ASOCIACION DE HEMATOLOGIA Y HEMOTERAPIA

ASOCIACION DE HEMATOLOGIA Y HEMOTERAPIA

Sesión del día 9 de febrero de 197 3

LAS TRANSCOBALAMINAS. INTERES CLINICO. NUESTRA EXPERIENCIA PERSONAL

ENRIQUE GIMFERRER FELIP

Llamamos Transcobalaminas a unas gluco-proteínas plasmáticas do­tadas de la propiedad de unirse a la Vitamina B12 recién ingresada del exterior o de origen endógeno, t ransportarla por la circulación y ce­derla a diversas células posiblemente de un modo selectivo y peculiar, cuyo modelo funcional normal dista con mucho de ser conocido en su totalidad.

Existe en diversos jugos orgánicos otras glucoproteínas dotadas de propiedades de transporte aunque con misiones distintas, tales como el Factor Intrínsico, muy bien estudiado y conocido y sustancias tipo Transcobalamina que se detectan en L.C.R., bilis, lágrimas, leche, de origen y misiones desconocidas, probablemente procedentes del plasma. Todas ellas tienen algunas características de tipo antigénico parecidas, pero se trata de substancias distintas funcional y bioquí­micamente .

Prácticamente hace veinte años se empezaron a estudiar las Trans­cobalaminas, en el transcurso de los cuales, han variado las metodo­logías y la nomenclatura, y los modelos que se apuntaban inicialmente como fisiológicos han sufrido continuas transformaciones, algunas de ellas contradictorias. A ello ha contribuido no poco, el hecho de que las alteraciones precozmente señaladas como patológicas, evidenciadas hasta el momento mediante dichas metodologías no ha ayudado en absoluto al esclarecimiento del auténtico modelo normal sino más bien a hacerlo más confuso. Por otra parte, siguen existiendo lagunas en muchos puntos del ciclo metabólico de la Vitamina B12, hecho com­prensible si se tiene en cuenta las mínimas cantidades de coenzima circulante y la extraordinaria difusión de la misma en todo el orga­nismo.

En este t rabajo, en primer lugar intet;taretnos exponer con la máxima objetividad posible los conocimientos bioquímico-fisiológicos de que disponemos referentes a las Transcobalaminas A continuación revisaremos los hallazgos patológicos descritos hasta el momento y el 3nterés práctico que pueden aportar los mismos. Finalmente expon­dremos nuestra primera experiencia personal, respecto a la estandari-

E. GIMFI!RRER. LAS 'fRANSBOLAMlNAS 1019

zación de un método de estudio y a los resultados que hemos obtenido inicialmente en población normal. BIOQUÍMICA. - Conocemos tres tipos de transportador plasmático de Vitamina B12. l. La Transcobalami na I, de peso molecular aproximado 120.000, de características electroforéticas alfa globulina, eluible del DEAE ce­lulosa a pH 6,2 a una molaridad Fosfato de 0,1 a l. 2. Transcobalamina II, de peso molecular aproximado 40.000, de movilidad electroforétíca beta, eluible del DEAE celulosa a molari­dad 0,04 . 3. La Transcobalamina III, menos conocida, de caracteres mix­tos, peso molecular aproximado 120.000, o sea eluible cromatográfi­camente con geles simples junto con la Transcobalamina I, en cambio eluible del DEAE celulosa hacia la molaridad 0,05 junto a la Trans­cobalamina II. Posiblemente es un polímero de esta última muy simi­lar a la Transcob alamina I, probablemente es una molécula intermedia, aunque es rara la trimerización (presumible por su PM) en otros modelos bioquímicos conocidos.

