ANTI TPO

Anti-TPO Ab

IMMULITE® 2000 Anti-TPO Ab

2 IMMULITE 2000 Anti-TPO Ab (PIL2KTO-16, 2005-04-05)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement ofantithyroid peroxidase (TPO) antibodies inserum and EDTA plasma, as an aid in theclinical diagnosis of thyroid diseases.Catalog Number: L2KTO2 (200 tests)L2KTO6 (600 tests)Test Code: ATA Color: Aqua

Summary and ExplanationAntithyroid peroxidase (TPO) antibodiesare autoantibodies directed against thethyroid peroxidase enzyme. This enzymecatalyzes the iodination of tyrosine inthyroglobulin during the biosynthesis of T3and T4.2

Historically, these antibodies were referredto as antimicrosomal antibodies (AMA)because the antibodies bind to themicrosomal part of the thyroid cells.Recent research has identified thyroidperoxidase as the primary antigeniccomponent of microsomes.2,3,13

Thyroid autoimmune disease is the majorfactor underlying hypothyroidism andhyperthyroidism and tends to occur in agenetically predisposed population.The major thyroid autoimmune diseasesare: Hashimoto's thyroiditis and Graves'disease.13 In virtually all cases ofHashimoto's disease and in the majority ofGraves' disease cases, TPOautoantibodies are elevated.13 High levelsof TPO autoantibodies, in the context ofthe clinical presentation of hypothyroidism,confirms the diagnosis of Hashimoto'sdisease.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 Anti-TPO Ab is a solid-phase, enzyme-labeled, chemiluminescentsequential immunometric assay.Incubation Cycles: 2 × 30 minutes.

Specimen CollectionThe use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.

Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2000 Anti-TPO Ab has notbeen tested with all possible variations oftube types. Consult the section onAlternate Sample Types for details ontubes that have been tested.Volume Required: 5 µL sample.Storage: 2 days at 2–8°C, or for longerperiods frozen at –20°C.Automatic Predilution Factor: 100.

Dispense required volume of diluent(L2AAZ) to a suitable test tube withbarcode label applied.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with large

IMMULITE 2000 Anti-TPO Ab (PIL2KTO-16, 2005-04-05) 3

volumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

Anti-TPO Ab Bead Pack (L2TO12)With barcode. 200 beads, coated withhighly purified human TPO. Stable at2–8°C until expiration date.L2KTO2: 1 pack. L2KTO6: 3 packs.

Anti-TPO Ab Reagent Wedge (L2TOA2)With barcode. 11.5 mL buffer matrix, withpreservative. 11.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to monoclonal murine anti-human IgG in buffer, with preservative.Stable at 2–8°C until expiration date.L2KTO2: 1 wedge. L2KTO6: 3 wedges.Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

Anti-TPO Ab Adjustors (LTOL, LTOH)Two vials (Low and High), of lyophilizedTPO autoantibodies in a humanserum/buffer matrix, with preservative. Atleast 30 minutes before use, reconstituteeach vial by adding 4.0 mL distilled ordeionized water. Mix by gentle swirling orinversion until the lyophilized material isfully dissolved. (No further dilution isrequired.) Aliquot and freeze in tightlycapped plastic containers. Avoid repeatedfreeze/thaw cycles. Stable at 2–8°C for7 days after reconstitution, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.L2KTO2: 1 set. L2KTO6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Thyroid Autoantibody Sample Diluent(L2AAZ)Test code: TAD. For the on-board dilutionof patient samples. 50 mL concentrated

(ready-to-use) anti-TG/anti-TPO antibody-free buffer matrix, with preservative.Stable at 2–8°C for 30 days after opening,or 6 months (aliquotted) at –20°C.L2KTO2: 1 vial. L2KTO6: 3 vials.

Barcode labels are provided for use withthe diluent. Before use, place anappropriate label on a 16 × 100 mm testtube, so that the barcodes can be read bythe on-board reader.L2KTO2: 3 labels. L2KTO6: 5 labels.

Kit Components SuppliedSeparatelyL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes(16 × 100 mm)L2ZC: 250 Sample Diluent Tube CapsLAACM: Bi-level control module.

Also RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.

Quality Control Samples: Use controlsor serum pools with at least two levels(low and high) of TG and TPOautoantibodies.

