UNIVERSIDAD AUTONOMA DE ZACATECASFrancisco Garca Salinas
AREA DE CIENCIAS QUIMICAS
UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUIMICAS
PROGRAMA DE QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
DOCENTE: Araceli
INTEGRANTES DE EQUIPO:Gwendolyne Mndez FraustoEdwin Antonio
Reyes OlivaLaura Monserrat Saucedo HerreraFlor de Mara Torres
Jurez
Nombre de la prctica: Determinacin de glucosa (Mtodo glucosa
oxidasa/peroxidasa) OBJETIVO:Realizar la determinacin de glucosa en
suero por medio de una tcnica enzimtica-colorimtrica, para la
valoracin de las alteraciones del metabolismo de los
carbohidratos.INTRODUCCIN:Clsicamente se han clasificado los mtodos
de determinacin de la glucosa en tres apartados diferentes: Mtodos
que dependen del poder reductor de la glucosa (mtodos reductores).
Mtodos qumicos. Mtodos enzimticos.Actualmente podemos decir que los
primeros grupos se encuentran prcticamente obsoletos, por lo tanto
no nos referiremos a ellos.Los mtodos enzimticos consiguen una gran
especificidad, ya que utilizan enzimas purificadas que actan
selectivamente sobre la molcula de glucosa, no interfiriendo el
resto de los hidratos de carbono o derivados que se encuentran
fisiolgicamente en los lquidos biolgicos.Mtodo de la glucosa
oxidasaEs un mtodo especfico para la glucosa, pues la enzima
glucosaoxidasa (GOD) acta oxidando a la beta-D-glucosa, con una
mnima accin sobre la alfa-D-glucosa, la cual est presente en las
soluciones en equilibrio con la forma beta. Habitualmente el punto
de equilibrio se obtiene a travs de mutarrotacin y se alcanza
cuando existe un 36 por 100 en la forma alfa y un 64 por 100 en la
forma beta. Para lograr una oxidacin completa de la glucosa es
necesario que sta sea transformada completamente en la forma beta,
es decir, debe producirse una mutarrotacin total de alfa a beta
durante el periodo de incubacin la velocidad con la que se produce
la mutarrotacin est afectada por el pH, el aumento de temperatura
y, ms especficamente, por una enzima, la mutarrotasa. Algunas
preparaciones comerciales de glucosa oxidasa contienen la enzima
glucomutarrotasa, que acelera especficamente este paso.La reaccin
tiene dos fases, en la primera la GOD oxida a la
beta-D-glucosa:
La segunda fase se basa en la utilizacin de un sistema enzimtico
conjugado, en el cual el H2O2 formado se acopla a travs de una
peroxidasa (POD) a un receptor cromognico (aceptor de oxigeno) y
permite la medida fotomtrica directa de la glucosa.
Como receptores cromognicos se han utilizado la orto-toluidina,
que da lugar a un cromgeno rojo, etc.Esta segunda fase es menos
especfica porque hay muchas sustancias reductoras que compiten con
el aceptor de oxgeno, que por mtodos polarogrficos nos miden la
velocidad de consumo se oxgeno, el cual sera directamente
proporcional a la cantidad de glucosa de la muestra, permitiendo la
determinacin directa de la glucosa.
MATERIAL:Material biolgico3 ml de sangre perifrica en ayuno sin
anticoagulante
Reactivos Reactivo R de color rosa para glucosaPatrn de glucosa
concentracin 5.56 mmol/L 100 mg/dlMaterial para puncin sangunea1
jeringa de 3 ml1 tubo 13X100 mm con tapnGradillaTorundas
Material para el desarrollo de la prctica2 puntillas amarillas
Celdas para espectrofotmetro3 tubos 12X751 tubo eppendorf1 pipeta
pasteur1 aspirador Gradilla
EquipoCentrfuga Espectrofotmetro para lecturas de 500
nmMicropipeta para 6l y 600lIncubadora a 37C Cronmetro
PROCEDIMIENTO REALIZADO: Se extrajo 3 ml de sangre perifrica en
ayunas y fue colocada en un tubo 13X100 mm sin anticoagulante y
rotular. Se centrifug los tubos a 3000 rpm durante 5 minutos y el
suero se separ. Se marcaron 3 tubos 12X75 mm como blanco, patrn,
muestra. El reactivo se esper a que estuviera a temperatura
ambiente. Se agreg lo siguiente en cada uno de los tubos:
BlancoPatrnMuestra
Patrn-------10l-------
Muestra-------------10l
Reactivo1.0 ml1.0 ml1.0 ml
Se agit e incub durante 5 minutos a una temperatura de 37C. Se
ley la absorbancia del patrn y la muestra en el espectrofotmetro a
una longitud de onda 500 nm.