FuNCIÓN DE LAS TRANSCOBALAMINAS. -Se deduce del empleo de la Vitamina B12 marcada con cobalto radioactivo, añadida a modelos celulares in vitro formados por reticulocitos humanos o por células HeLa., y también de la administración oral o parental de dicha vita­mina marcada a humanos. De estos ensayos se evidencia el siguiente modelo normal: La Vitamina B1 2 de origen dietético (una vez absorbida, vía factor intrínsico) estudiada en la circulación mayor (se desconoce el modelo que sigue en la circulación portal y en el hígado), es transportada por la Transcobalamína II, la cual, después de una vida media muy breve aunque vatiable según los autores, de 5 a 90 minutos, es cedida a los tejidos. La labilidad de la unión Transcobalamina II-Bl2, se demues­tra tanto por su rápido aclaramiento plasmático, como por su aclara­miento rápido del sobrenadante del cultivo celular in vitro, con su pronta incorporación a las células. La Transcobalamina II por su parte, una vez vacía se cree es cata­bolizada rápidamente y no es reutilizada, precisándose una síntesis continua. Lentamente reaparece en el plasma radioactividad B12 de­pendiente pero ya a nivel de la transcobalamina I, la cual puede per­sistir durante meses, aunque la vida media del complejo se presume en unos 10 días. Ello es motivado por la mayor fuerza de la .m.ión Bl2-TC I , la cual cede con mucha mayor dificultad la coenzima a los tejidos in vivo o a las células cultivadas in vitro. Es el mismo modelo in vitro el que demuestra en el sobrenadante del cultivo tratado pre­viamente con B12-Transcobalamina II, la reaparición lenta de la Vita­mina B12, transportada ya a nivel Transcobalamina l.

1020 ANALES DE MEDICINA

La Vitamina B12 inyectada parenteralmente ofrece un modelo li­geramente distinto, debido a que por la rapidez de entrada y oferta de coenzima a los transportadores, aproximadamente un 80 % de la misma es captado y tratado a través de la Transcobalamina II con una rápida desaparición plasmática y eliminación en tejidos y orina, pero el 20 % restante, conjugado a la Transcobalamina I es aclarado más lentamente.

Respecto al tercer transportador, la Transcobalamina III (menos estudiada} con características de afinidad por la Vitamina B12 interme­dios a la I y II y aceptado como un polímero de Transcobalamina II con características de Transcobalamina I, diremos que sus niveles son demostrables de forma variable, según el instante que tomada la muestra analítica y también en función de la metodología.

Se cree que la Transcobalamina I es sintetizada por los granulad­tos maduros y se cree (se discute sin embargo) que la Transcobala­mina II es sintetizada por ellúgado.

METODOLOGÍA DE ESTUDIO Y VALORES NORMALES.- Las Transco­balaminas pueden ser estudiadas desde dos puntos de vista, el cuan­titativo y el cualitativo. El primer aspecto, está relacionado con la actividad funcional global de las Transcobalaminas, las cuales a igual que las otras proteínas de transporte (como por ejemplo la transfe­rrina} transportan a la coenzima que normalmente circula y ofrecen además una capacidad latente de transporte de Vitamina B12. La ca­pacidad total de transporte es el resultado de añadir a la Vitamina B12 basal dicha capacidad latente. La transcobalamina está a una saturación aproximada del 25-35 % en la normalidad. Considerando siempre que prescindimos de cantidades absolutas de proteína (desconocidas) y ha­blamos al igual que en la transferrina de capacidades latente y total de transporte, o sea que hablamos de actividad biológica funcional, podemos dar como cifras normales de dicha actividad las de 900 a l .500 pg. por rol. de plasma de capacidad latente de transporte de Vitamina B12 y las de 1.400 a 2.000 pg. por ml. como capacidad total suponiendo que el individuo tenga un nivel de Vitamina B12 sérico de 500 pg. por mi.

Método de estudio cuantitativo. - Su fundamento es el siguiente: Se toma el suero a determinar, se le añade u na cantidad de Vitamina B12 en exceso con el fin de saturar sus Transcobalaminas, y después de incubación bajo condiciones estándar, es tratado con un absorbente o por medio de diaHsis con el fin de librarle de' la Vitamina B12 no fijada o dializable. Finalmente se determina el nivel resultante de Vitamina B12 de aquel suero así tratado la cual representará la capacidad total de transporte o de captación de su Transcobalamina, de la cual sólo tiene que ser restada la Vitamina B12 basal de aquel suero, previamen­te conocida, para obtener la capacidad latente de su Transcobalamina y naturaliñente el índice de saturación (esquema n.0 1).