Expected ValuesBased on its relationship to DPC'sIMMULITE Anti-TPO Ab (see MethodComparison), the assay can be expectedto have essentially the same referenceranges.

Thyroid peroxidase autoantibodies areunique for each patient; therefore, eachpatient sample will show its own individualbinding characteristics. Normal levels formost patients have been defined as less


than 35 IU/mL for the IMMULITE Anti-TPOAb assay. A numerical result greater thanor equal to 35 IU/mL indicates an elevatedanti-TPO level in serum, whereas a resultless than 35 IU/mL indicates a normalanti-TPO level in serum. However, due toindividual variability it is also possible thata normal patient with no history of thyroiddisease may have reproducible elevatedvalues greater that 35 IU/mL.Two studies are presented below thatdemostrate the variability between tworandom populations.

Using the IMMULITE Anti-TPO Ab assay,the levels of TPO autoantibodies weredetermined for 75 apparently healthysubjects (26 males and 49 females), withages ranging from 13 to 87 years. All hadnormal TSH levels, and none had thyroidautoimmune disorders. Using therecommended 35 IU/mL cutoff, 79%(59/75) of the subjects had normal anti-TPO values. The following histogramshows the distribution of subjects fordifferent levels of TPO autoantibodies.

In another study, IMMULITE Anti-TPO Abprocedure was used to determine the TPOautoantibody levels of 130 apparentlyhealthy subjects. Using the recommended35 IU/mL cutoff, 92% (118/130) of thesubjects had normal anti-TPO values. Thedistribution of subjects for different levelsof TPO autoantibodies is presented in thefollowing histogram.

Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsFor diagnostic purposes, anti-TPO resultsshould be used in conjunction with othertest results, the overall clinicalpresentation to the physician, and all otherapproriate information. Autoantibodiesmay be found in less than 10% of thenormal population at low levels and inpatients with non-thyroidial illnesses, suchas the inflammatory rheumatic diseases.14

Patient TPO autoantibodies and theantibodies used for calibrating the assaymay differ in their binding properties. Thismay lead to deviations from strict dilutionalparallelism for certain patient samples.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.


Results are expressed in IU/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Calibration Range: up to 1,000 IU/mL(WHO 1st IRP 66/387).Analytical Sensitivity: 5.0 IU/mLHook-Effect: None up to 16,624 IU/mL.

Intraassay Precision: Statistics werecalculated for six samples from the resultsof 20 replicates in a single run. (See“Intraassay Precision” table.)Interassay Precision: Statistics werecalculated for six samples assayed in 12different runs. (See “Interassay Precision”table.)Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree anti-TPO Ab solutions (63, 207 and520 IU/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 20 volunteers intoplain, heparinized, EDTA and BectonDickinson SST® vacutainer tubes. Equalvolumes of the matched samples werespiked with various concentrations of TPOautoantibodies, to obtain valuesthroughout the calibration range of theassay, and then assayed by theIMMULITE 2000 Anti-TPO Ab procedure.(Heparin) = 0.84 (Serum) + 17 IU/mLr = 0.984

(EDTA) = 0.89 (Serum) + 15 IU/mLr = 0.981

(SST) = 0.88 (Plain Tubes) + 17 IU/mLr = 0.984

Means:299 IU/mL (Serum)268 IU/mL (Heparin)282 IU/mL (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirubin: Presence of bilirubin inconcentrations up to 200 mg/L has noeffect on results, within the precision of theassay.

Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 381 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.

Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Method Comparison: The assay wascompared to DPC's IMMULITE Anti-TPOAb on 246 samples. (Concentration range:approximately 10 to 1,000 IU/mL. Seegraph.) By linear regression:(IML 2000) = 0.97 (IML) – 2.6 IU/mLr = 0.987

Means:188 IU/mL (IMMULITE 2000)197 IU/mL (IMMULITE)

