BAZI YARI SENTETiK PEN1S1L1NLER1N MiKTAR ...

BAZI YARI SENTETiK PEN1S1L1NLER1N MiKTAR TAYiNLERiNDE YENi YÖNTEMLER VE KARSILASTIRILMALARI

Eczacı Ahmet KESTEK

T.C.

İSTANBUL ÜNİVERSİTESİ

SA~LIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ

LİSANS- ÜSTÜ E~İTİM-Ö~RETİM VE SINAV YÖNETMELİ~İNİN

ANALİTİK KİMYA ANABİLİM DALI İÇİN ÖNGÖRDÜ~Ü

YÜKSEK LİSANS TEZİ OLARAK HAZIRLANMIŞTIR

İSTANBUL

Eylül 1985

Yüksek Lisans tezimi yöneten ve karşılaştığım her güçlükleri yenmeme yardımcı olan danışmanım Sayın Doç.Dr.İnci Morgil'e, çalışmalarıma yardımcı olan Analitik Kimya Bilim Dalı mensuplarına, tartışma ve yardımla

rından dolayı Sayın Hocalarıma

en derin şükranlarımı sunarım.

1 C 1 N D E K 1 L E R

1. GİRİŞ VE CALIS~IN AMACI

2, GENEL BÖLÜM 2.1. PENİSİLİNLER HAKKINDA GENEL BİLGİ

2.2. İNCELENEN PENİSİLİN TÜREVLERİ

2.2.1. Penisilinlerin Miktar Tayinleri

2.2.1.1. Mikrobiyolojik Tayin

2.2.1.2. Kimyasal ve Enstrümantal Yöntemler

2.2.1.3. Faroıakope Yöntemleri

2.2.1.4. İncelenen Penisilinlerin Farmasötik Şekilleri

2.3. SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLER

2.3.1. Ellman Belirtecinin Gelişimi ve Uygulamaları

2.3.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yönteminin Gelişimi ve Uygulamaları

2.3.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yönteminin Gelişimi ve Uygulamaları

3, DENEYSEL BÖLÜM 3.1. KULLANILAN MADDELER

3.2. ÇÖZELTİLER

3.2.1. Ellman Belirteci İle Yapılan Çalışmada Kullanılan Çözeltiler

3.2.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yönteminde Kullanılan Çözeltiler

3.2.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yönteminde Kullanılan Çözeltiler

3.2.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon Yönteminde Kullanılan Çözeltiler

3.3. ALETLER

3.3.1. Spektrofotometreler

3.3.2. Diğer Aletler

3.4. ÇALIŞMA YÖNTEMLERİ

Sayfa

1

3

3

10

17

17

17

31

32

38

38

39

41

43

43

44

44

45

46

47

48

48

48

49

-ii -

3.4.1. Ellman Belirteci İle Yapılan Çalışmalar

3.4.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yöntemi İle Yapılan Çalışmalar

3.4.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yöntemi İle Yapılan Çalışmalar

3.4.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon Yöntemi İle Yapılan Çalışmalar

3.5. FARMASÖTİK ŞEKİLLERİN MİKTAR TAYİNLERİ

3.5.1. Ellman Belirteci Yöntemiyle Yapılan Miktar Tayinleri

3.5.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yöntemiyle Yapılan Miktar Tayinleri

3.5.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yöntemiyle Yapılan Miktar Tayinleri

3.5.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon İle Yapılan Miktar Tayinleri

Sayfa

49

49

51

52

54

54

56

57

59

3.6. İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ ÇALIŞMALARI 60

3.6.1. Adsorbanlar 60

3.6.2. Çözücü Sistemleri 60

4, SONUÇLAR 61

4.1. ELLMAN BELİRTECİ İLE YAPILAN İNCELEMELER 61

4.1.1. Uygun Degradasyon Ortamının Seçimi 62

4.1.2. Uygun Degradasyon Süresinin Tayini 62

4.1.3. Uygun pH'nın Seçimi 62

4.1.4. DTNB/Penisilin Mol Oranının Saptanması 63

4.1.5. Ölçü Eğrilerinin Hazırlanması 63

4.2. Hg(II)-İMİDAZOL-EDTA YÖNTEMİ İLE YAPILAN İNCELEMELER 93

4.2.1. Reaksiyon Koşullarının Saptanması 93


4.3. Ni(II)-HİDROKSİLAMİN YÖNTEMİ İLE YAPILAN İNCELEMELER 125

4.3.1. Reaksiyon Koşullarının Saptanması 125


4.4. İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ İLE REAKSİYON t.İRÜNLERİNİN İNCELENMESİ 154

- iii -

4.4.1. Ellman Reaktifi Kullanılan Yöntemde Reaksiyon Ürünlerinin İnce Tabaka Kromatografisi İle İncelenmesi

4.4.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Reaktifi Kullanılan Yöntemde Reaksiyon Urünlerinin İnce Tabaka Kromatografisi İle İncelenmesi

4.5. FARMASÖTİK ŞEKİLLERİN MİKTAR TAYİNLERİNDE SAPTANAN SONUÇLAR

4.6. SONUÇLARIN KARŞILAŞTIRILMASI VE İSTATİSTİKSEL İNCELENMESİ

5, TARTIŞMA

6. ÖZET

7, İNGİLİZCE ÖZET

8. KAYNAKLAR

9, ÖZGECMİS

Sayfa

154

155

157

179

182

186

188

190

207

1. GtRtS VE CALISMANIN AMACI

Başarılı bir tedavi kullanılan ilaçların etkin madde

içeriklerinin verilen doza uygunluğu ile sağlanır. Bu nedenle

yeni bir tayin yöntemi geliştirilerek etken maddenin saflığı

nın, farmasötik şeklin içerdiği etken madde miktarının saptan

ması ve ilacın organizmaya girmesinden sonra biyolojik mater

yaldeki (kan, serum, plazma, idrar ve dışkı) tayini yapılır.

Farmakopeler ilacın etken maddesinin saflığının ve farmasötik

şekillerdeki etken madde içeriklerinin saptanması için uygun

yöntemleri önerir ve bu yöntemler geliştirilen yeni yöntemle

rin uygunluğunun saptanmasında da kullanılır.

Tedavide antibiyotiklerin heterosiklik yapıda S-laktam

içeren yarı sentetik penisilinlerin kullanımı son yıllarda

büyük bir artış göstermiştir. Ortalama 30 penisilin türevi

gram pozitif, gram negatif ve anaerob mikroorganizmalara kar

şı tedavide kullanılmaktadır. Yapılan literatür çalışmaları

sonucu penisilinlerin farmasötik şekilleri için farmakopeler

de verilen miktar tayini yöntemleri, mikrobiyolojik yöntem ya

nında iyodometrik, arjantometrik, susuz ortamda titrasyon,

kolorimetrik hidroksilamin ve Hg(II)-imidazol yöntemleridir.

Susuz ortamda yapılan titrasyonla ampisilin trihidrat ve

amoksisilin, penisilin G sodyum, Penisilin V potasyum, kolo

rimetrik hidroksilamin yöntemi ile karindasilin, ampisilin

trihidrat, amoksisilin, Hg(II)-imidazol yöntemi ile spektro

fotometrik olarak kloksasilin sodyum, oksasilin sodyum, dik

loksasilin sodyum, flukloksasilin sodyum, karbenisilin, ti-

- 2 -

karsilin, ampisilin trihidrat, penisilin G sodyum, Penisilin

V potasyumun farmasötik şekillerindeki etken madde miktarı ta

yinlerinin yapıldığı gözlenmiştir. 5.S'-ditiyobis(2-nitro)

benzoik asit (DTNB): Ellman Belirteci kullanılarak geliştiri

len yöntem ise benzilpenisilin, kloksasilin sodyum, ampisilin

trihidrat ve sodyum tuzuna, metisiline uygulanmıştır. Diğer

penisilinlerin ilaç şekillerindeki miktar tayinlerine ait li

teratür bulgularına da rastlanamamıştır.

Çalışmamızda penisilinlerin sistematik analizlerine

olanak sağlayacak Ellman Belirtecini kullanarak ve modifiye

edilmiş Hg(II)-imidazol belirtecini kullanarak Hg(II)-imida

zol-EDTA spektrofotometrik miktar tayini yöntemlerinin geliş

tirilmesi ve aynı zamanda geliştirilen bu yöntemlerin farma

kopelerde verilen yöntemlerle Uniformluk Testi (Conent Uni

formity Test) çerçevesinde karşılaştırılması amaçlandı. Ancak

karşılaştırma yöntemlerinden biri olarak kullanılan USP XX de

ki kolorimetrik hidroksilamin yöntemi sonuçlarının presizyon

ları açısından farklılık göstermesi nedeniyle; uygulamalarda

Ni(II) tuzlarını katalizör olarak kullanan Ni(II) hidroksila

min yönteminin örnek olarak seçilen penisilinlere uygulanması

ve diğer bir karşılaştırma yöntemi olması uygun görülmüştür.

- 3 -

2. GENEL BÖLÜM

2.i. PENİSİLİNLER HAKKINDA GENEL BİLGİ

İnfeksiyöz hastalıklara karşı kullanılan kemoterapötik

ilaçların en önemli grubu olan antibiyotik ilaçlar kimyasal

yapı elementlerine göre aşağıdaki şekilde sınıflandırılırlar:

A- Amino asid türevi antibiyotikler

a) Bir amino asid taşıyanlar (Kloramfenikol, D-siklo

serin vs.)

b) İki amino asid taşıyanlar (Periisillinler, sefalo

sporinler)

c) Polipeptid yapıda olanlar (Basitrasin, tirotrisin,

polimiksin, viomisin, vs.)

B- Şeker türevi antibiyotikler (Aminoglikozit antibiyo

tikler: Kanamisin, neomisin, gentamisin, streptomisin)

C- Makrolit laktan taşıyan antibiyotikler (Eritromisin,

oleandomisin, spiramisin)

D- Tetrasiklinler (Demeti! klortetrasiklin, doksisiklin,

metasiklin, limesiklin)

E- Çeşitli yapı elementine sahip olanlar (Linkomisin,

fusidin, rifamisinler, nistatin, amfoterisin B,

griseofulvin)(l,2).

- 4 -

Adı geçen sınıflandırmada iki amino asid taşıyanlar

grubuna giren ve yapılarında S-laktam halkası içeren penisi

linlerin genel yapısında tiyazol halkası bulunmaktadır(l-6).

Penisilinler

R1-f ;NH:ırs('~}~~~ :. Jz_-~1- 2 COO-R 1 o 2

: 1 T j Thiazoli~in halke-sı

: 13-Laktam halkası

A yan zincir 6-Aminopenicillanik asid grubu

ŞEKİL 1- İki amino asid taşıyan penisilinlerin yapısı

Penisilinler(B), antibiyotikler adı altında toplanan

Hnemli bir grup antibakteriyel ilaçlardan ilk keşfedilmiş

olanlardır. Antibiyotik terimini ilk defa Waksman "antibiosis"

kelimesinden türetmek suretiyle kullanmıştır. Antibiosis, aynı

ortamda yaşayan mikroorganizmaların yaşamlarını devam ettirmek

için aralarında mevcut rekabeti ifade eder. Bu rekabet bir

mikroorganizmanın kendi yaşamını devam ettirmek için, beraber

bulunduğu diğer mikroorganizmanın yaşamasına engel olan bir

takım maddeler meydana getirmesi şeklinde olur. Gerçekte bu

gün antibiyotik olarak adlandırılan maddeler de, bir takım

canlı organizmalar tarafından meydana getirilen ve diğer mik

roorganizmaların gelişmelerini durduran veya onları yok eden

tedavi vasıtalarıdır. Antibiyotikler genellikle saprofit top

rak mantarları veya bakterilerinin metabolizma ürünleridir.

Dolayısıyla doğal kaynaklıdırlar. Ancak son senelerde antibi

yotikler sentetik olarak elde edilmişlerdir.

1928 yılında Alexander Fleming çalışmaları esnasında,

stafilakok kültürlerine dışarıdan karışan bir mantarın bulun

duğu bHlgede stafilakokların üremediğini tesbit etmiştir. Bu

nun üzerinde duran araştırmacı kültüre karışan mantarın bir

- 5 -

11 penicillium 11 türü olduğunu tesbit ederek, mantar tarafından

oluşturulan, antibakteriyel etkili maddeye 11 penici11in" adını

vermiştir. Ancak bu aktif maddenin saf olarak elde edilmesi

bir hayli güç ve geç mümkün olmuştur. ' Bu gecikmede büyük bir

olasılıkla aynı senelerde üzerinde çalışılan sülfonamidlerin

antibakteriyel etkilerinin tesbit edilerek, tedavide kulla

nılmaya başlanmalarının da etkisi olmuştur. Sonuçta 1940 yı

lında Florey ve arkadaşları saf olmamakla beraber az miktarda

penisilini izole etmeyi başarmışlardır. 1946 senesinde ise

Du Vigneaud penisilin sentezini yapmıştır.

a) Standardizasyonları

Penisilinlerin miktarı Enternasyonal ünite ile ifade

edilir. Klinikte çok kullanılan penisilinlerden Penisilin G

için Enternasyonal ünite Oxford ünitesidir. Bir ünite 0.6 mcg

penisilin G ye veya 1 mg Penisilin G 1667 üniteye eşittir.

Ticarette kullanılan kristalize penisilin preparatlarının 1

mg'nın aktivitesi 1500 üniteden az olmamalıdır. Bugün kulla

nılan Penisilin G'den başka bütün penisilin preparatları

ağırlık birimi ile değerlendirilirler.

b) Tesir Mekanizmaları

Penisilinler genellikle bakterisid tesirli antibakteri

yel etkenler olarak kabul edilirler ve üremekte olan hücreler

üzerinde etkili olurlar. Bu etkileri, bünyelerinde müramik

asid ihtiva eden hücre çeperi mükopeptidlerinin sentezini in

hibe etmek suretiyle meydana gelir. Bu sure~le membranı oluş

mayan yeni bakteri hücreleri, morfolojik olarak anormal şekil

ler oluştururlar ve neticede erir veya ölürler. İnsan ve meme

li hayvan hücre çeperlerinin mükopeptidleri müramik asid içer

mediklerinden penisilinden etkilenmezler. Penisiline karşı

duyarlılık açısından mikroorganizmalar içinde aynı konu geçer

lidir.

- 6 -

c) Antibakteriyel Spektrti•ları

Penisilinlerin antibakteriyel spektrumları oldukça dar

dır. Genel olarak gram pozitif ve negatif koklara (gonokok,

pn6mokok, menengokok gibi), bazı gram pozitif ~asillere (dif

teri, şarbon basilleri gibi), spirikoetlerden treponema palli

dum'a, bazı iri virüslere, leptospira'lara ve birçok aktino

mices'lere etki ederler. Buna karşılık gram negatif basillere,

aside dayanıklı basillere, protozoerlere, virüslerin büyük bir

kısmına etki etmezler. Ancak yarı sentetik yeni penisilinlerin

bazılarının spektrumları daha geniştir; bunlar gram negatif

basillere ve penisilinaz husule getiren, tabii penisilinlere

dayanıklı stafilokok suşlarına da etki ederler. Örneğin ampi

silin ve karbenisilin gram negatif basillere ve enterokoklara

etkilidir, methisilin ve nafsilin penisilinaz meydana getiren

stafilakok suşlarına da etkilidir; oksasilin, kloksasilin ve

dikloksasilinin benzer tesiri methisilininkinden de kuvvet

lidir, fakat serum proteinlerine yüksek nisbette bağlandıkla

rından aktiviteleri düşüktür, buna rağmen tesir süreleri uzun

dur.

d) Rezistans

Penisiline karşı bakterilerin dayanıklılığı iki şekil

de oluşabilir: 1- Bazı bakteriler penisiline karşı tabii di-,

renç gösterirler, dolayısıyla penisilin tedavisine başlangıç

tan itibaren cevap alınmaz; 2- Bazen de bakteriler penisiline

sonradan direnç kazanabilirler ve bu hal daha çok yetersiz

dozlarla yapılan tedavi sonucu olarak oluşur. Penisiline kar

şı bakteri rezistansı çeşitli sebeplere bağımlı olarak meydana

gelebilir: a) Bakteriler penisilini parçalayan penisilinaz gi

bi enzimler meydana getirirler, b) Mükopeptid sentezini, peni

silinin etkileyemediği başka yollardan elde etme yeteneği ka

zanabilirler, c) Penisilinin bakteri membranını geçerek, içe

ri girmesine engel olan bir set meydana getirebilir, d) Peni-

- 7 -

siline dayanıklı mütantlar oluşabilir, e) Bakteriler hücre

çeperi oluşmadan yaşayabilme yeteneğine sahip olabilirler,

f) Enfeksiyona neden olan bakteriler arasında az miktarda pe

nisiline tabii dayanıklılığı olan suşlar mevcut olabilir ve

bunların çoğalarak enfeksiyonu devam ettirmeleri, bakterile

rin sonradan penisiline rezistans kazandıkları izlenimini ve

rebilir. Penisilinlere dayanıklı bakteriler diğer antibakteri

yel ilaçlara hassas olabilirler. Yani sülfonamidler ve diğer

antibiyotiklerle penisilin arasında çaprazlama bir direnç mev

cut değildir.

e) Farmakokinetik özellikleri

Penisilinin emilmesi organizmaya veriliş yoluna ve ve

rilen penisilinin cinsine bağlıdır. Tabii penisilinler per os

verildikleri taktirde, midede yıkıma uğrayıp uğramamaları mide

asiditesine tabidir. pH 2 ve daha düşük ise hızla parçalanır-

lar. pH 4 civarında parçalanmazlar. Dolayısıyla aç karuına ve

rildiklerinde per os etkili olabilirler; yalnız 3-5 misli ve

daha yüksek dozlarda vermek icap eder. Mide asiditesine özel

likle dayanıklı olan ve per os verilebilen penisilin bileşik

leri yukarıda belirtildi. Per os verilen penisilin özellikle

dnı:>dnnnmd::ın ı:>mi1ir- Cilt- ::ılt'ın.<ı vı:> .<ırlo1ovı:> 1nro-111,:ın<ın non;c,;ı;n

- 8 -

ması gerekir. Foetus dolaşımına da az oranda geçer. Penisilin

plazmada kısmen albuminlere bağlanır. Bağlanma oranı penisi

linin cinsine göre farklılık gösterir. Albumine bağlı penisi

lin, serbest penisiline oranla hastalık odağına daha güç etki

eder. Alınan penisilinin yarısından fazlası değişmemiş halde

idrarda bulunur. Geri kalanı ise organizmada metabolize ola

rak, metabolitleri idrarla atılır. Böbreklerden elimine olan

penisilin, tübüllerden atılarak idrara geçer. Benzoik asid,

p-amino hippürik asid ve özellikle probenecid, tübüllerde

kompetisyon suretiyle penisilin eleminasyonunu bloke ederler;

dolayısıyla penisilinin kanda uzun müddet kalarak etki süre

sinin uzamasını temin ederler. Sütle atılan penisilinin teda

vi bakımından değeri yoktur.

f) Toksik Tesirleri

Kullanılan bütün penisilinlerin doza bağlı toksisite

leri yoktur. Uygulanan 100 milyon ünite penisilin G veya 30

gr methisilin hiç bir toksik tesir meydana getirmez. Buna kar

şılık bazen önemli yan etkiler ve tehlikeli hipersansibilite

reaksiyonları meydana getirirler. Tahriş edici oldukları için,

uygulanan penisilinler enjeksiyon bölgesinde ağrıya sebep olur

lar, hatta sinire rastlayacak olursa felçlere yol açabilirler.

İntravenöz uygulamadan sonra tromboflebit oluşabilir. Bu ne

denle konsantre solüsyon halinde enjekte etmemek lazımdır.

İntratekal uygulandıklarında santral sinir sistemi üzerine

irritan etki gösterebilirler; baş ağrısı, adele çekilmeleri,

hatta konvülsiyonlar oluşturabilirler~ Bu nedenle intratekal

enjekte edilen solüsyonun 1 ml'si 1000 üniteden fazla penisi

lin içermemesi ve total olarak da 30.000 üniteyi geçmemeli

dir. Ayrıca sifilitik şahıslarda Herxheimer reaksiyonuna sebep

olabilirler.

Penisilin türevlerinin tarihsel gelişmesi Tablo l'de

görülmektedir.

- 9 -

TABLO 1- Penisilinlerin Tarihsel Gelişmeleri ve Sınıflandı·rılmaları(4, 7)

Biosentetik Penisilin Penisilin V 1954

Penisilin Tllrevleri Ansilin 1961 · Nafsilin 1961 Methisilin 1961

tsoksazolilpenisil.id Oksasılı.n Kloksasilin

' l)ikloksasi-lin Flukloksasilin

Aminometil-PC Siklasilin 1967 Peııil ksaııtojen-PC Pirazosilin. FL 1060

Betasilin 1967 Amoksisilin · 1973 Amidaıııpi'ailin Episi lin 1969 Metaıııpisilin · 1969 Sun.siJin · Ureido-Pc· · Sulbeni:siiin · 19iO BL-P. 875. . BL-P i654

' 1 Ti~rsilin 1973

PENiSiLİN 6 Tuz Na, ıt: 1941 Prokaiıı 1948 Beazatin 1952 Clemiz.ol Feııilaras:İ.liıı

Ester Feııethemat-HJ·

UzNı;;-(s ~ .. r-N_LCOOH

Oralpenisilinler •---ll!llllllll Feııethisili.Jı · ·. 1960

O 6:..APA

GENi$· ETI<tLt PBdSlL:'lNLER

0-~·CO•HN.,-( ..ı . NH _;..-N- COOH

ı o .AMP1S1Lltf J961

(·TRtHIDRA'r.,·.SCD't'tN)

CH·CO·HN----r--('~ ~OONa

0~N- · ·cooNa

l<ARBENISILIN 1967

Propisilin 196'ı Azidosi'ıin 197l

Tuz Anhid;at Pot;asywiı. Bçnzatin

Ester Pirampisilin 1973 .Talaınpisilin 1974

Ester ltaİindasilin 1972 X.~fesilin 1974

- 10 -

2.2. İNCELENEN PENİSİLİN TÜREVLERİ

Etken madde ve farmasötik şekilleri incelenen penisi

linlerin kimyasal formülleri, internasyonal indekslere göre

adlandırılmaları, molekül ağırlıkları ve kapalı formülleri

Tablo 2 ve 3 1 de görülmektedir.

TABLO 2- İncelenen Penisilin Türevleri

Madde*

Oxacillin pı = Sodyum

p2 = Cloxacillin Sodyum

p3 = Dicloxacillin Sodyum

H H

~-NH±t~CH3 O ; CH3

R'

-R

~ /, co-, , N,O H3

-- cı ~ /, co-

N' \ 'o H3

- . - cı ~ /, co-

' cı ~\ H3

* Maddeler enternasyonal isimleri ile verilmiştir.

R'

-COONa

-COONa

-COONa

. ...

p4

Ps

p6

p7

= Flucloxacillin Sodyum

= Carbenicilin

= Carindacillin

= Ticarcillin

= Ampicillin trihidrat

= Amoksisilin

= Epicillin

P 11 = Bacampicillin

P12

= Pivampicillin

Pi 3 = Mezlocillin

- 11 -

- F

i ~ lı co~ CI N1 ~

'o CH3

. ---'

o-DL TH-C0-

C00H

Q-9~-co-' co

1

00) :::,...1

· DL

V-TH--:-CO-

C00H

HO~ gH-C0-'=7"""ı

NH2

-COONa

-COOH

-COOH

-COOH

-COOH

-COOH

-COOH

CH3 • 1 C0-0-CH-0-C0-0-C~s

CH3 • 1 C0-0-CHz-0-C0-C-CH3

1 CH3

-COOH

- 12 -

0-8H-CO-

Pl4 = Piperacillin 1 NH 1 co -COOH 1

cN:t° ~ o C2Hs

-

0-gH-CO-1 N3 -COOH

Pıs = Azidocillin

pl6 = Azlocillin o gH-C.0- -COOH

l><H 1 co 1

c~o NH

oco-. -COOH

Pl7 = Ciclacillin NH2

Pl8 = Penisilin G o-CH2-CO-Sodyum

-COONa

Pl9 = Penisilin V Q-o-CH2-CO-Potasyum -COOK

p20 = Phenbenicillin C6 11 .. 1 ~ -COOH

C6 H50CIICO

- 13 -

p21 ı o- OL

= Propicillin : '\ 0-CH-CO-. - 1

CH2-CH:t- . -COOH

p22 = C 1 amizol Cl

Mega Clemizol Q + Penisilin G

fa . o o::-~CHa-N + Penisilin G

N

TABLO 3- İncelenen Penisilin Türevleri

İncelenen Penisilin Türevi Kapalı formülü

pı c19HJ.8N3Na05S

p2 c19H17ClN3Na05S

p3 c19H16Cl2N3Na05S

p4 c19H16ClFN3Na05S

p5 C17H18N206S

p6 C26H26N206S

~ ~ S CH3 R-NH-t-f'" -y . 0~N-{tH3

R'

Kimyasal Adı

3,3-dimetil-6-(5-metil-3-fenil-4-isoksazolekarbok-samido)-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo(3,2,0)-heptan-2-karboksilik asid. Sodyum tuzu.

6-{ {{3~-(2-klorof eni 1) ~5-metil .:_4~isoksazo li l}karbo;i 1 }-amino}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo (3,2,0)heptan-2-karboksilik asid. Sodyum tuzu.

6-{3-(2,6-diklorofenil)-5-metil-4-isoksazolekar-boksamido}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-aza-bisiklo(3,2,0)heptan karboksilik asid. Sodyum tuzu.

6-{3-(2-kloro-6-florofenil)-5-metil-4-isoksazole-karboksamido}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-aza-bisiklo(3,2,0) heptan karboksilik asid. Sodyum tuzu

N-(2-karboksi-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}hept-6-yl)-2-fenil-malonamik asid.

N-(2-karboksi-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-l-azabisiklo{3,2,0}hept-6-yl)-2-fenilmalonamik asid 1-(5-indanyl)ester

Molekül Ağırlığı

423.42

457.89

492.31

475.89

378.40

494.56

......

.ı::--

TABLO 3- (devam)

p7 Cl5Hl6N206S2

p8 Cl6Hl9N3045

p9 Cl6Hl9N305S

pıo Cl6H21N304S

pıı C21H27N307S

Pl2 C22H29N306S

pl3 C21H25N508S2

6-{(karboksi-3-tienilasetil)amino}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-l-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-kar-boksilik asid

6-{D-(2-amino-2-fenilasetamido)}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2~0}heptan-2-karboksilik asid

6-{D-2-amino-2-(1,4-sikloheksadien-l-yl)asetamido}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-l-azabisiklo{3,2,0} heptan-2-karboksilik asid

6-{D-2-amino-2-(1,4-sikloheksadien-l-il) asetamido}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-l-azabisiklo-{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid

(2S,5R,6R)-6{(R)-(2-amino-2-fenilasetamide)} -3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0} heptan-2-karboksilik asid-1-hidroksietil karbonat esteri

6-{(aminofenilacetil)amino}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-l-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid (2,2-dimetil-l-oksopro-porsi)metil ester

{2S-{2a,5a,6S(S*)}}-3,3-dimetil-6-{{{{{3-(metil-sülfonil)-2-okso-l-imidazolidinil}karbonil} amino}fenilasetil}amino}-7-okso-4-tiya-l-aza-bisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid

384.43

403.45

365~41

351.42

465.52

463.55

539.58

..... V1

TABLO 3- (devam)

p14 C23H27N507S

p15 cı6H17N50 4s

p16 C20H23N506S

p17 C15H23N304S

p18 c16H17NaN204S

p19 Cl6H18KN205S

p20 C22H21KN205S

p21 c18H21KN2o5s

p22 C35H37ClN504S

6-{{{{(4-etil-2,3-diokso-1-piperazinil)karbonil} -amino}fenilasetil}amino}-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}-heptan-2-karboksilik asid

6-(D-2-azido-2-phenylacetamido)-3,3-di-metil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptane-2-karboksilik asid

(2S,5R,6R)-3,3-dimetil-7-okso-6-{(R)-2-(2-okso-1-imidazolidinkarboksamido)-2-fenil-asetamido}-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid

6-(l-aminosikloheksankarboksamido)-3,3-dimetil-7-okso-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid

3,3-dimetil-7-okso-6-{(fenilasetil)amino}-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid sodyum tuzu.

3-3-dimetil-7-okso-6-{(fenoksi asetil)amino}-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid. Potasyum tuzu,

3-3-dimetil-7-okso-6{(fenoksifenilasetil)amino} -4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid potasyum tuzu

3-3-dimetil-7-okso-6-(2-fenoksibutiramido)-4-tiya-1-azabisiklo{3,2,0}heptan-2-karboksilik asid potasyum tuzu

1-p-klorobenzil-pirolidinilmetil-benzimi-dazol+Penicilin G

517.55

375.40

461.49

341.43

356.38

389.39

464.60

416.55

659.23

1-" (J'\

- 17 -

2.2.1. Penisilinleriti 'Miktar Tayinleri

2.2.1.1. Mikrobiyolojik Tayin

Antibiyotiklerin in vitro ve in vivo tayinlerinde şim

diye kadar uygulanan en önemli tayin şekli mikrobiyolojik uy

gulamaya dayanan yöntemdir. Kullanılan mikrobiyolojik yöntem

lerin seçimi örneğin yapısına ve arzu edilen bilgiye bağlı

dır(*).

2.2.1.2. Kimyasal ve Enstrümantal Yöntemler

Penisilinlerin kantitatif analizlerinde kullanılan

kimyasal yöntemler genelde kimyasal bir değişikliğe uğramamış

molekül üzerinden yürüyen direkt yöntemler ve indirekt uygu

lanan parçalanma ürünleri veya türevlerle yapılan tayinler

olmak üzere iki grup halinde toplanabilir. Buna göre elde edi

len literatür bulguları, incelenen penisilinlere göre direkt

ve indirekt yöntemler olmak üzere ilgili tabloda verilmekte

dir (Tablo 4).

(*) Çalışmamızın konusu kimyasal analize dayandığı için penisilinlerin mikrobiyolojik tayinleri konusunda fazla bilgi verilmemiştir.

