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Centro Universitrio Maurcio de NassauDisciplina de Microbiologia
Clnica
Identificao laboratorial das principais bactrias Gram
positivas
Professora Gleiciere Maia SilvaEspecialista em Microbiologia
Mdica e Micologia
Mestre em Biologia de Fungos
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Objetivo Geral: Identificar as principais bactrias Gram + que
causam patologias de interesse mdico; Objetivos especficos:
Identificar os principais testes da rotina laboratorial para
identificao dessas bactrias;
Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
Cristal Violeta 1 min.: Colorao azul
Lugol 1 min.: Mordente
Soluo lcool-Acetona (1:1) Descolorao
Safranina 15 a 30 seg.:
Colorao de Gram
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Bactrias Gram Positivas Cocos: Staphylococcus; Streptococcus
Bacilos: Lactobacillus; Listeria; Corynebacterium
Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Staphylococcus Espcies: Staphylococcus aureus; S. epidermidis;
S.
saprophyticus; S.haemolyticus
Streptococcus Espcies: Streptococcus pyogenes; S. agalactiae;
S.
pneumoniae; S. grupo viridans; S. grupo D
Enterococcus Espcies: Enterococcus faecalis; E. faecium; E.
bovis
Principais bactrias Gram +
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Bactrias no esporuladas que mais resistem no meio ambiente;Podem
sobreviver por meses em amostras clnicas secas, so relativamente
resistentes ao calor e podem tolerar uma concentrao aumentada de
sal. Este microrganismo continua a ser um dos mais importantes
patgenos para o homem. Indivduos sadios so colonizados desde a
amamentao, e podem albergar o microrganismo na nasofaringe,
ocasionalmente na pele e raramente na vagina.
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do
paciente, objetos inanimados ou outros pacientes por contato direto
ou por aerossol.J foram descritos no Brasil casos de infeces
causadas por S. aureus parcialmente resistentes aos antibiticos
mais potentes como a Vancomicina, e relatos da capacidade que os
Staphylococcus coagulase negativa tem de desenvolver
resistncia..
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase negativa
conhecidas, das quais os mais freqentes so:Staphylococcus
epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais
freqente microrganismo encontrado em hemoculturas.Staphylococcus
saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres
jovens.Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia
aumentada aos antimicrobianos, e por ser comumente confundido com o
S. aureus, pois apresenta hemlise na placa de gar sangue de
carneiro.
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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Catalase; Coagulase (Livre e Fixa); DNAse; Sensibilidade
Novobiocina; gar Manitol.
Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
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Principais bactrias Gram +
Cocos Gram positivos;Organizados em Aglomerados Irregulares
Cachos;Famlia Micrococcaceae;Imveis;Produzem pigmentos: branco
amarelo-dourado;Anaerbios facultativos;Catalase positiva;
Caractersticas: Staphylococcus
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Prova da Catalase: A catalase uma enzima que decompe o perxido
de hidrognio (H2O2) em gua e oxignio. Com a ala bacteriolgica ou
com um palito coleta-se o centro de uma colnia suspeita e
esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar sobre este esfregao uma
gota de gua oxigenada a 3% e observar a formao de bolhas. Para a
famlia Microccocacea (estafilococos) a prova positiva,enquanto que
para a famlia Streptococcacea (estreptococos) negativa
(ANVISA,2008).
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Prova da Catalase:
Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Ao coletar a colnia, no carregar meio de cultura (gar sangue),
que pode acarretar resultados falsopositivos porque o sangue do
meio contm catalase. Algumas cepas de enterococos podem dar falsa
reao positiva (fazer Gram e ver disposio em cadeias curtas ou aos
pares).
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Prova da Coagulase: A maioria das cepas de S. aureus possui a
coagulase ligada (ou fator aglutinante) clumping factor na
superfcie da parede celular, que reage com o fibrinognio do plasma
causando a coagulao do mesmo.Colocar 2 gotas de salina em uma
lmina; Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;Colocar uma gota
de plasma e misturar com um palito de plstico ou madeira; Observar
se h aglutinao em 10 segundos.
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Teste Coagulase em Tubo: Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado
por uma noite, com colnia suspeita a um tubo de ensaio com 0,5 ml
de plasma; Incubar por 4 horas 35C em estufa ou banho maria; A
formao do cogulo observada pela inclinao suave do tubo de ensaio a
90 graus da vertical.
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
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DNAse Positiva- Meio adicionado de Indicador -
Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
Este teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo DNA,
(DNAse test agar) obtido comercialmente.Adicionar ao meio original
azul de ortotoluidina na concentrao de 0,1%; o meio adquire uma
colorao azul intensa; Incubar a 35C por 24 horas;
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Teste de crescimento em gar manitolO S. aureus tem a capacidade
de fermentar o manitol em meio contendo 7,5 % de cloreto de sdio,
denominado gar manitol salgado. O indicador de pH o vermelho de
fenol, que indica uma reao positiva quando o meio ao redor das
colnias se torna amarelo, e negativa quando permanece
avermelhado.
Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
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Teste de resistencia a novobiocina A cepa semeada de maneira
semelhante ao antibiograma em placa de Muller Hinton acrescida de
um disco teste de novobiocina contendo 5 g. As amostras resistentes
mostram zonas de inibio de 6 a 12 mm, enquanto as susceptveis
apresentam halos de 16 mm ou mais. As cepas de S. saprophyticus so
resistentes.
Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
M-1: S. epidermidisM-2: S. saprophyticus
M -1
M-2
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Staphylococcus aureus Colorao amarelo-dourado (tipicamente);
Prova da Coagulase Positiva; Importante agente de Infeces
Hospitalares; Geralmente so hemolticos em gar sangue; Capaz de
despolimerizar DNA (Meio DNAse); Cresce em meio salgado (12% NaCl);
Fermentao do manitol positiva; Possui vrias Hemolisinas e Toxinas
(Virulncia e
Patogenicidade).
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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Staphylococcus epidermidis Colorao branca; Coagulase Negativa;
DNAse Negativa; Fermentao do manitol negativa; Novobiocina Sensvel;
Habitante Normal da pele e mucosas; Causa ocasionalmente
sepses.
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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Staphylococcus saprophyticus Colorao branca; Coagulase negativa;
DNAse negativa; Fermentao do Manitol negativa; Novobiocina
resistente; Causa Infeces genito-urinrias.
Principais bactrias Gram +
Caractersticas: Staphylococcus
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Principais bactrias Gram +
Identificao bioqumica
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Anvisa, 2008
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Streptococcus: Identificao laboratorial das principais
espcies
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Principais bactrias Gram +
Cocos Gram Positivos; Colnias Pequenas e Translcidas; Famlia
Streptococcaceae; Disposio aos pares ou em cadeias Colar de contas;
A maioria so imveis; Aerbios ou Anaerbios facultativos; Catalase
negativa; So fastidiosos (altamente exigentes); Constituinte da
Microbiota Normal; A maioria possui importncia clnica.
Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco
hospitalar na era pr-antibitica, causando surtos de infeco e morte
de purperas. Apesar de no serem atualmente uma importante causa de
infeco hospitalar, provocam, no entanto, doenas muito graves e
muitas vezes letais, mesmo em pacientes imunocompetentes, sendo
importante o rpido diagnstico deste agente.
Streptococcus
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Catalase; Hidrlise do Hipurato; Prova de CAMP; Hidrlise da
Esculina; Tolerncia a Caldo Salgado (NaCl 6,5%); Sensibilidade
Optoquina; Sensibilidade Bacitracina.
Principais bactrias Gram +
Provas Bioqumicas: Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Provas Bioqumicas: Streptococcus
Streptococcus pneumoniae; S. pyogenes; S. agalactiae; S. grupo
viridans; S. grupo D
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- -Hemlise (Hemlise Total);
- Streptococcus pyogenes;- S. agalactiae.
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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- -Hemlise (Hemlise Parcial);- Streptococcus Viridans;- S.
pneumoniae;
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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- -Hemlise (Sem Hemlise);
- Streptococcus Grupo D;
- Enterococcus spp.
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Hidrlise do Hipurato Negativa
Hidrlise do Hipurato Positiva
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Prova de CAMP PositivaStreptococcus agalactiae
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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ANVISA
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Hidrlise da Esculina
Negativa
Hidrlise da Esculina
Positiva
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Sensibilidade Optoquina
M-1
M-2
M-1: Streptococcus Viridans
M-2: Streptococcus pneumoniae
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Sensibilidade Bacitracina
Streptococcus pyogenes
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Streptococcus pneumoniae Pneumococos- Pneumonia bacteriana (90%
dos casos);Apresenta-se aos pares (em forma de Chama de
Vela;-Hemolticos (Hemlise Parcial);Sensvel Optoquina (5g/mL).
Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Streptococcus
Streptococcus pyogenes Grupo A de Lancefield; So -Hemolticos
(Hemlise Total em gar Sangue); Sensvel Bacitracina Provocam Infeces
nas Vias areas superiores e
pele; Febre reumtica, glomerulonefrite (natureza
imunolgica);
Possui vrias toxinas e enzimas (hemolisinas): Virulncia e
patogenicidade.
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Principais bactrias Gram +
Streptococcus
Streptococcus Grupo Viridans Microbiota normal da boca, mucosas,
pele e Intestino; Principais espcies:Streptococcus sanguis,
salivarius,
mitis, mutans Ocasionalmente causam processos endocrdicos
-Hemolticos (Hemlise Parcial); Resistentes Optoquina (5g/mL).
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Streptococcus agalactiae Grupo B de Lancefield; So -Hemolticos
(Hemlise Total em gar Sangue); Provocam Infeces na Via
Genito-Urinria; Resistente Bacitracina; Prova de CAMP positiva;
Hidrolisa o Hipurato de Sdio.
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Streptococcus Grupo D Classificao segundo Lancefield; , ou
-Hemolticos; Microbiota Intestinal; Hidrolisam a Bile; No crescem
em meio hipertnico (6,5% NaCl); Infeces Genito-Urinrias.
Principais bactrias Gram +
Streptococcus
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Principais bactrias Gram +
Enterococcus
Enterococcus Antigo Representante dos Streptococcus Grupo D;
Principais espcies faecalis, faecium, bovis -Hemolticos (Sem
Hemlise); Microbiota Intestinal; Hidrolisam a Bile; Crescem em meio
hipertnico (6,5% NaCl); Infeces Genito-Urinrias.
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Enterococcus
Principais bactrias Gram +
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Referncias Bibliogrficas
Microbiologia- Gerard J. Tortora. Microbiologia Ilustrada-
Willian A. Strohl Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica-
Carmen Oplustil et al. ANVISA