References1) Becker W, Reimers C, Börner W.Immunological criteria for the differentialdiagnosis of thyroid disease. Therapiewoche1985;35:1167-76. 2) Czarnocka B, Ruf J,Ferrand M, et al. Purification of the humanthyroid peroxidase and its identification as themicrosomal antigen involved in autoimmunethyroid diseases. FEBS lett. 1985;190:147-52. 3) Czarnocka B, Ruf J, Ferrand M, et al.Interaction of highly purified thyroid peroxidasewith anti-microsomal antibodies in autoimmunethyroid diseases. J Endocrinol Invest1986;9:135-8. 4) Ruf J, Czarnocka B, FerrandM, et al. Thyroid peroxidase is the organ-specific'microsomal' antigen involved in thyroidautoimmunity. Acta Endocrinol (Copenh)1987;Suppl. 281: 49-55. 5) Ruf J, Czarnocka B,Ferrand M, et al. Relationship betweenimmunological structure and biochemicalproperties of human thyroid peroxidase.Endocrinol 1988;125 (3):1211-8. 6) Horster FA.The importance of MAK, TAK, TRAK andthyroglobulin in the diagnosis of thyroid disease.Internist 1988;29:538-40. 7) Schatz H, Löbig H.The diagnostic and prognostic importance ofantibodies against thyroid microsomes andthyroglobulin. Akt Endokr Stoffw 1989;10:146-53. 8) Hashimoto H. Understanding thelymphatic changes of the thyroid. Arch Klin Chir1912;97:219-48. 9) Libert F, Ruel J, Ludgate M,et al. Thyroperoxidase, an auto-antigen with amosaic structure made of nuclear andmitochodrial gene modules. EMBO J1987;6:4193-6. 10) McKenzie JM, Zakarija M,Sato A. Humoral immunity in Graves' disease.Clin Endocrinol Metab 1978;7:31-45. 11)Scherbaum WA, Berg PA. The importance ofautoantibodies in the diagnosis of endocrinedisease. Dtsch Med Wschr 1981;106:308-13. 12) Scherbaum WA, Berg PA. Thyroidautoimmune disease – new aspects indevelopment and diagnosis. Dtsch Med Wschr1984;109:1574-81. 13) Feldt-Rasmussen U.Analytical and clinical performance goals fortesting autoantibodies to thyroperoxidase,thyroglobulin, and thyrotropin receptor. ClinChem 1996;42:160-3. 14) Wild D, editor. The


immunoassay handbook. Great Britain: StocktonPress, 1994: 342-3.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Intraassay Precision (IU/mL)

Mean1 SD2 CV3

1 46 2.4 5.2%

2 88 4.6 5.2%

3 177 13 7.4%

4 274 12 4.4%

5 458 22 4.8%

6 668 49 7.3%

Interassay Precision (IU/mL)

Mean1 SD2 CV3

1 53 3.8 7.2%

2 71 2.3 3.2%

3 160 9.5 5.9%

4 349 15 4.3%

5 515 29 5.6%

6 677 48 7.1%

Method Comparison

(IML 2000) = 0.97 (IML) – 2.6 IU/mLr = 0.987

Linearity (IU/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 219 — —

4 in 8 109 110 99%

2 in 8 57 55 104%

1 in 8 27 27 100%

2 8 in 8 394 — —

4 in 8 218 197 111%

2 in 8 103 99 104%

1 in 8 52 49 106%

3 8 in 8 474 — —

4 in 8 253 237 107%

2 in 8 131 119 110%

1 in 8 59 59 100%

4 8 in 8 547 — —

4 in 8 255 274 93%

2 in 8 129 137 94%

1 in 8 62 68 91%

5 8 in 8 651 — —

4 in 8 336 326 103%

2 in 8 166 163 102%

1 in 8 88 81 109%

6 8 in 8 932 — —

4 in 8 478 466 103%

2 in 8 223 233 96%

1 in 8 110 117 94%


Recovery (IU/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 54 — —

A 97 114 85%

B 244 264 92%

C 503 571 88%

2 — 115 — —

A 149 172 87%

B 307 319 96%

C 589 629 94%

3 — 133 — —

A 187 189 99%

B 346 336 103%

C 560 646 87%

4 — 186 — —

A 238 239 100%

B 382 386 99%

C 625 697 90%

5 — 251 — —

A 284 301 94%

B 427 448 95%

C 653 758 86%

Deutsch. Intraassay Precision, InterassayPrecision: 1Mittelwert, 2SD (Standardbereich),3CV (Variations-koeffizient). Linearity:1Verdünnung, 2Beobachten (B), 3Erwarten (E),4% B/E, 58 in 8. Recovery: 1Lösung,2Beobachten (B), 3Erwarten (E), 4% B/E.

Español. Intraassay Precision, InterassayPrecision: 1Intraensayo, 2Total, 3Media, 4DS,5CV. Linearity: 1Dilución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery:1Solución, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Method Comparison. Anti-TPO Ab:Anticuerpos Anti-TPO.

Français. Intraassay Precision, InterassayPrecision: 1Moyenne, 2DS, 3CV. Linéarité:1Dilution, 2Observée (O), 3Attendue (A), 4%O/A,58 dans 8. Test de récupération: 1Solution,2Observée (O), 3Attendue (A), 4%O/A.

Italiano. Intraassay Precision, InterassayPrecision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard),3CV (Coefficiente di Variazione). Linearity:1Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A,58 in 8. Recovery: 1Soluzione, 2Osservato (O),3Atteso (A), 4%O/A.

Português. Intraassay Precision, InterassayPrecision: 1Média, 2Desvio padrão, 3Coeficientede variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado(O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:

1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E.

Deutsch

ANTI-TPO ABVerwendungszweck: Für in-vitro-diagnostische Tests mit dem AnalysegerätIMMULITE 2000 – zur quantitativenMessung von Autoantikörpern gegenSchilddrüsen-Peroxidase im Serum undPlasma.Artikelnummern: L2KTO2 (200 Tests),L2KTO6 (600 Tests)Testcode: ATA Farbe: türkis

Klinische RelevanzAnti Thyreoperoxidase (TPO) Antikörpersind Antikörper gegen die Peroxidase derSchilddrüse. Diese Enzym katalysiert dieIodierung des Thyrosin in der Biosynthesedes T3 und T4 am Thyreoglobulin.Diese Antikörper werden auch häufig alsantimikrosomale Antikörper (AMA)bezeichnet, da sie an den mikrosomalenTeil der Schilddrüsenzellen binden. DieThyreoperoxidase wurde als die primäreantigene Komponente der Mikrosomenidentifiziert.

Autoimmune Schilddrüsenerkrankungensind eine der Hauptursachen für Hypo-und Hyperthyreoidismus. Eine höhereInzidenz dieser Erkrankungen wird beieiner entsprechenden genetischenVeranlagung beobachtet.Die wichtigsten Schildddrüsenauto-immunerkrankungen sind: HashimotoThyreoiditis und Morbus Basedow. Beipraktisch allen Hashimoto Erkrankungenund in der Mehrzahl der Morbus BasedowErkrankungen werden erhöhte TPOAutoantikörperspiegel gefunden. HoheTPO-Autoantikörperspiegel und klinischeZeichen einer Hypothyreose bestätigendie Diagnose der Hashimoto Thyreoiditis.

MethodikIMMULITE 2000 ANTI-TPO AB ist einsequentieller Festphasen-Chemiluminiszenz- immunometrischerAssay.


Inkubationszyklen: 2 × 30 minuten.

ProbengewinnungDer Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zuinterpretierenDie Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000Anti-TPO sind nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 5 µl probe.Lagerung: 2 Tage bei 2–8°C, oder fürlängere Lagerung eingefroren bei –20°C.Verdünnungsfaktor (automatisch): 100.Bitte vor Gebrauch ein Probenröhrchenmit ausreichender Menge Verdünnungs-puffer (L2AAZ) und dem entsprechendenBarcode versehen.

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.

Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle aus

menschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.

Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.

Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Bestandteile der TestpackungDie Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung benötigt.

Anti-TPO Ab Kugel-Container (L2TO12)Barcodiert. Kugel-Container enthält 200Kugeln, beschichtet mit gereinigtem TPO.Gekühlt (2–8°C) haltbar bis zumangegebenen Verfallsdatum.L2KTO2: 1 ContainerL2KTO6: 3 Container

Anti-TPO- Reagenzbehälter (L2TOA2)Barcodiert, Reagenz-Container enthält11,5 ml Puffer-Matrix (mitKonservierungsmittel), sowie 11,5 mlalkalische Phosphatase (Kalb) konjugiertmit monoklonalem Anti-humanen IgG(Maus) in einem Puffer (mitKonservierungsmittel). Gekühlt (2-8°C)haltbar bis zum angegebenenVerfallsdatum.L2KTO2: 1 BehälterL2KTO6: 3 BehälterVor Gebrauch den Aufkleber vorsichtig ander Perforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Bei Einsetzen in das System,den Schiebedeckel nach unten in dieFührung des Reagenziendeckelseinrasten lassen.