- 18 -

TABLO 4- İncelenen Penisilin Türevleri İçin Literatürde Verilmiş Olan Direkt ve İndirekt Yöntemler

A. Direkt Yöntemler

Square-wave polarografi 180

HPLC* 181

GC** 182

Spektrofotometri 196,269,290

TLC*** 263,266,282

Titrimetri Merkürimetrik 197

Nal04 ile titrasyon 265

N-bromo süksinimid ile 288

NMR**** 282

Titrimetrik Potasyum iyodat ile 245

Merkürimetrik 251


HPLC 149,150,176,179,181

Spektrofotometrik 151,196,257,229,290

Polarografi 237

ac-polarografi***** 153,228,238

Square wave-polarografi 180

Mikrobiyolojik yöntem 247

GC 182

NMR 191,282

RPLC****** 255

TLC 204,263,266,282

*HPLC: High Performance Liquid Chromatography **GC Gas Chromatography -

***TLC: Thin-Layer Chromatography ****NMR: Nuclear Magnetic Rezonans

*****ac-Polarografi: Alternative Current Polarography ******RPLC: Reverse Phase ~iquid ~hromatography

Titrimetrik

Square wave polarografi

HPLC

GC

TLC

Spektrofotometrik

Potansiyometrik

NMR

HPLC

Anodik

Kulometrik Titrasyon

RPLC

Kütle Spektroskopisi

ac-polarografi

Potansiyometrik

HPLC

Spektrofotometrik


Kütle spektroskopisi

TLC

ac-polarografi

IC*

RPLC

*IC: _!on ~hromatography

- 19 -

Nal04 ile titrasyon

Perklorik asit, p-toluensülfonik asit/EtOH-

265

180

181

182

266,282

196

C6H6 ve bütilamonyum hidroksit/Me0H-C6H6 ile 199

282

156,157,159,181

158

160

255

183

238

199

144,147,209,254

145,290

180

183

200,266

238

286

289

p6

ı~~krobiyolojik

I

RPHPLC*

_HPLC

HPLC

Metod

Polarografi

dc-polarografi**


DPP***

RPHPLC

GC

Kütle spektroskopisi

Spektrofotometrik

Titrimetrik

TLC

Polarimetrik

NMR

Fluorometrik

Mikrobiyolojik Metod

RPLC

- 20 -

Formol titrasyonu ile Sodyum metilat ile Potasyum iyodat ile Merkürimetrik Alkalimetrik N-bromo süksinimid ile

1227 286

1173 209,235,254

87,88,89,97,174,179, 210,211,212,254

237

90,218

180

201

92

93,111

93,183

95,98,115,118,122,192, 215,216,218,221,236, 257,270,290

103 109 245 177,197 193,256 288

204,263,266

189

191

198,240

217

289

*RPHPLC: Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography **dc-polarografi: Direct-Current Polarography -

***DPP: Differantial ~ulse ~olarography

- 21 -

HPLC 119,121,174,210,211, 254,277

RPLC 289,273

Fluorometrik 127,128,131,225

Spektrofotometrik 129,192,224,236

Square wave polarografi 180

RPTLC* 184

Titrimetrik Merkürimetrik 177

Alkalimetrik 193,256

Polarografi 223

dc-polarografi 226

dc-polarografi 154

HPLC 212

Fluorometri 240

Titrimetrik N-bromo suksinimid ile 288

RPLC 289

p12

IFluorometri 1198

p13

IHPLC 1178,179,213

p14

IHPLC 1171,234

*RPTLC: !everse ~hase _!hin _!:ayer ~hromatography

IHJn.C

_RPLC

IHPLC

IRPLC

HPLC

Dansitometrik

GC

Kütle Spektroskopisi

Titrimetrik

TLC

DPP

ac-polarografi

Spektrofotometrik

NMR

IC


RPLC

- 22 -

Demir III nitrat ile

1254 289

1142,178,213

1289

162,176

164

182

183

194


Arjantimetrik 195

As idimetrik 208

Demir III iyonu ile 239

Potasyum İyodat ile 245

Merkürimetrik 251,274

Arjantimetrik 292

NaI04 ile titrasyon 265

Susuz ortamda titrasyon 287

200,263,282

201

238

270,290

282

286

287

289

- 23 -

Titrimetrik Demir III iyonu ile 239

Merkürimetrik 251

Naıo4 ile titrasyon 265

Demir III nitrat ile 194

Arjantimetrik 195,291,292

Asidimetrik 208

N-bromo suksinimid ile 288

Polarimetrik 189

Fluorometrik 233

Kütle Spektroskopisi 183

GC 182

Spektrofotomerik 169,272,269

Polarografik 237

ac-polarografi 238

HPLC 166,167,233

TLC 263,266,282

NMR 282

IC 286

RPLC 189

Square-wav e polarografi 180

HPLC 254

Titrimetrik Nal04 ile titrasyon 265

TLC 282

NMR 282

Spektrofotometrik 289

HPLC 172

Titrimetrik Susuz ortamda titrasyon 287

Mikrobiyolojik Metod 287

B. İndirekt Yöntemler

Titrimetri

Spektrofotometrik

Kolorimetrik

Titrimerik

Spektrofotometrik

- 24 -

İyodometrik

Asid hidrolizden sonra

Kristal viyole ile

Tris tamponu ile

Bakır sülfat ile

Otomatize hidroksilamin ile

Bakır II ıyonu ile

İmidazol belirteci ile

Hg II iyonu ile

Hidroksamik asit ile

260,271

203

230

285

231,241,276

248,249,279

258

37

268

283

İyodometrik 151,261,271

İyodometrik(Kloramin T ile) 214

Ninhidrin ile 202

Bakır II iyonu ile 244

Tris tamponu ile

Ellman belirteci ile

.Amonyum Vanadat ile

Otomatize Hidroksilamin

285

252

253

yöntemi 279

İmidazol belirteci ile 37

Bakır sülfat ile 275,276

İyon Değiştirme Yöntemi Alkalimetrik ve kompleksometrik yöntemlerle 152

Mikrobiyolojik Yöntem İn-vivo olarak

IR* Döteryum oksit ve dimetil sülfoksit çözeltisi ile

*IR: Infra Red

264

284

Spektrofotometrik

Titrimetrik

IR


Spektrofotometrik

Titrimetrik

IR

Türbidimetrik

Kolorimetrik

Spektrofotometrik

Spektrofotometrik

- 25 -

Tris tamponu ile 285

Bakır II iyonu ile 206,244

Otomatize hidroksilamin ile 279


Bakır sülfat ile 276

İyodometrik 206,271

Döteryum oksit ve dime-til sülfoksit çözeltisi ile 284

Bacillussubtilis ve staphylococcus aeureus ile


Bakır sülfat ile

İyodometrik

Döteryum oksit ve dimetil sülfoksit çözeltisi ile

157,247

252

276

261

284

Mikrobiyolojik Yöntemle 146

4-02Nc6H4

N2+Cl- ile


92

283



Ellman belirteci ile 252


Mikrobiyolojik metod 247


IR

İn vivo

Döteryum oksit ve . dimetil sülfoksit çözeltisi ile

264

284

Spektrofotometrik

Polarografi

Fluorometri

Kolorimetrik

Dansitometrik

Türbidimetrik

HPLC

Mikrobiyolojik metod

Titrimetrik

Spektrofotometrik

- 26 -

İm.idazol belirteci ile 35

Hidrolizden sonra 220

Fluoreskamin belirteci ile 108


Civa klorür ile

4-dimetilamino sinnamaldehit ile

106

109

Civa II iyonu ile 268

Fosfomolibdik asit ile 104

Hidroksamik asit ile 283

Ninhidrin ile 96

Ninhidrin ve Kollidin ile 110

N,N-dimetil anilin ile 101

Mikrobiyolojik yöntemle 113,105,190

Mikrobiyolojik yöntemle 100

İyodometrik-Kloramin Tile

247,264

214

Fenasil bromid ile 111,116

İyodometrik-2,4-dibromo-N,N-dimetil anilin ile 188

İyodometrik 78,205,259,261,271


Alkali degradasyondan sonra 281

Ninhidrin ile 202


Asid hidrolizden sonra 203

Hidroksilamin belirteci ile 217

Kelatometrik

TLC

IR

Titrimetrik

Titrimetrik

Spektrofotometrik

- 27 -

Malonik asit ile

İınidazol katalizi ile


.Amonyum Vanadat ile

Bakır II kompleksi şeklinde

Bakır Sülfat ile

Asetilaseton ve formaldehit ile

İınidazol + HgCl2 ile

Çinko iyonu ile

o-hidroksikinonftalein ve palladium II ile

Otomatize hidroksilamin ile

Hidrolizden sonraimidazol +HgCl2 ile

Degradasyondan sonra

219

250

252

253

222,258

241,275

243

246,278

175

117

279

91,99

107

94

N,N-dimetil anilin ile 101


İyodometrik-2,4-dibromo-N,N-dimetil anilin ile 188

İyodometrik 78,120,205,225,261


İınidazol+HgCl2 ile 37,246

Palladium II iyonu ile 134

Bakır kompleksi halinde 136,225


4-aminofenazon ile

Çinko iyonu ile

91

175

- 28 -

Ferri hidroksamat Belirteci ile 225

Asit hidrolizden sonra 225

Asetilaseton ve formal-dehit ile 243

Mikrobiyolojik Metod 244

Kolorimetrik

HPLC

Fluorometrik

Titrimetri

Spektrofotometrik

Titrimetri

Spektrofotometrik

IR

2,6-diklorokinon klorimid ile

Folin-Ciocalteau Reak-

137

tifi ile 139

4-aminofenazon ile 140

İndirekt olarak 54

Na-kobaltinitrit ile 133

4-dimetilamino sinnamaldehit ile 135

Fosfomolibdik asit ile 130

Amperometrik yöntemle kombine olarak

Hidrolizden sonra

Civa klorür ile

Kompleksometrik-Bakır

asetat ile

İmidazol katalizi ile

İyodometrik

Bakır II iyonu ile

İmidazol katalizi ile

Döteryum oksit ve dime-til sülfoksit çözeltisi ile

123

125,126

132

155

170

206,261

206

250

284

Spektrofotometrik

Spektrofotometrik

Spektrofotometrik

Titrimetrik

Kolorimetrik

Gravimetrik

Potansiyometrik

HPLC

IR

- 29 -

Seryum IV sülfat ile 143

Çinko iyonu ile 175

İmidazol+HgCl2 ile 246

Hg(II)-imidazol belir-teci ile 274

Krom VI ve Metal III sülfat ile

Tris tamponu ile

Bakır asetat ile

Otomatize Hidroksilamin yöntemi ile


Amonyum Vanadat ile

Bakır II iyonu ile

186,187

285

232

248,249,279

252

253

258

İyodometrik 163,259,271,274,280,287

İyodometrik-İyod mono-klorür ile 207

Civa II iyonu ile

Metilen mavisi ile

Kromotropik asid ile


Bakır II ve Demir III iyonları ile

268

267

185

283

242

Demir III iyonu ile 239,287


Degradasyondan sonra 165


Titrimetrik

Titrimetrik

Gravimetrik

Kulometrik

Spektrofotometrik

Kolorimetrik

Türbidimetrik

Mikrobiyolojik

IR

Spektrofotometrik

- 30 -

İyodometrik-iyot mono klorür ile

İyodometrik

Demir III iyonu ile

İyodometrik, hidrolizden sonra

Otomatize Hidroksilamin metodu ile

Tris tamponu ile

207

260,271

239

168

248 , 249,279

285

Ellman belirteci ile 252

Amonyum vanadat ile 253


Hidroksilamin reaktifi ile 262

Azure Bile 170

Alkali degradasyondan sonra

Krom VI ve Metal sülfat ile

Kromatropik asid ile

Bakır II ve Demir III iyonları ile

Metilen mavisi ile

281

186,187

185

242

267

Cıva II iyonu ile 268

Mikrobiyolojik yöntemle 190

İn vivo 264



- 31 -

Titrimetrik İyodometrik 265

İyodometrik-Kloranıin T ile 214

Spektrofotometrik Bakır II iyonu ile 244


Bakır sülfat ile 275

Titrimetrik İyodometrik 287

Gravimetrik Demir II iyonu ile 287

2.2.1.3. Farmakope Yöntemleri

İncelenen penisilin türevlerinden farmakope kapsamına

alınanlarla ilgili miktar tayini yöntemleri Tablo 5'de toplu

halde görülmektedir.

TABLO 5- Analizleri Yapılacak Yarı Sentetik Penisilinlere Ait Farmakope Yöntemleri

Penisilin Türevi Farmakope Verilen Yöntem

pı USP XX Hg(II)-imidazol Fed.Code of Reg. İyodometrik Türk Farmakopesi Titrimetrik

p2 USP XX Hg(II)-imidazol Ph.Int. it - it

Fed.Code of Reg. İyodometrik

p3 USP XX Hg(II)-imidazol Fed.Code of Reg. İyodometrik Fed.Code of Reg. Arjantimetrik

p4 USP XX Hg(II)-imidazol USP XX İyodometrik Fed.Code of Reg, İyodometrik

- 32 -

TABLO 5- (devam)

PCi USP XX Hg(II)-imidazol

p6 Fed.Code of Reg. İyodometrik

" " il " Kolorimetrik hidroksilamin

p7 USP XX Hg(II)-imidazol

p8 Fed.Code of Reg. Susuz ort.titrasyon (Perklorik asit ve Li.metilat)

" il il il İyodometrik

" il il il Kolorimetrik hidroksilamin Ph.Int. Hg(II)-imidazol The Pharmaceutical Codex Kolorimetrik hidroksilamin Türk Farmakopesi Spektrofotometrik

pg USP XX Fed.Code of Reg. İyodometrik

il il " il Kolorimetrik hidroksilamin " il il il Susuz ort.titrasyon

(Perklorik asit ve Li.metilat)

pl8 Fed.Code of Reg. Gravimetrik il il il il İyodometrik

Ph.Helvatica İyodometrik

" il Gravimetrik USP XX Hg(II) imidazol Ph. Int. Hg(II)-imidazol

Pl9 Fed.Code of Reg. İyodoınetrik USP XX Hg(II)-imidazol The Pharmaceutical Codex İyodometrik E.Ph. İyodometrik Türk Farmakopesi İyod0metrik

" il Spekcrofotometrik

2.2.1.4. İncelenen Penisilinlerin Farmasötik Şekilleri

Geliştirilen yöntemler penisilin türevlerinden Batı

Almanya, İngiltere ve Türkiye'de tedavide kullanılan tablet,

kapsül ve injeksiyon çözeltisi şeklindeki çeşitli farmasötik

şekillere uygulanmıştır. Çalışmamıza konu olan penisilin tü

revlerine ait farmasötik şekiller Tablo 6'da görülmektedir.

TABLO 6- Analizi Yapılan Penisilinlerirt Farmasötik Şekilleri

Etken Farmasötik Şeklin Adı Maddesi Dozajı(mg) Kullanılış Şekli

® pı 250 Kapsül Stapenor

500/5 ml İnjeksiyon çözeltisi 1000/10 ml " "

b . ® p2 250 Kapsül Or enın 500 il

250/1,5 ml İnjeksiyon çözeltisi 500/5 ml " il

1000/10 ml il il

. 1 ® p3 250 Kapsül Dıch or-Stapenor 500/5 ml İnjeksiyon çözeltisi

@ · P4 250 Kapsül Staphylex

500 il

250/2 ml İnjeksiyon çözeltisi 500/5 ml il il

1000/10 ml il il

® Geopen Ps 382 Tablet

. ® Carındapen p6 500 Tablet

. ® P7 1000/25 ml İnjeksiyon çözeltisi Aerugıpen

2000/100 ml " il

5000/250 ml il il

10000/500 ml

Üretildiği Firma ve Ulke

Bayer Leverkusen . Batı Almanya

Beecham Research Lab. Brentford, İngiltere

Bayer Leverkusen, Batı Almanya

Beecham Research Lab. Brentford, İngiltere

Pfizer İlaçları A.Ş., Türkiye

Pfizer Inc. Batı Almanya

Beacham-Wülfing, Batı Almanya

lı.i (.ıJ

Ampicillin®Ratiopharm 1000

Cymbi®soo

® Cymbi 1000

••• ® Ampıcıllın 1 g

Ampicillin®500 mg

® Amblosin 500

® Amblosin 1000

Ampicillin®IOOO Stada

••• ® Ampıcıllın 500 Stada

® Pen-Bristol

® Penbrock

® Binotal 500

® Binotal 500

® Binotal

p8 1000

500

1000

1000

500

500

1000

1000

500

500

1000

250/1 ml 500/2 ml 1000/ 5 ml 2000/10 ml 5000/100 ml 250 500

500

500

3000/60 ml 500/5 ml

Tablet

Kapsül

Tablet

Tablet

Tablet

Tablet

Tablet

Tablet

Kapsül

Kapsül

Kapsül

İnjeksiyon çözeltisi il il

il il

" " İnfüzyon çözeltisi Kapsül Kapsül

Tablet

Kapsül

Şurup

İnjeksiyon çözeltisi

Ratiopharm GmbH Batı Almanya

Dolorgiet Batı Almanya

Dolorgiet BAtı Almanya

Sanorania Batı Almanya

Sanorania Batı Almanya

Hoechst AG, Batı Almanya

Hoechst AG, Batı Almanya

Stada Chem.ie GmbH, Batı Almanya

Stada Chemie GmbH, Batı Almanya

Grünenthal, Batı Almanya

Grünenthal, Batı Almanya

Beecham-Wülfing, Batı Almanya il il il il

il il il il

" il " il

" il " il

" il il il

' " il " il

Bayer-Leverkusen, Batı Almanya

" " " il

il il il " " fi " il

1.,.)

~

® Amoxypen 500 p9 500 Kapsül

® Amoxypen 750 750 Tablet

® Amoxypen 1 g 1000 Tablet

. . ® Prımasın 250 Kapsül

® Alfoxil 250 Kapsül

· · ®50 Infectomycın O 500 Tablet

. . ® Infectomycın 750 750 Tablet

. f . ®ı o In ectomycın 00 1000 Tablet

® Clamoxyl 500 500 Kapsül

® Clamoxyl 750 Tablet

® Clamoxyl 1 g 1000 Tablet

® CLamoxyl -Tropfen 2000 İnjeksiyon çözeltisi

® Clamoxyl -Trockensaft 4000/120 ml Şurup

Spectacillin®ıooo Pıo 1000 Draje

·ı · ®50 Spectacı lın O 500 Kapsül

Spectacillin ®250 250/60-120 ml Şurup • ®

Brıcapen Pll 800 Tablet

. 1 . ® Berocı lın Pl2 350 Tablet

·ı . ® Berocı lın -forte 700 Tablet

Grünenthal GmbH, Batı Almanya

il il il il

il il il il

Eczacıbaşı İlaç San.ve Tic.A.Ş., Türkiye

Abfar İlaç San.ve Tic.A.Ş., Türkiye

Von Heyden GmbH, Batı Almanya

il il il il il

il il il il il

Beecham-Wülfing, Batı Almanya

il il ,, il

il "'. il il il

" " il "

" " il "

Sandoz AG, Batı Almanya

il " " "

" il " " Astra Chemicals GmbH, Batı Almanya

Thomae GmbH, Batı Almanya

" il " il

l,.)

\J1

® 500/ 5 ml İnjeksiyon Çözeltisi Baypen Pl3 1000/10 ml il il

2000/20 nıl " " 3000/30 ml il il

4000/40 ml il il

5000/50 ml il il

10000/100 ml il il

•• ® 1000/10 ml İnjeksiyon Çözeltisi Pıprıl Pl4 2000/20 ml il il

4000/40 ml il il

6000/60 ml " il

Syncillin ®7 50 Pı5 750 Granül

· · ®250 Syncıllın 250 Granül

® 500/5 ml İnjeksiyon Çözeltisi Securopen Pl6 1000/10 ml il il

2000/20 ml il il

4000/40 ml il il

5000/50 ml il il

10000/100 ml il " Ul traci llin ®soo p17 500 Tablet

Ultracillin®ı g 1000 Tablet

Penciillin®G Hoechst Pıa 387/5 ml İnjeksiyon çözeltisi

• • ® 1 1 5 Pl9 982,32 Tablet Megacıllın ora , Mega

·® 653,60 Tablet Megacillın oral

Megacillin®oral 600 392,20 Tablet

~ Bayer-Leverkusen, Batı Almanya il il il il

il il il il

il il il il

il il il il

il il il il

il il il il

Cyanamid-Lederle GmbH, Batı Almanya il il il il' il

il il il il il

il il il ". il

Troponwerke, Batı Almanya

il . il il

Bayer-Leverkusen, Batı Almanya il il il il

il il . il il

il il il il

il il il il

il il il il


" il il il·

Hoechst AG, Bat~_Almanya

Grünenthal GmbH, Batı Almanya il il il il

il il il il

il il il "

w

"'

Beromycin®400 p 400/150 ml 19

·® Beromycın -mega 1000/500 ml

. ® 1 5 ' Arcasın - , Mıo 1000

. ®. Arcasın Mıo 650

·® Arcasın 600 390

® Arcasin 400 260

® Arcasin Saft 39/75-100 ml

Oricillin®400 p21 280

· · · ®600 0rıcıllın 420

. ·11· ® Orıcı ın Mega 700

.. ® p22 1000000 Megacıllın

IE/3,5 ml

.. ® Megacıllın forte 3600000

IE/5 ml


il il

Tablet

Tablet

Tablet

Tablet

ŞUrup

Tablet

Tablet

Tablet


il il

Boehringer Ingelheim, Batı Almanya

il il il il

Karı Engelhard, Batı Almanya

il . . il il il

il il il il

il il il il

" il " il


il " il il

il il il il


il il il il

(.,J

""-1

- 38 -

2.3. SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLER

2.3.1. Ellman Belirtecinin Gelişimi ve Uygulamaları

DTNB veya daha yaygın olarak Ellman belirteci olarak

tanınan S,S'-ditiyobis(2-nitro benzoik asid veya {bis (3-kar

boksi-4-nitro-fenil)-disülfür} 1959 yılında G.L.Ellman tara

fından sulu tampon çözeltilerde çözünen sülfidril gruplarının

miktar tayininde kullanılmak amacıyla sentez edilmiş ve belir

teç biyolojik materyale uygulanmıştır(9). Yapılan tayinlerin

esasını kükürt içeren bir bileşiğin direkt veya indirekt ola

rak nötr veya hafif alkali ortamda DTNB'nin S-S bağını parça

laması ve spektrofotometrik olarak ölçülebilen S-tiyo-2-

nitrobenzoik asid {No 2c6H3

(COO-)S-} yapısında sarı renkli bir

ürünün oluşması teşkil etmektedir(lO). Sentezinden kısa bir

müddet sonra Beutler ve arkadaşları Ellman belirtecini kan

glutationunun tayininde kullanmışlardır(ll). 1967 yılında

Harrap, kandaki asidde çözünür disülfür miktarını DTNR'yi

kullanarak tayin etmiş(l2), Robyt ve arkadaşları ise Asper

gillus oryzae, a-amilaz, papain ve lisozim içindeki -SH ve

-S-S- gruplarının sayısını yine aynı belirteci kullanarak uy

guladıkları miktar tayini yöntemi ile saptamışlardır(l3). Di

sülfürlerin tayininde kullanılan seçici ve hassas bir yöntemin

esasını ditiyotreitol veya d-tiyoeritritol ile redüklendikten

sonra oluşan monotiyollerin DTNB ile miktar tayini teşkil et

mektedir(l4). Ellman belirteci ayrıca sülfür(lS) ve sülfit(l6)

miktar tayininde kullanıldığı gibi kağıt ve ince tabaka kro

matografisinde bazı tiyollerin tanımında da kullanılmıştır(l7).

DTNB sülfidril gruplarının ve indirekt olarak proteinlerin ve

bilhassa enzimlerin tersiyer yapılarının tayinine olanak sağ

lamıştır(l8). Asetilkolinesteraz tarafından serbest hale ge

çirilen tiyokolinin DTNB ile miktar tayini, bu enzim ile il

gili birçok çalışmayı yönlendirmiş ve dokulardaki izoenzimle

rin tanınmasına yardımcı olmuştur(l9,20).

- 39 -

Normal ve patalojikeritrosit ve eritrosit membranla

rındaki sülfidril grupları Ellman belirteci kullanılarak

araştırılmıştır(21). Memeli hayvanların ovalbuminleri, bovin,

8-laktoglobulin ve serum albumini tayininde DTNB'nin birçok

belirteç arasında en uygun olduğu saptanmıştır(22). Protein

lerdeki disülfür miktar tayininin esaslarını bu grup maddeler

için uygulanan yöntemlerin sodyum borohidrat ile indirgenme

den sonra, indirgenin aşırısının uzaklaştırılıp, tiyol grubu

nun DTNB ile tayini teşkil etmektedir(23). Günümüzde yaygın

bir kullanım alanı olan ve standart tiyol grubu belirteci ola

rak bildirilen DTNB 1972 yılından itibaren bazı farmasötik

tiyollerin tayininde de kullanılmaya başlamıştır. Vermeij,

benzilpenisilin, kloksasilin, ampisilin ve metisilin çözelti

lerinde penisilenik asid tayininde Ellman belirtecinden ya

rarlanmıştır(24). Sistemminin stabil enjeksiyon preparatların

da etken madde ditiyotreitol (Cleland belirteci) ile indir

genmiş veya indirgenmemiş halde DTNB ile tayin edilmiştir(25).

D-penisilamin çözeltilerinin stabilitesi yine aynı belirteç

kullanılarak gözlenmiştir(26). 1976 yılında J.Kirschbaum pe

nisilinlere benzer yapıda olan sefalosporinlerin tayininde

uygulanmıştır(27). 1979 yılında ise Vermiej(28) idrarda peni

silamin üzerinden penisilin miktar tayininde Ellman belirte

cini kullanmıştır.

2.3.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yönteminin Gelişimi ve Uygulamaları

imidazolün 1858 yılında Debus tarafından glioksal üze

rine amonyak ilavesi ile hazırlandığı bildirilmiştir(29). Bu

madde genel olarak kimyasal reaksiyonlarda katalizör rolü oy

namaktadır(30-32). İmidazolün merküri klorür ile bir kompleks

oluşturduğu Brook ve Davidson tarafından bildirilmiştir(33).

Bundgaard penisilinlerin penisilenik aside imidazolle katali

ze olmuş izomerleşmesini incelemiş ve yaptığı çalışmalarda

imidazol üzerine ilave edilen merküri klorürün dayanıklı ol-

- 40 -

mayan penisilenik asiddeki sülfidril gruplarına eklenerek da

yanıklılığı arttırdığını saptamıştır(34-36). Bundgaard daha

sonra 9 penisilin türevinin Hg(II)-imidazol belirteci kulla

narak spektrofotometrik tayinlerini gerçekleştirmiştir, fakat

bu yöntemin ampisilin, fenoksimetilpenisilin ve fenetisiline

uygulanamayacağını çünkü bu penisilinler de penisilenik asid

oluşum hızının, bozunma hızından daha yavaş olduğunu açıkla

mıştır(37). 1974 yılında gerçekleştirdiği bir çalışmada ise

Bundgaard yan zincirdeki amino grubunu asetilleyerek ampisi

linin tayinini bir önceki yöntemle mümkün kılmıştır(38).

Yamana ve arkadaşları çalışmalarında fizyolojik şartlar altın

da hızlı penisilloilleşme imkanlarını açıklamak amacıyla peni

sillinlerin bir çok imidazol türevi ile verdikleri reaksiyon

ları incelemişlerdir(39). Bundgaard'ın geliştirdiği yöntem

1975 yılında Kashiro ve Fujita tarafından sulbenisilin miktar

tayinine uygulanmıştır(40). Bundgaard tarafından 1977 yılında

yapılan diğer bir çalışmada imidazol yöntemi diğer amino peni

silinlerin miktar tayinine uygulanmış, bozunma ve polimerizas

yon ürünlerinin reaksiyona zarar vermediği bildirilmiştir(41).

Ampisilin ve ön ilaçları pivampisilin ve bakampisilin'in yan

yana differansiyel kinetik incelemeleri de yine Bundgaard ta

rafından Hg(II)-imidazol belirteci kullanılarak gerçekleşti

rilmiştir(42). Daha sonra karbenisilin ve ön ilaçları karin

dasilin ve karfenisilinin yanyana tayininde yine aynı belir

teçten faydalanılmıştır(43). B.P. 1980 1 de(44) ampisilin(44a),

amoksisilin(45) ve kloksasilin(46), Enternasyonel Farmakopede

ise ampisilin(47) ve kloksasilin(48) için Hg(II)-imidazol be

lirtecini kullanan yöntemler bildirmektedir. Bu reaktifin se

falosporin grubu antibiyotiklere ilk uygulanması Bodnar ve ar

kadaşları tarafından otomatize bir yöntemle gerçekleştiril

miştir(49). Daha sonra Marini sefadroksilin spektrofotometrik

miktar tayininde Hg(II)-imidazol belirtecinden faydalanmış

tır(SO). Şengün ve Ulaş sefalosporinlerin sistematik analiz

lerinde EDTA:HgC1 2 (2:1) oranda EDTA içeren modifiye edilmiş

Hg(II) imidazol-EDTA yöntemini geliştirmiştir(50a).

- 41 -

2.3.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yönteminin Gelişimi ve

Uygulamaları

Karboksilli asid türevlerinin hidroksilamin ile reak

siyonu sonucunda oluşan hidroksamik asidlerin demir(III) iyo

nu ile verdikleri renkli kompleksten faydalanılarak spektro

fotometrik tayinler yapmak mümkün olmaktadır. Bamberger tara

fından 1899 yılında geliştirilen, hidroksilaminin benzhidroks

amik aside dönüştürülmesinden sonra demir ile mor-kırmızı renk

vermesi esasına dayanan reaksiyon(Sl) Feigl tarafından ancak

1934 yılında analitik kimya uygulamalarına alınmış ve karbok

silli asid, ester ve anhidritleri için "spot test'', bu renk

reaksiyonundan faydalanılarak geliştirilmiştir(52,53). Ferri

hidroksamat reaksiyonu birçok ester türünün, amidlerin, siklik

imidlerin, anhidritlerin, nitrillerin, indirgen şekerlerin ve

şeker asidinin yanısıra laktonların tayininde de kullanılmış

tır(54,55). Lipmann ve Tuttle asetil fosfatın tayininde hid

roksilamin belirtecinden faydalanmışlardır(56). Glukonolakton,

galaktonalakton ve bunların serbest asidlerinin hidroksilamin

ile tayini 1959 yılında Lien tarafından gerçekleştirilmiş

tir(57). Pantenol ve pantotenatlar hidrolizden sonra pantoil

lakton halinde hidroksilamin ile reaksiyona sokularak tayin

edilmişlerdir(SB). Hidroksilamin yöntemi penisillinlerin mik

tar tayinine de uygulanmıştır. Hem elle yapılan, hem de otoma

tize işlemler uzun yıllar standart maddeleri ve ilaç madde

lerindeki penisillin içeriğini tayin etmede kullanılmıştır(59-

61). Flynn hidroksilamin ile reaksiyon sonucunda tüm penisil

lin ve sefalosporinlerin beta laktam halkalarının alkali or

tamda parçalanarak ilgili hidroksamik asid sodyum tuzunu

oluşturduğunu bildirmiştir(62). USP XX 1 de ve CFR 1 de penisi

linlerden ve sefalosporinlerden bazıları için kolorimetrik

hidroksilamin yöntemi verilmektedir(63,79). USP XX'de ayrıca

yine sefalosporin ve penisilinler için otomatize hidroksilamin

yöntemi v~rilmiştir(64). Walter ve arkadaşları geliştirdikle

ri otomatize yöntemde, hidroksilamin ile reaksiyona girmeyen

- 42 -

ve UV elektromanyetik radyasyonunu absorplayan maddeler ve

bozunma ürünleri yanında bozunmaya uğramamış sefalazolini ta

yin etmişlerdir(65). 1972 yılında Munson ve Connors(66), asid

hidrazidlerin spektrofotometrik tayininde nikel(II) ile kata

lize edilmiş hidroksamik asid oluşumundan faydalanmışlardır.

Daha sonra asetik asidin sudaki çözeltisinin nikel(II) ve

hidronyum iyonu ile katalize edilen reaksiyonlarının kinetik

ve denge çalışmaları incelenmiştir(67). Notari 1969 yılındaki

bir çalışmasında süksinimidin hidroksiaminolizinin mekanizma

sını ve kinetiğini çalışmıştır(68). Mays ve arkadaşları Munson

ve diğerlerinin Ni(II) iyonu ile geliştirdikleri katalizlen

miş ferri hidroksamat reaksiyonlarından faydalanarak sefalos

porinler için USP XX'de bildirilen kolorimetrik hidroksilamin

yöntemini modifiye etmişlerdir(70). 1976 yılında ise Kula sefa

losporin ve penisillinlerin miktar tayini için geliştirdiği

otomatize sistemde nikelsiz hidroksilamin belirtecini kulla

narak bir yöntem geliştirmiştir(69).

- 43 -

3, DENEYSEL BÖLÜM

3.1. KULLANILAN MADDELER

5,5'-Ditiyobis-(2-nitrobenzoik asid)(Ellman belirteci) Janssen Pharm~ceutica Aldrieh Europe

Hidroksilamin.HCl(Merek)

Ni(N03

) 2 .6H 20(Panereae)

NaHC03

, d.H 2so4 , NH4 Fe(so4 ) 2 .ız H20(Merek)

NaOH(Merek) , d.HCl (Ferak)

İmidazol p.a. (Merek)

HgC1 2 (Merek)

Titriplex III (Merek)

Dibazik potasyum fosfat (Merek)

Monobazik potasyum fosfat (Merek)

Sodyum tiyosülfat (Merek)

Na 2co 3 , İyot (Merek)

Potasyum İyodür (Mallinekrodt)

Çinko klorür (Merek)

İsopropanol, Aseton, Piridin, gl.AeOH (Merek)

Etil asetat (Merek)

Sodyum ve disodyum hidrojen fosfat (Merek)

Sitrik asit, sodyum asetat (Merek)

Nişasta ( Merek)

Alkol (Tekel)

a) DC-Plastikfolien Kieselgel 60 F 254 Art. 5735 (Merek)

b) TLC-Cellulose ready aluminium sheets (Carı Sehleieher

and Sehüll)

- 44 -

Analizlenen yarı sentetik penisilinler aşağıdaki kuru

luşlardan sağlandı:

- Oksasilin Na+: Bayer-Leverkusen/Batı Almanya

- Kloksasilin Na+: Beecham.Research.Lab.Brentford/İngiltere - Dikloksasilin Na+: Bayer-Leverkusen/Batı Almanya

- Flukloksasilin Na+:Beecham Research Lab.Brentford/ İngiltere

P5

- Karbenicilin: Pfizer Inc./Batı Almanya

P6

- Karindacilin: Pfizer Inc./Batı Almanya

P7

- Tikarsilin: Beecham-Wülfing/Batı Almanya

P8

- Ampisillin trihidrat: Grünenthal GmbH/Batı Almanya

P9

- Amoksisilin: Grünenthal GmbH/Batı Almanya

P10 - Episilin: Sandoz AG/Batı Almanya

P11

- Bakampisilin: Astra Chemicals GmbH/Batı Almanya

P12 - Pivampisilin: Thomae GmbH/Batı Almanya

P13 - Mezlosilin: Bayer-Leverkusen/Batı Almanya

P14 - Piperasilin: Cyanamid-Lederle GmbH/Batı Almanya

P15 - Azidosilin: Troponwerke/Batı Almanya

P16 - Azlosilin: Bayer-Leverkusen/Batı Almanya

P17

- Siklasilin: Grünenthal GmbH/Batı Almanya + P

18 - Penisilin G Na: Hoechst AG/Batı Almanya

P19

- Penisilin V K+: Boehringer-Ingelheim/Batı Almanya

P20 - Phenbenisilin: Grünenthal GmbH/Batı Almanya

P21 - Propisilin: Grünenthal GmbH/Batı Almanya

P22

- Clamizol (Clemizol+penisilin G): Grünenthal GmbH/Batı Almanya

3.2. ÇÖZELTİLER

3.2.1. Ellman Belirteci İle Yapılan Çalışmada Kullanılan

Çözeltiler

a) 0.5 N NaOH Çöz~ltisi: 20 g NaOH 1000 ml distillen

miş deiyonize suda çözülerek hazırlandı.

