biometriahematica-

SEP DGETI SEMS

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.

NOMBRE DEL ALUMNO: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE

CATEDRÁTICO: YOLANDA VERGARA CORDERO

SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN CLÍNICA

REPORTE DE LA PRÁCTICA: BIOMETRIA HEMATICA

SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”

FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_

CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________

INTRODUCCION

La Biometría Hemática también denominada Hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que la información que de aquí se deriva nos proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del paciente, consta de 2 bloques:

Formula Roja: Determina los parámetros relacionados con el eritrocito.

Formula Blanca: Determina los parámetros relacionados con los leucocitos.

Formula Roja: La determinación de la fórmula roja se compone de los siguientes parámetros:

A. Microhematocrito (Ht): Volumen del paquete globular, después de centrifugación respecto del volumen sanguíneo total expresado en litros/litros.

El volumen total que ocupan los eritrocitos en un volumen dado de sangre, dividido entre el volumen de sangre, se denomina fracción de volumen de eritrocitos.

El resto de sangre se compone de casi completamente de plasma, junto con una reducida cantidad de glóbulos blancos.

B. Hemoglobina (Hb): Es determinada la cantidad de esta proteína expresada en g. /dl.

C. Conteo eritrocítico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitros de sangre.

Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritrocítico son:

1. Cambios que inciden directamente en la circulación de eritrocitos:

Valor disminuido: Se denomina anemia, los tres parámetros disminuyen aunque este decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamaño eritrocítico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el cálculo e interpretación de los índices de la formula roja son de ayuda en estos casos.

Valor aumentado: Denominado policitemia, donde aumente el número de eritrocitos circulantes denominado policitemia absoluta, también puede darse un aumento transitorio en los eritrocitos circulantes denominado policitemia relativa (descritos posteriormente).

2. Cambios en el volumen plasmático:

Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratación.

Valor disminuido: Se presentan en sobrehidratación con fluidos administrados parenteralmente dando una lectura que simula anemia.

 D. Índices eritrocíticos: Determinados mediante cálculos matemáticos.

1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht x 10 / Eri), Es el tamaño eritrocítico expresado en fentolitros y se comporta de la siguiente forma:

Valor aumentado: Se presenta en anemia macrocítica en la que la interferencia en la síntesis del ADN causa inhibición de la división celular y la resultante es la aparición de eritrocitos de gran tamaño (como ocurre en los casos de deficiencia de vitamina B12 y ácido fólico). También aumenta transitoriamente en los casos de reticulocitosis (anemia regenerativa).

Valor disminuido: Se presenta en casos de deficiencia de hierro

2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en él eritrocitos expresada en picogramos.

Valor aumentado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro; la hemoglobina extracelular también está implícita, aunque el índice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Durante la reticulocitosis permanece normal o ligeramente elevado.

Valor disminuido: En los casos de deficiencia de hierro.

3. Concentración de Hemoglobina Globular Media (CHGM): (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que está relacionada directamente con el eritrocito. Es el índice más preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes.

Valor aumentado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro, así mismo puede incrementarse en los casos de esferocitosis marcada.

Valor disminuido: En los casos de reticulocitosis y deficiencias de hierro.

 E. Morfología eritrocítica: Es determinada en el frotis sanguíneo.

1. Rouleaux: Es el agrupamiento de eritrocitos a manera de monedas amontonadas, es debido a una tendencia de sedimentación en forma paralela, trastorno que se relaciona con el incremento en la concentración de fibrinógeno y/o el cambio en las concentraciones de globulinas. En caninos y felinos puede presentarse en condiciones normales en un grado moderado y es muy marcada en casos de enfermedad inflamatoria y neoplasias. En equinos sanos es común desapareciendo en casos de anemia.

2. Aglutinación eritrocítica: Cuando se forma un acumulo de eritrocitos, ocurre generalmente en los casos de anemias inmunomediadas, puede ser observada en las paredes del tubo colector como pequeños grumos.

3. Anisocitosis: Es la variación en el tamaño de los eritrocitos donde aparecen macrocitos y/o microcitos a lado de células de tamaño normal, se presenta como respuesta en anemias de tipo regenerativo.