CLCULOS:Cmuestra(mg/dl)=(absorbancia de la muestra/ absorbancia
del patrn) X100 mg/dlCmuestra(mg/dl)=(0.096/ 0.138) X100
mg/dlCmuestra (mg/dl)= 69.56 mg/dl
RESULTADOS:LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICANombre del paciente:
Laura Monserrat Saucedo HerreraSexo: FemeninoEdad: 21 Fecha: 11/
febrero / 13Mdico: A quien correspondaPARMETRORESULTADOVALORES DE
REFERENCIA
Glucosa en ayuno69.56 mg/dl70-110 mg/dl
INTERPRETACIN:En la prueba realizada al paciente se puede ver
que los niveles de glucosa estn por debajo de los valores de
referencia pero se tomo como un resultado normal porque la
diferencia es muy pequea.CONCLUSIONES:Durante esta prctica
realizamos la determinacin de glucosa en la muestra de sangre
perifrica de un paciente haciendo uso de un mtodo enzimtico
oxidasa/peroxidasa para poder determinar el metabolismo de
carbohidratos y as lograr un diagnstico acerca de una
patologa.BIBLIOGRAFA CONSULTADA:Daz Portillo J., Fernndez del
Barrio MT., Paredes Salido F. Aspectos bsicos de bioqumica clnica.
(1997). Ediciones Daz de Santos. 293p.
PERFIL DE LIPIDOSObjetivo:Realizar la determinacin en suero de
un perfil de lpidos el cual consiste en colesterol total (por el
mtodo colesterol oxidasa/peroxidasa), colesterol HDL (por el mtodo
por precipitacin con fosfotungato/magnesio), triglicridos (por el
mtodo glicerol fosfato oxidasa peroxidasa y colesterol LDL (por el
mtodo polivinil sulfato/polietilenglicol) para la evaluacin del
riesgo alergnico, as como de otras patologas.Introduccin: El perfil
lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de
lpidos que son transportados en la sangre por los diferentes tipos
de lipoprotenas plasmticas. La determinacin de estos parmetros es
un procedimiento analtico bsico para el diagnstico y seguimiento de
enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Entre estos
parmetros analticos que se pueden determinar estn: el colesterol
total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol
transportado por las HDL, los triglicridos totales, ciertas
apoprotenas particulares etc. El colesterol es una sustancia
adiposa que forma parte de las membranas celulares. El cuerpo
produce la mayor parte del colesterol en el hgado. Por este motivo,
los niveles de colesterol estn determinados en gran medida por la
gentica, y el colesterol alto puede ser una caracterstica
hereditaria. Una dieta con alimentos ricos en colesterol, grasas
saturadas, grasas trans y grasa total tambin puede afectar sus
niveles de colesterol. La mayor parte del colesterol presente en su
dieta proviene de productos animales, tales como carnes, grasas
lcteas y yema de huevo. Los niveles de colesterol altos contribuyen
a la formacin de placa en los vasos sanguneos; este proceso se
denomina aterosclerosis. La placa de colesterol dentro de las
paredes de los vasos sanguneos hace que estos se estrechen
(enfermedad arterial coronaria), y aumenta su riesgo de ataque
cardaco y derrame cerebral. Es importante que controle sus niveles
de colesterol (perfil o panel lipdico) en forma rutinaria.El
colesterol total es el nivel total de colesterol en la sangre. Un
nivel superior a los 200 mg/dL se considera alto. El colesterol
LDL, o lipoprotenas de baja densidad, tambin se denomina colesterol
malo debido a la relacin comprobada entre los niveles altos de LDL
y la enfermedad cardaca. La meta principal de cualquier programa de
tratamiento para el colesterol es reducir el colesterol LDL. La
cantidad de LDL que debe reducirse depende de sus otros factores de
riesgo de enfermedad cardaca. Por ejemplo, un nivel de LDL de 130
mg/dL es aceptable en una persona sana que no tiene factores de
riesgo de enfermedad cardaca. Sin embargo, si usted ya tiene una
enfermedad cardaca u otros factores de riesgo significativos como
diabetes o enfermedad renal crnica, debe reducirse su nivel de LDL
en la mayor medida posible. Los pacientes pertenecientes a este
grupo de alto riesgo deben tener un nivel de LDL igual o inferior a
70 mg/dL. El colesterol HDL, o lipoprotenas de alta densidad,
tambin se denomina colesterol bueno. Se ha demostrado que niveles
ms altos de colesterol HDL reducen el riesgo de enfermedad cardaca.