- 45 -

b) 0.15 M pH 7.2 Fosfat Tamponu: Sörensene göre o.ıs M

Na 2HP04 çözeltisinin pH'sının uygun miktarlarda o.ıs M

NaH 2Po4 çözeltisi ilavesiyle pH 7.2'ye getirilmesi suretiyle

hazırlandı(252).

c) Ellman Belirteci: 20 mg DTNB'nin 100 ml o.ıs M pH

7.2 fosfat tamponunda çözündürülmesiyle hazırlandı. Bu çözel

ti kullanımı sırasında ışıktan korundu.

d) Penisilin Stok Çözeltileri: 10-20 mg penisilin tü

revi 10 ml distillenmiş deiyonize suda çözülerek kullanıldı.

3.2.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yönteminde Kullanılan Çözeltiler

a) İmidazol Stok Çözeltisi: 3 g imidazol yaklaşık 70

ml distillenmiş deironize suda çözüldükten sonra ortamın pH'

sı 5 N HCl ile 6.8 ± 0.05 1 e getirilip, 100 ml'ye tamamlandı.

b) Merküri Klorür Çözeltisi: Distile su ile% 0.27'lik

olarak hazırlandı. Bu çözelti HgC1 2'ye göre 10- 2 M'dir.

c) Hg(II)-imidazol Belirteci: İmidazol stok çözeltisi

nin 100 ml'sine 10 ml % 0.27'1ik merküri klorür sürekli ka

rıştırarak ve damla damla ilave ederek hazırlandı. Bu işlem

sonucunda bulanıklık olduğu takdirde çözelti yenilendi. Taze

olarak kullanılan bu çözelti imidazole karşı 0.4 M, HgCl2'ye

göre 0.9 x 10-3 M'dir.

d) EDTA Çözeltisi: Distile su ile% 0,74'1ük olarak

etilendiamintetraasetikasid disodyum tuzundan hazırlanır. Bu

çözelti 2xl0- 2 M'dır.

e) Hg(II)-imidazol-EDTA (imidazol 2) Belirteci: 4,08 g

imidazol tartılarak 85 ml distile suda çözülür, 1 ml % 0,74'

lük EDTA çözeltisi konarak karıştırılır ve yine karıştırarak

- 46 -

damla damla 1 ml % 0,27'lik HgC1 2 çözeltisi ilave edilir. Çö

zeltinin pH'sı 0,5 N HCl ile analizi yapılacak penisiline gö

re istenen pH 1 ya getirilir ve distile su ile 100 ml'ye tamam

lanır. Gerekli olduğu takdirde pH ayarlaması 0,5 N HCl'den

daha derişik veya seyreltik çözeltilerle veya 0,1 N NaOH ile

yapılabilir. İmidazol (2) belirteci imidazole göre 0,6 M,

HgC1 2 'e göre 10-4 M, EDTA'ya göre 2xl0- 4 M'dır.

f) Distile Su: Potasyum permanganat üzerinden distil

lenen deiyonize su ile hazırlanan distile su penisilin-

le standart çözeltilerinin ve ilaç şekillerinin çözeltileri

nin hazırlanmasında kullanılır.

g) Penisilin Stok Çözeltilerinin Hazırlanmasında Kul

lanılan Madde Çözücüsü: Stok çözeltinin 10 ml'sine 1 ml dis

tile su konarak hazırlandı. Bu çözelti imidazole göre 0.4 M

dır ve standart maddelerin ve farmasötik preparatların çözel

tilerinin hazırlanmasında kullanıldı.

h) Penisilin Stok Çözeltileri: 50-55 mg Penisilin 50

ml distile suda çözülerek hazırlandı.

3.2.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yönteminde Kullanılan Çözeltiler

a) Ni(II)-Hidroksilamin Belirteci: 6.95 g hidroksila

min hidroklorür ve 2.39 g nikel (II) klorür 30 ml distillen

miş deiyonize suda çözüldükten sonra ortamın pH'sı 10 N NaOH

ile 6.2 ± 0.05 yapıldı ve yine distillenmiş deiyonize su ile

50 ml'ye tamamlandı. Hazırlanan bu çözelti hidroksilamine gö

re 2 M ve nikele göre 0.2 M'dir.

b) NaHC03 Çözeltisi: Distillenmiş deiyonize su ile% 1

lik olarak hazırlandı.

- 47 -

c) Ferri Amony'U:ni •Sülfat ·Bel'irteci: 30 g Fe(NH4

) (so4

)

12 H2o, 2.7 ml derişik sülfürik asid ilavesiyle, distillenmiş

deiyonize su ile 100 ml'ye tamamlandı. Bu çözelti kullanımı

sırasında ışıktan korundu.

d) Penisilin Stdk •çö~eltileri: Yaklaşık 20 mg Penisilin

türevi 10 ml distillenmiş deiyonize suda çözülmek suretiyle

hazırlandı.

3.2.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon Yönteminde Kulla

nılan Çözeltiler

a) O.Ol N Sodyum Tiyosülfat Çözeltisi: 2.482 g

Na2s

2o

3.5H

2o ve 125 mg Na 2co

3 1 litre distillenmiş deiyonize

suda çözülmek suretiyle hazırlandı.

b) N Sodyum Hidroksid Çözeltisi: 40 g NaOH 1 litre

distillenmiş deiyonize suda çözülerek hazırlandı.

c) 1.2 N Hidroklorik Asid Çözeltisi: 36,80 ml HCl 1

litre distillenmiş deiyonize suda çözülerek hazırlandı.

d) O.Ol N İyot Çözeltisi: USP'ye göre 0.1 N iyot çö

zeltisinden hazırlandı.

e) Nişasta İyodür Pastası: 250 ml'lik bir beherde 100

ml distillenmiş deiyonize su kaynayıncaya kadar ısıtıldıktan

sonra 0.75 g potasyum iyodürün 5 ml sudaki çözeltisi ve 2 g

çinko klorürün sudaki çözeltisi ilave edildi. Kaynamaya devam

eden bu çözeltiye 5 g çözünür nişastanın 30 ml soğuk distil

lenmiş deiyonize sudaki homojen süspansiyonu sürekli karıştı

rılarak ilave edildi, iki dakika daha kaynatıldıktan sonra,

soğutularak kapaklı bir erlenmayerde muhafaza edildi.

- 48 -

f) 0.1 N İyot ÇBzeltisi: 14 g iyot 36 g potasyum iyo

dürün 100 ml sudaki çBzeltisinde çBzüldükten sonra 3 damla

HCl damlatılıp distile su ile 1000 ml'ye tamamlandı.

g) Stok Penisilin ÇBzeltileri: Penisilin türevlerinin

20 mg•ı· 10 ml distile suda çBzülmek suretiyle hazırlandı.

3.3. ALETLER

3.3.1. Spektrofotometreler

a) Beckmann Model B (Beckmann Instruments INC,

Fullerton, Calif. USA)

b) Zeiss PMQ II Model (Batı Almanya)

c) Shimadzu-Double beam spectrophotometer

UV-150-02 (Japonya)

d) Varian Techtron, Model 635 (İsviçre)

3.3.2. Diğer Aletler

a) pli Metreler: 7020 Electronic Instruments Limited

(İngiltere).

Metrohm Herisau E 516 (İsviçre).

b) Karıştırıcılar: Heidolf type MR 1 (Batı Almanya).

Elektro-mag Laboratuvar Aletleri (Türkiye).

c) Teraziler: Mettler H 20 (İsviçre).

Mettler (P 1210) (İsviçre).

d) Termostatlı su banyosu: Grant Instruments. Cambridge

Limited type SSB4 (İngiltere).

e) Santrifüj cihazı: Janetzki T5 (Batı Almanya).

f) Hamilton enjektBrü: Hamilton Bonaduz AG (İ~viçre).

g) Otomatik Fin Pipeti: (0.2-1 ml)(l.0-5 ml).

- 49 -

h) Hesap Makinaları:

1. Texas Instruments TL-51-III

2. Texas Instruments TL-35

3.4. ÇALIŞMA YÖNTEMLERİ

3.4.1. Ellman Belirteci İle Yapılan Çalışmalar

Her bir penisilin türevi için 2 mg/ml konsantrasyonda

hazırlanan ana çözeltiden 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 ve 1 ml penisi

lin çözeltileri çekilip, kapaklı tüplere aktarıldı ve hacim

leri distile suyla 1 ml'ye tamamlandıktan sonra 0.5 ml 0.1

N NaOH çözeltisi ilave edilip oda temperatüründe belli süre

bekletildi ve daha sonra 0.5 ml 1 N HCl ilave edilerek kaynar

su banyosunda her bir penisilin için ayrı ayrı saptanan süre

lerde degradasyona tabi tutuldu. Reaksiyon süresinin sonunda

tüpler buz banyosuna konup, ısıları oda sıcaklığına getiril

dikten sonra Hamilton enjektörü kullanılarak 0.050 ml degra

dasyona uğramış penisilin çözeltisi cam küvete kondu; üzerine

3 ml Ellman belirtecinin 0.15 M pli 7.2 fosfat tamponundaki

çözeltisinden ilave edildi ve örneğin absorbansı izoksazolil

grubu penisilinler için 412 nm'de, diğer penisilinler için ise

410 nm'de aynı şartlarda hazırlanmış olan şahit çözeltiye

karşı ölçüldü.

3.4.2. Hg(II)-İmidazol-EDTA Yöntemi İle Yapılan Çalışmalar

Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminin sefalosporinlere uygu

lanmasında 78-l00°C'lar arasında çalışıldığında reaksiyon

ısısı arttıkça hassasiyetin arttığı buna karşılık tekrarlana

bilirliğin azaldığı, yüksek temperatürde ve uzun süreli ısıt

malarda A 'un kaybolduğu bildirilmektedir(SOa). Yine tayinde max kullanılan imidazol belirteci HgC1 2 içermediği zaman A 'un max kaybolduğu, hassasiyetin azaldığı ve Hgcı 2 varlığının bu spek-

trofotometrik tayin için gerekli olduğu saptanarak daha önce

- 50 -

sefadroksilin imidazol ile miktar tayininde(72) verilmiş olan

Hg(II)-imidazol belirtecinin hazırlanmasında kullanılan% 0,27

lik HgC1 2 konsantrasyonunun tayinler içinde elverişli olduğu

ve bu konsantrasyonun üzerinde civa tuzlarının çöktüğü bildi

rilmektedir.

İmidazol konsantrasyonu 0,4-0,5 M olduğunda maksimum

absorbans saptanmaktadır. Bu konsantrasyon daha önce penisi

linler için 1,2 M(37) sefadroksil için 1,2 M(71), sefapirin

için ise0.013 M(73) olarak verilmektedir.

Belirtecin pH'sı 6.8 olduğunda maksimum absorbans elde

edilmektedir. Bu pH'dan sonra absorbans düşmekte ve pH 7.2'

den sonra civa tuzları çökmektedir.

Yapılan ölçmelerdeki sonuçların büyük sapmalar göster

mesi ve belirli pH'larda çözeltilerin stabil kalmaması, ab

sorbanslarda ve A 'larda büyük sapmalar gözlenmesi üzerine max Hg(II)-imidazol yöntemi ile penisilinler üzerinde yapılan ça-

lışmalar yaptığımız tezde çalışma konusu olarak alınmamıştır.

Bu konuda sefalosporinler üzerinde yapılan çalışmalarda da

sonuçlarda stabil durum gözlenmemektedir(50a). Çalışmalarımız

da Hg(II)-imidazol belirteci kullanıldığında bazı penisilin

türevlerinde A teşekkülünün olmadığı, A teşekkül etse max max bile yeterli hassasiyetin sağlanamadığı ve konsantrasyonla

absorbans arasındaki bağıntının doğrusal olmadığı görüldü.

Hg(II)-imidazol belirteci ile reaksiyon vermeyen penisilinle

rin pH 6.8'de iç tuz halinde bulunabileceği ve izoelektrik

alan dışında reaksiyon verebileceği düşünülerek, pH 3-11 ara

sında değiştirilip Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemi koşulları

araştırıldı. pH >7.2 olduğunda civa tuzlarının çökmelerini önlemek

üzere, Hg(II) yi çözeltide kompleks şeklinde tutmak için Hg(II)

konsantrasyonunun iki misli olacak şekilde ortama etilendiamin

tetraasetikasid disodyum tuzu ilave edildi ve çalışıl~n peni-

- 51 -

silinlerin hangi pH 1 da maksimum absorbans gösterdiği saptandı.

Bu yöntemde 85 ± ı°C'lik su banyoları kullanıldı.

İlgili yöntemde kullanılan Hg(II)-imidazol-EDTA belirte-. d . o-4 -4 cın ekı HgC1 2 konsantrasyonu 1 M, EDTA konsantrasyonu 2x10

M, imidazol konsantrasyonu ise 0,6 M'dır. Penisilinlerin stok

çözeltileri referans standart madde kullanarak distile su ile

hazırlandı. 1 ml penisilin çözeltisine 5 ml Hg(II)-imidazol

EDTA belirteci ilave edildi. Ölçme çözeltisinin imidazol kon

santrasyonu 0,5 M'dır.

Ölçmelerde 1 cm'lik kuvartz küvetler kullanıldı.

3.4.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yöntemi İle Yapılan Çalışmalar

Analizi yapılacak penisilinlerin ana çözeltileri refe

rans standart madde ile% 1 NaHco 3 çözeltisinde hazırlanarak

3 ml sefalosporin çözeltisine sırasıyla 2 ml Ni(II)-Hidroksi

lamin ve 5 ml ferri amonyum sülfat belirteci ilave edildi.

Çalışmada adı geçen bütün penisilinler için, Ni(II)-hidroksi

lamin ve ferri amonyum sülfat belirteçleri ile gerekli reaksi

yon süreleri saptandı. Ferri amonyum sülfat belirteci ile re

aksiyon süresi 15' olarak sabit tutulup her bir penisilin çö

zeltisi Ni(II)-hidroksilamin belirteci ile 10'-70' arasında

çeşitli sürelerde bekletildikten sonra ferri amonyum sülfat

belirteci ilave edildi ve okunan absorbans değerlerinden re

aksiyonun tamamlanması için gerekli süreler saptandı. Bu sap

tanan sürelere göre Ni(II)-hidroksilamin belirteci ile bek

letme süresi sabit tutulup ferri amonyum sülfat belirteci ila

vesinden sonra çözeltiler 5'-60' arasında bekletilerek eşit

aralıklarla gösterdikleri absorbans değerleri ölçüldü. Bu de

ğerlere göre ferri amonyum sülfat belirteci için gerekli re

aksiyon süreleri saptandı. Ölçmelerden önce Ni(II)-tuzlarından

oluşabilecek bulanıklığı önlemek için çözeltiler santrifüj

lendi.

Ölçmelerde 1 cm'lik cam küvetler kullanıldı.

- 52 -

3.4.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon Yöntemi İle

Yapılan Çalışmalar

USP XX'ye göre iyodometrik titrasyon aşağıdaki şekilde

yapılır(74-78).

a) Örnek ve standart stok çözeltilerinin hazırlanması:

Analizi yapılacak penisilinlerin standart stok ve örnek çö

zeltileri distile su ile konsantrasyonları 2.0 mg/ml olacak

şekilde örnek ve referans standart madde ile hazırlanır.

b) İnaktive edilmiş standart ve örnek çözeltileri*:

1- 2 ml örnek ve standart çözelti ayrı ayrı cam

kapaklı erlenlere aktarılır.

2- Herbirine 2 ml 1 N NaOH ilave edilip oda tempera

türünde 15 dakika bekletilir.

3- 2 ml 1.2 N hidroklorik asit ilave edilir.

4- 10 ml 0,01 N iyot çözeltisi ilave edilerek erlen

lerin kapakları kapatılır ve oda temperatüründe

15 dakika bekletildikten sonra (d) bölümünde be

lirtildiği şekilde titrasyon işlemi yapılır**·

c) Boş deneme: 2 ml örnek ve standart çözelti ayrı ay

rı cam kapaklı erlenlere aktarılır. 10 ml 0,01 N iyot çözelti

si ilave edilir ve derhal (d) bölümünde anlatıldığı şekilde

titre edilir.

d) Titrasyon işlemi: İyodun fazlası 0,01 N Na-tiyosül

fatla geri titre edilir. Titrasyonun sonuna doğru 1 damla ni-

* Alkali ortamda hidrolizle antibiyotik etkisi kaybolmuş çözelti.

** 10 ml 0,01 N iyot çözeltisi, 2 ml 1,2 N hidroklorik asit çözeltisi ilavesinden sonra 20 saniye içinde ilave edilmelidir ve tayin, örnek ve standart çözeltisi hazırlandıktan sonra 1 saat içinde tamamlanmalıdır.

- 53 -

şasta-iyodür pastası ilave edilir. Titrasyona 0,01 - 0,02 mi

lilitrelik porsiyonlar halinde 0,01 N tiyosülfat ilavesiyle

devam edilir ve her ilaveden sonra şiddetle çalkalanır. Ni

şasta-iyot kompleksinin mavi rengi kaybolduğu zaman titrasyon

durdurulur.

e) Hesaplamalar:

1- (F) faktör hesabı: Referans standart madde yukarı

daki bölümde anlatıldığı şekilde tayin edilir ve aşağıdaki

formül yardımıyla (F) faktörü (Harcanan 0,01 N sodyum tiyosül

fat çözeltisinin 1 mililitresine ekivalan mcg cinsinden akti

vite) hesaplanır.

F =

w s

W X P s

V s

= Titre edilen 2 ml standart çözeltideki referans

standart maddenin mg cinsinden miktarı.

P = Referans standart maddenin mcg/mg cinsinden paten-

si

V = Referans standart maddenin boş denemesi ve inaks

tive edilmiş çözeltileri için harcanan 0,01 N

tiyosülfat çözeltisi hacimleri arasındaki fark (Aradaki fark

inaktive edilmiş standart madde tarafından harcanan 0,01 N

iyot çözeltisine ekivalandır).

2- Örneğin mcg/mg cinsinden potensi aşağıdaki şekilde

hesaplanır:

p =

p

V u

V x F u w

u

= Örneğin mcg/mg cinsinden potensi

= Örneğin boş denemesi ve inaktive edilmiş çözelti

leri için harcanan 0,01 N tiyosülfat çözeltisi

- 54 -

hacimleri arasındaki fark (Aradaki fark inaktive edilmiş ör

nek tarafından harcanan 0,01 N iyot çözeltisine ekivalandır).

W = Titre edilen 2 ml örnek çözeltisindeki örneğin mg u

cinsinden miktarı.

3.5. FARMASÖTİK ŞEKİLLERİN MİKTAR TAYİNLERİ

3.5.1. Ellman Belirteci Yöntemiyle Yapılan Miktar Tayinleri

a) Ölçü Eğrilerinin Çizilmesi

Örneğin ml sinde 2 mg olacak şekilde hazırlanan stok

çözeltiden 1 ml çözelti alındı ve 3.4.1. bölümünde anlatıldı

ğı şekilde çalışıldı. Farmasötik şeklin mg cinsinden aktivi

tesi ölçülen absorbans değerleri, kalibrasyon eğrileri ve

aşağıdaki formül yardımıyla hesaplandı. Ellman yönteminde he

saplamalara esas olan formül şu şekildedir:

A= p X Aı

* 1000

A: Farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi

P: Kullanılan referans standart maddenin mcg/ml cın

sinden aktivitesi

A1

: Kalibrasyon eğrisi yardımı ile hesaplanan farmasö

tik şekildeki mg cinsinden madde miktarı

* Ellman, Hg(II)-imidazol-EDTA ve Ni(II)-hidroksilamin yöntemiyle miktar tayini yapılan f-armasötik şekillerin aktivite hesaplarında bu formül kullanılmıştır.

- 55 -

b) Farmasötik Şekillerin Miktar Tayinleri

1- İnjeksiyonluk Preparatlarının Miktar Tayinleri: Yu

karıda belirtilen konsantrasyonlarda olmak üzere farmasötik

şekiller distile suda çözülerek örnek çözeltisi hazırlanır.

Bundan 1 ml çekilir ve üzerine 0,5 ml 0,1 N Na0H konur. Daha

sonra 0,5 ml lN HCl ilave edilir ve degredasyondan sonra 0,050

ml Hamilton enjektörle alınan örneğin üzerine 3 ml Ellman be

lirteci ilave edilir ve ölçü eğrisinin hazırlanmasında olduğu

gibi işlemlere devam edilerek ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümünde

ki formül yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivi

tesi hesaplanır.

2- Kapsüllerin Miktar Tayinleri: Kapsüller açılarak

kafi miktarda distile su ilave edilir ve manyetik karıştırıcı

yardımıyla yarım saat karıştırılır. Konsantrasyonu yukarıda

belirtilen şekilde olmak üzere distile su ile gerekli hacme

tamamlandıktan sonra adi süzgeç kağıdından süzülerek süzüntü

den 1 ml çekilip 3.4.1. bölümündeki şekilde çalışılır. Öl

çülen absorbans değerinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümünde ve

rilen formül yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden akti

vitesi hesaplanır.

3- Tabletlerin Miktar Tayinleri: Tablet üzerine kafi

miktarda distile su ilave edilip manyetik karıştırıcı yardı

mıyla 1 saat karıştırılır. Konsantrasyonu yukarıda belirtildi

ği şekilde olmak üzere distile su ile gerekli hacme tamamla

nıp adi süzgeç kağıdından süzülerek süzüntüden 1 ml çekilip

3.4.1. bölümündeki şekilde çalışılır. Ölçülen absorbans de

ğerinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümündeki verilen formül

yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi hesapla

nır.

- 56 -

3.5.2. Hg(II)-imidazol~EDTA Yöntemiyle Yapılan Miktar

Tayinleri


Konsantrasyonları yaklaşık 2 mg/ml olmak üzere miktar

tayini yapılacak penisilinlerin standart çözeltileri referans

standart madde kullanarak Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemine gö-

re distile su ile hazırlanır. Bu stok çözeltiden sırasıyla

0,2-0,4-0,6-0,8-l,O ml alınarak kapaklı tüplere aktarılır ve

hepsi distile su ile 1 ml'ye tamamlanıp 3.4.2. bölümünde Tab

lo 3l'de her madde için gösterilmiş pH'da 5 ml Hg(II)-imidazol

EDTA belirteci ilave edilir. Tüplerin kapakları kapatılıp yi

ne Tablo 3l'de gösterilen ısı derecesi ve sürede su banyosun

da beklemeye bırakılır. Isıtma süresi sonunda su banyosundan

çıkartılan tüpler derhal buz banyosunda soğutulur, civa tuz

larından ileri gelebilecek bulanıklığı, önlemek üzere santri

füjlenir ve Tablo 3l'de gösterilen A 'da aynı şartlarda ha-max zırlanmış penisilin türevi içermeyen boş çözeltiye karşı gös-

terdikleri absorbans değerleri ölçülerek ölçü eğrisi çizilir.

b) Farmasötik Şekillerin Miktar Tayinleri*

1- İnjeksiyon Preparatlarının Miktar Tayinleri: Yukarı

da belirtilen konsantrasyonlarda olmak üzere farmasötik şe

killer distile suda çözülerek örnek çözeltisi hazırlanır. Bun

dan 0,5 ml çekilir, üzerine 0,5 ml distile su ilave edilir

ve Tablo 3l'de gösterilen pH'da 5 ml Hg(II)-imidazol-EDTA be

lirteci ilave edilip ölçü eğrisinin hazırlanmasında olduğu

gibi işlemlere devam edilerek ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümün

deki formül yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivi

tesi hesaplanır.

* İmidazol 2 yöntemine göre 2 ayrı Amax'da çalışılabilen penisilinlerin farmasötik şekillerinin miktar tayinleri yapılırken visibl alandaki A 'larla çalışılmıştır. max

- 57 -


kafi miktarda distile su ilave edilir ve manyetik karıştırıcı

yardımıyla yarım saat karıştırılır. Kontsantrasyonu yukarıda

belirtilen şekilde olmak üzere distile su ile gerekli hacme

tamamlandıktan sonra adi süzgeç kağıdından süzülerek süzüntü

den 0,5 ml çekilip 0,5 ml distile su ilave edilir. Tablo 31'

de belirtilen pH'da 5 ml imidazol 2 belirteci ilave edilip

ölçü eğrisinin hazırlanmasındaki gibi çalışılır. Ölçülen ab

sorbans değerinden ölçü eğrisi ve 3.5.l bölümünde verilen for

mül yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi hesap

lanır.


miktarda distile su ilave edilip manyetik karıştırıcı yardı

mıyla l saat karıştırılır. Konsantrasyonu yukarıda belirtil

diği şekilde olmak üzere distile su ile gerekli hacme tamam

lanıp adi süzgeç kağıdından süzülerek süzüntüden 0,5 ml çeki

lip üzerine 0,5 ml distile su ilave edilir. Tablo 3l'de belir

tilen pH'da 5 ml Hg(II)-imidazol-EDTA (imidazol 2) belirteci

ilave edilerek ölçü eğrisinin hazırlanmasındaki gibi çalışı

lır. Ölçülen absorbans değerinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölü

münde verilen formül yardımıyla, farmasötik şeklin mg cinsin

den aktivitesi hesaplanır.

3.5.3. Ni(II)-Hidroksilamin Yöntemiyle Yapılan Miktar Tayin

leri


Konsantrasyonları yaklaşık 2.0 mg/ml olmak üzere ana

lizi yapılacak penisilinlerin standart stok çözeltileri refe

rans standart madde kullanarak% l NaHco3

çözeltisi ile hazır

lanır. Bu standart stok çözeltiden sırasıyla 0,5-1-1,5-2-2,5-3

ml alınıp tüplere aktarılır, hepsi% l NaHC0 3 ile 3 ml'ye

tamamlanır. Tüplere 2'şer ml Ni(II)-Hidroksilamin belirteci

- 58 -

ilave edilip karıştırılır ve sonuçlar bölümünde Tablo 54'de

her penisilin için belirtilmiş olan sürede bekletilir. Bu sü

re sonunda tüplere 5'er ml ferri amonyum sülfat belirteci ila

ve edilir, karıştırılır ve yine aynı tabloda belirtilen süreye

göre bekletilir, Ni(II) tuzlarından oluşabilecek bulanıklığı

önlemek üzere santrifüjlendikten sonra aynı şartlarda hazır

lanmış sefalosporin içermeyen boş denemeye karşı Tablo 54'de

belirtilen A 'da ölçme yapılarak ölçü eğrisi çizilir. max

b) Farmasötik Şekillerirt Miktar Tayinleri

1- İnjeksiyon Preparatlarının Miktar Tayinleri: Kon

santrasyonları yukarıda belirtilen şekilde olmak üzere farma

sötik şekiller% 1 NaHC03 çözeltisinde çözülerek örnek çözel

tisi hazırlanır. Bu çözeltiden 1,5 ml çekilerek üzerine 1,5

ml % 1 NaHC03

çözeltisi ilave edilir ve ölçü eğrisinin hazır

lanmasındaki gibi işlemlere devam edilir. Ölçülen absorbans

değerinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümünde verilen formül

yardımıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi hesapla

nır.


kafi miktarda% 1 NaHco3

çözeltisi ilave edilir ve manyetik

karıştırıcı yardımıyla 15 dakika karıştırılır. Konsantrasyonu

yukarıda belirtilen şekilde olmak üzere% 1 NaHco3

çözeltisi

ile gerekli hacme tamamlandıktan sonra adi süzgeç kağidından

süzülerek süzüntüden 1,5 ml çekilip üzerine 1,5 ml % 1 NaHC03 çözeltisi ilave edilir. İşlemlere ölçü eğrisinin hazırlanma

sında anlatıldığı gibi devam edilir. Ölçülen absorbans değe

rinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümünde verilen formül yardı

mıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi hesaplanır.


miktarda% 1 NaHC03

çözeltisi ilave edilip manyetik karıştı

rıcı yardımıyla yarım saat karıştırılarak tabletin dağılması

- 59 -

sağlanır. Konsantrasyonu yukarıda belirtildiği şekilde olmak

üzere% 1 NaHC0 3 ile gerekli hacme tamamlanır ve adi süzgeç

kağıdından süzülerek süzüntüden 1,5 ml alınıp üzerine 1,5 ml

% 1 NaHC03

çözeltisi ilave edilir. Ölçü eğrisinin hazırlanma~·.

sındaki gibi işlemlere devam edilir. Ölçülen absorbans değe

rinden ölçü eğrisi ve 3.5.1. bölümünde verilen formül yardı

mıyla farmasötik şeklin mg cinsinden aktivitesi hesaplanır.

3.5.4. USP XX'ye Göre İyodometrik Titrasyon ile Yapılan Miktar

Tayinleri

USP XX'ye iyodometrik titrasyon ile farmasötik şekil

ler aşağıdaki şekilde tayin edilir(76-79,252).

1- injeksiyon Preparatların Miktar Tayini: Konsantras

yonu Bölüm 3.4.4'te belirtildiği şekilde olmak üzere farmasö

tik şekil distile su ile çözülüp gerekli hacme tamamlanarak

örnek çözeltisi hazırlanır. İşlemlere 3.4.4. bölümünde anla

tıldığı şekilde devam edilir.

2- Kapsüllerin Miktar Tayini: Kapsüller açılarak üze

rine kafi miktar distile su ilave edilir ve manyetik karıştı

rıcıyla karıştırılarak etken maddenin çözülmesi sağlanır.

Konsantrasyonu Bölüm 3.4~4'te belirtildiği şekilde olmak üze

re distile su ile gerekli hacme tamamlanır ve işlemlere 3.4.4

bölümünde anlatıldığı gibi devam edilir.

3- Tablet Miktar Tayini: Tablet üzerine kafi miktar

distile su ilave edilir ve manyetik karıştırıcıyla karıştırı

larak etken maddenin çözülmesi sağlanır. Konsantrasyonu Bölüm

3.4.4 1 te belirtildiği şekilde olmak üzere distile su ile ge

rekli hacme tamamlanır ve işlemlere 3.4.4. bölümünde anlatıl

dığı gibi devam edilir.

- 60 -

3.6. İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ ÇALIŞMALARI

3.6.1. Adsorbanlar

İnce tabaka kromatografisi çalışmalarında plastik fol

ya üzerine kaplanmış slikajel ve aluminyum folya üzerine

kaplanmış selüloz adsorban olarak kullanıldı.

3.6.2. Çözücü Sistemleri

Yapılan ince tabaka kromatografisi (İTK) çalışmaların

da aşağıdaki çözücü sistemleri kullanıldı(84,85).

1- n-propanol 39.5

piridin 26.3

gl-AcOH 7. 9

H20 26.3

2- Etil asetat 50.0

Aseton 25.0

gl.AcOH ıo.o

H2

0 ıs.o

- 61 -

4. SONUÇLAR

4.1. ELLMAN BELİRTECİ İLE YAPILAN İNCELEMELER

Her bir penisilin türevi için öngörülen 2.0 mg/ml ölç

me konsantrasyonunda madde tam olarak tartılıp, distile suyla

10 ml'ye tamamlandı. 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ml penisilin çö

zeltisi çekip, kapaklı tüplere aktarıldı ve hacimleri distile

suyla 1 ml'ye tamamlandıktan sonra 0.5 ml 0.1 N NaOH ile oda

temperatüründe 30 dakika bekletildi. Daha sonra 0.5 ml 1 N HCl

ilave edildi ve su banyosunda 50 dakika süre ile degradasyona

tabi tutuldu. Reaksiyon süresinin sonunda tüpler buz banyo

suna konup, ısıları oda sıcaklığına getirildikten sonra Hamil

ton enjektörü kullanılarak 0.050 ml degradasyona uğramış peni

silin türevinin çözeltisi cam küvete kondu; üzerine 3 ml

Ellman belirtecinin 0.15 M pH 7.2 fosfat tamponundaki çözelti

sinden ilave edildi ve 410-412 nm'lerde aynı koşullarda hazır

lanan şahit çözeltiye karşı ölçüm yapıldı.

•HCl •NaOH

+ ---6

-

COOH

S-ON02 1 •ONO,

COOH

·•ONO, COOH

ŞEKİL 2- Penisilinlerin Ellman belirteciyle verdikleri reaksiyon mekanizması

- 62 -

4.1.1. Uygun Degredasyon Ortamının Seçimi

Penisilinlerin Ellman belirteci ile yapılan miktar ta

yinlerinde, Vermiej penisilinleri 0.1 N NaOH çözeltisi ile

soğukta beklettikten sonra 1 N HCl ilave ederek 60 dakika kay

nar su banyosunda bekletmiş ve degradasyonlarını tamamlamış

tır(79). J.Kirschbaum ise sefalosporinlerin degradasyonunu

NaOH ve Na2co

3 karışımı ile 75 dak. kaynar su banyosunda ve

2 N N2

so4

ile 30 dak oda temperatüründe bekleterek gerçekleş

tirmiştir(80). Degredasyon sonunda çözeltilerin pH'sı ölçül

düğünde asid ortamdan bazik ortama doğru kayıldığında absor

banslarda yükselme gözlenmiştir. Bu nedenle sistematik olarak

pH 9.0-11.3 aralığında hazırlanan çeşitli tampon çözeltiler

ile degradasyon tekrarlanarak ölçmeler yinelenmiştir.