Anti-TPO Ab-Kalibratoren (LTOL,LTOH)Zwei Fläschchen jeweils (niedrig und hoch)mit lyophilisiertem TPO Autoantikörper inhumaner Serum-Puffer-Matrix (mitKonservierungsmittel). Mindestens 30 min.vor dem Gebrauch, fläschchen mit 4,0 mldestilliertem oder deionisiertem Wasserrekonstituieren. Zum Mischen leichtschwenken oder umdrehen, bis dasgefriergetrocknete Material vollständigaufgelöst ist. (Muss nicht weiter verdünntwerden.) In fest verschlossenenPlastikbehältern aliquotieren undeinfrieren. WiederholtesEinfrieren/Auftauen vermeiden. NachRekonstituierung 7 Tage bei 2–8°C, sonst6 Monate (aliquotiert) bei –20°C haltbar.L2KTO2: 1 SetL2KTO6: 2 SetZur Kalibrierung die dem Kit beiliegendeAufkleber auf Röhrchen kleben, dieKalibratoren umfüllen und in das Gerätstellen, so dass die Barcodes vomBarcodereader des Systems eingelesenwerden können.

Thyroid Autoantikörper –Verdünnungspuffer (L2AAZ)Testcode: TAD. Zum automatischenVerdünnen der Patientenproben. 50 mlkonzentrierte (gebrauchsfertig) Anti-TG/Anti-TPO-Antikörper-freie Puffer-Matrix (mit Konservierungsmittel). 30 Tagenach dem Öffnen bei2–8°C haltbar oder 6 Monate bei –20°C(aliquotiert).L2KTO2: 1 Flasche. L2KTO6: 3 Flaschen.Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz(Diluents) werden Barcode Etikettenmitgeliefert. Vor Verwendung einentsprechendes Etikett so auf ein16×100 mm Teströhrchen kleben, dass esvom eingebauten Barcode Readergelesen werden kann.L2KTO6: 3 Etiketten.L2KTO6: 5 Etiketten.

Separat erhältliche Testsystem-KomponentenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) ReaktionsgefäßeL2ZT: 250 Teströhrchen (16 × 100 mm)

für die ProbenverdünnungL2ZC: 250 Röhrchenverschlüsse für dieProbenverdünnungLAACM: Bi-level Kontroll Modul.Ebenfalls benötigt:Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Röhrchen; Kontrollen

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.

Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2000-Handbuch.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Qualitätskontrollseren: Kontrollen oderSeren mit TG and TPO Autoantikörpern inzumindest zwei Konzentrationen (niedrigeund hohe) verwenden.

ReferenzwerteAufgrund der guten Korrelation zumIMMULITE Anti-TPO Ab ( sieheMethodenvergleich) ist zu erwarten, daßdieselben Referenzwerte gefundenwerden.

Thyreoperoxidase-Autoantikörper sindspezifisch für jeden Patienten. Aus diesemGrund zeigt jedes Patientenserum eineindividuelle Bindungscharakteristik. Fürden IMMULITE Anti-TPO Ab Assaywurden Werte <35 IU/ml als normaldefiniert. Eine Ergebnis >35 IU/ml zeigterhöhte Anti-TPO-Antikörperspiegel imSerum an. Werte ≤ 35 IU/ml sind alsnormal zu betrachten. Jedoch ist esmöglich, daß bei Patienten ohne Hinweisauf eine Schilddrüsenerkrankungreproduzierbar Werte über 35 IU/mlnachgewiesen werden können.

Die im folgenden Abschnitt dargestellenStudien zeigen die Unterschiede zwischenzwei zufällig ausgewählten Populationen.In Serumproben von 75 anscheinendgesunden Patienten (26 Männer, 49Frauen) im Alter von 13 bis 87 Jahrenwurden mit dem IMMULITE Anti-TPO-Abdie TPO-Autoantikörperkonzentration


bestimmt. Alle zeigten normale TSH-Werte und hatten keineSchilddrüsenautoimmunerkrankung. UnterBerücksichtigung des Cut off Wertes von35 IU/ml hatte 79% (59/75) normale Anti-TPO Werte. Das folgende Histogrammzeigt die Werteverteilung des getestetenKollektivs.