El HDL ayuda a eliminar parte del colesterol del torrente sanguneo
y lo lleva de regreso hacia el hgado. Los niveles objetivo de HDL
son superiores a 40 mg/dL en el caso de los hombres y superiores a
50 mg/dL en el caso de las mujeres. En el caso de pacientes con
enfermedad cardaca, el nivel de colesterol HDL debe ser el ms alto
posible. Los triglicridos son partculas de grasa cuyos niveles
aumentan en circunstancias tales como diabetes no controlada y
obesidad. Cuando se bebe demasiada cantidad alcohol y se toman
determinados medicamentos, pueden aumentar los niveles de
triglicridos. Los niveles altos de triglicridos (superiores a 150
mg/dL) significan un mayor riesgo de enfermedad cardaca. La relacin
colesterol total/HDL es un marcador importante de su riesgo de
enfermedad cardaca. En el mejor de los casos, este valor debera ser
3 o menos.Procedimiento realizado:Colesterol total:Se extrajo la
sangre de un paciente y se separ el suero de esta, se rotularon
tres tubos de 12X75 como muestra, blanco y patrn, al tubo rotulado
como patrn se aadieron 10l del patrn ms 1ml de reactivo , al tubo
rotulado como blanco solo se aadieron 1ml de reactivo y al ltimo al
tubo rotulado como muestra se le aadieron 10l de suero y 1ml de
reactivo, se agitaron cada uno de los tubos y se incubaron en una
estufa a 37C por 5 min pasado el tiempo se leyeron las absorbancias
en espectrofotmetro a 500nm.HDL:PrecipitacinSe tomaron 0.2 ml de
suero y se depositaron en un tubo eppendorf al que se le aadieron
0.5ml de reactivo precipitante, la mezcla fue agitada y incubada
por 10 minutos a temperatura ambiente. Transcurridos los 10 minutos
se prosigui a centrifugar durante 10 minutos a 4000 revoluciones
por minuto, de nueva fue recolectado el sobrenadante en un
eppendorf limpio.ColorimetraAntes de comenzar con la segunda fase
se atempero el reactivo de color a temperatura ambiente. Se
marcaron tres tubos de ensayo con las siguientes leyendas: blanco,
patrn y muestra. Al tubo blanco se le adicionaron 100l de agua
destilada, al tubo estndar se le adicionaron 100l de estndar y a el
tubo muestra se le adicionaron 100l de sobrenadante, por ultimo a
cada tubo se le adiciono 1000l de reactivo de color. Los tres tubos
fueron agitados y se incubaron 30 minutos a 37C. La absorbancia del
patrn y la muestra fueron ledas frente al blanco a una longitud de
onda de 500nm.Triglicridos:Para comenzar la prctica colocamos los
reactivos a temperatura ambiente para que no hubiera algn tipo de
interferencia en los resultados, luego rotulamos tres tubos de
12X75 como blanco, patrn y muestra respectivamente, despus aadimos
10 l de patrn y 10 l de muestra (suero del paciente) al tubo
respectivo ya marcado, para realizar las reacciones adicionamos 1ml
de reactivo a cada tubo blanco, patrn y muestra mezclamos muy bien
y pusimos a incubar durante 10 min a 37C en la estufa, al trmino de
este tiempo medimos la absorbancia (A) del patrn y la muestra a 500
nm contra el blanco de reactivo para as llevar a cabo los
respectivos clculos. El color de la reaccin es estable durante 2
horas.Clculos:Colesterol total:Formula
Sustitucin
HDLFormula
Sustitucin
Triglicridos:Formula
Sustitucin
ndice aterognico:Formula
Sustitucin
Resultados:Determinacin:Valor de la muestra.Valor normal.
Colesterol total224mg/dl140 a 200mg/dl
HDL18mg/dl150 g/dl
LDL
ndice aterognico2 g/dl.BilirrubinaLa bilirrubina que se detecta
en la orina es la conjugada, y puede ser el primer indicador de una
enfermedad heptica no detectada. La exposicin a la luz puede
degradar esta substancia y hacerla indetectable.Material:1 frasco
de boca ancha 1 probeta de 100ml1 tubo de ensaye1 portaobjetos1
cubreobjetos1gradillaEquipo:Centrifuga Microscpio.Reactivos:Muestra
Biolgica de orina.Tiras reactivasCOMBUR TEST. COBAS 100 FESTS
11374208 Urin/Orina LOT 23051243 IVD, CAD 2010-10
Roche.Procedimiento Se colecto la primera orina de la maana en un
frasco limpio de boca ancha.Examen fsico:Se homogenizo la muestra
dando vuelta en crculos y se observo turbidez, sedimento, color y
pH.Examen qumico: Se aadi del frasco de orina homogenizado a un
tubo de ensayo de 13x100 hasta llenarse dos terceras partes, se
introdujo la tira reactiva hasta que las almohadillas se mojaran, y
se dejo que ocurriera la reaccin por 3 minutos y se procedi a leer
comparando con la escala de colores de cada reaccin que viene en la
etiqueta del frasco.Examen microscpico:De la muestra que se colecto
en el tubo de ensayo se centrifugo a 2500 r.p.m durante 5 minutos,
el sobrenadante se decant en la tarja en agua corriente y del
sedimento que qued se coloc en portaobjetos, se coloc encima un
cubreobjetos y se observ al microscopio a 10X y despus a 40X.
Resultados
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICANombre del Paciente: Edwin
Antonio Reyes Oliva.Sexo: Masculino Edad: 21 aosFecha:05 de Marzo
del 2013.Mdico: A quien corresponda.
Examen Fsico:PARAMETRORESULTADOVALOR DE REFERENCIA
AspectoTransparenteTransparente
SedimentoMuy escasoNulo-escaso
ColorAmarillo oroAmarillo
pH6.05-7
Examen qumico:ParmetroResultadoValor de Referencia
GlucosaNegativo