E. GH.lf ERRER. LAS TRANSBOLAML'IAS

EsQUEMA N.0 1 DOSIFICACION DE LA TRANSCOBALAMINEMIA

SATURACION DE LA TRANSCOBALAMINA CON CIANOCOBALAMINA

~ ADSORCION MEDIANTE CARBON ACTIVADO ·t LIBERACION DE LA CIANOCOBALAMINA

Y DESPROTEINIZACION -!-DOSIFICACION DE LA CIANOCOBALAMINA

\¡

1021

TRANSCOBALAMINEMIA TOTAL

INDICE DE SATURACION DE LA TRANSCOBALAMINA

TRANSCOBALAMINEMIA LIBRE Método de estudio cualitativo.- El segundo aspecto del estuclio o sea el cualitativo, está relacionado con los clistintos tipos de Trans­cobalaminas, las cuales, como hemos clicho anteriormente tienen fun­ciones de transporte clistintas. En efecto, podemos considerar sin du­das que la Transcobalamina I es la responsable del transporte de la Vitamina B12 de origen endógeno, basal, y de mantener su nivel cons­tante (vitaminemia B12 sérica normal); y que la Transcobalamina II es la responsable del transpotte fugaz de la coenzima tecién ingresada al totrente circulatorio procedente de absotción intestinal o de aporte directo. La transcobalamina II pot tanto está prácticamente desaturada o vacía y es la responsable de la capacidad latente de captación y transporte de la Vitamina B12 y por tanto en el modelo fisiológico normal, ptácticamente sería la que mecliríamos directamente con una técnica de saturación como la descrita más arriba. Pot su carácter de transportador lábil o ya sea por la gran disociabilidad proteína-coenzi­ma, la Transcobalamina II se vacía fácilmente cediendo la Vitamina B12 a las células y recuperando con cierta rapidez su estado de capaci­dad latente de fijación.

El fundamento del método es el siguieote: El suero a estudiar, una vez se ha saturado in viu-o su Transcobalarnina y se ha liberado de la Vitamina B12 no combinada, es tratado con una resina de intetcambio aniónico tipo DEAE celulosa, eluyéndose en primer lugar las proteínas menos acidofílicas usando tampones de baja molaridad, y eluyendo a continuación las proteínas acidofílicas con alta mola.ridad. Determi­nando la cantidad de Vitamina B12 absoluta en ambos eluidos obten­dremos en el primero la Vitamina B12 unida a Transcobalaminas II y

1022 ANALES DE MEDICINA

III y en el segundo la unida a Transcobalamjna I (esquema n.0 2). Tra­tando .finalmente el primer eludido con un gel que separe por pesos

ESQUEMA N .0 2 FRACCIONAMIENTO DE LAS TRANSCOBALAMINAS

SATURACION DE LAS TRANSCOBALAMINAS CON CIANOCOBALAMINA

-!-ABSORCION MEDIANTE CARBON ALBUMINA

! DE A E CELULOSA

.¡, ELUCION FOSFATO MOLARIDAD 0,06

1 ~

TRANSCOBALAMINA II SATURADA

ELUCION CLORURO SODICO 1 M

-!­TRANSCOBALAMINA SATURADA II

t 'V

LIBERACION DE LA CIANOCOBALAMINA Y DESPROTEINIZACION

V

DOSIFICACION CIANOCOBALAMINA 1

V

% TRANSCOBALAMINA I y II

moleculares, tipo Sephadex G-150, obtendremos dos nuevos eluidos, en primer lugar la proteína de mayor peso molecular (Transcobalamí­na III) y a continuación la de menor peso molecular (Transcoba­lamina II).

Por este procedimiento podemos aceptar como valores normales los siguientes:

Transcobalamína I: 15-20 %. Transcobalamina II: 60-70 % . Transcobalamina III: 10-15 % .

En la práctica dada la complicación técnica que representa la sepa­ración analítica de la Transcobalamina III y consiJerando todavía dudosa su significación, en muchos trabajos, el nuestro incluido, se mide solamente la Transcobalamina I y el complejo Transcobalamina II-III.

