Biomarcadores en Suero Candidatos para Adenocarcinoma en Próstata Identificados por Diferencias del ARNm en Tejido Prostático y Verificados con Mediciones.
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Biomarcadores en Suero Candidatos para Adenocarcinoma en Próstata Identificados por Diferencias del ARNm en Tejido Prostático y Verificados con Mediciones de Proteínas en Tejido y Sangre
E.W. Klee, O.P. Bondar, M.K. Goodmanson, R.B. Dyer, S. Erdogan, E.J. Bergstralh, H.R. Bergen III, T.J. Sebo y G.G. Klee
Figura 1. Procesos usados para identificar nuevos biomarcadores candidatos y medir proteínas en tejido y sangre. LCM, Microdisección capturada por laser.
Diseño del Diseño del EstudioEstudio
Medición de expresiones de ARNm en tejido
LCM PCa
Uso de bioinformática para predecir biomarcadores
secretados
35 nuevos candidatos
Búsqueda con MS/MS para estos biomarcadores
previstos en extractos de tejido PCa
5 biomarcadores
Péptidos sintetizados e isótopos estables
Hacer antisuero anti-péptido de conejo
Uso de bioinformática para predecir la asimilación de péptidos de tripsina para
Análisis MS/MS de Extractos de TejidoAnálisis MS/MS de Extractos de TejidoMuestras por electroforesis en gel de SDS-PAGE y proteínas asimiladas in-situ.
Identificación de Péptido por espectrometría de masas usando Espectrómetro de Masas Híbrido LTQ OrbitrapResultados: Se identificaron 5 marcadores candidatos, 3 con concentración elevada en muestras de tumor:
Tabla 1. Inmunohistoquímica (13 marcadores).C, tejido de cáncer de próstata; N, tejido normal adyacente; 0, sin tinción; 1, tinción débil; 2, tinción moderada; 3, tinción fuerte. P-valores de prueba de signo de una cola.
Método de Ensayo de Suero MS/MS (Baja Abundancia)Método de Ensayo de Suero MS/MS (Baja Abundancia)
49 Péptidos sintetizados representando a 25 biomarcadores
Conejos inmunizados con anticuerpos para péptidos
Péptidos extraídos como objetivo Primeras proteínas de alta abundancia agotadas Después sangre asimilada para hacer péptidos Finalmente uso de anticuerpos de conejo para extraer
péptidos.
Péptidos medidos usando Espectrometría de Masas (MS/MS)
Trazos de mediciones secuenciales para el Trazos de mediciones secuenciales para el Arreglo A para A) ELISA y B) MS/MS Arreglo A para A) ELISA y B) MS/MS
Sequence analysis order= Orden de secuencia de análisisAnalysisi order on..=Orden de análisis en…Analysisi sequence order: Orden de análisis secuenciado
Se identificaron 7 nuevos biomarcadores estadísticamente significativos en la discriminación de concentraciones de proteína en sangre de varones con cáncer de próstata comparados con los controles:
APOC1, ASPN, COMP, CXCL11, CXCL9, F5, y PCSK6
Se identificaron adicionalmente 4 nuevos biomarcadores con concentraciones elevadas en suero en al menos el 10% de muestras de cáncer de próstata avanzado comparadas con los controles: