APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS ➢ Diagnóstico ➢ Acompanhamento terapêutico ➢ Epidemiologia
APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS
➢ Diagnóstico
➢ Acompanhamento terapêutico
➢ Epidemiologia
FATORES QUE INFLUENCIAM NOS RESULTADOS DAS REAÇÕES SOROLÓGICAS
●Antígenos
●Anti-soros padronizados ●Reações padronizadas (técnicas)
●Avaliação: Sensibilidade, especificidade e valor preditivo
DETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOS
AG AC SISTEMAREVELADOR
Íntegro
Recombinante
Peptídeo
Monoclonais
PrecipitaçãoAglutinação
Enzima
Radioisótopo
Fixaçãodo C`
Extrato
Policlonais
FluorocromoPurificado
SENSIBILIDADE
ESPECIFICIDADE
VALOR PREDITIVO
Porcentagem de resultados positivos peloteste na população de doentes
VPSen. = VP + FN
Porcentagem de resultados negativos peloteste nos indivíduos não doentes
VNEsp. = VN + FP
Positivo – proporção de indivíduos doentesentre os resultados positivos obtidos no testeem estudo
VPVPP = VP + FP
TESTEDOENÇA
TOTAL
presente ausente
positivo 380 80 460
negativo 20 1520 1540
TOTAL 400 1600 2000
TESTEDOENÇA
TOTAL
presente ausente
positivo 19 99 118
negativo 1 1881 1882
TOTAL 20 1980 2000
Sens = 95%Espec = 95%Prev = 1%
Sens = 95%Espec = 95%Prev = 20%
VALOR PREDITIVO POSITIVO
VPP = 16%
VPP = 82%
ESTRUTURA DE PROTEÍNAS
ESTRUTURA DE PROTEÍNASEPITOPOS
FONTES ANTIGÊNICAS
• Antígenos totais• Antígenos de membrana• Frações purificadas• Proteínas recombinantes• Peptídeos sintéticos
➢ conter epítopos específicos
➢ ser comum as diferentes cepas
➢ de fácil obtenção através de
metodologia reprodutível
Características ideais de um antígeno
➢ Fixação de Complemento
➢ Reações de Aglutinação: Aglutinação Direta;
Aglutinação com Látex; Hemaglutinação Indireta;
➢ Imunofluorescência
➢ Radioimunoensaio
➢ Reações Imunoenzimáticas: ELISA; Dot Blot;
Western Blot; Line Immuno Assay
➢ Reações de Quimioluminescência
➢ Nefelometria e Turbidimetria
MÉTODOS IMUNOLÓGICOS
Testes de Aglutinação em Tubos
1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640
0,950 mL PBS
0,5 mL PBS
0,5 mL PBS
0,5 mL PBS
0,5 mL PBS
0,5 mL PBS
0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL
Acrescentar 0,5 mL de Ag em cada tubo
50 μL do soro
Armazenar a 4ºC por 72 horas
Realizar a leitura a cada 24 horas
TESTE DE AGLUTINAÇÃO
LATEX COAGLUTINAÇÃO
TESTE DE AGLUTINAÇÃO DIRETA:CONJUNTO DIAGNÓSTICO PARA DETECÇÃO DE ESTREPTOCOCOS
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO HEMOAGLUTINAÇÃO
REAÇÃO DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Indireta
Detecção de Ag Detecção de Ac
Direta
Detecção de Ag
APLICAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS PARA DETECÇÃO DE PATÓGENOS POR
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA
Vírus influenza
Tipo B
Vírus Herpes simplexTipo 1
REAÇÃO DE IMUNOFLURESCÊNCIA DIRETA PARA DETECÇÃO DE Giardia e Cryptosporidium
Cryptosporidium
Giardia
LES Sindrome de Goodpasture
IMUNOCOMPLEXOS EM DOENÇAS AUTOIMUNE
CITOMETRIA DE FLUXO
REPRESENTAÇÃO DOS DADOS NA CITOMETRIA DE FLUXO
TÉCNICA DE ELISA
SUBSTRATE
COLORDEVELOPED anti-Ig
POD labeled
ELISA INDIRETO – DETECÇÃO DE ANTICORPOS
antigen
anti-Ag Ab POD labeled
SUBSTRATE
COLORDEVELOPED
ELISA CAPTURA – DETECÇÃO DE ANTÍGENOS
FASE SÓLIDA
• Índice de adsorção • Boa adesão a agentes surfactantes• Estabilidade de adsorção• Custo acessível• adesão a agentes surfactantes• Estabilidade de adsorção• Custo acessível
Poliestireno
Polivinil
ELETROFORESE
➢Eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) (Laemmli, 1970)
Proteínas do extrato bruto Marcadores de peso molecular na faixa de 200 a 10 kDa
TÉCNICA DO
WESTERN BLOT
WESTERN BLOT PARA O DIAGNÓSTICO DA INFECÇÃO PELO HIV
DIAGNÓSTICO DA INFECÇÃO PELO HIV