E. GlMFERRER. LAS TRANSBOLAMINAS 1023

ALTERACIONES PATOLÓGICAS DE LAS TRANSCOBALAMINAS.- Como decíamos más aniba, es a partir de la patología que se ha intentado descifrar la fisiología del transporte de la vitamina B12, y dentro de las diversas enfermedades, han sido muy estudiadas ciertas hemopatías con resultados desgraciadamente todavía muy insatisfactorios que sin­tetizaremos a continuación. Por ser los niveles hemáticos de vitamina B12 transcobalamin-dependientes, hablaremos de niveles de vitamina y niveles de Transcobalamina. Leucemia mieloide crónica.- Hipervitaminosis B12: Es un hecho constatado por muchos autores . Algunos de ellos, hallan niveles de B12 intensamente aumentados, hasta de 20 veces su valor normaP· 33• 36 Otros los encuentran más discretamente elevados.40• Según FISCHER/8 prácticamente el 90 % de leucemias mieloides crónicas tienen en el momento del diagnóstico cifras superiores a 2.000 pg. por ml., siendo las cifras medias halladas por este último en una serie de 47 casos, la de 5.292 pg. Este dato parece tan específico como el propio cromo­soma Philadelphia, habiendo descrito BRITT 4 un caso de LMC Phila­delphia negativo con hipervitaminosis B12. En cambio, RosNER 40 cita otro caso de Philadelphia positivo con n ivel de B12 sérica persisten­temen te normal.

Evolución de los niveles de vitamina B12: Al iniciarse la terapéu­tica y descender las cifras de leucocitos, desciende también el nivel de B12 sérica, normalizándose ambos parámetros en paralelo durante la remisión 15 y durante los eventuales . períodos de aplasia terapéutica.45 Según algunos autores este descenso es sólo parcial, alcanzándose nive­les de aproximadamente el 50 % de los ·iniciales. Según otros autores, persisten niveles ligeramente elevados.18• 33 FISCHER 18 no admite dicho descenso como fenómeno constante y lo admite en cambio en las crisis blásticas, y ahí es donde se acentúan los desacuerdos puesto que Do­SICK 16 cita un caso de hipervitamínemia persistente en una LMC Ph posí ti va a pesar de la aplasia terapéutica provocada en el curso de la enfermedad. FISCHER 40 cita tres casos en los que dura11te las remisiones se en­cuentran elevaciones invariables de la vitaminemia que persisten hasta el exitus de los pacientes. ZITTOUN 45 considera variable el comporta­miento de dicho parámetro según el tipo de celularidad hallada en la crisis blástica. Transcobalamina en la LMC: Está aumentada la Transcobalamine­mia libre y la total. La hipervitaminemía B12 que como hemos visto es habitual en la LMC, depende de un aumento previo del nivel de Transcobalamina I circulante, por lo que al hallarse este transportador marcadamente aumentado en dicha enfermedad, retendrá prácticamente cuanta Vitamina B12 se ofrezca a su «binding>>, quedándole todavía un buen margen latente de capacidad insaturada, de hasta 5-10 veces su

1024 ANALES DE .\IEDICINA

valor habitual '· 2• 7· 28

• 30

• n o algo inferior .40 Se demuestra que la res­ponsable es la Transcobalamina I, porque este es el transportador que capta la vitamina B12 radioactiva añadida in vitro al suero de estos enfermos.29 Por otra parte, también se halla ligeramente elevado el nivel de Transcobalamina II 10 aunque según ciertos autores está dis­minuido.25 En cualquier caso el cociente II : I está netamente dismi­nuido e incluso invertido. Durante las remisiones disminuye la canti­dad de Transcobalamina I circulante igual que en ciertas agudizacio­nes.37 Parece que esta Transcobalamina I es antigéoicamente normal, referida a la de individuos sanos 18 de modo que es de suponer que el factor responsable de las cifras elevadas de vitamina B12 es realmente la presencia de una cantidad elevada de transportador y no una mayor capacidad de captación de vitamina por molécula del mismo. A pesar de ello, algunos autores muestran alguna diferencia en el carácter elec­troforético de esta Transcobalamina,18 y lo atribuyen a la presencia de cantidades variables de ácido siálico en la misma 17 por lo que dudan de que se trate de Transcobalamina I genuina normal. CARMEL 7 cree que esta Transcobalamina distinta es la descrita por él, y llamada Transco­balamina III, sintetizada por células mieloides maduras, siendo sólo las células inmaduras las que sintetizarían Transcobalamina I. Sobre este aspecto volveremos a continuación.