Macrocitos: Son eritrocitos de gran tamaño que provocan incremento en el VGM, (reticulocitos) aparecen generalmente en anemias regenerativas.

Microcitos: Son pequeños eritrocitos con un VGM disminuido que son observados en casos de anemias dadas por deficiencia de hierro y Piridoxina generalmente.

4. Esferocitos: Son considerados microcitos que cuentan con una membrana celular reducida, lo que incrementa la permeabilidad hacia el sodio, son casi exclusivos de caninos y se presentan generalmente en anemias de tipo autoinmune y en anemias hemolíticas isoinmunes así como después de una transfusión. Son removidas rápidamente de la circulación por los macrófagos esplénicos, debido a su falta de elasticidad y a que no están habilitadas para traspasar los poros capilares esplénicos.

5. Policromasia: Es una variación en la afinidad eritrocítica hacia el colorante, donde existe un tono azuloso en las células que contienen residuos de ARN, eritrocitos que generalmente son grandes y se consideran reticulocitos. La presencia de Policromasia está asociada con el incremento de la actividad eritropoyetica como respuesta a una anemia, catalogada como regenerativa cuando está presente.

6. Hipocromía: Se refiere a la presencia de palidez marcada en la región central del eritrocito dado por la disminución en la concentración de hemoglobina dentro de la célula, la causa más común en la que se presenta es la deficiencia de hierro.

7. Poiquilocitosis: Son células anormales en su forma comúnmente encontradas en anemias debidas a la pérdida crónica de sangre o a enfermedades caracterizadas por fragmentación eritrocítica, células que son retiradas prematuramente de la circulación agudizando el estado anémico. Los acantocitos, son un tipo de poiquilocitosis.

8. Leptocitos: Son células delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crónicas debilitantes que producen anemia.

9. Estomatocitos: Son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en la Estomatocitos hereditaria del Alaska malamut y en enfermedades hepáticas.

10. Células en diana: Son células con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de tipo regenerativo junto con Policromasia, aunque cuando se presentan y no existe Policromasia se pueden relacionar con enfermedad renal, hepática o esplénica.

11. Cuerpos de Howell-Jolly: Son remanentes nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anémico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar hipoesplenismo..

12. Cuerpos de Heinz: Son estructuras localizadas en la membrana eritrocítica producto de la desnaturalización de la hemoglobina causada por la acción oxidante de ciertas drogas o químicos, estos cuerpos desorganizan la membrana eritrocítica y se asocian con hemolisis intravascular.

13. Cuerpos eritrocíticos refráctiles: Se localizan en estados normales en aproximadamente el 10% de los eritrocitos del gato, se incrementan en la presencia de diversas enfermedades, en muchas ocasiones juegan un papel importante en el desarrollo de la anemia.

14. Eritrocitos nucleados (Rubrocitos y Metarrubrocitos): Se deben a la liberación de células eritroides inmaduras hacia la circulación sanguínea en los casos de anemia, aunque

pueden ser observadas en casos de enfermedad de la médula ósea donde existe daño en el parénquima que afecta la barrera capilar, así como en casos de leucemia.

Formula blanca:

Frotis sanguíneo.

La extensión se prepara repartiendo uniformemente una gota pequeña de sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite una capa de células.

Después de teñirlas, las extensiones se sangre se utilizan para.

Determinar las fracciones de número de los tipos de leucocitos. Para detectar glóbulos rojos anormales Identificar ciertos parásitos.

Cámara de Neubauer

Es para ambos conteos, glóbulos blancos y glóbulos rojos, también con oxalato de amonio podemos contar plaquetas y glóbulos blancos al mismo tiempo.

Serie Plaquetaria:

Puede ser por medio del frotis sanguíneo o en Cámara de Neubauer, estas se cuentan para observar que no haya trombosis o trombocitopenia.

OBJETIVO

El alumno realizara la biometría hemática completa, en 30 minutos correctamente.