4.1.2. Uygun Degradasyon Süresinin Tayini

Uygun degradasyon süresinin saptanması için çeşitli

konsantrasyonlardaki penisilin çözeltilerinin 1 ml'si üzerine

O.S'er ml 0.1 N NaOH ve 1 N HCl çözeltisi ilave edilerek 120

dakika süre ile kaynar su banyosunda bekletilen çözeltilerden

60 dakikaya kadar 15 dakika ve daha sonra S'er dakika aralık

larla 0.050 ml alınarak bir cam küvete kondu ve DTNB'nin fos

fat tamponu pH 7.2'deki 3 ml çözeltisi ile karıştırılarak ab

sorbanslar aynı koşullarda distile suyla hazırlanmış boş de

nemeye karşı okundu.

Burada gözlendiği üzere çalışmamıza konu olan 22 peni

silin için uygun degradasyon süresi 0,1 N NaOH ile 30 dakika

bekleme ve daha sonra 90 dakika 1 N HCl ile sıcakta (90~1°C)

bekletmeyle olduğu saptandı.

4.1.3. Uygun pH'nın Seçimi

Absorbansın en yüksek olduğu pH'nın saptanması amacıy

la 20 mg. DTNB'nın pH 6.4, 6.8, 7.0, 7.2, 7.4, 7.6 ve 8.0'-

- 63 -

daki 100 ml'lik çözeltileri hazırlandı. Degradasyona uğratıl

mış her bir penisilin çözeltisinden 0.050 ml., 3 ml. DTNB'nin

farklı tamponlardaki çözeltisi ile karıştırılarak absorbansla

rı her bir pli için ayrı boş deneme hazırlanarak 410 nm'de öl

çüldü. Reaksiyonun farklı pH'lara karşı ne şekilde oluştuğu

gözlendi. Buna göre her bir penisilin için absorbans en yüksek

değere pH 7.2'de ulaşmaktadır. pH 7.6 ve pH B'de DTNB belirte

ci dayanıklı olmadığı için boş denemenin absorbansı ölçme ko

şullarında kısa süre içinde yükselmektedir(81). Dolayısıyla

ölçmeler belirteç ilavesinden sonra kısa bir süre içinde ya

pılmıştır.

4.1.4. DTNB/Penisilin Mol Oranının Saptanması

DTNB ile penisilin türevleri arasındaki reaksiyonun

kantitatif olarak yürümesi için gerekli belirteç miktarının

saptanması amacı ile yapılan çalışmada penisilin konsantras

yonu sabit tutulup, DTNB'nin pH 7.2 fosfat tamponundaki kon

santrasyonu penisilin türevi konsantrasyonunun 0.04 ile 40

katı olacak şekilde çalışıldı. Herbir penisilin için DTNB/

penisilin mol oranının en az 10 olması reaksiyonun kantitatif

olarak yürümesi için yeterli olmaktadır. Bu nedenle çalışmamız

da DTNB penisilin mol oranı 20 olarak çalışılmıştır(82).

Reaksiyon ffrününün Dayanıklılığı

İncelenen penisilin türevlerinin Ellman belirteci

ile verdikleri reaksiyon ürününün dayanıklılığının saptanması,

reaksiyon koşullarında pilot madde olarak alınan P1 , P4 , P8 ,

P22

için her 30 dakikada bir 6 saat süre ile gözlendiğinde

absorbanslarda değişiklikler saptanamamıştır.

4.1.5. Ölçü Eğrilerinin Hazırlanması

Ölçü eğrilerinin hazırlanmasında Lambert Beer kanununun

geçerli olduğu konsantrasyon alanını saptamak için, penisilin

konsantrasyonları Tablo 7'de bildirilen sudaki çözeltileri ha

zırlanarak 4.1 bölümünde anlatıldığı gibi çalışılarak yapıldı.

- 64 -

TABLO 7- İncelenen Penisilin Türevlerinin Ellman Belirteci İle Verdikleri Reaksiyondaki Başlangıç ve Ölçme Konsantrasyonları

Başlangıç Ölçme Sefalosporin

A Konsantrasyonu Konsantrasyonu

Türevi max ( mg / ml) (mcg/ml)

pı 412 1,9215 21, 00

p2 412 2,8822 31,50

p3 412 2,6535 29,00

p4 412 3,1567 34,50

P5 410 1,3070 14,30

p6 410 1,272 13,90

p7 410 1,1195 12,25

p8 410 1,685 O 18,40

p9 410 1,2150 13,30

Pıo 410 1,075 O 11,75

pıı 410 1,485 O 16,25

p12 410 1,4840 16,20

Pl3 410 1,6100 17,60

p14 410 1,9490 21,30

Pı5 410 1,3875 15,15

p16 410 1,768 O 19,30

p17 410 1, 768 O 19,30

Pı8 410 1,650 12,75

Pl9 410 1,0150 11,10

p20 410 1,5000 16,40

p21 410 1,4775 16,15

p22 410 1,4700 16,10

<( CQ o

- 65 -

ı:--: o

~ tO o d

{/l

ı:: <11 .o

o ı-ı ~ o ~ {/l

.o <11

aJ ı-ı

o~ co ı:: ~•M

r-! •M

{/l

•M ı:: aJ p..

::ı o r-! N" ı.n o

ı::

-.::t P-ı

.. ('t")

P-ı

.. N P-ı

.. r-!

P-ı

1 ('t")

~ •H :::.:: w tr.ıı

<( d

a.. ın a.. <.o o...t--..... 4

a

66

f1 -. o

o U> (I')

o o ~

o c:0 ~

o

"M H Q)

,-1

"M H ıöO Q)

rı:ı

ı:: cıı

,o H o rı:ı

,o cıı

Q)

H Q)

,-1

ı:: "M ,-1

"M rı:ı

"M ı:: Q)

p.

;j ,-1

o ı::

'° P-ı

1.1)

P-ı

1 --t

...:ı •H :-,.:: J:%l cr.ı,

r-: o Lll

o

- 67 -

~ o

,<.

o C0 ('I')

o N ~

o CD ...,

o o ın

o

"" H aı

r-1

"" H >öO aı

Ol ı::: ı:ıı

,o H o Ol ,o ı:ıı

.µ

"" ı:ıı

aı H aı

r-1 ı:::

"" r-1

"" Ol

." ı::: aı p..

::ı r-1

o ı:::

r-... r-1

ı:ı.ı

.. ırı r-1

ı:ı.ı

.. N r-1 P-ı

r-1 r-1

P-ı

o r-1

P-ı

.. °' ı:ı.ı

.. co P-ı

1 ırı

ı-'l •H ~ ~ uı,

' ' I I

I

' 1

I I

J J

I

, , I

.... .... ,~

\

'

, , ,

;

, , , ı. ,

~ .... ........ , ...

...... ........ ....

'° d

',,,

1

l J

1 1 1 1 1 1 , 1 1 1 1

\

' 1 1 1 1 1 1 1 1 1

\

\

68

d "f o o

o o "4

o N "4

o tD "4

o o Ul

•r-1 H (U

,-(

•r-1 H ıoO (U

Cll s:::: ('j

,.o H o Cll

,.o ('j

.µ •r-1 ('j

(U

H (U

,-(

s:::: •r-1 ,-(

•r-1 Cll

•r-1 s:::: (U p.,

:ı ,-(

o s::::

'° ,-(

P-ı

...;t ,-(

P-ı

C"")

,-(

P-ı

1

"° ...,::ı

•H ~ ~ U)ı

A

06

04

02

r----1 ---

0~8

iP,g

• Pıo 0'21 * Pı2

1 -

---------o···...o-j ----,,,,._, . __ ..___

........... ,e_· , --·-7 ..... ~-""6 --// .... -:;;--

-------/

... ·--··--·---···---··-·--y~~---········· - ~

---~ı~------~/ o ____ _____-/·

0L-f.ı---+----------+----------------------+-------500 460 420 400 A

ŞEKİL 7- Pıs, P19, Pzo, Pzı, P22 no.lu penisilinlere ait absorbans eğrileri

O\ ı..o

A

0,8

o.6

0.4

0,2

o 5.4

- 70 -

ıo.a 16.2 21.6 27 C mcgkri

ŞEKİL 8- Pı nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 8- Pı Ölçü Eğrileriyle İlgili Absorbans Değerleri C\max 412 nm

No C

Al A2 A3 A4 AS A s S/A. 100 mcg/ml

1 5,4 0,240 0,240 0,236 0,240 o, 240 0,2390 ;9, 0018 o, 7531

2 10,8 0,410 0,410 0,410 0,410 0,412 0,4100 0,0009 o, 2195

3 16,2 0,565 0,565 0,570 0,568 0,565 0,5670 0,0023 0,4056

4 21,6 0,750 0,740 0,745 0,750 0,750 0,7470 0,0044 O,Ş890

5 27,0 0,920 0,920 0,920 0,925 0,925 0,9220 0,0027 o, 2928

A

0.8 1

o.6

0.4

.o. 2

o 6

- 71

12 18 24 30 C mcg/mt

ŞEKİL 9 - P2 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 9 - P2 Ölçü Eğrileriyle İlgili Absorbans Değerleri Oı.max 412 nm,

No C


1 6,0 0,288 0,290 0,295 0,291 0,290 O, 2900 0,0025 0,8621

2 12,0" 0,445 0,450 0,440 0,446 0,445 0,4450 0,0035 o, 7865

3 18 ,o 0,590 0,590 0,590 0,592 0,600 0,5920 0,0043 0,7264

4 24,0 0,760 0,750 0,760 0,760 o, 7Cr,2 o, 7580 0,0047 0,6201

5 30,0 0,890 0,890 0,880 0,880 0,878 0,8820 0,0085 0,9637

- 72 -

A

o.s

0.6

0.2

o 6.6 13.2 19.8 26.4 33 C mcg/ml

ŞEKİL 10- p3 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 10- p3 Ölçü Eğrileriyle İlgili Absorbans Değerleri Oı-max 412 nın)

No C Al A2 A3 A4 AS A s s/A. ıoo mcg/ml

1 6,0 0,265 0,275 0,265 0,268 0,265 o, 2680 0.0043 1.6045 2 13,2 0,400 0,405 0,420 0,410 0,400 0,4070 0.0083 2.0393 3 19,8 0,510 0,512 0,510 0,510 0,510 o.5100 0.0009 0.1765 4 26,4 0,640 0,640 0,635 0,635 0,640 0,6380 0.0027 0.4232 5 33,0 o, 730 0,730 0,735 0,740 0,740 o, 7350 o. 0050 0.6803

A

0.8

o.

o 12.8

- 73 -

19.2 25.6 32 C mcg/mt

ŞEKİL 11- Pq nın Ellman belirteciyle verdigi ölçü eğrisi

TABLO 11 - P 4 ö 1 ç ü E ğ r i 1 er i y 1 e İ 1 g i 1 i A b s o r b an s D eğ er 1 er i O,max 412 nm.)

No C


1 6,4 0,238 0,238 0,240 0,240 0,238 0,2390 0,0010 0,4184

2 12,8 0,410 0,415 0,417 0,412 0,415 0,4140 0,0027 0,6522

3 19,2 0,510 0,512 0,510 0,512 0,510 0,5110 0,0011 0,2153

4 25,6 0,735 0,736 0,735 0,740 0,735 0,7360 0,0022 0,2989

5 32,0 0,890 0,890 0,890 0,885 0,900 0,8910 0,0054 0,6061

A

0.300

0.225

0.150

o. 075

o

- 74 -

2.86 5.72 8.58 11.44 14.30 C

mcg/ml

nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi ŞEKİL 12- P5

TABLO 12- P5 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nm) max

No C Al A2 A3 A4 A s S/A.100 mcg/ml

1 2,86 0,040 0,040 0,040 0,040 o, 0400 0,0000 0,0000

2 5, 72 0,091 0,090 0,095 0,090 0,0915 0,0024 2, 6229

3 8,58 0,141 0,140 0,145 0,140 0,1415 0,0024 1,6961

4 11,44 0,191 0,190 0,190 0,190 0,1903 0,0005 O, 2627

5 14,30 0,240 0,240 0,245 0,240 0,2413 0,0025 1,0361

- 75 -

A

0.300

Oal50

o. 075

o 2.78 8.34 11.12 13.90 C

mcg/ml

ŞEKİL 13- P6

nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 13- P6

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A 410 nm) max

No C Al A2 mcg/ml A3 A4 A s S/A.100

1 2,78 0,041 0,040 0,042 0,040 0,0408 0,0009 2,2059

2 5,56 0,100 0,100 0,100 o, 105 0,1013 0,0025 2,4679

3 8,34 0,151 0,150 o, 150 o, 153 0,1510 0,0014 o, 9272

4 11,12 0,201 0,200 0,205 0,203 0,2023 0,0022 1,0875

5 13, 90 0,249 0,248 0,248 0,250 0,2488 0,0009 0,3617

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o

ŞEKİL 14- P7

TABLO 14- P7

No C mcg/ml

1 2,45

2 4,90

3 7,35

4 9,80

5 12,25

- 76 -

2.45 4.90 7.35 9.80 12. 25 C

mcg/ml


ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nm) max

Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,071 0,070 0,070 0,070 0,0703 0,0005 0,7112

o, 141 0,140 0,145 o, 140 o, 1415 o, 0024 1,3223

0,211 0,210 0,215 o, 210 0,2115 0,0024 1, 1348

0,284 0,285 0,280 0,285 o, 2835 0,0024 0,8467

0,360 0,360 0,362 0,360 0,3605 0,0010 o, 2774

A

0.60

0.45

0.30

0.15

o

ŞEKİL ıs- P8

TABLO ıs- p8

No C

mcg/ml

1 3,68

2 7,36

3 ll,04

4 14, 72

5 18,40

- 77 -

3.68 11.04 14.72 18.40 C

mcg/ml


ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 run) max

Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,130 0,131 0,130 0,130 0,1302 0,0005 0,3840

0,261 0,260 0,265 0,260 0,2615 0,0024 0,9178

0,397 0,390 0,395 0,391 0,3933 0,0033 0,8391

0,520 0,520 0,515 0,515 0,5175 0,0029 0,6946

0,651 0,650 0,655 0,652 0,6520 0,0022 0,3374

- 78 -

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o 2.66 5.32 7.98 10.64 13. 30 C

mcg/ml

ŞEKİL 16- P9 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü e~risi

TABLO 16- Pg ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A 410 mn) max


1 2,66 0,060 0,060 0,060 0,062 o, 0605 0,0010 1,6529

2 5,32 0,121 0,120 0,125 0,120 0,1215 0,0024 1,9753

3 7,98 o, 182 0,180 0,185 o, 180 0,1818 0,0024 1,3201

4 10,64 0,241 0,240 0,241 0,240 0,2405 0,0058 2,4116

5 13,30 0,302 0,300 0,305 0,301 0,3020 0,0022 o, 7285

- 79 -

A

0.4

0.3

0..2

0.1

o 2.35 4.70 7.05 11.75 C

mcg/ml

ŞEKİL 17- P 10 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 17- P10 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (Amax: 410 nm)


1 2,35 0,060 0,061 0,60 0,062 0,0608 0,00095 1,5625

2 4,70 0,120 0,121 0,120 0,121 0,1205 0,00058 0,4813

3 7,05 o, 180 o, 182 o, 185 0,181 o, 182 0,0022 1, 2088

4 9,40 0,241 0,240 0,242 0,240 0,2408 0,00095 0,3945

5 11, 75 0,302 0,300 0,300 0,301 0,3008 o, 00096 0,3191

A

0.60

0.45

0.30

O .15

o 3.25

- 80 -

6.50 9.75 13.00

•

16.25 C

mcg/ml

ŞEKİL 18- P11 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi


No C Al A2 A3 A4 A S/A.100 mcg/ml s

l 3,25 0,119 o, 115 o, 120 0,117 o, 1178 0,0022 1,8676

2 6,50 0,203 0,200 0,205 0,205 0,2033 0,0024 1,1805

3 9,75 0,304 0,300 0,305 0,303 0,3030 0,0022 o, 7261

4 13,00 0,407 0,405 0,400 0,405 0,4043 0,0030 0,7420

5 16, 25 0,575 0,571 0,575 0,575 0,5740 0,0020 0,3484

A

0.60

0.45

0.30

0.15

o

- 81 -

3.24 6.48 12.96 16.20 C

mcg/ml

ŞEKİL 19- Pı2 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 19- Pı2 ·ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nm) max

No C Al A2 A3 A4 A S/A..100 mcg/ml s

1 3,24 0,111 0,110 o,ııo o, 110 o, 1103 0,0005 0,4533

2 6,48 0,213 0,215 0,210 0,215 0,2133 0,0024 1,1252

3 9, 72 0,328 0,325 0,330 0,330 0,3283 0,0024 0,7310

4 12,96 0,431 0,430 0,435 0,430 0,4315 0,0024 0,5562

5 16,20 0,540 0,540 0,542 0,542 0,5410 0,0012 0,2218

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o 3.52

- 82 -

7.04 10.56 14.08 17.60 C

mcg/ml

ŞEKİL 20- P 13 nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi



1 3,52 0,081 0,081 0,080 0,080 o, 0805 0,0005 0,6211

2 7 ,04 0,161 0,160 0,162 0,160 0,1608 o, 0009 0,5597

3 10,56 0,230 0,230 0,235 0,230 0,2313 0,0025 1,0808

4 14,08 0,321 0,320 0,325 0,320 o, 3215 o, 0024 0,7465

5 17,60 0,402 0,400 0,405 0,400 0,4018 0,0024 0,5973

A

0.8

o.6

0.4

0.2

o

- 83 -

4.26 8. 52 12.78 17.04 21. 30 C

mcg/ml




1 4 ,26 0,129 o, 130 o, 127 o, 130 o, 1290 0,0014 1,0853

2 8,52 0,331 0,330 0,335 0,330 0,3315 0,0024 O, 7239

3 12,78 0,490 0,490 0,492 0,490 0,4905 0,0010 0,2039

4 17,04 0,650 0,651 0,651 0,650 0,6505 0,0006 o, 0922

5 21,30 0,810 0,815 0,810 0,810 0,8113 0,0025 o, 3081

A

0.90

0.75

0.50

0.25

o 3 .03

- 84 -

Pıs

6.06 9.09 12.12 15.15

C mcg/ml


TABLO 22- Pı5 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nm) max


1 3,03 0,192 0,190 0,200 0,195 0,1943 0,0043 2,2131

2 6,06 0,367 0,365 0,365 0,370 0,3663 0,0025 o, 6825

3 9,09 0,550 0,550 0,552 0,552 0,5510 0,0012 0,2178

4 12,12 0,732 o, 730 0,730 o, 732 0,7310 0,0012 o, 1642

5 15, 15 0,920 0,920 0,920 0,923 0,9208 0,0015 0,1629

A

0.60

0.45

0.30

0.15

- 85 -

o 3.86 11.58 15.44 19. 30 C

mcg/ml

ŞEKİL 23- P16


TABLO 23- P ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nm) 16 max

C A4

-S/A.100 No mcg/ml Al A2 A3 A s

1 3,86 0,116 0,115 o, 115 0,115 o, 1153 0,0005 0,4337

2 7, 72 0,239 0,240 0,235 0,237 0,2378 0,0022 o, 9251

3 11,58 0,358 0,360 .0,355 0,360 0,3583 0,0024 0,6698

4 15,44 Q,481 0,480 0,480 0,482 0,4808 0,0009 o, 1872

5 19,30 0,600 0,600 0,603 0,600 0,6008 0,0015 0,2497

A

0.500

0.375

0.250

O .125

o 3 . 66

- 86 -

7.72 11.58 15.44 19. 30 C

mcg/ml


TABLO 24- P17 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 410 nın) max

No C

Al A2 A3 A4 S/A.100 mcg/ml A s

l · 3 ,66 0,102 0,100 0,100 0,105 o, 1028 0,0024 2, 3576

2 7,22 0,203 0,200 0,205 0,200 0,2020 0,0024 1,1881

3 11,58 0,305 0,100 0,302 0,302 0,3022 0,0021 0,6949

4 15 ,44 0,407 0,405 0,400 0,405 0,4043 o, 0030 0,7420

5 19, 30 0,505 0,500 0,505 0,500 0,5025 0,0029 0,5771

A

0.500

o. 375

O.250

O .125

o 2.55

- 87 -

5,10 7.65 10..20 12.75 C

mcg/ml

ŞEKİL 25- P18


TABLO 25- P 18

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.max 410 run)

No C

Al A2 A3 A4 A s S/A.100 mcg/ml

1 2,55 0,102 0,100 0,100 0,100 0,1005 0,0010 0,9950

2 5,10 0,201 0,200 o, 205 · 0,200 0,2015 0,0024 1,1911

3 7,65 0,298 0,295 0,295 0,300 0,2960 0,0017 0,5743

4 10,20 0,397 0,395 0,395 0,400 0,3968 0,0024 0,6048

5 12, 75 0,495 o,495 0,497 0,495 0,4955 0,0010 0,2018

- 88 -

A

o.soo

0.375

0.250

0.125

o 2.22 6. 66 11.10 C

mcg/ml


TABLO 26- P19 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.max= 410 nm)

No C Al A2 A3 A4 A S/A.100 mcg/ml s

1 2,22 0,101 0,100 0,100 0,100 0,1003 0,0005 0,4985

2 4,44 0,200 0,210 0,205 0,205 0,2050 0,0041 2,0000

3 6,66 0,298 0,295 0,295 0,300 0,2970 o, 0024 0,8081

4 8,88 0,397 0,395 0,400 0,400 0,3980 0,0024 0,6030

5 11, 10 0,493 0,495 0,495 0,490 0,4933 0,0024 0,4865

A

0.60

0.45

0.30

0.15

o 3.28

- 89 -

6.56 9.84 13.12 16.40 C

mcg/ml

ŞEKİL 27- P20


TABLO 27- P20

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 410 nm) max


1 3,28 0,118 0,120 0,115 0,120 o, 1183 0,0024 2, 0287

2 6,56 0,232 0,235 0,230 0,230 0,2318 o, 0024 1,0354

3 9,84 0,301 0,300 0,302 0,300 o, 3008 0,0009 o, 2992

4 13,12 0,467 0,465 0,470 0,465 0,4668 0,0024 0,5141

5 16,40 0,529 o, 580· 0,580 0,580 0,5798 0,0005 0,0862

- 90 -

A

0.60

0.45

0.30

O .15

o 3.23 9. 69 12.92 16.15

ŞEKİL 28- P nın Ellman belirteciyle verdiği ölçü eğrisi 21

C mcg/ml



1 3,23 0,134 0,135 0,130 0,135 0,1335 0,0023 1,7228

2 6,46 0,259 0,260 0,255 0,260 0,2585 0,0024 0,9284

3 9,69 0,388 0,390 0,385 0,390 0,3883 0,0024 0,6181

4 12,92 0,512 0,510 0,515 0,510 0,511,8 0,0024 0,4689

5 16, 15 0,630 0,630 0,630 0,635 0,6313 0,0025 0,3960

- 91 -

A

0.500

0.375

0.250

0.125

o 3.22 6.44 9. 6 12.88

ŞEKİL 29- P22


C mcg/ml

TABLO 29- P22 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 410 nm) max


1 3,22 0,112 0,110 0,115 0,110 o, 1118 o, 0024 2,1467

2 6,44 0,210 0,210 0,211 0,210 0,2103 0,0005 0,2378

3 9,66 0,310 0,310 0,310 0,312 0,3105 0,0010 0,3221

4 12,88 0,399 0,395 0,400 0,400 0,3985 o, 0024 0,6023

5 16,10 0,493 0,495 0,495 0,495 0,4945 0,0010 0,2022

- 92 -

TABLO 30- Ellman Yöntemiyle Miktar Tayini Yapılan Penisilinlerin Ölçü Eğrileriyle İlgili Regresyon Analizleri Sonuçları

~ A m n r max

pı 412 0,031537 0,066100 0,9998

p2 412 0,024950 0,144300 0,9992

p3 412 0,017349 0,170253 0,9990

p4 412 0,025406 0,070400 0,9946

P5 410 0,018597 -0,006260 0,9989

p6 410 0,017532 -0,009500 0,9999

p7 410 0,999837 -0,003260 0,9998

p8 410 0,035315 0,001020 0,9999

p9 410 0,999977 0,000660 0,9999

Pıo 410 0,025545 0,000890 0,9999

pıı 410 0,034258 -0,013540 0,9903

pl2 410 0,999878 0,001000 0,9998

pl3 410 0,022821 -0,001810 0,9994

p14 410 0,998750 -0,022520 0,9988

P15 410 0,059990 0,007370 0,9998

p16 410 0,031450 -0,005600 0,9999

p17 410 0,025733 0,005599 0,9999

pl8 410 0,999956 0,002470 0,9999

pl9 410 0,044099 0,005020 0,9998

p20 410 0,993065 -0,007900 0,9931

p21 410 0,038666 0,010010 0,9998

p22 410 0,029615 0,019040 0,9997

- 93 -

4.2. Hg(II)-İMİDAZOL-EDTA YÖNTEMİ İLE YAPILAN İNCELEMELER

Herbir penisilin türevi için öngörülen takriben 20 mg

madde tam olarak tartılıp, hacimleri distile suyla 10 ml'ye ·

tamamlandı. 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 ve 1 ml penisilin çözeltileri

çekilip tüplere aktarıldı, hacimleri distile suyla 1 ml'ye

tamamlandıktan sonra 5 ml Hg(II)-imidazol-EDTA belirteci ila

ve edilip, 85°~ı 0 c su banyosunda 30-40 dakika bekletildi. Sü

renin sonunda buz banyosunda soğutulan çözeltilerin sıcaklığı

oda temperatürüne getirildikten sonra, 5 dakika santrifüje

tabi tutuldu ve aynı şartlarda hazırlanmış boş denemelere kar

şı absorpsiyon spektrumlarındaki maksimum dalga boyunda absor

bansları ölçüldü.

4.2.1. Reaksiyon Koşullarının Saptanması

Reaksiyon koşulları 3.4.2 bölümünde anlatıldığı şe

kilde saptanıp, çalışılan penisilinlerin hangi pH da Hg(II)

imidazol-EDTA belirteci ile miktar tayinlerinin yapılabildiği

Tablo 3l'de, çalışılan penisilinlerin çeşitli pH larda Hg(II}

imidazol-EDTA belirteci ilavesinden sonra gösterdikleri absor

banslar ise grafiksel olarak Şekil 29 ve 30'da gösterilmekte

dir. Reaksiyon ısısı ise tüm penisilinler için A 'un kayde-max dildiği 85°+ı 0 c'lik ısı olarak alınmıştır. Degredasyon süresi

ise 5 dk'lık aralarla taranarak P1

~ P 2 , P 3 , P4 için 30 dakika

ve diğer tüm penisilinler için 40 dakika olarak saptanmıştır.

4.2.2. Ölçü Eğrilerinin Haz~rlartması

Lambert-Beer Kanununa bağlı kalınarak 4.2 bölümündeki

gibi Tablo 3l'deki konsantrasyon ve şartlara göre çalışıldı.

A

0.6

O-'

0.2

o

••••• ~·· I -

.·············· ...

r--••········--4:.:.::.. "···" .. ·ı·t······ .._ ------- '·

... ,···· I ·••••••• I

""" .... • .,- ...... ~····

P2

. ....... Pıo

P4

P5

'••···· ....... ,p6

.... -' ..

~,:

/ -..._ __ ....._ ___ .__PJI

P1

5 6 7 8 9 pH

ŞEKİL 30- Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemiyle incelenen penisilinlerin çeşitli pH'larda imidazol belirteci ilavesinden sonra gösterdikleri absorbanslar. P1'den P11 'e kadar numaralı penisilinler için (Tablo 7 1 deki koşullarda ve 90°±1°c 1 de)

ı.o

.ı::-

A

05

03

0.1

__ ..,_ ______ ..._ ..._ pl7 _,...____ ------ ------------- .......... -- ... .. ........... ... ~---•••• ---------... ••••••••• ._. p2J --ıı~:---~----~------~- • -- • ---.-...: P15

············-·--- •-.. ·--• .. ·-...... _ • ...,............. ......... ...... .. .................. P

1 8

P 19

---···-·---..... _ ... _ ... _ ... p22

.. ···--• .. --------·--···- .. .. . .... ------ ------------.... -..,..c-a.._______ - P 14 ----- ·-r'" . -.-._ııııı,-_-_:-::--.. c ... -ı:,.._..._.-.. ~--;:ı..'""•c .. ·--....._ ·• .. - .. _ .. ······-~···-• .......... __ P 13 ···-··•----- .. ····-· •-·-- - ···-·---~~--""'4,_..,~,..,ıııı:::::: ·--. ·····-..... -. •·····--

.. . .......... . .. , ---·····- ........... . - -· -.. ...- ·•• .. -..... _ ... ... ....... -.. -..... . •·· _.... -..... -..... ·--····· . ••···•·•·· •····--·····-..-·· pl2

Pı6

o 4 5 6 7 8 pH

ŞEKİL 31- Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemiyle incelenen penisilinlerin çeşitli pH'larda imidazol belirteci ilavesinden sonra gösterdikleri absorbanslar. P12 den Pzz'ye kadar numaralı penisilinler için (Tablo 7'deki koşullarda ve 90°11°c'de)

ı.o

V1

- 96 -

TABLO 31- Hg(II)-imidazol-EDTA Yöntemi İle Yapılan Miktar Tayinlerindeki Reaksiyon Koşulları

Hg(II)-imidazol-EDTA A

Örnek ve Standart Belirtecinin pH'sı max Çözelti Konsantrasyonu

mg/ml pı 6, 5 O± O, 25 343 0,1260

p2 6,50±0,25 343 0,1890

p3 7,5±0,1 344 0,1740

p4 7,5±0,35 340 0,2070

P5 5,5±0,1 420 0,2462

p6 6,0±0,1 480 0,2568

p7 6,5±0,1 480/360 0,2332

p8 6,5±0,1 470 0,346

p9 7, O± O, 1 460 O, 25 04

Pıo 7,5±0,1 460 0,2986

pll 5,5±0,1 460 0,2560

pl2 5,0±0,1 440 0,2100

Pl3 7 , O± O, 1 480 0,2944

pl4 6,0±0,1 460 0,1966

P1s 5,0±0,1 480 0,2180

Pl6 6,5±0,1 460/330 0,2672

pl7 6,5±0,1 460 0,3768

P18 5,0±0,1 420/324 0,4536

pl9 5,0±0,1 460/324 0,2004

p20 6,0±0,1 470 0,2440

p21 6,5±0,1 480/323 0,2304

p22 6,5±0,1 461 0,2700

A

o.

oı.oo

(Y'

I I I 1

i i

/ .,. I

'

-.....

A~

o P, • '2 ~¼

'···'-...\ ...................

.........____~

o 1 ,, 1 1 1 1 1 1 -

360 350 31.0 330 320 ~ 380 370

ŞEKİL 32- Pı, P2, P3, P4'e ait absorbans eğrileri (Tablo 3l'deki koşullarda ve

85°~1° de)

ı..o

-....ı

A

0.3

02

0.1

A-----···-ıl---•---

---..........

A fs • Ps x~

... ... ~ ... --K-..... ', ıl••·······-·X·········--·· ········-··N-·············X.-----X--.~.---K········ .. ·····~·-·····, '···•~'\

•. ' '· ' \ı~,.~ .... .,x-

,,.~ ~--.

0..1.-.tı---t-----------+-----------+-----------------520 440 360 X

ŞEKİL 33- P5, P6, P7'e ait absorbans eğr ileri (Tablo 3l'deki koşullarda ve 85°~1°c'de)

\O 00

A

a3

02

0.1

~--·-···--~ A. ...... . ... · .... ....... ·· .•. ..

~ ........ ,__ -4---f-,_ --- ·:.,__ ~---«-..

·•.............. .....,_'\..

• % •Pg • P,o X ~1

•P,2 ·. ~ '\ \ ... ~---..... \ ____ ... "K........... \ \ X--------K- ..... x. \

...... , . ~ * •,', $ . ~ ~

* Pı5 * 17

\~ ı:: \ . \ --··+-·----~--.. -:.. . ._:,

\ ~----....... . \ ' .......... .... ··.. \ ' ···,. ' . ' ·-...... ·· ... "' ~ ,.., · .. ,

\ ',, ···, ·•. \ ', ·, ...... .,jl \ ' '\ ----- ··. ,_ ·~· •. "' \ı, ' ,.. ' •.··. ... ___ ..,.:-·, ..• ": . .... '.•.~~-... . .

~

.... o~~f-:--------+---~---+---_....., ______

520 440 360

ŞEKİL 34- Ps, Pg, Pıo, P11, P12, P15, P17'e ait absorbans eğrileri (Tablo 3l'deki koşullarda ve sso!ı 0c)

A

ı.o

\O

A

0.3

02

0.1

------------------------------•--•----------.. , ...... ' ' ...........

