API Industry General

The Global Reference for Identification

IDENTIFIKASI

Morfologi Pengamatan bentuk koloni dan mikroskopik

Genetik

Biokimia

Teknik biologi molekuler

Reaksi terhadap substrat biokimiawi, termasuk reaksi enzimatik

Serologi

Reaksi antigen dan antibodi spesifik

Sistem identifikasi untuk bakteri dan jamur Dalam 1 strip terdapat 10 atau 20 substrat reaksi biokimiawi Tipe reaksi biokimiawi :

- Enzimatik - Assimilasi- Inhibisi

Total database =± 822 organisme (taksonomi berdasarkan pada International Journal of Systemic Bacteriology)

Microtube berisi substrat kering

Tes enzimatik : menggunakan substrat kromogenik atau fluorogenik, seperti : aminopeptidase (Beta-alanine arylamidase), lipase, esterase, oxidase, ONPG, betaGAL, phosphatase

Tes asimilasi : menggunakan sumber karbon yang unik,

pendeteksian berdasarkan reaksi kekeruhan

seperti : karbohidrat, asam amino, asam organik

Tes inhibisi : menggunakan antibiotik atau substrat toksik, pendeteksian berdasarkan reaksi kekeruhan

range

Jenis strip Gol. Bakteri/jamur InkubasiAPI 20EAPI 20E Gram negative Bacilli 24 jamAPI10E/10SAPI10E/10S Enterobacteria 24 jamRAPID 20ERAPID 20E Enterobacteria 4 jamAPI 20 NEAPI 20 NE Non Enterobacteria 24-48jamAPI StaphAPI Staph Staphylococci 24 jamAPI 20 StrepAPI 20 Strep Streptococci 4-24 jamAPI 20 C AuxAPI 20 C Aux Yeasts 24-48 jamAPI CandidaAPI Candida Yeasts 24 jamAPI 20AAPI 20A Anaerobes 24-48 jam API CampyAPI Campy Campylobacter 24 jamAPI CoryneAPI Coryne Corynebacteria 24 jamAPI NHAPI NH Neisseria/Haemophilus 2 jamAPI ListeriaAPI Listeria Listeria 24 jamAPI 50 CHBAPI 50 CHB Bacillus 24-48 jamAPI 50 CHLAPI 50 CHL Lactobacillus 24-48 jamAPI 50 CHEAPI 50 CHE Enterobacteria 24-48 jam

Gallery

Bagaimana cara memilih strip?

Lakukan tes orientasi :

• Morfologi koloni• Pewarnaan Gram • Tes katalase • Tes oksidase

Kelengkapan

Mineral oilMineral oil

StripStripPSIpettes/ pipet steril

rak

Reagen tambahanReagen tambahanIncubation boxIncubation box

Medium suspensiMedium suspensi

Prosedur Kerja

Suspensi

(McF)

Koloni

Inokulasi

HASILHASIL

Inkubasi

Pembacaan : Penambahan reagent

transfer

Prinsip Inokulasi

GLU

Oil

ADH CIT

« anaerob fakultatif » « anaerobic » « aerobic »

Oil

Pembacaan : Deteksi

Setelah proses inkubasi Reaksi dideteksi dengan cara :

perubahan warna secara spontan atau dengan penambahan reagent tambahan

Penyimpanan Penyimpanan :: 2 - 8°C2 - 8°C

VPB - NIT 2 - XYL - VP2 – HER

Dalam kondisi gelap :Dalam kondisi gelap : bungkus dengan aluminium foil

FB - FVB - ZYM B - NIN – PYZ – James - VP2

2 - 30°C2 - 30°C» VPA - VP1 - NIT 1 - Zn- BCP – TDA - ZYM A

Pembacaan

Reaksi setelah inkubasi

Perubahan warna secara spontan

Perubahan warna dengan penambahan reagent

Pembacaan : Deteksi

Gunakan tabel pembacaan (dalam package insert) dan isi dengan kode ( + ) atau ( - )

Kode tersebut ditransformasikan menjadi profil numerik dengan menggunakan prinsip pengkodean :

setiap tes pada strip dibagi menjadi 3 grup setiap tes bernilai : 1, 2 atau 4

Kertas Kerja

7 angka profile 3604512

Hasil identifikasi dari software

Test tambahan

PROSEDUR

INTERPRETASI

Persentase reaksi positif untuk setiap reaksi dan takson

Taxon = base unit• Species• Biotype• Genus• Species group

bioMérieux Taxonomy = official taxonomy• International Journal of systematic bacteriology

INTERPRETASI

CONTOH :

INTERPRETASI

Identifikasi bakteri berdasarkan pada perbandingan profile terhadap database takson

Perbandingan memperhitungkan profile yang diperoleh dengan cara :

Mencari kesamaan dari berbagai takson yang berbeda dari database

% ID (Persen Identifikasi) Apakah isolat mikroorganisme tersebut berkaitan dengan suatu takson dalam database?Takson yang mana?

Mencari kesamaan dari typical profile dari setiap takson

Typicity index (T Index )Apakah isolat bakteri benar-benar terkait dengan takson tersebut ?

Interpretasi

Taxon xA

B

C

Persen Identifikasi :% ID

• Nilai mendekati 100%• Kedekatan relatif ke berbagai takson dalam database

Typicity index:T

C

the most typical profile

Taxon x

00

• Nilai mendekati 1 • Mendekati typical profile tertentu

Interpretasi

Setiap hasil identifikasi selalu dilengkapi dengan

HARUS DILIHAT PERTAMA KALI: menunjukkan tingkat hasil identifikasi berdasarkan pada % of id, dan index T

excellent identification » % id > 99.9 et T > 0.75 « very good identification » % id > 99 et T > 0.5 « good identification » % id > 90 et T > 0.25 « acceptable Identification » % id > 80 et T > 0

Low discrimination : sistem tidak dapat membedakan 2 takson atau lebih Doubtful profile : terdapat tottaly test againts

INTERPRETASI

Against tests: ?

Partially against tests

• Jika persentase positivitas < 25% dan test +• Jika persentase positivitas >75% dan test -

Totally against tests

• Jika persentase positivitas = 0% dan test +• Jika persentase positivitas 100% dan test –

INTERPRETASI

Low discrimination : lakukan complementary tests Doubtful profile (test totally totally against) cek :

Kontaminasi

A typical organism

Technical errors (mineral oil, reagent, shelf-life …)

Ulang pengerjaan

INTERPRETASI

APIweb

Tes orientasi

Isolat muda

Isolat murni

Media yg standard

Kekeruhan

inokulum

Cara Inokulasi

Inkubasi

Rekomendasi Teknis

Penyimpanan reagent

QUALITY CONTROLWhy ???

Memvalidasi proses transportasi strip API

Kualifikasi teknisi/pengguna

When ???

Setiap nomor lot baru

Setiap ada teknisi baru

How ???

Gunakan strain ATCC yang direkomendasikan oleh bioMérieux

Rekomendasi Teknis