MATERIAL, REACTIVOS, APARATOS

Por persona:1. 1.- tubo de ensaye con anticoagulante2. Torundas en alcohol3. Ligadura hueca de 45 cm aprox.4. Portaobjetos limpios y secos5. Tubo capilar6. Tubo de wintrobe7. Pipeta de Sahli8. Pipetas toma p/ blancos y rojos9. Tubos de ensaye de 13x100mm10. Boquilla con manguera o alargadera11. Cámara de Neubauer12. Jeringas o vacutainer para 5ml

Reactivos:1. Anticoagulante EDTA u Oxalato doble2. Amonio y Potasio. Alcohol de caña3. Líquido de Drabkin (cianometahemoglobina)4. Liquido de Turk y de Hayen5. Colorante de Wright6. Buffer para colorante de Wright

Aparatos:1. Soporte para tubos de wintrobe2. Centrifuga p/Microhematocrito3. Aparato p/ lectura de Microhematocrito4. Espectrofotómetro

METODOLOGÍA

TOMAR MUESTRA, 5MLS DE SANGRE CON ANTICOAGULANTE DE EDTA

LLENADO DE TUBO DE WINTROBEo Sujetar en un embolo limpio y seco, la cánula de wintrobe. Mover bombeando

unas 3 o 5 veces el embolo y mezclarlo al topo.o Mezclando la sangre por inversión, quitar el tapón dejarlo sobre la mesa

invertido (no ensuciar la mesa de sangre), introducir la cánula hasta el fondo de tubo con sangre y

o Aspirar hasta 1ml, sacar la cánula, tapar el tubo de sangre y limpiar el exterior de la cánula sin tocar la punta, ahora…

o Tomar el tubo de wintrobe etiquetado. Introducir la cánula hasta el fondo del tubo de wintrobe, a la altura de la vista ir inyectando la sangre y sacando al mismo tiempo la cánula, de tal manera que cuando haya llegado exactamente a la marca 0-10, también la cánula este afuera. Si hubiera sobrado sangre en el embolo, quitar la cánula y vaciar por las paredes el sobrante la sangre. Y el tubo de wintrobe

o Llevarlo a la gradilla de wintrobe, dejarlo ahí y leer a los 60 minutos exactamente.

TUBO CAPILAR MICROHEMATOCRITO

o Tubo capilar lleno a ¾, presione el extremo para evitar que salga la sangre, limpiar el extremo con papel sanitario, sellar el extremo opuesto a la sangre,

con la llama del mechero girando cuidadosamente para que se funda uniformemente. Llevarlo a centrifugar por 5 minutos, en la microcentrifuga para luego leer el Microhematocrito.

o Lectura: Hacer coincidir exactamente la fase hematíes-plasma, con la raya y no

mover más el capilar. Colocar en la ranura de plástico, orientando el paquete de hematíes hacia

el punto rojo. Moviendo el disco de aluminio hacer coincidir la línea graduada, con el

fondo de paquete de glóbulos rojos por un lado y por el otro con la fase plasma aire, procurando que la línea intercepten esos puntos por el centro.

Escribir la lectura de Microhematocrito en la escala.

RECUENTO DE ERITROCITOS Y LEUCOCITOS:o Siempre agitar la sangre que tiene anticoagulante, tantas veces como la utiliceo La sangre en la pipeta de Thoma debe estar exactamente en la marca 0.5,

limpiar el exterior con papel sanitario, sin tocar la punta para evitar que baje la marca. El diluyente (Hayen para rojos, Turk para blancos) debe quedar exactamente en la marca /101 rojos, 11 blancos) indicada en la pipeta (no debe faltar ni sobrar), cubrir los extremos de la pipeta con el pulgar y cordial, agitar por inversión varias veces por 15 segundos. Llevar al agitador mecánico 3 minutos, desechas las 3 primeras gotas (que es liquido diluyente).

o La cámara (colocarla sobre un fondo blanco) y el cubre de Neubauer sobre la cámara (debe estar libre de polvo y sin grasa), ya lista depositar inmediatamente la dilución en la cámara de Neubauer (sin que se derrame o tenga burbujas). Puede ser de un lado, rojos y al otro blancos.

o Colocar la cámara en el microscopio con cuidado y leer. Rojos cuadricula central (5 cuadrantes de 4x4 objetivo de 40x; y blancos en las cuadriculas de los extremos (4 cuadrantes de 4x4 objetivo de 10x).

o Se escribe el número total de cada cuadrante, desde el primero hasta el numero 5 (así observamos la diferencia entre cada cuadricula, ya que no debe haber una diferencia de más de 10 para que se considere correcta la lectura. Y de la misma manera se realiza para los blancos, solo que serán los 4 cuadrantes).

o Se suman los 5 resultados, se multiplica el total por 10,000 asi obtendrá el numero de hematíes por ml de sangre.

o Para blancos se suman los 4 resultados, se multiplica por 50, obteniendo el numero de leucocitos por ml de sangre.