•• _.a . .& __ _...... ••••• ••• ' ' ' ', ,, -----~- &

, __ " ,._ \ . ~ \ ' '

...... ,, ... ,

\. ,• ·•., ~ ..... ·, ··."'4-...... ._. .... ..;..., ...... ··

O ~ 360 520 440

• Pı3

•14 A 15

)..

ŞEKİL 35- P13, P14, P16'ya ait absorbans eğrileri (Tablo 3l'deki koşullarda ve 85°±1°C'de)

t-' o o

A

04

03

.... r,,

g -ıs c:ı

~~ 02 Bm ~~: ;;!§i' ~!!ı ~~

ffi ! 01

~~ __ e:

'-t ...... ... .......... _ -------, ... ___ ... _... -~-- ' ----------------- . '

' "\ ' ' \ ~

\ \ \ \ \ \ \

• 18 X 19 A~O

• Pı1 *Pı2

~·-~·-•··~. \ .e-······---...... ___ • • . ..,, •

--··· lf ------ ··-,.__ ;-...,_ ... - -- ' '-. \ -., ....x---· ' --~\ ··•.

1 \\

. ··.. \ .. , "\~~~ . ;;_~--•--

' ·--. -'-A---- ~---',,,_... \.._ :·.,.• .. ./ _______ ~ --------....,.... __ _ OL./,--!":----

520 440 360 )ı.

ŞEKİL 36- P1s, P19, Pzo, Pz1, Pzz'ye ait absorbans eğrileri (Tablo 3l'deki koşullarda ve 85°±1°C'de)

t-' o t-'

A

0.5

0.4

0.3

0.2

o.ı

o

- 102 -

8.4 12.6 16.8 C mcglml

ŞEKİL 37 - p nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği elçü eğrisi 1

TABLO 32- Pı ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A 343 run) max

No C


1 4,2 0,080 0,082 0,080 0,083 0,081 0,0810 0,0013 1,6049

2 8,4 0,144 0,144 0,145 0,144 0,145 0,1440 0,0005 0,3472

3 12,6 0,216 0,216 0,216 0,216 o, 218 0,2160 0,0009 0,4167

4 16,8 1 o, 284 0,284 0,285 0,286 0,284 o, 2850 0,0009 0,3158

5 21,0 0,364 0,363 0,364 0,365 0,364 0,3640 0,0008 0,2198

A

0.5

0.4

0(12

o 6.3

- 103 -

12.6 18. 9 25.2 31.5 C mcg/ml

ŞEKİL 38- p nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği <Hçü eğrisi 2

TABLO 33- P 2 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.max: 343 nm)

No C

Al Az A3 A4 AS A s S/A. 100 mcg/ml

1 6,3 0,124 o, 123 0,124 0,124 0,128 0,1240 0,0005 0,4032

2 12,6 0,248 0,247 0,247 0,248 0,247 0,2470 0,0005 0,2024

3 18, 9 0,376 0,376 0,376 0,378 0,378 o, 3770 0,0011 0,2918

4 25,2 0,452 0,450 0,450 0,452 0,451 0,4510 0,0009 0,1996

5 31,5 0,568 0,565 0,567 0,567 0,569 0,5670 0,0015 0,2646

A

0.5

0.3

0 .. 2

o.ı

o

ŞEKİL

- 104 -

11.6 23.2 29. o C rrc~

3~ p nın Hg(U)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği elçü eğrisi 3

TABLO 34- P 3 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (;\. 344 nın) max

No C Al A2 A3 A4 AS A s S/A. 100

mcg/ml

1 5,8 0,128 0,124 o, 127 0,130 o, 128 0,1270 0,0022 1,7323

2 11,6 0,188 o, 188 0,188 0,188 0,189 0,1880 0,0004 0,2128

3 17,4 0,252 0,251 0,250 0,252 o, 252 0,2510 0,0009 0,3586

4 23 ,2 . 0,328 0,327 0,330 0,328 0,327 0,3280 0,0012 0,3659

5 29,0 0,384 0,384 0,386 0,383 0,383 0,3840 0,0012 0,3125

A

0.5

0 .. 4

o.ı

o 6.9

- 105 -

13.8 20.1 27.6 34.5 C mcglm(

ŞEKİL 40- p4 nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği elçü eğrisi

TABLO 3.5- P4

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A 340 nm) max

Na C


1 6,9 0,152 o, 150 0,151 0,150 0,152 o, 1510 0,0010 0,6623

2 13,8 0,240 0,240 0,250 0,245 0,242 0,2430 0,0042 1, 7284

3 20,7 0,372 0,371 0,380 0,372 0,372 0,3730 0,0037 0,9919

4 27,6 0,496 0,495 0,496 0,500 0,496 0,4970 0,0019 0,3823

5 34,5 0,576 0,576 0,576 0,578 0,576 0,5760 0,0009 0,1563

A

0.300

0.225

O .150

O. 075

o

ŞEKİL 41- P 5

TABLO 35- P5

No C mcg/ml

1 8 ,21

2 16,42

3 24,63

4 32,84

5 41,05

- 106 -

8.21 16.42 24.63 32.84 41. 05 C

rncg/ml

nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi


Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,052 0,052 0,051 0,053 0,0520 0,0008 1,5385

0,104 0,104 0,103 0,104 0,1038 0,0005 0,4817

o, 142 O, 142 0,142 0,142 0,1420 0,0000 0,0000

0,193 o, 194 0,195 0,193 o, 1938 0,0010 0,5160

0,242 0,244 0,245 0,244 0,2438 0,0013 0,5332

A

0.30

O. 2?5

0.15

O. 07":-

o

ŞEKİL 42- P6

TABLO 36- P6

No C

mcg/ml

1 8,56

2 17 ~12

3 25 ,68

4 34,24

5 42,80

- 107 -

8.Sf 17.12 25.68 42.80 C

mcg/ml nın Hg(II)-imidazpl-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 480 run) max

Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,051 0,051 0,050 0,048 0,0500 0,0014 2,8000

o, 105 0,102 0,101 · 0,102 0,1025 0,0017 1,6585

0,141 0,142 0,145 0,140 0,1420 0,0022 1, 5493

0,193 0,192 0,190 o, 194 0,1923 0,0017 0,8840

o, 241 0,243 0,242 0,241 0,2418 0,0010 0,4136

A

0.20

0.15

0.10

O. 05

o

TABLO 37- P7

No C

mcg/ml

1 7,78

2 15,56

3 23,34

4 31,12

5 38,90

- 108 -

7.78 15.56 23.34 31.12 38.90 C

mcg/ml


ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (>,max: 480 nm) 360

Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,040 0,040 0,040 0,041 0,0403 0,0005 1, 2407

0,078 0,080 0,080 0,080 o, 0795 0,0010 1,2579

0,120 0,122 0,120 o,ııo 0,1205 0,0010 0,8299

0,161 0,161 0,163 0,163 0,1620 0,0012 o, 7407

0,198 0,200 0,198 0,200 0,1990 0,0012 0,6030

A

0.20

O .15

o.ıo

O. 05

o 11.54

- 109 -

23.08 34.62 46.16 57.70 C

mcg/ml

SEKİL 44 - P 8

nın Hg(II)-imidaz.ol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 38 - P8

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 470 nın) max

No C


1 11,54 0,036 0,035 0,035 0,036 0,0355 0,0006 1,6901

2 23,08 0,072 0,072 0,070 0,075 0,0723 0,0021 2,9016

3 34,62 0,098 0,09 0,100 0,100 0,0993 0,0009 0,9063

4 46,16 0,132 0,133 o, 135 0,137 0,1343 0,0022 1,6381

5 57,70 0,170 o, 168 0,170 0,170 0,1695 0,0010 0,5899

A

0.4

0.2

o.ı

o

ŞEKİL 45 - P9

TABLO 39- P9

No C mcg/ml

1 8,35

2 16 ,70

3 25,05

4 33,40

5 41, 7 5

8.35 16.70 25.05 33.40 41.75 C

mcg/ml

nın Hg(II)-imidaz,ol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O, : 460 run) max

Al A2 A3 A4 A s S/A. 100

0,078 0,080 0,075 0,080 0,0783 0,0024 3,0651

0,158 0,157 o, 158 0,158 0,1578 0,0050 0,3169

0,218 0,215 0,220 0,215 0,2170 0,0024 1,1059

0,290 0,285 0,286 0,287 0,2870 0,0022 o, 7408

0,380 0,375 0,378 0,376 o, 3773 0,0022 0,5831

A

O. 20

0.15

o.ıo

O. 05

o

- 111 -

9.96 19.92 29.88 39.84 49.80 C

mcg/ml

ŞEKİL 46- P10 nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 40- P10 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (\max= 460 nm)

No C


1 9 ,96 0,035 0,035 0,035 0,035 0,0350 0,0000 0,0000

2 19,92 0,077 0,080 0,075 0,080 0,0780 o, 0024 3,0769

3 29 ,88 0,112 0,110 o, 115 o, 110 o, 1118 0,0024 2,1467

4 39,84 0,157 0,160 0,155 0,155 0,1568 0,0024 1,5306

5 49,80 0,190 0,190 0,190 0,188 0,1895 0,0010 0,5277

- 112 -

A

0.20

. O .15

o.ıo

O. 05

o 8.54 17.08 25.62 34.16 420 70: C

mcg/ml ŞEKİL 47 - P11 nın Hg(II)-imidaz,ol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi


No C Al A2 mcg/ml A3 A4 A s S/A.100

1 8,51 0,045 0,045 0,048 0,046 0,0460 0,0014 3,0435

2 17 ~08 0,095 0,095 0,095 0,096 o, 0953 0,0005 0,524 7

3 25,62 o, 133 0,132 0,130 0,135 0,1325 0,0021 1,5849

4 34,16 o, 183 0,180 0,185 0,183 0,1828 0,0021 1,1488

5 42, 70 0,230 0,230 0,230 0,230 0,2300 0,0000 0,0000

A

0.3

0.2

o.ı

o 1.0

- 113 -

14. O 21.0 28.0 35.0 C

mcg/ml

ŞEKİL 48 - P12 nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 42- P12 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (>ı : 440 run) max


1 7,00 0,055 0,058 0,060 0,057 0,0575 0,0021 3,6522

2 14,00 o, 114 0,114 0,115 0,110 o, 1133 0,0022 1,9417

3 21,00 o, 188 0,185 0,185 0,188 0,1865 0,0017 0,9ll5

4 28 ,00 0,250 0,252 0,250 0,250 o, 2505 0,0010 0,3992

5 35,00 0,315 0,314 0,314 0,310 0,3133 0,0022 o, 7022

A

0.300

0.225

0 .. 150

o .. 075

o

- ll4 -

9.81 19.62 29.43 39.24 49.os C

mcg/ml

ŞEKİL 49 - P13

nın Hg(II)-imidaz.ol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi


No C


l 9,81 0,050 0,050 0,050 0,052 0,0505 o, 0010 I ,9802

2 19,62 0,102 0,100 0,102 0,105 0,1023 0,0021 2, 0528

3 29, 13 0,141 o, 141 . 0,140 0,140 o, 1405 0,0006 0,4270

4 39 ,24 0,193 0,192 0,190 0,195 0,1925 0,0021 1 ,0909

5 49,05 0,245 0,245 o, 245 0,245 o, 2450 0,0000 0,0000

A

0.3

0.2

o.ı

o 6.55

- 115 -

13.10 19. 65 26.20 32.75 C

mcg/ml

ŞEKİL 50 - P14


TABLO 44- P14


Na C


1 6,55 0,060 0,060 0,060 0,062 o, 0605 0,0010 1,6529

2 13, 10 0,120 0,122 0,120 0,120 0,1205 0,0010 0,8299

3 19,65 0,190 0,194 0,190 0,190 0,1910 0,0020 1,04 71

4 26,20 0,252 0,250 0,255 0,250 0,2518 0,0024 0,9531

5 32,75 0,320 0,320 0,320 0,320 0,3200 0,0000 0,0000

A

0.20

0.15

0.10

o 'I • 27

- 116 -

14.54 21.81 29. 08 36. 35 C

mcg/ml

ŞEKİL 51 - P15


TABLO 45- P15



1 7, 27 0,035 0,037 0,038 0,036 0,0365 0,0013 3,5616

2 14 ,51 0,074 0,073 0,075 0,075 0,0743 o, 0009 1,2113

3 21,81 0,100 0,097 0,098 0,098 o, 0983 0,0013 1,3225

4 29,08 0,135 0,135 o, 137 0,135 o, 1355 0,001 0,7380

5 36,35 0,175 0,170 0,172 0,173 o, 1725 0,0021 1,2174

A

0.20

0.15

o.ıo

0.05

o 8.91

- 117 -

17.82 26.73 35.64 44.55 C

mcg/ml

ŞEKİL 52: .. Pı.~-·nın Hg(II)-imidaz,ol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi j l.U :

TABLO 46- P ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 460 run) 16 ı max 330

No C


1 8,91 0,038 0,038 0,039 0,040 0,0388 0,0010 2 ,5773

2 17,82 0,080 0,080 0,081 0,080 0,0800 0,0000 0,0000

3 26,73 0,119 0,118 0,119 0,120 0,1190 0,0008 0,7339

4 35,64 0,148 0,151 0,148 0,149 0,1490 0,0014 0,9396

5 44,55 o, 191 0,190 0,191 o, 192 0,1910 o, 0008 0,4188

- 118 -

A

0.20

0.15

o.ıo

o 12.56 25.12 37.68 50.24 62.80 C

mcg.lml ŞEKİL 53- P nın Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

17

TABLO 47- P17 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 460 nm) max -~

~


1 12,56 0,040 0,040 0,04 O 0,041 0,0403 0,0005 ı, 2407

2 25,12 0,080 0,080 0,080 0,085 0,0813 0,0025 3,0750

3 37,68 0,120 0,125 0,120 0,120 0,1213 0,0025 2,0610

4 50,24 0,157 0,160 0,15Ş 0,160 0,1588 0,0015 0,9446

5 62,80 0,198 0,198 0,200 0,200 0,1990 0,0012 0,6030

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o

- 119 -

15.12 30.24 45. 36 60.48 75.60 C

mcg/ml

ŞEKİL 54- P 18

nın Hg(II)-imidaz:01-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 48- P18

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 420 nm) max 324 ·- 1

No C Al A2 A3 A4 A s S/A. 100 mcg/ml

1 15,12 0,070 0,070: 0,070 0,070 0,0700 0,0000 0,0000

2 30,24 0,140 o, 141 0,140 0,141 0,1405 0,0006 0,4270

3 45,36 0,195 0,196 0,196 0,195 0,1955 0,0006 0,3069

4 60,48 0,260 0,264 0,265 0,265 0,2635 0,0024 0,9108

5 75,60 0,340 0,335 0,336 0,336 0,3368 0,0022 0,6532

- 120 -

A

0.20

0.15

o. ıo

O .05

o 6 .. 68 13.36 26.72 33.40 C

mcg/ml

ŞEKİL 55- P19


TABLO 49- P19

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 460 nm) max 324 -~ 1


1 6,68 0,035 0,035 0,035 0,036 0,0353 0,0005 1,2784

2 13,36 0,072 0,073 0,073 0,072 0,0725 0,0005 0,7438

3 20,04 0,102 o, 100 0,105 0,102 0,1023 0,0021 2,0528

4 26, 72 0,140 0,140 o, 145 0,141 0,1415 0,0024 . 1 ,6961

5 33,40 o, 178 0,180 0,175 o, 177 0,1775 0,0021 1,1831

A

0.300

0.225

0.150

O. 075

o 8.13

- 121 -

16.26 24.39 32.52 40.65 C

rncg/ml

ŞEKİL 56- P 20

nın Hg(II)-imidazpl-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 5~ P 20 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (;ı .. max= 470 nm) ·~

'

No C

Al A2 A3 A4 A s S/A. 100 mcg/ml

1 8, 13 0,043 0,043 0,043 0,041 o, 0425 0,0010 2 ,3529

2 16,26 0,088 0,090 0,090 0,085 0,0883 0,0024 2, 7180

3 24,39 o, 140 0,142 o, 140 o, 140 o, 1405 0,0010 o, 7117

4 32,52 o, 190 0,190 0,188 0,190 0,1895 0,0010 0,5277

5 40,65 0,240 0,242 0,241 0,240 o, 2408 0,0010 0,4153

A

0.20

0.15

u.ıo

o. 05

o .7. 68

- 122 -

15.36 23.04 30.72 38.40 C

mcg/ml

ŞEKİL 57 - P21


TABLO 51 - P21 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.. : 480 nın) max 323 ·~ !

No C


1 7,68 0,040 0,040 0,04 o 0,042 0,0405 0,0010 2,4691

2 15,36 0,085 0,080 0,085 0,085 o, 0838 0,0025 2,9833

3 23,04 0,113 0,114 0,114 0,110 o, 1128 0,0019 1 ,6844

4 30, 72 o,155 o,150 0,154 0,154 0,1533 0,0022 1,4351

5 38,40 0,190 0,191 0,195 0,193 O, 19 23 0,0022 1 ,1440

A

0.500

0.375

0.250

O .125

o

- 123 -

9.0 18.0 27. O 36.0 45. O

C mcg/ml

ŞEKİL 58- P22 nın Hg(II)-imidazpl-EDTA yönteminde verdiği ölçü eğrisi

TABLO 52- P22 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 461 nm) max ..... 1

No C


1 9,00 0,085 0,084 0,085 0,084 0,0845 0,0006 0,7101

2 18,00 0,190 o, 192 0,192 0,190 0,1910 0,0012 0,6283

3 27,00 0,290 0,295 0,290 0,295 o, 2925 0,0029 0,9915

4 36,00 0,385 0,390 0,387 0,390 o, 3880 o, 0024 0,6186

5 45,00 0,480 0,482 0,483 0,485 0,4825 0,0021 0,4352

- 124 -

TABLO 53- Hg(II)-imidazol-EDTA Yöntemiyle Miktar Tayini Yapılan Penisilinlerin Ölçü Eğrileriyle İlgili Regresyon Analizleri Sonuçları

~ :>ı. max m n r

pl 343 0,016833 0,005900 0,9993

p2 343 0,017302 0,026200 0,9965

p3 344 0,011276 0,059400 0,9990

p4 340 0,016000 0,036800 0,9969

p5 420 0,998954 0,005000 0,9989

p6 480 0,055304 0,003700 0,9992

p7 480 0,999836 0,000290 0,9998

p8 470 0,999037 0,003180 0,9991

p9 460 0,997677 0,005320 0,9978

P10 460 0,038936 -0,002120 0,9988

pll 460 0,005334 0,000670 0,9991

p12 440 0,999367 -0,010420 0,9994

pl3 480 0,998695 0,002400 0,9987

p14 460 0,009928 -0,006330 0,9997

Pı5 480 0,004583 0,003460 0,9978

p16 460 0,004191 0,003540 0,9987

p17 460 0,003144 0,001670 .,,

' 0,9998

p18 420 0,004345 0,004250 0,9990 . p19 460 0,005292 -0,000230 0,9993

p20 470 0,006123 -0,009020 0,9998

p21 480 0,004858 0,004610 0,9986

p22 461 0,011033 -0,010200 0,9997

- 125 -

4.3. Ni(II) HİDROKSİLAMİN YÖNTEMİ İLE YAPILAN İNCELEMELER

4.3.1. Reaksiyon Koşullarının Saptanması

İlk olarak Connors ve Munson tarafından(66,67,83) asit

hidrazitleri ve karboksilli asitlerin, daha sonra D.L.Mays ve

arkadaşları(70) tarafından bazı sefalosporinlerin spektrofo

tometrik miktar tayininde kullanılan Ni(II)-hidroksilamin

belirtecinin 22 penisilin türeviyle olan reaksiyon koşulları

incelenip reaksiyon süreleri saptandı. Kullanılan Ni(II)-hid

roksilamin belirtecinin pH'sı 6,2 + 0,05 olup daha yüksek pH'

larda Ni(II) tuzları çökmektedir. Bu belirteç Ni(II) 'ye göre

0,2 M, hidroksilamine göre ise 2 M'dir. Ni(II) konsantrasyonu

arttıkça okunan absorbans değerleri artmakta fakat 0,2 M'nin

üzerinde nikel tuzları çökmektedir. Hidroksilamin konsantras

yonunun arttırılması da ölçülen absorbans değerlerini arttır

mqkta ancak hidroksilamin konsantrasyonunun 2 M'nin üzerinde

olması kompleksin renk stabilitesinin kötüleşmesine neden ol

maktadır*. Hidroksilamin konsantrasyonundaki artışlar Fe(III)

konsantrasyonunun arttırılmasıyla karşılanmaya çalışılmışsa da

boş denemenin absorbansı arttığından uygulanamamıştır(70). Bu

yüzden Connors ve Munson tarafından kullanılan belirteç en uy

gun konsantrasyonlarda olan belirteçtir(83). Yapılan incele

melerde her penisilin Ni(II)-Hidroksilamin belirteci ile ver

diği reaksiyonun farklı sürelerde tamamlandığı saptanarak

reaksiyon esnasında başlangıçta oluşan hidroksamik asit ile

Fe(III) iyonundan ferri-hidroksamat oluşması ~içi!n gerekli re

aksiyon süreleri ve oluşan renkli kompleksin maksimum absor~

bans gösterdiği dalga boyu saptanmıştır.

Tablo Sl'de her iki belirteç için gerekli reaksiyon sü-

releri A 'lar örnek ve standart stok çözelti konsantrasyon-max

* Ferri-hidroksamat kompleksinin optimum stabilitesi için Fe(III)/NH 20H oranı 5 olmalıdır(83).

- 126 -

ları, Şekil 59'da Ni(II)-hidroksilamin belirteci, Şekil 59a'da

ferri amonyum sülfat belirteci için grafiksel olarak reaksiyon

süreleri görülmektedir. Bazı penisilin türevlerinde absorpsi-

yon spektrumlarında A elde edilemediğinden ölçmeler diğer max sefalosporinlerin çoğunda gözlenen A olan 440 nm'de yapıl-max mıştır. Boş çözeltilerin absorbans göstermesi nedeniyle 400

nm'den sonra absorpsiyon sepktrumu çizilememiştir.

4.3.2. Ölçü Eğrilerinin Hazırlanması

Her bir penisilin türevi için öngörülen yaklaşık 20 mg

madde% l'lik NaHC0 3 çözeltisinin yeterli miktarında çözül

dükten sonra hacimleri 10 ml'ye tamamlandı. Her bir penisilin

çözeltisinden 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 ve l'er ml çekilip, hacimle

ri yine% l'lik NaHC0 3 çözeltisiyle 1 ml'ye tamamlandıktan

sonra Üzerlerine 0.5 ml % l'lik NaHC03

çözeltisi ve 1 ml

Ni(II)-hidroksilamin belirteci konup, önceden saptanan süre-;

lerde oda sıcaklığında bekletildi. Bekleme süresinin sonunda

Üzerlerine 2.5 ml ferrihidroksemat ilave edilip önceden sap

tanmış süreler içinde reaksiyonun tamamlanması için beklendi

ve çözeltilerin absorbansları aynı şartlarda hazırlanan boş

denemeye karşı absorpsiyon spektrumlarındaki maksimum dalga

boyunda ölçüldü.

- 127 -

TABLO 54- Ni(II)-hidroksilamin Yöntemi İle Yapılan Miktar Tayinlerinde Reaksiyon Koşulları

Ni(II)-Hidroksilamin Fe(II)-Belirteci Örnek ve Penisilin Belirteci İç.in İçin Reaksiyon

>ı. Standart

Türevi Reaksiyon Süresi Süresi max Çözelti (dakika) (dakika) Konsantrasyonu

pı 40 ıs 440 2,000

p2 40 15 440 2,000

p3 40 15 440 2,000

p4 40 15 440 2,000

Ps 30 10 -* 2,050

p6 30 10 -* 2,000

p7 40 ıs -* 2,300

Ps 40 15 -* 2,050

p9 40 ıs 440 2,050

Pıo 40 15 -* 1,360

pıı 30 ıs 410 1,980

Pl2 40 20 440 2,005

Pl3 40 5 460 2,020

Pl4 40 ıs 440 1,945

Pıs 40 15 440 2,100

Pl6 40 ıs -~. 1,800

Pl7 40 ıs 440 2,110

Pıs 40 10 440 4,000

Pl9 40 10 440 2,060

p20 30 5 440 2,000 '

p21 40 10 440 2,230

p22 40 10 440 1,840

*Bazı penisilin türevlerinin miktar tayinlerinde, absorbsiyon spektruınlarında Amax elde edilemediğinden ölçmeler 440 nm'de yapıldı.

A

•--. -------~---- ------~ ----------•---------:::-------------------------------------------__ ,.._._. ~ ' ................ • ·=-··· -·•-=l - . ·····-········-· ... lf : -···· .... _ ...... :. .................... : .... -·····-.....• ~ ......... --··-·· --~---.... -·--···-

- --········~ 5 Pı5

0.6 ..... ...... ...•. ' ..... . .... ~

• ------]l-~-·-...... f? ____ ... _ ... ---·····-·--·····-........ -. ·-·····--.. ···---··--:;"'1='·~·-==---_........ ... ____ ,:-~ -::-:._14..

.------:

---·· .... .. •~... R ---~ ___ ........ ..,.. -- --t 2 ----·· ,,,.,.. --... .•.. -....... __ ..,.. ________ _... -e3 ___ ..... -------------...... -- -___ .. ----_.,_-----------------

..__ ..... -----

04

Pı2

02

J..--- .. ········ .... ı ............................................................. ~.:::::t=••·-......... -........... • - ;-ı.; - - 8 e--•·-···--·-·· .... ·•·-·--·-·•--e--·------------·-·--··--·-+-··· -·-··-••-e-----···~"'•-•..,.,",-.=""'::::::.~. ···"'-••w:.;:···-,ı::: · ··········-~ 6 ----------···---· !=:== ;;;.---~:::t::=··· 1 ... - - .,__ --=ı=:---·l?.ııı . 4 ... • •-e---• --+ •- ••• --• • --•-- ---• T •••-D . • ·---1?. '8 • • 19 • • • • • • - • -··=• • ---------- F,? -. ··---·- 9 -----------·-.... ·-·------+-·----------···------........... ---◄------------···-------------·--··· ... f?. -92 •--··-------- _.__. ........ ·--··-----·-···----···---······+---··--··--+····--·-········•-····-···-... ··16 __ Ff:

----·- __ .._ _________________ _.___--.. 3 .------------------ • • • • --P. -------- : • ._ • - • 18 rı - • ... -=--r,o • ~-e t=----------------------- - -------- ------------ ---·•---------· 21 ----·---------------------------P.

11

o---;---:~---::----::----:-'::"""------+-----~-----5 10 15 20 25 30 ŞEKİL 59- Ni(II) hidroksilamin belirteci ile incelenen penisilinlerin reaksiyon

süreleri (Tablo 54 1 deki koşullarda)

35 .40 .45 dk.

1-' N 00

A

0.9 15

0.7 ~----------..... ------------------------~--- --------------------.... --------~ 1 _-;-..:--.. -•-1==-.-.:::..... 1 • ı -- 1 .Pr.s 7 ..... ·-· ·-· ... ·ı

0.5

- ----~¼:;· -------------....... ·---------------•---------------------------P, 1::=--•-••--•--•--- _::~;::;- m•••~ -. ..=... ~ 4 ___ ... __. .,.-·· - .•. -:-.-~:::::::."7.:·::=:.::::::.¼:-· ......... ---·-.. ·-:!::-- .... --.......... __ o 14

._ ... .,., ......... -··-··· ·--· -· ••• r2"········ P.1 ,.~ .,,. ....

•--·-···--······-· ·-_.,,

Q.3

• ····· ~ ---e

1;;;:=.~-~-•~~~..:::::~~;:~~_:: __ 1_:-::·~c-~::.=r=-~F--!-~_LPa 19 '3

0.1

ı::-----____ _._ _________ ... ____ ------ı:-----------•---------_ _,._ __ -p~ ·-----1?. :··--••••--• .......... -.,,.,. ,. ,,. • • ·-··•·--······:. .............. _ .......... _ ........... __ ,. ...................... m •• 13 ............. 1? 16 t------·---:ı:::··------.. -:·---···---.. ·---:ı---·---·---- ... -.::.----... ----·---.. :.::=;-·---~ 12 ~ ,... .... ... ..... ...• ·- A\;i 10 9

----- ---·--•--.. ·---·------·••·--- ----··--·------···--···---···---···-- 21 P. 11

oL.--------------------t-----,__----+--------t-25 30 dk. 5 10 15 20

ŞEKİL 59a- Ni(II)-hidroksilamin yönteminde ferri amonyum sülfat belirteci için reaksiyon süreleri (Tablo S4'deki koşullarda)

1-' N ı.o

A

D.9 ' P, * '2 -~ ·2

0.7 X Pg

• 11 • 12

05

&----- .1, ---------- • -...--::t::: ~ ---------- •------~ ------- - - -- - -- ---____ --------------------------- - ~ . ------------------- -· ...-- >( ----

*13 '14 j 15

'""" l,J

+ 17 o

i 18

03 '/ -----~----- ----------<>------::::::::ı=::------ _.,..- --Q--. ----<>- -- ---

. . ------------ ~ ---Q

~

---,~::::,1-----_:_=::zj: --~~ -...,._ ----.. .....-- ---·- -==- --.,,_-..... ------- _..._ ________________________ .,,..._ -------.:_ - -- --.,.._ ~------- ' - -------- ----- -'

il'-~~-

,r Pı9

o '21 ~ Pıo

(ij) Pı2

0.1 .,------------------------- -------... --~--------.... ___________ __ o '--ılfJ---f------------------------------------------------640 600 s6o sıo ,so "o ,oo >ı.

ŞEKİL 60- Penisilin türevlerinin Ni(II)-Hidroksinamin belirteci ile verdikleri absorbans eğrileri

A

0.6O

0.45

0.30

0.15

o

ŞEKİL 61- Pı

TABLO 55- Pı

No C

mcg/ml

1 80

2 160

3 240

4 320

5 400

- 131 -

80 160 240 320 400 C

mcg/ml nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi


Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,119 0,120 0,115 0,115 0,1173 0,0026 2,2165

0,241 0,240 0,235 0,240 0,2390 0,0027 1,1297

0,359 0,360 0,355 0,360 0,3585 o, 0024 0,6695

0,480 0,480 0,482 0,480 0,480~ 0,0010 0,2081

0,599 0,600 0,600 0,600 0,5998 0,0005 o, 0834

- 132 -

A

~ 0.60

0.45

0.30.

O .15

o 80 160 240 320 400 C

mcg/ml ŞEKİL 62 • P 2 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 56- P 2 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 440 nm) max

No C Al A2 A3 A4 A s S/A. 100 mcg/ml

1 80 0,120 0,115 0,115 0,117 o, 1168 0,0024 2,0548

2 160 0,241 0,235 0,240 0,235 0,2378 0,0032 1,3457

3 240 0,360 0,358 0,360 0,360 0,3595 0,0010 0,2782

4_ 320 0,480 0,478. 0,480 0,478 0,4790 0,0012 0,2505

5 400 0,590 0,587 0,590 0,588 0,5888 0,0015 0,2548

A

~ O.60

0.45

0.30

0.15

o 80

- 133 -

160 240 320 400 C

mcg/ml

ŞEKİL 63- P 3 nın Ni (II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 57- P3

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 440 nm) max •,

No C


1 80 0,111 0,110 o,ııo o,ııı o, ııo5 0,0006 0,5430

2 160 0,231 0,230 0,230 0,232 0,2308 0,0010 0,4333

3 240 0,349 0,350 0,345 0,345 0,3473 0,0026 0,7486

4 320 0,471 0,470 0,475 0,470 0,4715 o, 0024 o, 5090

5 400 0,585 0,585 0,590 0,590 0,5875 0,0029 0,4936

A

0.60

0.45

o.,o

o.ıs

o 80

- 134 -

160 240 320 400 C

mcg/ml

ŞEKİL 64 - P4 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 58 - P4 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.max= 440 nm) • .


1 80 0,122 0,120 0,125 0,120 0,1218 0,0024 1,9704

2 160 0,243 0,240 0,245 0,245 0,2433 0,0024 0,9864

3 240 0,361 0,360 0,365 0,360 0,3615 0,0024 0,6639

4 320 0,48~ 0,480 0,480 0,485 0,4820 0,0024 0,4980

5 400 0,611 0,610 0,610 0,610 0,6103 0,0005 0,0819

A

o.a

o.6

0.4

0.-2

o

ŞEKİL 65 - P5

TABLO 59- Ps

No C mcg/ml

1 82

2 164

3 246

4 328

5 410

- 135 -

82 164 246 328 410 C


ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (A : 440 nm) max •.

