Az emberi DNS vizsgálatokat elsősorban a koponyacsonton ...

Az emberi DNS vizsgálatokat elsősorban a koponyacsonton végezzük. A halántékcsont sziklacsonti része tartalmazza a legmagasabb arányban az elhunyt ember saját DNS-ét, ilyen kivágott sziklacsont darabok láthatók a képen.

A kivágás egészben megmaradt koponya esetén annak alapi része felől történik, ahonnan egy mikrofűrésszel ejtünk vágást.

Amennyiben a halántékcsont egészben megmaradt, azt megtisztítjuk.

Fogakból emberi kórokozók nyomait kutatjukDNS vizsgálatokkal, melyekhez a fog gyökeréből, a gyökércsatornából nyerünk ki port, fúrásostechnikával.

A fogak alkalmasak lehetnek az elhunyt sajátDNS-ének kutatására is, azonban ennekmegtartása a sziklacsonthoz képest jelentősengyengébb is lehet a fogakban.

A minták kinyerése a laboratórium egy speciálisegységében, a mintavevőben történik.

A kinyert por egy műanyag csőben, azátadóablakon keresztül kerül a steril labornaka mintavevőnél tisztább helységeibe. A laboratóriumban légnyomáskülönbségekkelszabályozott különböző funkciókkal bíró tisztatereket alakítottak ki az AGI munkatársai.

Fotó: Bozsoki József

A DNS izoláló helyiségben az oldatokelőkészítése után enzimek segítségével feloldjáka kutatók a csont állományát, kiszabadítva a DNS-t. A feltárás hosszabb folyamat, éjszakán áttartó melegítés és forgatás közben megy végbe.

2021-től a DNS izolálás tisztítási lépései ésa DNS könyvtár készítése roboton zajlanak. A robot betáplált utasítások alapjánpipettáz, ráz, fűt és hűt, kiváltva a kutatóknapok alatt, kézzel végzett munkáját.

A DNS minták tárolása a steril labor fagyasztószekrényében.

Életképek a tiszta laborban

A tiszta laboratóriumi térben a munka többnyiremagányosan zajlik, az egyes tereket egyesévelhasználva a legnagyobb tisztaságra törekedve. A szakmai csapat azonban rendszeresen egyeztet a feladatokról, fejlesztésekről és az esetlegesenfelmerülő problémákról.

DNS könyvtárak ellenőrzése a post-PCR laborban

A felszaporított genomi DNS-t agaróz gélben ésfragmens elemző készüléken futtatva ellenőrzik a kutatók. Arra kíváncsiak, hogy mekkorahosszúságú és milyen mennyiségű DNS-t sikerültkinyerni a mintából?

Fotó: Szécsényi-Nagy Anna (BTK AGI)

Tape Station eredmény, mely a DNS hosszúságát ésmennyiségét mutatja.

DNS könyvtárak ellenőrzése a post-PCR laborban

A felszaporított genomi DNS-t agaróz gélben ésfragmens elemző készüléken futtatva ellenőrzik a kutatók. Arra kíváncsiak, hogy mekkorahosszúságú és milyen mennyiségű DNS-t sikerültkinyerni a mintából?

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

Agaróz gél és a benne felszaporított DNS különböző megjelenítési formái.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

A DNS könyvtárak teljesítményétvalós idejű PCR reakcióval ellenőrzik, amellyel a DNS szaporodásátfolyamatában követik a kutatók.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

DNS szekvenátor, amely leolvassa a DNS bázissorrendjét.

Fotó: Szécsényi-Nagy Anna (BTK AGI)

DNS szekvenátor képernyője, amelyleolvassa a DNS bázissorrendjét.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

A vizsgálatok során évek alatt fejlesztett ésjavított munka-protokollokat használnak a kutatók. Ebben vannak leírva az egyeslépések, összemérendő mennyiségek és a különböző műszerek szükséges beállításai.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

Pipettázó a robot, DNS könyvtáraktisztítása.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)

A robotizálás egyik fontos feltétele a laboratóriumi protokollok átalakítása, automatizálható változatra. Ennek fontos tényezője a DNS mágneses tisztítása és szeparálása a korábbi centrifugálással járó megoldásokhoz képest. Egy ilyen mágneses szeparáló egységet láthatunk itt.

Bioinformatikai munka.

Fotó: Gerber Dániel (BTK AGI)