LECTURA DE CIANOMETAHEMOGLOBINAo Agitar la sangre con anticoagulante, tales veces que se utilice.o La sangre en la pipeta de Sahli debe estar exactamente en la marca 0.02mls y

limpiar el exterior con el papel sanitario sin tocar la punta (evitando la variación en la marca).

o En el tubo de ensaye etiquetado con 5 mls de cianometahemoglobina, depositar la sangre soplando y con la misma pipeta mezclar, aspirar la misma dilución y soplar y mezclar (varias veces), haciendo una dilución homogénea, que no quede sangre en el interior de la pipeta. Dejar en reposo por 0 minutos.

o Leer en el espectrofotómetro a 540nm.

FROTISo Portaobjetos limpios y secos (bordes uniformes, no roñoso o rotos), se toman

por los lados laterales para evitar las huellas o grasa de las manos, si es necesario lavarlos con jabón y secarlos con un paño limpio y sin pelusa.

o Portaobjetos sobre un fondo blanco, que tendrá sobre la mesa de trabajo.o Agitar lenta, uniforme y por inversión el tubo que contiene la sangre, para evitar

sedimentaciones y errores, al quitar el tapón rápidamente colocar…

o Una gota de sangre en el extremo central de cada portaobjetos con rapidez tomar con una mano (pulgar y cordial) los extremos del portaobjetos y con el índice presionar el centro.

o Con la otra mano, tomar el otro portaobjetos, sujetándolos con el dedo índice la punta de un extremo y con el pulgar un poco más arriba del extremo, y con los demás dedos sujetar el borde lateral, el portaobjeto quedara por debajo de la mano (según se le ha mostrado). El dedo índice nos marcara en el frotis según lo necesitemos.

o Colocar en ángulo de 50° con los portaobjetos (uno horizontal y con el otro haciendo ángulo de 50°), haciendo contacto con la gota de sangre que, por capilaridad formara una línea con el portaobjetos. Deslizando rápido y con firmeza para obtener un frotis en condiciones favorables: delgado, más de la mitad, liso (sin ondulaciones).

o Dejar que se seque aireándolo (al aire libre), si tenemos dudas observarlo al microscopio con objetivo de 10x o 40x, las células sanguíneas deben estar separadas unas de otras.

TINCIÓN CON WRIGHTo Teñirlo con el colorante de Wright, en el

soporte colocar el frotis y cubrirlo totalmente con el colorante de Wright por 3 min. (ó según se indique), ahora añadirle el buffer de Wright unas 6 u 10 gotas inmediatamente, con una

pipeta soplarle (en forma de 8) por 20 o 30

segundos, haciendo una mezcla homogénea (toma la superficie un brillo metálico homogéneo) reposar por 6 minutos; transcurrido el tiempo lavar al chorro de la

llave verticalmente (solamente eliminando el exceso de colorante), se deja escurrir dejando paradito a que se escurra y se limpia la parte opuesta al frotis para que no tenga interferencia en la observación microscópica.

HEMOGRAMAo En la punta del frotis teñido colocar una gota

de aceite de inmersión levantarlo para que resbale recorriendo lo teñido. Ahora colocarlo en la platina del microscopio y enfocar con objetivo de 10x, ya enfocado mover el revolver directamente al objetivo 100x y mover ligeramente el micrométrico e ir leyendo las células correspondientes.

o Eritrocitos anormales que localice reportarlo.o Leucocitos agranulocitos ó

monomorfonucleares como monocitos y linfocitos.

o Leucocitos granulocitos ó polimorfonucleares: Neutrófilo basófilo, Neutrófilo Eosinófilo.