Al A2 A3 A4 A s S/A. 100

0,136 0,135 0,137 0,140 0,1370 0,0022 1,6058

0,273 0,270 0,275 0,270 0,2720 0,0024 0,8824

0,415 0,415 0,415 0,418 0,4158 0,0015 O ,3608

0,557 0,560 0,555 0,560 0,5580 0,0024 0,4301

0,686 0,690 0,685 0,681 0,6855 0,0037 0,5398

A

o.s

o.6

0.4

0.2

o

ŞEKİL 66- P6

TABLO 60- P6

No C mcg/ml

1 80

2 160

3 240

4 320

5 400

- 136 -

80 160 240 320 400 C mcg/ml

nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi


Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,131 0,130 0,130 0,130 0,1303 0,0005 0,3837

0,260 0,260 0,260 0,260 o, 2600 0,0000 0,0000

0,391 0,300 0,392 0,390 0,3908 0,0010 o, 2559

0,521 0,520 0,-525 0,521 0,5218 0,0022 0,4216

0,649 0,650 0,648 0,650 0,6493 0,0010 o, 1540

A

0.8

o.6

0.4

0.2

o 92

- 137 -

184 276 368 460 C

mcg/ml ŞEKİL 67- P7 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 61- P7 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (Amax= 440 nm) •.

No C


1 92 o, 140 0,140 0,142 o, 140 o, 1405 0,0010 0,7117

2 184 0,284 0,280 0,284 0,280 0,282 0,0023 0,8156

3 276 0,420 0,420 0,417 0,417 0,4185 0,0017 0,4062

4 368 0,572 0,570 0,5 75 0,570 0,5718 0,0024 0,4197

5 460 0,715 0,715 0,720 o, 715 o, 7163 0,0025 o, 3490

A

0.4

0.3

o .. 2

o.ı

o 82

- 138 -

164 246 328 410 C

mcg/ml

ŞEKİL 68 - P 8 nın Ni(II)-hidroksilamin Qelirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 62- P 8 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O : 440 nm) max

C -S/A.100 No

mcg/ml Al A2 A3 A4 A s

1 82 0,081 0,080 0,085 0,080 0,0815 0,0024 2,9448

2 164 o, 114 0,145 0,140 0,145 o, 1435 0,0024 1 ,6725

3 246 0,216 0,215 0,212 0,215 o, 2145 0,0017 0,7925

4 328 0,285 0,290 0,285 0,285 0,2863 0,0025 0,8732

5 410 0,350 0,350 0,352 0,352 0,351 0,0012 0,3419

A

0.20

O. 15

o.ıo

o. 05

o

ŞEKİL 69 - P 9

TABLO 63- P9

No C mcg/ml

1 82

2 164

3 246

4 328

5 410

- 139 -

82 164 246 328 410 C



Al A2 A3 A4 A s S/A.100

0,040 0,040 0,044 0,040 O ,0410 0,0020 4 ,8780

0,080 0,080 0,081 0,081 o, 0805 0,0006 0,7453

0,120 0,120 0,120 0,124 0,1210 0,002 1,6529

0,160 0,158 0,160 0,158 0,1590 0,0012 o, 754 7

o, 190 0,190 0,194 0,190 o, 1910 0,0020 1,0471

A

0.20

O, 15

O. 10

0.05

o

- 140 -

54.4 108.8 163.2 217 .. 6 212 C

mcg/ml ŞEKİL 70- P10 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 64- Pıo ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 440 run) max

No C


1 54,4 0,032 0,030 0,032 .. 0,030 0,0310 0,0012 3,8710

2 108,8 0,068 0,070 0,075 0,072 0,0713 0,0030 4,2076

3 163,2 0,101 0,100 0,100 0,100 0,1003 0,0005 0,4985

4 217,6 0,138 o, 140 0,135 0,140 o, 1383 o, 0024 1,7354

5 272 0,165 0,164 0,164 0,165 0,1645 0,0006 0,3647

A

0.20

o.ıo

O. 05

o 79.2

- 141 -

158.4 237.6 316.8 396 C

mcg/ml

ŞEKİL 71- P 11 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 6S- P11


Na C Al A2 A3 A4 A s S/A..100 mcg/ml

1 79,2 0,031 0,030 0,032 0,030 0,0308 0,0010 3,2468

2 158,4 0,058 0,060 0,058 0,060 0,059 0,0012 2,0339

3 237,6 0,081 0,080 o, 081 0,080 0,0805 0,0006 0,7453

4 316,8 0,100 0,100 0,105 0,100 o, 1013 0,0025 2,4679

5 396 0,127 o, 130 0,127 0,130 o, 1285 0,0017 1,3230

A

0.20

o.ıs

o.ıo

o. 05

o 80.2

- 142 -

160.4 240.6 320.8 401 C

mcg/ml

ŞEKİL 72 - P12 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 66- P12 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (Amax: 440 nın) -.

No C


1 80,2 0,040 0,040 0,042 0,040 0,0405 0,0010 2,4691

2 160,4 0,078 0,080 0,080 0,080 0,0795 0,0010 1,2579

3 240,6 o, 110 0,112 0,110 o,ııo o,ııo5 0,0010 o, 9050

4 320,8 0,148 0,150 0,145 0,150 o, 1483 0,0024 1,6183

5 401 0,180 O, 182 0,180 o, 182 0,1810 0,0012 0,6630

A

0.300

0.225

o. ıso

0.075

o 80.8

- 143 -

161.6 242.4 323.2 404 C

mcg/ml

ŞEKİL 73· P 13 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 67- P13 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O'max: 440 nm)

No C


1 80,8 0,042 0,040 0,040 0,040 0,0405 0,0010 2,4691

2 161,6 0,088 0,090 0,090 0,090 0,0895 0,0010 1, 1173

3 242,4 0,130 0,135 0,130 o, 130 o, 1313 0,0025 1, 9040

4 323,2 0,170 0,170 0,170 0,173 0,1708 0,0015 0,8782

5 404,0 0,210 0,210 0,214 o, 212 0,2115 0,0019 0,8984

- 144 -

A

0.60

0.45

0.30

o.ıs

o 155.6 233.4 311.2 389 C

mcg/ml

ŞEKİL 74- P 14 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 68- P14

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri Oı.max= 440 run)

C A4

-S/A.100 No

mcg/ml Al A2 A3 A s

l 77 ,8 0,121 0,120 0,125. 0,125 o, 1228 0,0026 2, 1173

2 155,6 0,240 0,245 0,240 0,245 0,2425 0,0029 1,1959

3 233,4 0,360 0,362 0,360 0,360 o, 3605 0,0010 0,2774

4 311,2 0,478 0,480 0,480 0,475 0,4783 0,0024 0,5018

5 389,0 0,595 0,595 0,600 0,595 0,5963 0,0025 0,4193

A

ı.oo

0.50

O .25

o 84 168

- 145 -

252 336 420 C

mcg/ml ŞEKİL 75- P 15 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 69- P 15

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O.. : 440 nm) max

No C


1 84 0,202 0,200 0,200 0,200 o, 2005 0,0010 0,4988

2 168 0,400 0,400 0,404 0,400 0,4010 0,0020 0,4988

3 252 0,600 0,600 0,600 0,600 0,600 0,0000 0,0000

4 336 0,80_0 0,802 0,802 0,800 0,8010 0,0012 0,1498

5 420 0,986 0,985 0,986 0,984 0,9853 0,0010 0,1015

- 146 -

A

0.300

O. 225

0.150

o. 075

o 72 144 216 288 360 C

mcg/ml ŞEKİL 76~ P nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçU eğrisi

16

TABLO 70- P16

ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : Zı-40 run) max

No C Al A2 A3 A A s S/A.100 mcg/ml 4

1 72 0,050 0,050 0,052 o,oso 0,0505 0,0010 1, 9802

2 144 0,100 0,100 0,100 o,ıoo 0,1000 0,0000 0,0000

3 216 0,150 o, 152 0,152 o, ısa o,ısıo 0,0012 0,7947

4 288 0,200 0,204 0,200 0,200 0,2010 0,0020 0,9950

5 360 0,250 0,251 0,250 0,253 0,2510 0,0014 0,5578

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o

- 147 -

168.8 253.2 337.6 422 C

mcg/ml

ŞEKİL 77- P 17

nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 71- P17 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (Amax 440 nm) .,

No C


1 84,4 0,075 0,071 0,(i)70 0,075 0,0728 0,0026 3,5714

2 168,8 o, 130 o, 130 0,132 o, 130 o, 1305 0,0010 0,7663

3 253,2 0,191 o, 190 0,195 0,190 0,1915 o, 0024 1,2533

4 337,6 0,257 0,260 0,.260 0,261 0,2595 0,0017 0,6551

5 422,0 0,325 0,323 0,325 0,323 o, 3240 0,0012 o, 3704

A

0.20

O. 15

o.ıo

0.05

o 80

- 148 -

160 240 320 400 C


TABLO 72- P 18 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O,max= 440 nın) -. .

No C


1 80 0,039 0,040 0,040 0,038 0,0393 0,0010 2,5445

2 160 0,078 0,080 0,078 0,080 0,0790 0,0012 1,5190

3 240 o, 117 0,117 0,120 0,117 0,1178 0,0015 1,2733

4 320 o, 154 0,155 0,155 0,155 0,1548 0,0005 0,323

5 400 0,190 o, 192 o, 190 0,192 0,1910 0,0012 o, 6283

A

0.300

0.225

0.150

o. 075

o 82.4

- 149 -

164.8 247.2 329.6 412 C

mcg/ml

ŞEKİL 79- P19 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 7'3-- P19 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 440 nm) max

No C


1 82,4 0,061 0,060 0,060 0,061 0,0605 0,0006 0,9917

2 164,8 o, 118 0,118 0,120 0,120 O, 1190 0,0012 1, 0084

3 247,2 0,178 o, 180 0,178 o, 180 0,1790 0,0012 0,6704

4 329,6 0,234 0,230 0,230 0,230 0,2310 0,0020 0,8658

5 412,0 0,295 0,291 o, 290 0,290 0,2915 0,0024 0,8233

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o 80

- 150 -

160 240 320 400 C mcg/ml

ŞEKİL 80· P20 nın Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi

TABLO 74- P20 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri (Amax 440 nm)

No C

Al A2 A3 A A s S/A.100 mcg/ml 4

1 80 0,072 0,070 0,075 0,070 0,0718 o, 0024 3,3426

2 160 o, 130 o, 130 o, 132 0,130 0,1305 0,0010 0,7663

3 240 0,201 0,200 0,200 0,205 0,2015 o, 0024 1,1911

4 320 0,268 0,270 0,265 0,271 o, 2685 0,0026 o, 9683

5 400 0,330 0,330 0,330 0,332 0,3305 0,0010 0,3026

A

0.20

O. 15

o.ıo

O. 05

o

- 151 -

89.2 178.4 267.6 356.8 446 C

mcg/ml

ŞEKİL 81- P21 nın Ni(II)-hidrok'silamin belirteciyle verdiği ölçü eğrisi


No C


l 89,2 0,030 0,030 0,035 0,030 0,0313 0,0025 7,9872

2 178,4 0,070 0,070 0,070 0,072 0,0705 0,0010 1,4184

3 267,6 0,100 0,100 0,102 0,100 0,1005 0,0010 0,9950

4 356,8 o, 138 0,140 0,138 o, 138 0,1385 0,0010 0,7782

5 446,0 0,170 0,171 0,170 0,170 0,1703 0,0005 0,2936

A

0.4

0.3

0.2

o.ı

o 73.6

- 152 -

147.2 220.8 294.4 368 C


TABLO Ur P22 ölçü eğrileriyle ilgili absorbans değerleri O. : 440 nın) max

No C


1 73,6 0,080 0,080 0,080 0,080 0,0800 0,0000 0,0000

2 147,2 0,152 0,150 0,152 0,152 o, 1515 0,0010 0,6601

3 220,8 0,229 0,230 0,230 0,227 0,2290 0,0014 0,6114

4 294,4 0,305 0,300 0,305 0,305 0,3038 0,0025 0,8230

5 368 0,380 0,380 0,382 0,380 0,3805 0,0010 o, 2628

- 153 -

TABLO 77- Ni(II)-hidroksilamin Yöntemiyle Miktar Tayinleri Yapılan Penisilinlerin Ölçü Eğrileriyle İlgili Regresyon Analizleri

Penisilin " m n r max

pı 440 0,999994 -0,002930 0,9999

p2 440 0,999807 0,000820 0,9998

p3 440 0,001493 -0,008890 0,9999

p4 440 0,001519 -0,000930 0,9999

P5 * 0,001687 -0,001240 0,9998

p6 * 0,001625 0,000500 0,9999

p7 * 0,001567 -0,006600 0,9998

p8 * 0,000831 0,010820 0,9997

p9 440 0,000462 0,004950 0,9991

Pıo * 0,000614 O, 008 710 0,9978

pıı 440 0,000300 0,008710 0,9985

p12 440 0,000436 0,007020 0,9995

pl3 460 0,000524 0,001730 0,9991

p14 440 0,001520 0,005240 0,9999

Pı5 440 0,002345 0,006680 0,9998

p16 * 0,000697 0,000100 0,9999

pl7 440 0,000748 0,006240 o., 9995

Pl8 440 0,000474 0,002620 0,9998

p19 440 0,000697 0,004000 0,9998

p20 440 0,000819 0,003940 0,9996

p21 440 0,000388 -0,001580 0,9992

p22 440 0,001024 0,002970 0,9999

*Bazı penisilinler için Amax saptanamadığından penisilin türevlerinin çoğu için geçerli olan 440 nm de ölçü eğrisi çizildi.

- 154 -

4.4. İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ İLE REAKSİYON ÜRÜNLERİNİN İNCELENMESİ

4.4.1. Ellman R~gktifi Ktillgriilgn Yöritemde Reaksiyon Ürünleririiri İrit~ ·Tgbgkg K~d•gtdgtafigi İle İricelenmesi

Ellman Belirteci Yönteminde reaksiyon ürünlerinin in

celenmesinde pilot madde olarak ampisilin trihidrat kullanıla

rak, maddenin 2.086 mg/ml konsantrasyondaki çözeltisi kulla

nıldı. Bir numaralı tatbik noktasına penisilin türevinin su

daki çözeltisi, iki numarada tatbik noktasına pH 7.2 ~ 0.5

olan fosfat tamponu tatbik edildi. Üç numaralı tatbik noktası

na penisilin türevinin 0.5 ml 0.1 N NaOH ile degredasyon ürünü

tatbik edildi. Dört numaralı noktaya penisilin türevinin bi

rinci degredasyondan sonraki çözeltisine 0.5 ml 1 N HCL çözel

tisi ilavesinden sonraki ürün tatbik edildi. Beş numaralı tat

bik noktasına ise penisilin türevinin baz ve asit ilavesinden

sonra genel penisilinler için saptanan sürede, belli ısıda

degredasyon ürünü tatbik edildi. Buna göre plak belli bir süre

çözücü (3.6. bölümünde anlatılan absorbans ve çözücü sistemle

ri kullanıldı) sisteminde tutuldu ve maddelerin plak üzerinde

yürümeleri sağlandı. 1 ve 2 numaralı tatbik noktalarında hiç

bir yükselmenin görülmediği, 3 numaralı noktada degredasyon

ürününün yükselme gösterdiği, 4 ve 5 numaralı maddelere ait le

kelerin aynı noktada leke gösterdiği plağın 254 ve 366 nm de

UV lambasında incelenmesi sonucu ortaya çıkmıştır. Bunun sonu

cunda NaOH ile yalın degredasyonun penisilinler için yeterli

o lmad ığı HC 1 i 1 aves i ile penisi 1 in deg radas yo__nunun hızlandığı

ve ısı ile degradasyonun tamamlandığı saptanmıştır.

, ı\rıı--c✓ ~ -ı-------ı""s'-ı< Vkrıı 11 1 l__.l~ O c--N COOH

o'

- 155 -

+

HCI NaOH

f:l

ŞEKİL 83- P8 'in Ellman Belirteci ile reaksiyon mekanizması

4.4.2. Hg(II)-imidazol-EDTA Reaktifi Kullanılan Yöntemde Reaksiyon Urünlerinin İnce Tabaka Kromatografisi İle Incelenmesi

4.4.a ve 4.4.b bölümünde belirtilen absorban ve çözücü

sistemleri kullanılarak reaksiyon çözeltilerinin, çalışılan

penisilinlerin sulu çözeltilerinin ve imidazol çözeltisinin

ince tabaka kromatografisi ile elde edilen kromatogramları

iyot buharında ve 254 ile 366 nm de UV lambasında incelenmesi

yapılmıştır. Reaksiyon çözeltilerinin ince tabaka kromatogra

fisi ile incelenmesinde reaksiyon ürünleri büyük bir olası

lıkla Hg(II) içeren organik yapıda bileşikler olduklarından,

polar çözücü sistemlerinde ilerlemeyerek stardda kaldıkları

gözlenmiştir. Literatür bulgularında sefalosporinlerden Sefa

droksil'in Hg(II) imidazol belirteci ile verdiği reaksiyon

mekanizması aşağıda görülmektedir(SO). Pilot madde olarak in

celemeye aldığımız ampisilin trihidrat maddesindeki gözlenen

startta kalma olayının buna benzer bir olay olabileceği ve

reaksiyonun büyük bir olasılıkla Şekil 85'deki gibi olabile

ceği varsayımına varılmıştır. Ancak çalışma koşulları elverdiği

takdirde startta kalan bu lekelerdeki bileşiklerin izole edilip

yapılarının aydınlatılması bu konuyu açıklığa kavuşturacaktır.

- 156 -

HoO"( CH-C,..-~~=>s • ı ıı 1 1

- NH20 C--N "'9CH Q 3

o coo-. l imidazol

ŞEKİL 84- Sefadroksil'in Hg(II)-imidazol belirteci ile reaksiyon mekanizması

Hge!z -

ŞEKİL 85- P8 'in Hg(II)-imidazol belirteci ile verdiği muhtemel reaksiyon mekanizması

- 157 -

4.5, FARMASÖTİK ŞEKİLLERİN MİKTAR TAYİNLERİNDE SAPTANAN SONUÇLAR

İncelenen 22 penisilin türevine* ait farmasötik şekil

lerinin 3,5 bölümünde anlatıldığı şekilde:

M1

: Ellman yöntemi

M2

: Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemi

M3

: Ni(II)-hidroksilamin yöntemi

M4

: USP XX ye göre iyodometrik titrasyon metodu

yöntemleri ile analizleri yapılmıştır. İlgili tablolarda ve

rilen farmasötik şekillerin içerdikleri, o farmasötik şekil

için aktivite(mg) cinsinden verilen etkin madde içeriğidir

(doz).

Uniformluk testi çerçevesinde miktar tayini yapılan far

masötik şekillerin tablet ve kapsül şeklinde olanlarından lS'er

tane seçilerek tartılmış ve ağırlıkları birbirine yakın olan

(tablet ve kapsül ağırlıkları arasında maksimum 0.20 mg fark

olanlar) 7 tane farmasötik şeklin miktar tayini yapılarak sap

tanan sonuçlardan 5 tanesi üzerinden değerlendirmeye seçilmiş

tir. Diğer farmasötik şekillerin de 7 tanesinin miktar tayin

leri yapılmış ve saptanan sonuçlardan yine 5 tanesi değerlen

dirilmiştir.

Farmasötik şekillerin miktar tayinlerinde herbir peni

silin türevine ait farmasötik şekiller için örnek olarak alın

mış ve M1

, M2

, M3

, M4 yöntemleri uygulanarak alınan sonuçlar

değerlendirilmiştir. Tablo 78 1 de bu farmasötik şekillere ait

sonuçlar görülmektedir.

*P20 maddesine ait elimizde farmasötik şekil bulunmadığından bu penisilin türevine ait farmasötik şeklin miktar tayini yapılamamıştır.

- 158 -

TABLO 78- Farmasötik şekillerin miktar tayinlerinde alınan sonuçlar

® a) Stapenor Kapsül (P

1)

250 mg Oksasiline eşdeğer 275 mg oksasilin sodyum tuzu içermektedir.

Ölçme No Ml M2 M3 M4

1 249,81 246,30 243,14 24 O, 2 6

2 250,02 247,21 245,24 24 2, 12

3 250,09 248, 29 251,82 250,25

4 250,17 247,17 24 7, 26 252,11

5 250,28 248,29 246,17 24 3, 08

X 250,074 247,452 246,726 245,564

s 0,1764 0,8470 3,2253 5,267 2

s rel 0,0710 0,3423 1,3072 2,1449·

s_ 0,0789 0,3788 1, 44 24 2,3556 X

Güven 250,07±0,22 247,45±1,05 243,73±4,00 242,56±6,54 Sınırları

- 159 -

TABLO 78- (devam)

b) Orbenin® Kapsül (P2

)

500 mg kloksasilin sodyum tuzu içermektedir.


1 249,87 251,01 250,17 240,47

2 250,11 248, 4 2 247,11 24 2, 26

3 250,07 248,00 248,43 24 3, 5 7

4 250,63 249,17 251,11 249,27

5 250,27 248, 16 250,19 247,16

x 250,190 248,952 249,402 244,546

s O, 28 4 3 1,2349 1,6067 3,6035

s rel 0,1136 0,4960 0,6442 1,4735

s_ 0,1271 0,5523 0,7185 1,6115 X

Güven 250,19±0,35 248,95±1,53 249,40±1,99 244,55±4,47 Sınırları

- 160 -

TABLO 78- (devam)

c) Dichlor-Stapenor® Kapsül (P3

)

250 mg Dikloksasiline eşdeğer 270 mg dikloksasilin sodyum tuzu içermektedir.


1 248, 5 3 234,93 24 O, 61 238,47

2 248,17 240,17 244,57 241,18

3 249,91 238,67 247,11 24 8, 6 2

4 249,28 241,16 241,14 24 O, 2 7

5 248,26 24 O, 2 9 241,39 244, 6 7

X 248,830 239,044 242,964 242,642

s 0,7449 2,4679 2,7890 4,0317

s rel 0,2994 1,0324 1,1479 1,6616

s_ 0,3331 1,1037 1,2472 1,803 O X

Güven 248,83±0,92 239,04±3,06 242,96±3,46 242,64±5,01 Sınırları

- 161 -

TABLO 78- (devam)

® d) Staphylex Kapsül (P 4 )

250 mg Flukloksasiline eşdeğer 272 mg Flukloksasilin sodyum tuzu+ 1 H2 0 içermektedir.


1 250,01 248, 05 250,09 239,17

2 250,00 248,07 248 , 71 242,14

3 249,92 249,17 249,63 24 9, 19

4 249,98 249,63 250,19 248, 27

5 250,27 250,27 252,27 249,63

X 250,036 249,038 250,178 245,680

s 0,1354 0,9745 1,3076 4,7313

s rel 0,0542 O, 39 13 0,5227 1,9258

s_ X

0,0606 0,4358 0,5848 2,1159

Güven 250,04±0,17 249,04±1,21 250,18±1,62 245,68±5,87 Sınırları

- 162 -

TABLO 78- (devam)

@ e) Geopen Tablet (P 5 )

500 mg Karindasiline eşdeğer 382 mg Karbenisilin içermektedir.


1 500,57 501,19 500,63 501,17

2 500,26 500,9 8 502,17 500,19

3 500,16 502,16 504,16 497,16

4 501,09 501,17 500,21 495,42

5 500,92 500,87 501,16 498,16

X 500,600 501,375 501,666 498,420

s 0,4039 0,5318 1,5751 2,3103

s rel O, 08 O 7 0,1061 0,3140 0,4635

s_ O, 18 06 0,2378 O, 7 044 1,0332 X

Güven 500,60±0,50 501,38±0,66 501,67±1,96 498,42±2,87

Sınırları

- 163 -

TABLO 78- (devam)

f) Carindapen® Tablet (P6 )

500 mg Karindasiline eşdeğer 552 mg Karindasilin sodyum içermektedir.


1 492,13 495,17 492,63 493,16

2 493,17 494,17 49 4, 1 7 494,63

3 492,76 493,16 492,61 498,17

4 493,32 494,19 493,27 495,61

5 492,74 493,63 495,74 495,42

x 492,824 494,064 493,684 495,398

s o,4633 0,7510 1,3133 1,8254

s rel 0,0940 0,1520 0,2660 0,3685

s_ 0,2072 0,3359 0,5873 0,8163 X

Güven 492,82±0,58 494,06±0,93 493,68±1,63 495,40±2,27 Sınırları

- 164 -

TABLO 78- (devam)

g) Aerugipen® 10 g Flakon (P7

)

10000 mg Tikarsiline eşdeğer 11144 mg Tikarsilin disodyum tuzu içermektedir.


1 10010,44 10008,76 10001,52 10021,08

2 10008,80 10005,89 10018,98 10012,42

3 10011,66 10004,73 10000,36 10020,10

4 10009,17 10006,80 10009,27 10002,27

5 10010,27 10010,29 10009,69 10009,16

x 10010,068 10007,294 10007,964 10013,006

s 1,1322 2,2313 7, 5 06·4 7, 8 4 08

s rel 0,0113 0,0223 0,0750 0,0783

s_ 0,5063 0,9979 3,3570 3,5065 X

Güven 10010,07±1,41 10007 ,29±2, 77 10007, 96±9, 32 10013,01±9,73 Sınırları

- 165 -

TABLO 78- (devam)

h) Ampicillin 1000 Stada® Tablet (P8 )

1000 mg ampisiline eşdeğer 1154 mg. Ampisilin Trihidrat içermektedir.


1 1020,02 1039,58 104 O, 63 1041,17

2 1020,62 1 1038,63 104 2, 1 7 1038,16

3 1020,17 1040,81 1038,63 1036,42

4 1020,42 1039,17 1039,17 1039,17

5 1020,-1 1039,82 1040,07 1027,16

X 1020,368 1039,602 1040,134 1036,416

s 0,2670 0,8122 1,3772 5,4521

s rel 0,0262 0,0781 0,1324 O, 5 261

s_ 0,1194 X

O, 3 68 2 0,6159 2,4383

Güven 1020,37±0,33 1039,60±1,01 1040,13±1, 71 1024, 42±6, 77 Sınırları

- 166 -

TABLO 78- (devam)

® ı) Clamoxyl 750 Tablet (P

9)

750 mg Amoksisiline eşdeğer 860,7 mg Amoksisilin Trihidrat içermektedir.


1 749,17 750,17 751,06 750,07

2 750,21 748,63 748,16 753,16

3 750,17 750,01 750,63 747,25

4 750,82 749,63 747,13 745,12

5 749,63 748,27 750,09 746,09

x 750,000 749,342 749,414 748,338

s 0,6267 0,8472 1,6907 · 3,2728

s rel 0,0836 0,1131 0,2256 0,4373

s_ 0,2803 0,3789 0,7561 1,4636 X

Güven 750,00±0,78 749,34±1,05 749,41±2,10 748,34±4,06 Sınırları

- 167 -

TABLO 78- (devam)

ı") S ·1· ® 500 K -ı (P ) pectacı ın . apsu 10

500 mg Episilin içermektedir.


1 498,63 470,35 490,35 480,42

2 49 7, 28 470,38 501,08 500,07

3 497,91 473,22 480,16 486,42

4 498,28 471,16 487,42 473,17

s 497,16 472,42 488,16 481,63

X 497,852 471,506 489,434 484,342

s 0,6320 1,2745 7, 5 5 24 9,9905

s rel 0,1269 0,2703 1,5431 2,0627

s_ 0,2826 0,5700 3,3775 4,4679 X

Güven 497,85±0,78 471,51±1,58 489,43±9,38 484,34±12,4( Sınırları

- 168 -

TABLO 78- (devam)

J.) . ®

Brıncapen

800 mg Bakampisilin hidroklorür içermektedir.


1 798,17 782,80 7 8 O, 08 780,98

2 798,68 784,02 789,17 784,11

3 798,17 783,07 790,11 7 9 O, 08

4 800,09 785,17 791,07 794,17

5 800,07 786,26 794,17 781, 08

X 799,036 783,864 788,920 786,084

s 0,9755 1,4520 5,287 O 5,8382

s rel 0,1221 O, 18 5 2 0,6702 0,7427

s_ 0,4363 0,6494 2,3644 2,6109 X

Güven 799,04±1,21 783,86±1,80 788,92±6,56 786,08±7,25 Sınırları

- 169 -

TABLO 78- (devam)

k) Berocillin® Forte Tablet (P 12 )

700 mg Pivampisilin hidroklorür içermektedir.


1 699,43 700,17 700,63 700,00

2 700,17 702,06 704,17 705,12

3 700,08 702,17 701,42 703,16

4 700,21 703,03 705,40 708,41

5 699,93 701,17 702,16 706,11

X 699,964 701,720 702,756 704,560

s 0,3173 1,0885 1,9780 3,1738

s rel 0,0453 0,1551 O, 2815 0,4505

s_ 0,1419 0,4868 0,8846 1,4194 X

Güven 699,96±0,39 701,72±1,35 702,76±2,46 704,56±3,94

Sınırları

- 170 -

TABLO 78- (devam)

® l} Baypen 0,5 g Flakon (P 13 )

500 mg Mezlosiline eşdeğer 537 mg Mezlosilin sodyum tuzu+ 1 H20 içermektedir.


1 505,22 505,71 500,52 499,64

2 505,40 502,82 502,98 498,31

3 505,83 502,61 504,73 502,49

4 504,97 503,71 505,17 503,10

5 504,27 506,42 501,67 500,48

X 505,138 504,254 503,014 500,804

s 0,5779 1,7224 1,9761 1, 98 71

s rel 0,1144 0,3416 0,3929 0,3968

s_ 0,2584 0,7703 0,8837 0,8887 X

Güven 505,14±0,72 504,25±2,14 503,01±2,45 1500,80±2,47 Sınırları

- 171 -

TABLO 78- (devam)

m) Pipriı® 2 g Flakon (P14

)

2000 mg Piperasiline eşdeğer 2000 mg Piperasilin sodyum tuzu içermektedir.


l 2000,73 2001,71 0207,12 1989,12

2 2000,27 1998,63 1999,63 2004,41

3 2002,32 2004,16 2001,19 2001,17

4 2001,14 2001,73 2002,14 2008,48

5 2000,32 2001,99 2003,27 2010,10

X 2001,356 2001,644 2002,670 2002,656

s 0,9051 1,9714 2,8230 8,3343

s rel 0,0452 0,0985 0,1410 0,4162

s_ 0,4048 0,8816 1,2625 3, 7272 X

Güven 2001,36±1,12 2001,64±2,45 2002;.67±3,50 2002.,66±10,35

Sınırları

- 172 -

TABLO 78- (devam)

n) Syncillin® Tablet (P 15 )

250 mg Azidosiline eşdeğer 265 mg Azidosilin sodyum tuzu içermektedir.


1 249,69 24 6, 7 O 247,18 250,02

2 249,17 24 7, 28 246,93 245,02

3 249,58 248, ı.o 249,87 248, 14

4 250,02 248, 28 250,11 250,07

5 250,11 24 7, 31 247,91 254,11

x 249,714 247,534 248,400 249,472

s 0,3758 0,6494 1,4979 3,3077

s rel 0,1505 0,2623 0,6030 1,3259

s_ 0,1681 X

0,2904 0,6699 1,479 2

Güven 249,71±0,47 247,53±0,81 248,40±1,86 249,47±4,11 Sınırları

- 173 -

TABLO 78- (devam)

® o) Securopen 0,5 g Flakon (P 16 )

500 mg Azlosiline eşdeğer 524 mg Azlosilin Sodyum tuzu ıçermektedir.


1 500,17 497,16 495,94 494,17

2 501,02 499,63 500,17 502,63

3 501,17 502,17 502,63 498, 22

4 501,12 498,63 500,48 505,63

5 501,63 499,19 504,17 501,11

x 501,022 499,356 500,678 500,352

s 0;5308 1,828 3 3,1125 4,3699

s rel 0,1059 0,3661 0,6217 0,8734

s_ 0,2374 X

0,8176 1,3920 1,9543

Güven 501,02±0,66 ~99,36±2,27 500,68±3,86 500,35±4,43 Sınırları

- 174 -

TABLO 78- (devam)

ö) Ultracillin® 1 g Tablet (P17

)

1000 mg Siklasilin içermektedir.