Leucocitosis no leucémicas.- Admitiendo que la Transcobalamina I es sintetizada y segregada por los granulocitos maduros 14 carecería de valor cualquier afirmación de modelo específico en la malignidad mieloide si no se comprobase un modelo netamente distinto en las Jeucocitosis benignas con pollnucleosis secundarias o sea en las no pri­mitivamente hematológicas. Desgraciadamente aquí existen demasiadas controversias. De entrada en estas leucocitosis se halla un nivel de vitamina B12 sérica sólo moderadamente elevado 2 y no se muestra elevación de la Transcobalamina libre en los trabajos de los clásicos MILLER,32 CAlu.fEL 10 y HALL.27 Dicha elevación parece relacionada con la leucocitosis y no con su causa,31 siendo máximos los niveles de la Trans­cobalamina en las leucocitosis leucemoides.10

• 23

• 27

• 33

CARMEL refiere 10 en sus primitivos trabajos un modelo idéntico al de la LMC en lo que se refiere a la Transcobalamina, aunque da valor dife­rencial a la normalidad de la Transcobalamina II, cuya elevación por otra parte otros autores muestran como especifica, junto a la normalidad de la Transcobalaminemia total.9• 36•

40• En otro trabajo, CARMEL 6 da como

normales a la vitaminemia y a la transcobalaminemia y sólo admite un ligero aumento de la capacidad latente (dependiente de la Transcobala­min III?). Admitiendo dicho aulor que la Transcobalamina III es el transportador de las células maduras se explicaría el confusionismo de la literatura del tema por no haberse efectuado sistemáticamente en los últimos trabajos publicados por la mayoría la determinación de los niveles de las tres Transcobalaminas por separado.

E. GJMFERRER. LAS TRANSBOLAMlNAS 1025

Creemos en este aspecto bastante trascendentales los recientes tra­bajos de CARMEL 5• 6 en los que revisa 41 leucocítosis no mielósicas de diversas etiologías, hallando en el 88 % de los casos vitaminemia B12 normal con Transcobalamina alta relacionada con el nivel real de leuco­citosis (pool leucocitario global). La transcobalamina responsable de esta elevación es según el autor la Transcobalamina III, reafirmándose en su propia doctrina 7 de la secreción de dicho transportador a cargo de las células granulocíticas maduras. Inversamente en las leucopenias (agranulocitosis, aplasias), se des­cribe Vitaminemia B12 normal 33 o baja con túveles de Transcobalamina también bajos.23

Leucemia mieloide aguda. - Las leucemias mielomonocíticas se comportan de modo idéntico que las Mieloides crónicas 11•

12•

45 especial­mente las promielocíticas.38 Las leucemias agudas indiferenciadas cursan con normalidad de vitaminemia y del transportador.3•

33•

38•

45 También en este terreno hay algunas discrepancias, citándose niveles altos de vitaminemia con transportador normal en casos RACHMILEWITZ 38 o la elevación de ambas en casos de ROSNER.40 Otras hemopatías.- Respecto a las leucemias linfáticas crónicas y agudas, las mielofibrosis y mielomatosis y diversas anemias existe acuer­do general de aceptar la normalidad de estos parámetros 33

• 45 con algu­nas discrepancias 28• 40 que creemos no son muy significativas. En la po­licitemla Vera ha sido descrito también un elevado nivel de Vitamina y transportador con disminución del cociente II : I 33

• 40 considerándose útil este modelo específico en el diagnóstico diferencial con las eritroci­tosis secundarias.t9 El tratamiento normalizaría estos resultados.26 ENFERMEDADES NO HSMATOLÓGICAS.- Hepatopatías.- La mayo­ría de autores están de acuerdo en que existe una elevación de los tuve­les de vitamina circulante cuando se produce una lisis de la célula hepá­tica (hepatitis) o cuando el hígado por su parenquimopatía es incapaz de toma1·la vitamina B12 y almacenarla (cirrosis) o cuando suceden am­bos fenómenos.21