1 980,36 983,91 980,17 978,63

2 981,71 987,47 982,63 98 O, 4 2

3 980,63 985,11 986,17 982,27

4 98 O, 2 7 986,42 988,42 987,42

5 981,18 985,21 981,17 989,14

X 980,830 985,624 983,712 983,576

s 0,6065 1,3615 3,4780 4,5239

s rel 0,0618 0,1381 0,3536 0,4600

s_ 0,2712 0,6089 1,5554 2,0231 X

Güven 980,83±0,75 985,62±1,69 983,71±4,32 983,58±5,62 Sınırları

- 175 -

TABLO 78- (devam)

® p) Penicilin G Hoechst Flakon (P 18 )

1000000 IE Penisilin G ye eşdeğer 700 mg Penisilin G sodyum tuzu içermektedir.


1 707,62 700,59 701,17 711,61

2 706,88 699,27 704,18 7 04, 1 7

3 707,81 696,14 700,47 700,69

4 707,03 698,18 703,17 709,17

5 706,93 699,04 705,19 702,26

X 707,254 698,644 702,836 705,580

s 0,4296 1,6448 1,9895 4, 6414

s rel 0,0607 0,2354 O, 28 31 0,6578

s_ 0,1921 0,7356 0,8897· 2, 07 '1, 7 X

Güven 717,25±0,53 698,64±2,04 702,84±2,47 705,58±5,76 Sınırları

- 176 -

TABLO 78- (devam)

r) Beromycin® Mega Tablet (P 19 )

1000000 IE Penisilin V potasyum tuzuna eşdeğer 700 mg Penisilin V potasyum tuzu içermektedir.


1 7 O O, 28 7 Ol, 29 700,01 697,12

2 700,28 702,17 698,17 699,42

3 699,69 700,08 702,14 703,04

4 700,31 702,17 704,12 7 05, 19

5 700,21 703,01 698, 48 700,37

X 700,154 701,744 700,584 701,028

s 0,2620 1,1114 2,5253 3,1489

s rel 0,0374 0,1584 0,3605 0,4492

s_ X

0,1172 0,4970 1, 129 3 1,408 2

Güven 700,15±0,33 701,74±1,38 700,58±3,14 701,03±3,91 Sınırları

- 177 -

TABLO 78- (devam)

s) Oricitlin® Mega Tablet (P21

)

1.000.000 IE(=700 mg) Propisilin içermektedir.


1 708,21 708,01 700,17 7 08, 1 7

2 709,65 7 09, 1 7 101;11 7 08, 16

3 709,11 709,42 701,12 702,11

4 708,47 705,12 698,11 700,44

5 708,61 707,16 695,97 701,16

X 708,81 707,776 699,308 704,008

s 0,5725 1,7417 2,2400 3, 84 08

s rel 0,0808 0,2461 0,3203 0,5456

s_ X

0,2560 0,7789 1,0018 1,7177

Güven 708,81±0,71 707,78±2,16 704,01±4,77 699,31±2,78 Sınırları

- 178 -

TABLO 78- (devam)

ş) Megacilin® Forte Flakon (P22

)

280 mg (400000 IE) Klamizol + Penisilin G içermektedir.


1 275,60 275,12 270,10 271,42

2 276,10 275,10 28 O, 09 278,40

3 275,48 269,47 272,16 28 O, 1 7

4 275,87 270,17 275,93 28 4, 06

5 276,02 271,19 278,33 279,46

X 275,814 272,210 275,322 278,702

s 0,2668 2,7171 4,1660 4,5978

s rel 0,0967 0,9982 1,5131 1,6497

s_ 0,1193 1,2151 1,8631 2,0562 X

Güven 275,81±0,33 272,21±3,37 275,32±5,17 278,70±5,71

Sınırları

- 179 -

4.6. SONUÇLARIN KARŞILAŞTIRILMASI VE İSTATİSTİKSEL İNCELENMESİ

M1

, M2 , M3

, M4

miktar tayini yöntemlerinin incelenen

penisilinlerin farmasötik şekillerini uygulanmasıyla saptanan

sonuçların (S'er tayin üze~inden) standart sapmaları ve orta

lamaları yönünden karşılaştırılmaları için F ve t testleri

uygulandı. Uygulanan 4 yöntemin birbirleriyle mukayeseleri

yapıldı. F ve t testi açısından yapılan bu mukayese 21 peni

silin türevinin 4.5 bölümündeki bütün farmasötik şekillere

ait 4 yöntem için hesap edildi. Farmasötik şekillere ait ve F

ve t testlerine ait tablo aşağıda görülmektedir.

180

BLO 79- İncelenen penisilin türevlerinin farmasötik şekillerinin miktar tayinleri sonuçlarının karşılaştırılması

ıisilin l\-1'12 l\-1'13 l\-1'14 1112~ 1112-1'14 1113-1'14

üravi Farmaslltik Şekil

F t F t F t F t F t F t

pl Stapenor®

23.06 6.06 334.31 2.07 891.58 1.71 14.50 0.44 38.67 0.71 •2.67 0.38 KapsUl

p2 Orbenin®

18.87 1.95 31.94 0.97 160.66 .. 3.12 *l.69 0.44 8.52 2.31 5.03 2.46 Kapsill

p3 Oichlor-Stapeno/'

10.98 *"7.59 14.02 **4.06 29.29 **3.02 •1.28 2.11 *2.67 1.52 *2.09 0.13 KapsUl

p4 Staphylex®

51.79 2.03 93.26 1.52 1221.02 l.84 •ı.75 1.40 23.57 1.39 13.09 ı.e3 Kapsül

Ps Geopen®

*l.73 2.32 15.21 1.31 32.72 l.86 B.77 0.35 lB.87 2.49 •2.ıs 2.32 Tablet

p6 Carindepen ®

*2,63 ••2.01 B.04 1,24 15.52 2.73 *3.06 1,76 5.91 1,35 *l.93 1.52 Tablet

p? Aeurugipen ®

*3.88 2.22 43.96 o.ss 47,96 0.74 ll.32 0.17 12.35 1.40 •1.91 0,93 10 g Flakon

PB Ampicillin 1000 Stada®

9,25 **44.99 25,60 ••20.ıe 416.97 ns.88 •2.8B 0.67 45.06 1.16 15,67 1.32 Tablet

p9 Clamoxyı®

•ı.e3 1.24 7.28 0,65 27.27 ı.ao •3.98 0,08 14.92 o.59 •3.75 0,58 750 Tablet

P10 Spectacilin (1)

*4.07 **26.35 142.80 2.22 249.89 2,70 35.11 ••4.68 Bl,45 2.55 •ı.75 o.81 500 KapsUl

pil Brincapen(I)

•2.21 **17.35 29.37 •3.76 35.82 ••4.38 13.26 l.84 16.17 0.74 •ı.22 0.72 Tablet

pl2 Berocillin (1)

11.77 3.10 :ıe.86 2.79 ıoo.os 2.88 •J.3D D.92 8.50 1.69 *2.57 0.96 Fort Tablet

pll Baypen(I)

e.ee o.97 ıı.s 2.DB 11.82 ••4.19 •1.32 o.es •1.33 2.62 •ı.oı ı.se 0.5 g Flakon

pl4 Piprilı,

•4.74 0.27 9.73 o.es B4.79 D.31 *2.05 o.sa 17.B? 0.24 B,72 O.Ol 2 g Flakon

Pı5 Syncilllnı,

*2,98 ••s.eı ıs.ee 1,70 77,47 o.ıs *5.32 ı.oe 25.94 1.15 *4.BB 0,59 Tablet

Pıe Sacurcpen

11

ll.B6 ı.75 34.38 D.22 67,78 o.:ıo •2.sa 0.73 -S.71 0.42 •ı.97 0.12 0.5 g Flakon

pl7 Ultracillin (1)

•s.04 ••6.43 32.BB ı.e:ı 55.84 1.20 e.s3 1.02 11.04 o.B? •ı.89 o.as 1 g Tablet

Penicillin G Hoechst (1)

-. ' plB Flakon

14.6 **10.ll 21.45 **4.34 116.73 0.72 *1.46 3.25 7.96 **2.82 -S.44 1.119

pl9 Beromycin®

17.99 **2.78 92.9D 0.34 144.45 o.ss •s.ıs 0.84 8.03 6.43 •1.ss 0.22 lllega Tablet

p21 0ricillin 11P

9.25 1.13 15.30 **B,22 45.01 2.47 *1.65 •-S.97 *4,86 1.79 *2.94 2.11 lllega Tablet

®

p22 l'legacilin

103.71 2.64 243.82 0.24 296.98 1.25 •2.:ıs 1.25 *2.86 2.43 •ı.22 . 1.09 Forte Flakan

'

5 p = o,as t = 2,776 F = 6,39

' degerleri :l 95 olasılık düzeyinde cetvellerde verilen F de!lerinden (6,39) kUçüktllr ve presizyan yönünden fark yoktur.

t de!jerleri :( 95 olasılık düzeyinde cetvellerde verilen t de!lerinılan (2,776) bilyUktür ve yllntemler açısından l!nemll fark yoktur.

- 181 -

Yaptığımız çalışmada incelenen penisilin türevlerine

4 yöntemin uygulanması sonucunda her yöntem ile alınan so

nuçlar birbiri ile karşılaştırılmıştır. Buna göre Mı-M2 yön

temlerinin karşılaştırılmasında; F değerleri 103,71-1,73 arasında, t değerleri

44,99-0,97 arasında, M1-M3 yöntemlerinin karşılaştırılmala

rında; F değerleri 334,31-7,28 arasında, t değerleri 28,18-

0,22 arasında, M1

-M4

yöntemlerinin karşılaştırılmasında; F de

ğerleri 891,58-11,82 arasında, t değerleri 5,88-0,30, M2-M3 yöntemlerinin karşılaştırılmasında; F değerleri 35,11-1,28 ara

sında, t değerleri 5,97-0,08 arasında, M2-M4 yöntemlerinin

karşılaştırılmasında; F değerleri 45,06-1,33 arasında, t de

ğerleri 6,43-0,24 arasında ve M3

-M4

yöntemlerinin karşılaştı

rılmasında; F değerleri 15,67-1,01 arasında, t değerleri

2,46-0,01 değerleri arasında değişmektedir. Bu değerlerin ba

zıları ilgili cetvellerde% 95 olasılık düzeyinde beşer tayin

için verilen t değerinden (2.776) daha küçüktür. Yöntem pre

sizyonları yönünden karşılaştırıldıklarında yapılan F test

lerinin sonuçlarının bazılarının ilgili cetvellerde beşer ta-

yin için% 95 olasılık düzeyinde verilen değerden (6,39) büyük

olduğu görülmektedir(86). Hg(II)-imidazol, Ni(II)-Hidroksil-

amin ve USP XX ye göre yapılan iyodometrik titrasyon yöntemiy-

le yapılan miktar tayini sonuçları Ellman yöntemiyle yapılan

miktar tayini sonuçları ile presizyonları yönünden karşılaş

tırıldıklarında anlamlı farklılıklar gözlenmektedir. Bunun

yanı sıra bazı F ve t değerleri% 95 olasılık düzeyinde cet

velde verilen F değerinden küçük, t değerinden büyük olduğu

gözlenmiştir. Bu değerleri içeren yöntemleriQ ka~şılaştırıl

malarında presizyon yönünden ve yöntemler açısından önemli

fark yoktur.

- 182 -

5. TARTISMA

Bu çalışmada penisilin türevlerinden 22'sinin farmasö

tik şekillerinin analizlerine olanak sağlayacak miktar tayini

yöntemleri geliştirilmesi amaçlanmıştır. Literatür bulguları

na göre Ellman belirteci penisilin türevlerinden kloksasilin,

flukloksasilin, karbenisilin, ampisilin, penisilin G, Penisi

lin V'ye ilk olarak uygulanmıştır(252). Burada incelenen pe

nisilinler için saptanmış olan reaksiyon koşulları araştırma

larımıza konu olan penisilinlerin miktar tayinlerine olanak

vermemektedir. Çalışma koşulları olarak öngörülen pli 9.2'de

Ellman belirtecinin dayanıklılığı ilgili araştırmada incelen

miştir(lO). Baars ve arkadaşları daha sonra yaptıkları araş

tırmalarda DTNB'nin dayanıklı olduğu pH alanının, tayini ya

pılan bileşiğin mol ağırlığına bağlı olarak değiştiğini ve

ortamın ısısının yine DTNB'nin dayanıklılığını etkilediğini

saptamışlardır. Kirschbaum tarafından öngörülen pH 9.2'de ya

pılan çalışmalar tekrarlandığında DTNB'ye ait şahit çözelti

nin absorbansı devamlı artmakta ve belirteç boz4nmaya uğra

maktadır. Bu nedenle öncelikle DTNB'nin ölçmelerin yapıldığı

ilgili tampon çözeltilerdeki dayanıklılığı ve incelenen peni

silin türevleri ile ölçmelerde dayanıklılık olduğu pH'nın 7.2

olduğu saptanmıştır. Penisilin türevlerinin DTNB ile tayinle

rinin yapılabilmesi için asit ve alkali degradasyonundan son

ra yapıdaki tiazolidin halkasının parçalanmasından faydala

nılmaktadır. PenisJlin türevlerinin degradasyonu sonucunda

parçalanma ürününün miktarı DTNB ile olan reaksiyonu etkile-

- 183 -

diğinden hangi pli alanında maksimum parçalanma miktarının

oluştuğunun saptanması gerekmektedir. Yapılan çalışmalar al

kali degradasyonunun ve özellikle NaOH miktarının bu olayı

etkilediğini göstermektedir. Bu değerdeki fazlalığın reaksi

yon koşullarının değiştirilmesinden kaynaklandığı düşünülebi

lir. Parçalanma olayı penisilin ana çekirdeğinde bulunan kü

kürdün asit ve alkali degradasyonla s- 2 veya RS halinde açığa çıktığı ve literatür bulgularında da yinelendiği şekilde

DTNB'nin -S-S bağıyla reaksiyon vererek spektrofotometrik ta

yine olanak sağladığı görülmüştür(lO).

Penisilin türevlerinin saptanan koşullardaki alkali

degradasyonu sonucu DTNB ile verdikleri reaksiyon ürününün

spektrofotometrik tayini yüksek tekrarlanabilirliği sahip ve

penisilin türevlerinin büyük bir olasılıkla yapılarındaki kü

kürt üzerinden tayinlerine olanak sağlayan bir yöntemdir.

Ellman belirteci kullanarak biyolojik ortamda penisilin tü

revlerinin tayinlerinde de alkali ve asit degradasyondan son

raki spektrofotometrik ölçmeler sulu ortamda yapıldığından,

proteinler çöktürüldükten sonra uygulanabilmektedir.

Penisilin türevlerinin miktar tayinleri için DTNB kul

lanılarak geliştirilen yöntemin, penisilin türevlerinin sis

tematik analizlerinde kullanılabilirliğinin kontrolü için

benzer yapıda sefalosporinlerin sistematik analizlerinde de

kullanılan Hg(II)-imidazol-EDTA ve Ni(II)-hidroksilamin yön

temleri de inceleme konumuz olan penisilin tijreylerine uygu

lanmış ve bu yöntemlerle ilgili reaksiyon koşulları saptanmış

tır.

Bundgaard'a göre(37) penisilinlerde Hg(II)-imi-

dazol belirteciyle olan reaksiyon S-laktam bağının parçalan

ması ile yapıda oksazolinon halkası oluşmasına ve tiyazol

halkasının açılması ile serbest kalan tiyol grubuna HgC1 2 'nin

bağlanması ile oluşan ürünün stabilize olmasına dayanmakta

dır.

- 184 -

H

R-g'~ lınldazm. <fJ~-lcoo-

I

Ni(II)-hidroksilamin belirtecini kullanan spektrofoto

metrik yöntemde penisilinler hidroksilaminle reaksiyona gir

mektedirler. Yapılarında ester, imid, laktan, laktam ve tiol

esterleri içeren maddeler hidroksilaminle hidroksamik asit

oluşturmakta ve ortama Fe(III) iyonu ilave edildiğinde stabil

ferri hidroksamat kompleksi oluşmaktadır.

'c=O

' N-OH I

H

Hidroksamık asit

~-c-=--O

\ \ . + H+ Fe/n

~-el I

Renkli kompleks

İlk olarak Connors ve Munson tarafından kullanılan

Ni(II)-hidroksilamin belirteci daha sonra D.L.Mays ve arka

daşları tarafından sefalosporinlerin spektrofotometrik tayin

lerinde kullanılmıştır(66,67,83). Ni(II) iyonunun katalizör

etkisiyle penisilinlerde bir kelat kompleksi oluşmakta ve bu

nun aracılığıyla 8-laktam karbonili polarize olmaktadır. Bu

şekilde molekülün hidroksilamininin nükleofilik etkisine daha

duyarlı hale geldiği kabul edilebilir.

Çalışma konumuz olan yarı sentetik penisilin türevle

rini içeren toplam 21 farmasötik şekile Ellman, Hg(II)-imida

zol-EDTA, Ni(II)-hidroksilamin belirteçlerin~ kullanan üç

spektrofotometrik yöntemin uygulanmasında elde edilen stan

dart sapma ve relatif standart sapma değerlerinde rastlanılan

en küçük ve en büyük değerler Tablo 80'de gösterilmektedir.

- 185 -

TABLO 80- 21 Farmasötik Şeklin İncelenen 3 Spektrofotometrik Yöntemle Analizlerinde Elde Edilen s ve% s Değerleri

YÖNTEM

Ellman belirtecini kullanan spektrofotometrik yöntem

Hg(II)-imidazol-EDTA belirtecini kullanan spektrofotometrik yöntem

Ni(II)-hidroksilamin belirtecini kullanan spektrofotometrik yöntem

s

0.1354 1.1322

0.3518 2.7171

1.3076 7.5524

% s

O. 0113 0.2994

0.0781 1.0324

0.1410 1.5431

Bu değerler Ellman belirtecini kullanan yöntem kadar

Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminin analizlere uygulanmasında eş

değer sonuçlar alındığını gösterir. USP XX ye göre incelenen

penisilin türevleri için önerilen iyodometrik titrasyon yön

teminde alınan sonuçlar ise s: 1.8254-9.9905 ve s 1 : 0.0783-re 2.1449'dur.

- 186 -

6, ÖZET

Yarı sentetik penisilinlerin farmasötik şekillerinde

doz içeriklerinin saptanmasına olanak sağlayacak miktar tayi

ni yöntemlerinin geliştirilmesini ve farmakope yöntemleriyle

karşılaştırılmasını amaçlayan bu çalışmada; 22 penisilin tü

revinin (oksasilin, kloksasilin, dikloksasilin, flukloksasi

lin, karbenisilin, karindasilin, tikarsilin, ampisilin, tri

hidrat, amoksisilin, episilin, bakampisilin, pivampisilin,

mezlosilin, piperasilin, azidosilin, azlosilin, siklasilin,

penisilin G, penisilin V, phenbenisilin, klamizol+penisilin G)

Ellman, Hg(II)-İmidazol-EDTA ve Ni(II)-hidroksilamin yöntemle

re ait reaksiyon koşulları saptanarak ölçü eğrileri çizilmiş

tir. Ellman belirtecini kullanan metodda optimum reaksiyon

koşulları, reaksiyon sıcaklığı ve süreleri saptanmıştır.

Hg(II)-imidazol-EDTA yönteminde belirtecin penisilinlerin

miktar tayinlerine uygulanabilmesi için imidazol ve Hg(II)

konsantrasyonunun, pH'nın Hg(II)-İmidazol-EDTA belirtecindeki

EDTA:HgC1 2 mol oranının, reaksiyon esnasında~i ~sı derecesi

nin ve ısıtma sürelerinin reaksiyona etkisi araştırılarak ge

rekli koşullar saptanmıştır. Ni(II)-hidroksilamin yöntemiyle

penisilinlerin spektrofotometrik miktar tayinlerinde ise

Ni(II)-hidroksilamin belirteciyle hidroksamik asit oluşması

ve oluşan ürünün Fe(III) iyonuyla ferri-hidroksamat şeklinde

stabilize olması için penisilinlerin Ni(II)-hidroksilamin ve

ferri amonyum sülfat belirteciyle reaksiyon süreleri saptana

rak Ellman, Hg(II)-imidazol-EDTA belirteçlerini kullanan yön-

- 187 -

temlerle miktar tayini yapılan penisilinler icin karşılaştır

ma yöntemi olarak kullanılmıştır.

USP XX'de incelenen penisilinlerin 21 farmasötik şek

linin miktar tayinleri icin önerilen iyodometrik titrasyon

Ellman, Hg(II)-imidazol-EDTA ve Ni(II)-hidroksilamin yöntem

leriyle miktar tayinleri icin karşılaştırma yöntemi olarak

kullanılmıştır.

Yöntemlerin karşılaştırılmasında ve istatistiksel de

ğerlendirilmesinde F (Fisher) ve t (Student) testleri uygula

narak saptanan değerler ilgili cetvellerde% 95 olasılık düze

yinde beşer tayin icin verilen değerlerle karşılaştırılmış

tır. USP XX'deki iyodometrik titrasyon yöntemiyle saptanan

sonuçların Ellman, Hg(II)-imidazol-EDTA yöntemi ile saptanan

sonuçlarla presizyonları acısından karşılaştırılmasında ve

Ni(II)-hidroksilamin yöntemi ile saptanan sonuçlarla karşı

laştırılmasında saptanan F değerleri ve t değerlerinin bazı

ları dışında tüm değerler anlamlıdır.

Farmakope yöntemleriyle miktar tayini yapılamayan 11

farmasötik şeklin ve farmakopelerde miktar tayini yöntemi

önerilmeyen 11 farmasötik şeklin Ellman, Hg(II)-İmidazol-EDTA

ve Ni(II)-hidroksilamin yöntemleriyle yapılan miktar tayinle

ri sonuçlarının karşılaştırılmasında uygulanan F ve t testle

rinde ise anlamlı farklılıklar gözlenmemiştir.

- 188 -

7, SUMMARY

In this study, which has aimed to develop quantitative

methods that will make the determination of dose content of

the penicillins pharmaceutical preparations possible and to

compare these methods with the methods of pharmacopoeia, the

optimum conditions which belong to Ellman, Hg(II)-İmidazole

EDTA and Ni(II)-hydroxylamine methods, were determined far 22

penicillin derivatives (oxacillin, cloxacillin, dicloxacillin,

flucloxacillin, carbenicillin, carindacillin, ticarcillin,

ampicillin tryhydrate, amoxycillin, epicillin, bacampicillin,

pivampicillin, mezlocillin, piperacillin, azidocillin, azlo

cillin, ciclacillin, penicilin G, penicilin V, phenbenicillin,

clamizol + penicillin G) and calibration curves were drawn.

While studying Ellman method; The temperature during

the reaction, the duration of heating to reaction were

researched and the optimum conditions were determined and the

reagent was Ellman reagent.

In order to be used Hg(II)-imidazole-EDTA reagents in

the assay of penicillins, the effect of the concentrations of

imidazole and HgC1 2 of the reagent, pH, mal ratio of EDTA:

HgC1 2 in the Hg(Ir)-imidazole-EDTA reagent, the temperature

during the reaction and the duration of heating to reaction

were researched and the optimum conditions were determined.

In the spectrophotometric determination of penicillins with

- 189 -

Ni(II)-hydroxylamine method, the duration of reaction of

penicillins with Ni(II)-hydroxylamine and ferric amonium

sulfate reagents were determined to be formed hydroxamic acid

with Ni(II)-hydroxylamine reagent and to be formed ferric

hydroxamate with Fe(III) ion from that hydroxamic acid. This

method was used asa comparative method for penicillins and

the determinations were made with Ellman and Hg(II)-imidazole

EDTA method.

Iodometric titration methods in USP XX were used asa

comparative method for determination of 21 pharmaceutical

preparations of penicillins with another 3 methods.

In the comparison of methods and statistical calcula

tions, F and t tests were applied and the determined calcula

tions were compared with the calculations which were given

for each five determination in the confidence level of 95 %

in the related tablets. The results which were determined in

the comparison of F and t values are,significant except some

of them. In the comparison of the results which determined

with the iodometric titration method according to USP XX, the

results which determined with Ellman, Hg(II)-imidazole-EDTA,

Ni(II)-hydroxylamine methods in the way of precisions, F and

t values were significant except some of them. The determina

tions of 11 pharmaceutical preparations of which determination

cannot be made with pharmacopoeia methods and 11 pharmaceutical

preparations of which determination methods w.ere, not proposed

in pharmacopoeias, were made with Ellman, Hg(II)-imidazole-EDTA

and Ni(II)-hydroxylamine methods in the F and t tests which

were applied, in the comparison of the results obtained with

Ellman, Hg(II)-imidazole-EDTA and Ni(II)-hydroxylamine met

hods, significant ~ifferences were not observed.

- 190 -

8. KAYNAKLAR

1- Tali,E.Ç.; Genel ve Pratik Mikrobiyoloji, Sermet Basımevi, İstanbul, 1973, s.421-437.

2- Baytop,T.; Farmakognozi, Cilt I, Baha Matbaası, İstanbul, 1970, s.158.

3- Walter,A.M., Heilmayer,L.; Antibiotika-Fibel, Georg Thime Verlag, Stuttgart, 1975, s.170.

4- Flyn,E.H.; Cephalosporins and Penicillins, Academic Press New York, 1972, s.13, 615.

5- Gottlieb,D., Shaw,P.D.; Antibiotics II, Biosynthesis, Springer-Verlag,· Berlin 1967, s.l.

6- Fujisawa,Y.; J.Takeda Res.Lab., ~, 295, (1977).

7- Reiner,Roland; Antibiotics, Georg Thieme Verlag: Stuttgart, New York, 1982, s.93.

8- Sunam,Gültekin; Genel Farmakoloji, Modern Röprodüksüyon Ofset Basımevi, İstanbul, 1982, s.422.

9- Ellman,G.L., Arch. Biochem. Biophys., g, 70 (1959). Ref: C.A.: 53: 15184c (1963).

10- Baars,A.J., Van Dongen,E:W., Breimer,D.D., ,Pharm. Weekbl., 112, 1117 (1977).

11- Beutler,E., Duron,O., Kelly,B.M., J. Lab. Clin. Med., _§___!, 882 (1963). Ref: C:A.: 60: 12289h (1964).

12- Harrap,K.R., Bİochem. Pharmacol., _!!, 725 (1967). Ref: C:A.: 66:112797j (1967).

13- Robyt,J.F., Ackerman,R.J., Chittenden,C.G., Arch. Biochem. Bİophys. 147, 262 (1971). Ref: C.A.: 76: 1538n (1972).

- ·· 191 ..::

14- Zahler,W.L., CLeland,W.W:, J. Bİol. Chem., 243, 716 (1968).

15- Humphrey,R.E., Hinze,W., Jenkines,W.M.III., Anan. Chem., il, 140 (1971).

16- Humphrey,R.E., Ward,M.H:, Hinze,W., Anal. Chem., ~, 698 (1970).

17~ Giaser,C.B., Haeda,H., Meienhofer,J., J. Chromatogr., ~, 151, (1970).

18- Ryan,K.D., Aldriehehimiea Aeta, i, 33 (1971).

19- Ellman,G.L., Courtney,K.D:, Jr.ANdres,V., Featherstone, R.M., Bioehem. Pharmae., 7, 88 (1961). REf: C.A.: 55: 23655i (1961). -

20- 0 1 Malley,B.W., Mengel,C.E., Meriwether,W.D., Jr.Zirkle,G., Bioehemistry, 5, 40 (1966). Ref: C.A.: 64: 5371 g (1966).

21- Szeinberg,A., Clejan,L., Bioehem. Biophys. Aeta, .22_, 564 ( 1964). Ref: C .A:: 62: 3198e (1965).

22- Diez,M.J .F., 0suga,D.T., Feeney,R.E., Areh. Bioehem. Biophys., 107, 449 (1964). Ref: C:A.: 61: 10890g (1964).

23- Cavallini,D., Gt'aziani,M.T., Dupr,,S., Nature (London), 212, 294 (1966).

24- Vermeij,P., Pharm. Weekbl., 107, 249 (1972).

25- Brouwers,J.R.B.J., Vermeij,P., ibid., 111, 204 (1976).

26- Brouwers,J.R.B.J., Vermeij,P., Wemer,J., ibid., 112, 121 (1971).

27+- Kirsehbaum,J., J .Pharm. Sei., ~, 923 (1974).

28~ Vermeij,P., ibid., !, 217 (1979).

29- Merek Index, 9th Ed., s.651, Merek and Co., Ine., USA (1979).

30- Panehenko,B.V., Tsupilo,I.A., Dadali,V.A:, Litvinenko,L. M., Tezisy Dokl.-Ukr. Resp. Kdnf. Fiz. Khim., 12th, 149 (1977). Ref: C.A : 93: 7229k (1980).

31- Wellons,S.L., Carey,M.A., Elder,D.K., Anal. Chem., g, 1374 (1980).

32- Komiyama,M., Bender,M.L., J. Am. Chem. Soe., 100, 5977 (1978).

- 192 -

33- Brooks,P., Davidson,N., ibid., 82, 2118 (1960).

34- Bundgaard,H:, Tetrahedron Lett., ~' 4613 (1971).

35- Bundgaard,H., Dansk. Tidsskr. Farın.,~' 29 (1972). Ref: C.A.: 77: 46578n .(1972).

36- Bundgaard,H., ibid., ~' 85 (1972). Ref: C.A.: 77: 59932y (1972).

37- Bundgaard,H., Ilver,K.J., J. Pharın. Pharınac., ~' 790 (1972).

38- Bundgaard,H., ibid., ~; 385 (1974).

39- Yamana,T., Tsuji,A., Miyaınoto,E., Kiya,E., ibid., 5:]_, 287 (1975).

40- Koshiro,A., Fujita,T., Kyushu Yakugakkai KAiho, ~, 17 (1975).

41- Bundgaard,H., Arch. Pharm. Chemi. Sci. Ed., ~' 141 (L977).

42- Bundgaard,H., ibid., I, 81 (1979).

43- Bundgaard,N., ibid., I, 95 (1979).

44- British Pharınacopoeia 1980, Vol.l, s.88, University Press, Cambridge.

44a- ibid., s.33.

45- İbid., s.31.

46- İbid., s.119.

47- Pharmacopee Internationale, Troisieme Ed., Vol 2, s.45, World Health Organization, Geneva (1980).

48- İbid., s.98.

49- Bodnar,J.E., EVans,W.G:, Mays,D.L., J. Pharın. Sci., ~' 1108 (1977).

50- Marini,D., Pascucci,E., Boll. Chiın. Farın. 119, 52 (1980).

50a- Ulaş,K.; İ.Ü.Eczacılık Fakültesi Doktora Tezi, (1984).

51- Baınberger,E., Ber., _g_, 1805 (1899).

52- Feigl,F. 1 Anger,V., Mikrocheınie, ~' 23 (1934). 'Ref: C:A.: 28: 6393 4 (1934).

53- Feigl,F., Anger,V., Frehden,O:, ibid., 1:i, 9 (1934). Ref: C.A.: 28: 6393 1 (1934).

- 193 -

54- Polya,J.B., Tardew,P.L., Anal. Chem., 23, 1036 (1951).

55- Diggle,W.M., Gage,J.G., Analyst, 78, 473 (1953). Ref: C.A:: 47: 10410c (1953). -

56- Lipmann,F., Tuttle~L.C., J. Bİol. Chem., 159, 121 (1945). REf: C.A.: 39:5210 .

57- Lien,O.G., Anal. Chem., 31, 1363 (1959).

58- Wollish,E.G., Schmall,M., ibid., ~, 1033 (1950).

59- Boxer,E.G., Everett,P.M., ibid., ~, 670 (1949). Ref: C.A.: 43: 8097 g (1949).

60- Niedermayer,A.O., Russo-Alesi,F.M., Lendzian,C.A., Kelly, .J.M., ibid., _g, 664 (1960).

61- Ford,J.H., Anal. Chem., l:.2_, 1004 (1947) Ref: C.A;: 42: 1706a (1948).

62- ~ode of Federal Regulations Food and Drugs, 440.3, s.308, US. Government Printing Office 1978.

63- USP XX Official monographs, Twentieth Rev., 15th Ed., s.126, The United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville (1980).

63a~ USP-NF, 3S Addendum a, OFficial monographs, s.478.

63b- App. to USP XX, Third. Suppl., s.1331.

63c- İbid., s.1326.

63d- USP-NF, App. to USP XX, Third Supplement, s.428.

63e- App. to USP XX, Third Suppl., s.1281.

63f- İbid., s.1283.

64- USP-NF, 3S, Addendum a, s.608.

64a- USP-NF; Official Monographys, Fourth Supplement, s.681.

64b- İbid., s.680.

64c- İbid., s.679.

64d- App. to USP XX, Third Suppl., s.397.

64e- USP-NF, 3S, Addendum a, s.473.

64f- USP-NF, Official Monographs, 4S, Addendum a, s.813.

- 194 -

65- Holl,W.W., O'Brien,M., Filan,J., Mazeika,T.R., Post,A., Pitkin,D., Actor,P., J. Pharm. Sci., ~, 1233 (1975).

66- Munson,J.W., Connors,K.A., ibid., .§.!_, 211 (1972).

67- Munson,J.W., Co-nors,K.A., J. Am. Chem. Soc., ~' 1979 (1972).

68- Notari,R.E., J. Pharm. Sci., ~, 1064 (1969).

69- Kulo,A.E:, Farmaseuttinen Aikak., ~, 1 (1976).

70- Mays,D.L., Bangert,F.K., Cantrell,W.C., Evans,W.G:, Anal. Chem., !±]_, 2229 (1975).

71- Code of Federal Regulations, Title 21, Food and Drugs, s.395, U.S. Government Printing Office (1978).

71a- İb id. , s.410,

7lb- İb id. , s. 261.

71c- İbid., s.263.

7ld- İb id. , s.246.

7le- İb id. , s.409.

71f- İbid., s.392.

7 lg- Federal Registrar, ~, 788 (1983). Ref: C. A.: 98:113578m (1983).

72- Marini,D., Pascucci ,E.; Boll.Chim.Farm. 119, 52, (1980).

73- Bodnar,J.E., Evans,W.G., May s, D. L.; J • Ph a rm . S c i • , 66, 1108, (1977).

74- Append ix to USP XX, s.117.

7 5- Appendix to USP XX, s.1326.

76- Appendix to USP XX, s.1326, 1327, 1330.

76a- Appendix to USP XX, s.1325.

76b- Appendix to USP XX, s.1327, 13 28, 1329.

76c- Appendix to USP XX, s.1392, 1393.

76d- Appendix to USP XX, s.1391. '

76e- Appendix to USP XX, s.427, 428.

- 195 -

77- FDA (21 CFR) Part 442, s.391.

78- FDA (21 CFR) Part 436.204, s.261.

79- C.Jozeph; F.Alicino; Anal.Chem., ~, 648-9(1961), Ref. CA: 55:18010.

80- Kirschbaum,J.; J.Pharm.Sci., g, 923 (1974).

81- Baars,A.J.; Van Dongen,E.W.; Breimer,D.D.; Pharm.Weekbl., 112, 1117 (1977).

82- Fedai,1.; 1.ü.Eczacılık Fakültesi Doktora Tezi (1984).

83- Connors,K.E., Munson,J .w.; Anal.Chem., 44, 336 (1972).

84- Stahl,E.; Dünnschicht-Chromatographie Springer Verlag Berlin, 1967, s.545.

85- Fabre,H.; Hussam-Eddine,N.; J.Pharm.Pharmaco. 34, 425 (1982).

86- Eckschlager,K.; Errors Measurement and Results in Chemical Analysis, Van Nostand Reinhold Company, London, 1972, Chapter 4-5, s.76-147.

87- Sato,Katsuhiko; Matsuo,Kimiko; Sasaki,Tamami; Shibuya, Takeshi; Igaku no Ayumi, 129(3), 1976-7 (1984) Ref.CA: 101:83478 g.

88- Hagel,Robert,B., Waysek,Edward,H., Cort,Winifred,M.; Antimicrob.Agents Chemother, 16(3), 372~7 (1979), Ref. CA: 91:199002J.

89- Larsen,Claus; Bundgaard, Hans; J.Chromatogr., 147, 143-50 (1978).

90- Schroeder,S., Bonow,A., Noeschel,H., Horn,G.; Pharmazie, 33(7), 432-4 (1978).

91- J.W.G.Smith; G.E.de Grey, V.J.Patel, Ani1ys~ (Landon), 92(1093), 247-52 (1967).

92- M.Michel,J.Chromatogr., 236(2), 469-80 (1982).

93- M.Michel, J.Chromatogr., 236(2), 469-80(1982).

94- Tawakkol,M.S., Ismaiel Saad,A., Amer,M.M., Pharmazie, 30(8), 542 (1975).

95- Patel,A.A., Gandhi,T.P.~ Patel,P.R., Patel,M.R., Patel, v.c.; Indian J.Pharm.Sci., 40(2), 64-6 (1978).

- 196 -

96- Choudhury,C., Indian J.Pharm., 38(5), 124-6, (1976).

97- Tsuji,K., Robertson,John H., J.Pharm.Sci., 64(9), 1542-5 (1975).

98- Monteleone,Peter M., Vasiljev,Michael,K., Bomstein, Joseph, J.Pharm.Sci., 62(11), 1830-3(1973).

99- Bundgaard,Hans, Arch.Pharm.Chemi, Sci.Ed., 6(6), 1263070 (1978).

100- .Ali,Syed Laid; Klaus,Uwe; Fresenius'Z.Anal.Chem., 306(5), 399(1981).

101- Lee,Wang Kyu; Kim,Bak Kwang; Shim, Chang Koo; Yakhak Hoe Chi, 22(4), 238-41 (1978), Ref: CA, 91:27351 f.

102- Jusko,William,J., J.Pharm.Sci., 60(5), 728-32, (1971).

103- Moll,F., Doeker,H., Arch.Pharm, 309(7), 548-53 (1972).

104- Lee,Wang-Kyu, Yoo,Byung-Tai, Kang,Gil-Jong, Yakhak Hoe Chi, 18(3), 190-6 (1974) Ref: CA. 82:116152 y.

105- Whyatt,Philip L., Antimicrob. Agents Chemother, 6(6), 811-14(1974) Ref: CA, 82:92850 w.

106- Miyazaki,Katsumi, Ogino, Osamu, Arita, Takaichi, Chem. Pharm.Bull., 22(8), 1910-6 (1974), Ref.CA:- 82:10982 d.

107- Bundgaard,H., J.Pharm.Pharmac., 26, 385 (1974).

108- Kusnir,J., Barna,K., Cesk,Farm., 24(6), 253-5(1975). Ref.CA: Vol.84:53694.

109- Rao,G.Ramana, Kan Jilal, Geeta; Mohan K.Rama; Curr.Sci., 46(18), 636-7 (1977) Ref.CA: 87:189539 t.

110- Phokas,G.C., Gatsonis,C.D., Ageloudis,C.A., Pharm.Delt., Epistem.Ekdosis, 3(1), 1-6 (1977), Ref.CA: 89:65304 j.

111- Ruseva,N., Angelova,N., Farmatsiya (sayfa), 28(3), 12-16 (1978).

112- Das,Anupa, Boparai,K.S., Indian Drugs, 18(3), 111-12 (1980), Ref.CA: 94:145430.

113- Chakrabarti,K., Chatterjee,S.P., Basu,M., Chakravarti, R.N., Indian J.Exp.Biol., 19(7), 674-5(1981), Ref.CA, 95:68098 e.

114- Talegaonkar,Jyoti, Bopari,K.S., Indian Drugs, 18(11), 410(1981) Ref.CA. 96/24844 m.

- 197 -

115- Geçgil,Ş., Aran,B., Yetimoğlu,F., Acta Pharm,Technol., 27(4), 259(1981), Ref.CA, 96/187369 x.

116- Das,Anupa; Bopari,K.S., East.Pharm., 24(277), 195-6 (1981), Ref.CA: 94/197609a.

117- Mori,Itsuo, Fujita,Yoshikazu, Sakaguchi,Kimiko, Chem. Pharm.Bull., 30(7), 2599-603 (1982) Ref. CA No: Vol 97/ 133638 p.

118- Mironchik,A.F., Teoriya i Tekhn.Sushki Vlazhn. Materialov (Minsk), 113-18 (1979) (Ref: Zh., Khim. 1980 Abstr. No: 90297) Ref.CA. No.Vol. 93/12047g e.

119- Lee,Teh Lo; D'Arconte,Lucius, Bkoos, Marvin A., J.Pharm. Sci., 68(4), 454-8 (1979).

120- Girona,V., De Bolos,J., Castillo,M., Garcia,S., Cienc. Ind.Farm., 1(2), 42-6 (1982).

121- Lebelle,M,J., Wilson,W.L., Lauriault,G., J.Chromatogr., 202(1), 144-7 (L980).

122- Enrico F.Raffanti, King,C.J., Amer.J.Hosp.Pharm.,-1..!_, 745-91 (1974).

123- Brooks, M.A., Hackman,M.R., Mazzo,D.J., J.Chromatogr., 210(3), 531-5 (1981).

124- Zagico,J., 0rdonez,D., Marta,c., An.Quim.Ser.C., 78(1), 5-8 (1982).

125- Quigdellivo,E., Obiols,G., Moreno Dalmau,J.: Afinidad, 30(309-310), 749-56 (1973), Ref.CA. 81/58091 u.

126- Barbhaiya,R.H., Turner,P., Br.J.Pharmacol., 58(3), 473 (1976), Ref.CA. 86/100658 q.

127- Davidson,D.F., Clin.Chim.Acta, 69(1), 67-71 (1976), Ref.CA. 85/40541 p.

128- Komatsu,Takashii, Kunii, Otohiko, Mashita, Hiroaki, Rinsho Yakuri, 8(1), 35-7 (1977). Ref.CA: No. Vol.87/126949f.

129- Faith,L., Valcharciakova,J., Cesk.Farm., 26(5), 191-7 (1977).

130- Lee,Wang,Kyu; Yu, Kyung Soo, Shim, Chang Koo, Yakhak Hoe ehi, 21(1), 27-9 (1977), Ref.CA. 87/141346a.

131- Barbhaiya,R.H., Turner,P., Shaio,Elizabeth, Ciln.Chim. Acta., 77(3), 373-7 (1977), Ref.CA, 87/111134 n.

- 198 -

132- Miyazaki,Katsumi, 0gino,0samu, Sato, Hiroyuki, Nakano, Masahiro, Arita, Takaichi, Chem.Pharm.Bull., 25(2), 253-8 (1977) Ref.CA. 87/47850 p.

133- Rana,N.G., Dhyani,H.K., Patel,M.R., Shah,B.J., Indian Drugs, 17(5), 124-4 (1980) Ref.CA. 93:225684w.

134- Gallo,N., Bianco,P., Pizzi,A.O., Arch.Sci.Med., 139(4), 407-8 (1982), Ref.CA. 101/177601 b.

135- Rao,G.Ramana, Kanjilal,Geeta, Mohan,K. Rama, Indian drugs, 19(8), 326-7 (1982), Ref.CA. 97/44393n.

136- Doadrio,J.C., Doadrio,A., An.R.Acad.Farm. 49(1), 61-7 (1983), Ref.CA. 99:76940 w.

137- Naik,Pradeep,N., Emmanuel,J., Indian Drugs, 21(3), 121-2 (1983), Ref.CA, No: 100:126956 t.

138- Sane,R.T., Nayak,V.G., Malkar,V.B., Sapre,D.S., Nadkarni, A.D., Pandit,V.R., Doshi,V.J., Indian Drugs, 21(2). 76-8(1983) Ref.CA. 100:56944 m.

139- Emmanuel,J., Shetty,Arun,R., Indian Drugs, 21(2), 70-1 (1983) Ref.CA. 100:56942 k.

140- Bhatkar,R.G., Almeida,Lilian, Indian Drugs, 21(2), 70-1 (1983), Ref.CA. 100:56942 k.

141- Emmanuel,J., Mathew Roy, East Pharm., 27(320), 235-6 (1984) Ref.CA. 101:216491 n.

142- Gav,W., Horster,F.A., Arzneim.-Forsch., 29(12A), 1941-3 (1979).

143- Matovsova,O., Peterkova,M., Cesk.Farm., 30(6), 189-91 (1981), Ref.CA. 95:175882 c.

144- Twomey,Philip,A., J.Pharm.Sci., 70(7), 824-6 (1981).

145- Kolusheva,A., Papazova,P., Antibiotiki (Moscow), 16(12), 1064-7 (1971) Ref.CA. 76:63174 z.

146- Stankewich,Joseph,P., Upton,Ronald P., Antimicrob.Agents. Chemother., 3(3), 364-8 (1973), Ref.CA. 79:35168 u.

147- Yamaoka,kiyoshi,Narita,Shigeru; Nakagawa, Terumichi, Uno, Toyozo, J.Chromatogr., 168(1), 187-93 (1979).

148- Pamazon~ka-Kolodziejsha,Teresa, Acta Pol.Pharm., 34(6), 631-6 (1977) Ref.CA. 89:48943.

- 199 -

149- Soldin,Steven,J., Tesoro,Angel,M., MacLeod, Stuart M., Ther.Drug.Monit., 2(4), 417-22 (1980), Ref.CA. 97: 84578h.

150- Laurialult,G., LeBelle,M.J., Vilim,A., J.Chromatogr., 246(1), 157-60 (1982).

151- Seitzinger,R.W.Th., Pharm.Weekbl., 108(43), 961-8 (1973), Ref.CA. 80:34166a.

152- Jarzebinski,Jerzy, Prohop-Gryz, Krystyra, Farm.Pol., 32(6), 461-5(1976).

153- Nunez,V.Luis,J., Squella,J.A., An.Simp.Bras, Elastroguim. Electroanal., 3rd. !, 117-21 (1982), Ref.CA. 98:149643t.

154- Squella,J.A., Nunez,Vergara,Luis,J., Acta Pharm.Suec., 16(5), 339-44 (1979).

155- Ismaiel Saad,A., Tawakkol,Mostafa s., Amer,Mohamed M., Pharmazie, 31(11), 822 (1976).

156- Murai,Y., Nakagawa,T., Yamaoka,K., Uno,T., Int.J.Pharm., 15(3), 309-20 (1983).

157- Brunetta,A., Mosconi,L., pongiluppi,S., Scagnolari,U., Zambonin,G., Boll.Chim.Farm., 120(6), 335-42, (1981), Ref.CA. 95:225732b.

158- Squella,J.A., Silva,M.M., Nonez-Vergara,Luis,J.; Talanta, 28(11), 855-6 (1981).

159- Murai,Yasuo, Nakagawa, Terumichi, Yamaoka, Kiyoshi, Uno, T., Chem.Pharm.Bull., 29(11), 3290-7 (1981).

160- Szysko,Ed-und, Gawrych,Zofia, Acta Pol.Pharm, 32(3), 333-8 (1975) Ref.CA. 84:79753 p.

161- Yadav,R.L., Gupta,J.P., Labdev, Part A ll(A)(3-4), 97 (1973).

162- Terada,Hisaya, Asanoma, Masaharu, Sakabe, Yoshio, J.Chromatogr,, 318(2), 299-306 (1985).

163- Lindstrom,E.Borje, Nordstrom,Kurt, Antimicrob.Agents. Chemother., 1(2), 100-6 (1972).

164- Manni,P.E., Bourgeois,M.F., Lipper,R.A., Blaha,J.M., Hem, S • L. , J . C h roma t o g r. , 8 5 (1) , 1 7 7 -8 O ( 1 9 7 3) .

165- Blaha,Jean,M., Knevel, Adelbert,M., Hem Stanley L., J.Pharm.Sci., 64(8), 1384-6 (1975).

- 200 -

166- Lebelle,M.J., Lauriault,G., Wilson,W.L., J.Liq. Chromatogr., 3(10), 1573-8(1980).

167- Lindberg,Raija,L.P., Huupponen, Risto K., Huovinen Pentti, Antimicrob. Agents.Chemother, 26(3), 300-2 (1984), Ref.CA. 101:203781 g.

168- Kazimierz Kalinowski, Franciszek Czlonkowski, Acta.Pol. Pharm., 25(1), 29-32 (1968), Ref.CA. 68:117162z.

169- Hughes,Alan,S., Popplestone, Christopher,R., Proc.Anal. Div.Chem.Scc., 14(10), 288-90 (1977), Ref.CA. 88:41717 z.

170- Nayak,Anant N., Ramappa,P,G.: Yathirajan, H.S., Manjappa, S.: Anal.Chim.Acta. 134, 411-15 (1982).

171- Aravind,M.K., Miceli,J.N., Kauffman,R.E.: J.Chromatogr., 233, 423-6 (1982).

172- Nachtmann,F., Ostrein,K., J.Chromatogr., 238(2), 461-8 (1982).

173- Aravind,M.K., Miceli,J.N., Kauffman,R.E., J.Liq.Chromatogr., 7(14), 2887-93 (1984), Ref.CA. 102:105589 b.

174- Hekster,Y.A., Baars,A.M., Vree,T.B., Van Klingeren,B., Rutgers,A., Pharm.Weekbl., Sci.Ed., 1(3), 95-100 (1979).

175- Buur,Anders, Bundgaard,Hans: Arch.Pharm.Chemi,Sci.Ed., 11(3), 897-905, (1983).

176- Moats,W.A., J.Chromatogr., 317, 311-8 (1984).

177- Bird,A.E., Redrup,C.E.: Proc.Anal.Div.Chem.Soc., 14(10), 285-8(1977).

178- Gundert-Remy,V.: De Vries,J.X.: Br.J.Clin.Pharmacol., 8(6), 589-92 (1979).

179- Jehl,F.: Monteil,H., Minck,R.: Pathol.Biol., 31(5), 370-4(1983) Ref.CA. 99:63763 r.

180- Faith,L., Cesk,Farm., 29(3-4), 67-72 (1980).

181- Thij ssen,H.H.W.: J.Chromatogr., 183(3), 339-45 (1980).

182- Hishta,Charles, Mays,D.L., Garafalo, Michael, Anal.Chem., 43(11), 1530-3, (1971).

183- Mueller,M.D., Seibl,J., Simon,W., Anal.Chim.Acta, 100, 263-9 (1978).

184- Biagi,Gian Luigi; Barbaru,A.M., Gamba,M.F., Guerra,M.C., J.Chromatogr., 41(3-4), 371-9 (1969).

- 201 -

185- Singh,M.P., Basu,N., Roy,D.K., Mandal,S.K., Indian J.Exp. Biol., 22(1), 39-41 (1984), Ref.CA. 100:161842 z.

186- Siraj,P., Reddy,B.S., Sastry,C.S.Prakasa: Acta Cienc.Indica (Ser.) Chem., 6(3), 150-2 (1980) Ref.CA. 94:145435 w.

187- ibid., 8(1), 18-20 (1982) Ref.CA. 98: 113789 f.

188- Caorro,C., Serghini,M., Maurin,R., Analusis, 10(5), 245-6 (1982) Ref.CA. 97:28662 u.

189- Bakalov,U., Koleva,M., Farmatsiya (Sofya), 33(4), 7-13 (1983), Ref.CA. 100:109188 b.

190- T.B.Platt, J.Gentile, M.J.George, Ann.N.Y.Acda.Sci., 130(2), 664-71 (1965). Ref.CA. 64/9510 d.

191- Shin,Moon,Hee, Park,Man Ki., Yu,Chang Hwa, Choi,Jung Kap, Arch.Pharmacol. Res. 4(1), 17(1981), Ref.CA. 96/24847 q. --

192- Csiba,Andras, Czeh,Mrs .• Istvan, Acta Pharm.Hung., 49(2), 68-74 (1979), Ref.CA. 90:210188 b.

193- Lee,Wang, Kyu; Sim,Chang Koo; Yakhak Hoe Chi, 20(1), 32-6 (1976), Ref.CA. 85:149171 u.

194- Chakrawarti,Purushottam B., Tişari,Anuradha, Natl.Acad. Sci. ,Lett., 2(11), 409-10 (1979), Ref .CA. 93: 245556 j.

195- Dobiasovsky,J., Zyka,J., Cesk.Farm., 27(7), 293-8 (1978) Ref.CA. 90:210187 a.

196- Baciu,Elisabeta, Medianu,Maria, Draghici,Constantin, Badea,Florin, Rev.Chim.(Bükreşt), 30(10), 976-9 (1979), Ref.CA., 92:152995 r.

197- Paal,Tamas, Molnar,Margit, Gyogyszereszet, 20(1), 8-13 (1976), Ref.CA. 84:155733 z.

198- Miyazaki,Katsumi, Ogino,Osamu, Nakano,Ma~ahiro, Arita, Takaichi, Chem.Pharm.Bull., 23(1), 178-83 (1975), Ref. CA. 82/132700 f.

199- Casalini,C., Montecchi,L., Boccali,D., Cesarano,G., Boll. Chim.Farm., 114(11), 651-8 (1975), Ref.CA. 84:140795 x.

200- Birner,Jan, J.Pharm.Sci., 63(4), 603-5 (1974), Ref.CA. No.Vol 81/6294 t.

201- Sigerman,H.D., Flato,J.B., O'Dom,G.W., Autom.Microbiol. Immunol., (Pap. Synip) 1973 (Pub .1975)

- 202 -

202- Celletti,P., Moretti,G.P., Petrangeli,B., Farmaco, Ed. Prat., 27(12), 688-98 (1972), Ref.CA. 75:102074 e.

203- Buryak,V.P., Kurinnaya,N.V., Farm.Zh. (Kiev), 25(4), 42-5 (1970), Ref.CA. 74:6412 k.

204- Murakawa,Takeo, Wakai,Yoshimi,Nishida, Minoru, Fujii, Ryochi, Konno, Masatoshi, Okada,Kazuho, Goto, Sachiko, Kuwahara,Shogo, J.Antibiot., 23(5), 250-1(1970), Ref.CA. 73:43449 c.

205- US Food and Drug Administration, Code of Federal Regist. 49(19), 3457-61 (1984), Ref.CA. 100:91465 c.

206- Cervera,M., Nailet,B., Riera,A., De Blos,J., Cienc.Ind. Fa rm. , 1 ( 1 2) , 3 7 4-9 (1 9 8 2) .

207- Ibrahim,El-Sebai A., Rida,S.M., Beltagy,Y.A., Abdel Khalek,M.M., Pharmazie, 29(2), 143-4 (1974) Ref.CA. 81: 41385 v.

208- Floris,Geza, Simonyi,Istvan: Acta Pharm.Hung., 39(2), 74-80 (1969)

209- Gupta,V.Das., Stewart,Kenneth,R., J.Pharm.Sci., 69(11), 1264-7 (1980).

210- Vree,T.B., Hekster,Y.A., Baars,A.M.: Van der Kleijn,E., J.Chromatogr., 145(3), 496-501 (1978).

211- Miyazaki,K., Ohtani,K., Sunada,K., Arita,T., J.Chromatogr., 2 7 6 ( 2) , 4 7 8 -8 2 ( 19 8 3) •

212- Hartmann,V., Roediger,M., Chromatographia, 9(6), 266-72 (1976).

213- Hildebrandt,R., Gundert-Remy,U., J.Chromatogr., 228, 409-12 (1982).

214- Nayak,Aanantn, Ramappa,P., Yathirajan,H.S., Subrahmanya, U., Acta Pharm.Hung., 52(3), 102-7 (1982), 'Ref ,CA. 96: 223393p

215- Angelucci,L., Baldieri,M., J.Pharm.Pharmacol., 23(6), 471-2 (1971) Ref. CA. 75:61649 p.

216- David,E.Tutt, Michael A.Schwartz, Analytical Chemistry, 43(3) 338 (1971).

217- Lin,Song-Ling: Sutton,Vincent,J., Quraishi,Mateen, J.Assoc.0ff.Anal.Chem., 62(5), 989-97 (1979), Ref.CA. 92:47258 e._

- 203 -

218- Squella,Juan A., Nunez-Vergara,Luis J., Aros Maximo, J. Assoc.Off.Anal.Chem., 63(5), 1049-51 (1980), Ref.CA. 94:7843 b.

219- Thomas,A.D., J.Pharm.Pharmacol., 28(11), 838-9 (1976), Ref.CA. 86:96062 w.

220- Squella,J.A., Nunez-Vergara,L.J., Talanta, 26(11), 1039-40, 1979.

221- Goncalves,Lidia L., Mamede dos Santos Maria I.C., Bol. Fac.Farm.Univ.Coimbra Ed., 39(1-5), 32 pp (1973) (Pub 1974) Ref.CA. 83:103341 e.

222- Doadrio,Antonio, Garcia-Mirasierra Gomez,M., An.Real. Acad.Farm., 35(1), 115-31 (1969), Ref.CA: 71:42363 s.

223- Nunez-Vergara,L.J., Squella,J.A., Silva,M.M., Farmaco,Ed. Prat., 35(8), 409-15 (1980) Ref.CA. 93:210340 g.

224- Belal,F., Anal.Lett., 16(B 19), 1555-66 (1983) Ref.CA. 100: 109180 t.

225- Castro Ruiz,R.M., De Corral y'Yerro,M.S., Bedoya Turrez,J. An.R.Acad.Farm., 49(3), 31-41 (1983), Ref.CA. 100:91477 h.

226- Nunez-Vergara,L.J., Squella,J.A., IRCS Med.Sci.: Libr. Compend., 9(7), 649 (1981), Ref.CA: 95:161611 b.

227- De Carvalho,M.Pina, Ferreira, A.Matos, Chemother.Proc. Int.Congr.Chemother., 9 th 1975 (Pub.1976), .2.., 71-3 (1976) Ref.CA. 86:164983 z.

228- Nunez-Vergara,L.J., Squella,S.J.A., Silva,S.M.M., Bol. Soc.Chil.Quim., 27(1), 358-60 (1982), Ref.CA. 97:98417 s.

229- Novikevich,A.M., Onis'kiv,D.A., Farm.Zh.(Kiev), 27(1), 35-8 (1972) Ref.CA. 76:144873 d.

230- Bontchev,P.R., Papazova,P., Mikrochim.Acta, 2(4-5), 503-13 (1975).

231- Korobkin,V.N., Korchagin,V.B., Antibiotiki (Moscow), 23(3), 211-14 (1978). Ref.CA. 88:177276 n.

232- Saha,Utpal, IRCS Med.Sci., Libr.Compend., 11(1), 91(1983) Ref.CA: 98:132410 s.

233- Buchberger,W., Winsauer,K., Nachtmann,F., Fresenius' Z.Anal.Chem., 315(6), 525-7 (1983).

234- Meulemans,A., Mohler,J., Decazes,J.M., Dousset,I., Modai,A., J.Liq.Chromatogr., 6(3), 575-83 (1983) Ref.CA: 98:191168s.

- 204 -

235- Watson,Ian,D., J.Chromatogr., 337(2), 301-9 (1985), Ref. CA: 102:89611 v.

236- Csiba,Andras, Graber,H., Magy,Kem.Foly., 83(11), 504-6 (1977), Ref.CA: 88:83286 p.

237- Forsman,Ulf, Karlsson, Anders, Anal.Chim.Acta, 139, 133-42 (1982), Ref.CA. 97:78997 c.

238- Squella,J.A., Nunez-Vergara,L.J., J.Electroanal.Chem. Interfacial Electrochem., 130, 361-6 (1981), Ref.CA. 96:57841 m. --

239- Tiwari,A., Chakravarti,P.B., Vijnana Parishad Anusandhan Patrika, 21(4), 387-91 (1978), Ref.CA. 91:13106 t.

240- Barbhaiya,R.H., Turner,P., J.Antimicrob., Chemother. 3 ( 5) , 4 2 3-7 ( 19 7 7) , Re f. CA: 8 8 : 8 O t.

241- Matousova,o., Peterkova,M., Kakac,B., Cesk.Farm., 32(5), 153-5(1983), Ref.CA: 99:164070 t.

242- Tiwari,A., Chakraborty,P.B., Sci.Cult., 45(6), 242-3 (1979), Ref.CA: 92:87465 b.

243- Csiba,A., Proc.Huhg.Annu.Meet.Biochem., 19 th, 291-2 (1979), Ref.CA. 92:64836 j.

244- Saccani,F.: Pitrolo,G., Boll.Chim.Farm., 108, 29-33 (1969), Ref.CA. 70:99650 s.

245- Grime,J.K., Tan,Barrie, Anal.Chim.Acta., 105(1), 361-8 (1979).

246- Bundgaard,H., Larsen,Claus., J.Pharm.Biomed.Anal., 1(1), 29-37 (1983).

247- Selwyn,Sydney: Lancet, 2(7986), 616-18 (1976).

248- Lane,J.R., McClure,F., Martinez,C., J.A~so~.Off.Anal. Cehem., 57(69), 1314-24 (1974).

249- Lane,J.R., McClure,F., Martinez,C., ibid., 57(6), 1325-37 (1974).

250- Bundgaard,Hans, Arch.Pharm.Chemi, 86(13), 607-20 (1979).

251- Karlberg,Bo, Forsman,Ulf, Anal.Chim.Acta, 83(1), 309-16 (1976).

252- Vermeij,P., Pharm.Weekbl.Sci.Ed., 1(1), 217-20 (1979).

253- Ibrahim,El Sabia A., Beltagy,Y.A., El-khalek,M.M.Abd., Tlaanta, 24(5), 328-30 (1977).

- 205 -

254- Hoogmartens,J., Roets,E., Janssen,G.: Vanderhaeghe,H., J.Chromatogr., 244(2), 299-309 (1982).

255- Barbato,F., Grieco,C., Silipo,C., Vittoria,A., Farmaco, Ed.Prat., 34(6), 233-42 (1979).

256- Lee,Wang,Kyu, Sim Chang Koo, Yakhak Hoe Chi, 20(1), 32-6 (1976).

257- Davidson,A.G., Stenlake,J.B., J.Pharm.Pharmacol., 25(Suppl.) 156P-157P(l973).

258- Lepidi,A.A., Nuti,M.P., Mycopathol.Mycol.Appl., 43(1), 11-15(1971) Ref. CA: 74:146307 e.

259- Joseph,Bomstein; W.G. Evans; J.M. Shepp, Ann.N.Y.Acad.Sci. 130(2), 589-95 (1965).

260- Jahnsen,Sverre, Engberg-Pederson,H., Process Biochem., 6(3), 25-7 (1971).

261- Davidson,A.G., Stenlake,J.B., Analyst, 99(1181), 476-81 (1974).

262- A.O.Niedermayer, F.M.Russo-Alesi, Anal.Chem., 32(6), 664-6 (1960).

263- Vandemme,E.J., Voets,J.P., J.Chromatogr., 71(1), 141-8 (1972).

264- Genva,M.I., Giraldez,J., Rocha,E., Monge,A., J.Pharm.Sci. 69(11), 1282-4(1980).

265- Moehrle,H., Luther,G.: Deut.Apoth.Zeitung., 111(40), 1486-90 (1971).

266- Biagi,Gian L., Barbaro,Anna,M., Guerra,Maria,C., J. Chromatogr., 51(3), 548-52 (1970).

267- Beltagy,Y.A., Rida,S.M., Issa,A., Pharmazie, 29(1), 64-5 (1974).

268- Forsman,Ulf., Anal.Chim.Acta, ..21.., 153-9 (1977).

269- Rasmussen,C.E., Higuchi,T., J.Pharm.Sci., 60(11), 1608-· 16 (1971).

270- Amer.M.M., El Bardicy,M.G., Ruecker,G., Krankenhauspharmazie, il2..), 255-7 (1983).

271- US Food and Drug Administration, Fed.Regist., 33(219), 16385-6 (1968).

- 206 -

272- Hughes,A.S., Popplestne,C.R., Analyst, 102(1219), 759-63 (1977).

273- Carlwvist,J., Westerlund,D., J.Chromatogr., 164, 373-81 (1979).

274- Vanderhaeghe,H., Dubost,M., Fischler,M., Malherbe,R., Vandervlies,C., Anal.Chim.Acta, 143, 191-8 (1982).

275- Smith,J.W.G., De Grey, G.E., Patel,V.J., Analyst, 92, 247-252 (1967).

276- Yasuda,T., Shimada,S., J.Antibiot., 24(5), 290-3 (1971).

277- Lee,Teh Lo, D'Arconte, Lucius, Brooks, Marvin A., J.Pharm. Sci., 68,454-58,(1979)

278- Bundgaard,Hans, Arch.Pharm.Chemi, Sci.Ed.,_&_, 215-22 (1978).

279- Lane,J .R., J.Assoc.Off.Anal .Chem., 21., 1325-1337 (1974).

280- Pallenbach,D., Glombitza, Karl,W., Arch.Pharm., 302(11), 863-8 (1969).

281- Wahbi,Abdel Aziz M., Belal,Saied, Bedair,M., Abdine,H., Pharmazie, 37(9), 641-5 (1982).

282- Moehrle,H., Luther,G., Deuth.Apoth.Zeitung., 111(50), 1937-41 (1971).

283- Munson,J.W., Papadimitriou,D., De Luca,P.P., J.Pharm.Scii, 68(10), 1333-5 (1979).

284- Casu,Benito, Ventura,P., J.Pharm.Sci., 63(2), 211-8.

285- Zia,H., Malaz,E., Ma,J.K.H., Luzzi,L.A., Can.J.Pharm. Sci., 15(1), 14-16 (1980).

286- Whittaker,J.W., Lemke,P.R., J.Pharm.Sci., 71(3), 334-8 (1982).

287- Belal,Saied, Elsayed,M.Abdel-Hady, Abdel-Hamid,M.E., Abdini,H., J.Pharm.Sci., 70(2), 127-30 (1981).

288- Alicino,J.F., J.Pharm.Sci., 65(2), 300-1 (1976).

289- Westerlund,D., Carlquist,J., Theodorse,A., Acta Pharm. Suec., 16(3), 187-214 (1979).

290- Coclers,L., Delahaut,R., Versolato,A., J.Pharm.Belg. 24(11-12), 475-91 (1969).

291- Dobiasousky,J., Zyka,J., Cesk.Farm., 27(6), 253-7 (1978).

292- Dobiasovsky,J., Zyka,J., Cesk.Farm., 27(7), 293-298 (1978).

- 207 -

9. öZGECMtS

10.7.1960'da İstanbul'da Zühtü Kestek'in oğlu olarak

dünyaya geldim. İlköğrenimimi İstanbul Özel Yıldız Kolejinde

1967-71 yılları arasında, orta ve lise öğrenimimi ise 1972-78

yılları arasında Özel Işık Lisesinde tamamladım. 1978-79 öğ

renim döneminde İ.Ü.Eczacılık Fakültesine kaydoldum ve, 1982

Kasım döneminde mezun oldum. 26 Ağustos 1983 tarihinde yapılan

sınavı kazanarak 1 Ekim 1983 tarihinden itibaren i.ü.Sağlık

Bilimleri Enstitüsü Lisans-Üstü eğitim ve öğretim ve sınav

yönetmeliğinin İ.Ü.Eczacılık Fakültesi Analitik Kimya Anabilim

Dalı için öngördüğü Yüksek Lisans öğrenimime Doç.Dr.F.İnci

Morgil'in danışmanlığında başladım.

~, -1 ~ ... • ~~

DünUMA~TASVO~ Mt.ıiıt/66,t

BAZI YARI SENTETiK PEN1S1L1NLER1N MiKTAR ...

Documents