• 34

• 35

• 39

• 41

No parece aumentada la Transcobalamina libre, por lo cual el índice de saturación es alto. La hepatopatía es la única entidad en la que se habla de la Vitamina B12 sérica no enteramente transcobalamindepen­diente, debida a la existencia de ciertos polipéptidos circulantes de es­caso peso molecular (aproximadamente 10.000) capaces de captar coen­zima y que contribuirían al mantenimiento de estos elevados niveles de vitamina B12.39

Ttaltscobalaminopatías congénitas.- CARMEL 8 describió la ausen­cia congénita de la Transcobalamina I, disgenesia que no afecta en abso­luto a la normal utilización de la Vitamina B12 por parte de las células, por lo que la entidad cursa sin sintomatología alguna clínica no bioló­gica. Falta el hallazgo de más casuística para discutir la trascenden·

1026 ANALES DE MEDICINA

cía fisiológica de este transportador, que al parecer y juzgado por este único caso, no es un transportador imprescindible en el ciclo meta­bólico de la vitamina B 12.

No sucede lo mismo respecto a la Transcobalamina II, cuya ausen­cia congénita ha sido también descrita en un caso de HAKAMI 24 en que se detecta ya en las primeras semanas de la vida extrauterina junto a w1os niveles de B12 sérica normales, una malabsorción y transporte anómalo de la coenzima dependiente de la ausencia de este transpor­tador, lo que produce una grave pancitopenia con anenúa megaloblás­tica debida a la mala utilización de la vitamina B12, procedente de la Transcobalamina I , respondiendo hasta la actualidad el enfermo sólo a grandes dosis de B12 periódicas y frecuentes 42 y a la plasmoterapia con aporte del transportador fresco.

Transcobalaminopatías inmunológicas. - Ha sido descrito por SKOU­BY 44 un auto anticuerpo anti-transcobalamina II formador de comple­jos circulantes B12-Transcobalamina II-Anti-Ttanscobalamina II sin consecuencias clínico biológicas . Dicho anticuerpo fue producido por un individuo tratado largo tiempo con Hidroxicobalamina de lenta absorción, por una anemia perniciosa. El complejo era responsable de una elevación de la vitaminemia sérica y de su lento aclaramiento plasmático.

NUESTRA EXPERIENCIA PERSONAL. -En nuestros medios, dada la no disponibilidad de contador de partículas «gamma» adecuado, y te­niendo en cuenta el interés todavía actual de los métodos microbiológi-

, cos de los que se mide auténtica actividad vitamínica, hemos recurrido a dichos métodos siempre que nos hemos hallado ante la necesidad de calcular niveles de Vitamina B12 en cualquier ensayo in vitro. La semi­automatización de dichos métodos ha permitido obtener un relativo rendimiento . Así pues, de una forma en este aspecto original, hemos utilizado la técnica de determinación cuantitativa de la Transcobalami­nemia de GoTTLIEB 22 cuyo fundamento ha sido descrito al principio de este trabajo, con la modificación final de efectuar las mediciones de ni­veles de vitamina por el ensayo de Lactobacilus Leichrñanii según méto­do descrito previamente por nosotros.2°

De un modo parecido hemos utilizado la técnica de separación cuali­tativa seguida a su vez de una nueva cuantitación porcentual de las transcobalami11as descritas por SILVERSTEIN y HERBERT 43 modificada por el uso del método microbiológico para calcular la cantidad absoluta de coenzitúa de los eluidos.

Los resultados inicialmente obtenidos por ambas técnicas en pobla­ción sana se exponen en las tablas 1 y 2.

Sin embargo en la actualidad estamos sometiendo a esta técnica a unas severas comprobaciones en cuanto a la reproductibilidad y preci­sión analítica puesto que hasta el momento no estamos totalmente sa-

E. GlMFERRER. LAS TRANSBOLAMINAS 1027

TABLA N.0

l. - Dosificación T ranscobalamina

Muestra B12 T ranscobalamina (Binding cap.) Indice sat. N.o suero libre total % 1 680 830 1.510 45 2 1.355 1.046 2.041 56 3 1.200 150 1.350 88 4 1.400 600 2.000 70 5 1.400 2.360 3.750 37 6 280 3.562 3.842 7 7 1.025 1.276 2.301 44 8 475 876 1.341 35 9 870 680 1.550 56 10 1.015 2.122 2 .137 32 11 875 1.966 2.841 30 12 700 1.840 2.540 27 13 650 2.340 2.990 21 14 650 1.890 2.540 25 15 810 780 1.590 50 16 870 1.660 2.530 34 17 565 1.988 2.553 22 18 1.035 1.588 2.623 39 19 645 1.333 1.978 32 20 675 2.176 2.851 23

Origen de las muestras: Donantes de sangre no retribuidos. Técnica: GOTLIEB y col. modificada.

Vit. B12 expresada en pg. por ml.

tisfechos, teniendo a punto de completar un trabajo sobre el valor real y el grado de reproductibilidad del método, basándonos en una casuística' más copiosa y en algunas modificaciones interesantes efec­tuadas a la técnica inicial.

DISCUSIÓN FINAL.- De la revisión global de la li teratura mencio­nada, especialmente de las revisiones hechas por algunos clásicos del estudio de los Factores de Maduración tales como H ERBERT 28 y MEYER,1 junto con nuestra experiencia creemos que hay que tener en cuenta los siguientes puntos:

1.0

Las dificultades técnicas, debidas: a las pequeñísimas cantida­des manejadas tanto de ciancobalamina como de transportador, a la metodología en sí misma, al no uso de las auténticas coenzimas BJ 2 fi. siológicas como sustratos de saturación in vitro .

1028 ANALES DE MEOlCINA

TABLA N.0 2.- Fraccionamiento T ranscobalamina

Muestra B12 Transcobalamina Transe. II Transe. N.o suero total %

1 680 1.510 83 2 1.355 2.401 67 3 1.200 1.350 74 4 1.400 2.000 5 1.400 3.750 63 6 280 3.842 49 7 1.025 2.301 62 8 475 1.341 61 9 870 1.550 58

10 675 2.975 87 11 1.035 2.623 60 12 645 1.978 74 13 675 2.851 71

Origen de las muestras: Donantes de sangre no retribuidos. Técnica: SrLVERSTEIN y HERBERT modificada. ·

Vit. B12 expresada en pg. por ml.

%

17 33 26

37 51 38 39 42 13 40 26 29

I

2.0 La descripción de modelos patológicos antes de conocerse per­

fectamente el modelo fisiológico, e incluso en estos modelos patológicos,

la existencia de múltiples controversias muchas de ellas metodológico­

dependientes, aparte del «conclicionarniento» ínter-autores por la co­

piosísima literatura hasta 1971 inclusive. 3.0 Podemos considerar como realmente interesantes las elevacio­

nes de nivel sérico de Vitamina B12 en la Leucemia Mieloide crónica

y en las hepatopatias parenquimatosas. En este sentido se requiere la

práctica de series casuísticas largas, y tratar de establecer correlaciones

en otros parámetros biológicos interesantes (citogenéticos, bioquímicos,

enzimáticos, cítoquímicos, isotópicos) y clínicos (historia natural de la

enfermedad, evolución terapéutica, etc ... ). Concretamente en lo que se

refiere a las mielosis, hemos de apuntar como sugestivas: la investiga­

ción simultánea de la vitamina B12 sérica, Transcobalaminas, pool leu­

cocitario global por método isotópico, enzimas intra y extracelulares (fos­

fatasas, muramldasa) y cromosoma Philadelphia, etc., algunas de estas

correlaciones por otra parte ya en vías de estudio por algunos autores.13

4.0 Trabajando en todo momento con un máximo nivel de calidad

técnica y con métodos adecuados, creemos que el estudio de la Vitamina

B12 y sus transportadores tanto en sangre como en humores orgánicos,

una vez esclarecido el modelo fisiológico, puede contribuir al perfila-

E. GIMFERRER. LAS TRANSBOLAI\HNAS 1029

miento y creacwn de nuevos patrones clasificatorios, diagnósticos, pro­nósticos y evolutivos de ciertas enfermedades complejas quizás estu­diadas poco objetivamente hasta la actualidad en el aspecto bioló­gico, en especial aquellas enfermedades referidas anteriormente.

E . GrMFERRER, del Sei'Vicio de Hematología del Hospital de la Santa Cruz y

San Pablo. Jefe de la Secciótt de A11emias

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