In einer weiteren Studie wurden mit demIMMULITE Anti-TPO Ab die TPOAutoantikörperspiegel in 130 anscheinendgesunden Probanden bestimmt. UnterBerücksichtigung des Cut off Wertes von35 IU/ml hatten 92% (118/130) normaleAnti-TPO Werte. Das folgendeHistogramm zeigt die Werteverteilung desgetesteten Kollektivs.

Betrachten Sie diese Grenzwerte nur alsRichtlinien. Jedes Labor sollte eigeneReferenzbereiche ermitteln.

Grenzen der MethodeFür den diagnostischen Einsatz sollten dieAnti-TPO Ergebnisse nur imZusammenhang mit zusätzlichenTestergebnissen, denUntersuchungsergebnissen des Arztesund allen anderen verfügbarenErgebnissen interpretiert werden. ErhöhteAutoantikörperspiegel werden bei ca. 10%

der gesunden Bevölkerung sowie auch beinicht die Schilddrüse betreffendenErkrankungen, wie entzündlichenrheumatoiden Krankheitsbildern,gefunden.14

Die TPO Autoantikörper in derPatientenprobe und die zur Kalibrationverwendeten Autoantikörper könnenunterschiedliche Bindungscharakteristikaaufweisen. Diese Tatsache kann dieVerdünnungslinearität in einzelnenPatientenprobe beeinflussen.Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als IU/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – aus Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)Meßbereich: Bis zu 1 000 IU/ml (WHO1st IRP 66/387).Analytische Sensitivität: 5,0 IU/ml.

High-Dose-Hook-Effect: Keiner bis zu16 624 IU/ml.Präzision im einzelnen Testansatz(intraassay): 6 verschiedene Probenwurden in 20-fach Bestimmungengemessen und aus den Daten dieIntraassaypräzision berechnet. (SieheTabelle ”Intraassay Precision”.)

Präzision zwischen Testansätzen(interassay): 6 Proben wurden in 12


verschiedenen Ansätzen gemessen undaus den Daten die Interassaypräzisionberechnet. (Siehe Tabelle ”InterassayPrecision”.)Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungsstufengetestet. (Siehe Tabelle ”Linearity” fürrepräsentative Daten.)Wiederfindung: Proben wurden mit dreiLösungen (63, 207 und 520 IU/ml) imVerhältnis von 1:19 versetzt. (SieheTabelle ”Recovery” für representativeDaten.)Alternativer Probentyp: Um dieAuswirkungen von verschiedenenProbenarten zu untersuchen, wurde Blutvon 20 Freiwilligen in Röhrchen ohneAdditiva, in Heparin-, EDTA- und BectonDickinson SST® Vacutainer-Rörchengesammelt. Gleiche Volumina derjeweiligen Proben wurden mitverschiedenen Konzentrationen an TPOAutoantikörpern versetzt, um Werte imgesamten Kalibrationsbereich zu erhalten,und die Proben anschließend mit demIMMULITE 2000 Assay für Anti-TPO Abgemessen.(Heparin) = 0,84 (Serum) + 17 IU/mlr = 0,984

(EDTA) = 0,89 (Serum) + 15 IU/mlr = 0,981

(SST) = 0,88 (einfachen Röhrchen) + 17 IU/mLr = 0,984

Mittelwert:299 IU/ml (Serum)268 IU/ml (Heparin)282 IU/ml (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationenbis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf dieErgebnisse, der größer als die Impräzisiondes Assays selbst ist.Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 381 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Triglyceride hat inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.Methodenvergleich: Der Assay wurdeunter Verwendung von 246Patientenproben mit DPC's IMMULITEAnti-TPO Ab verglichen.

(Konzentrationsbereich: ca. 10 bis1 000 IU/ml. Siehe Grafik „MethodComparison“)Durch lineare Regression:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 2,6 IU/mlr = 0,987

Mittelwert:188 IU/ml (IMMULITE 2000)197 IU/ml (IMMULITE)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

Anti-TPOUtilidad del Test: Para el diagnóstico invitro usado con el Analizador IMMULITE2000 — para la medición cuantativa deanticuerpos anti-peroxidasa tiroidea (anti-TPO) en suero y EDTA plasma, siendouna herramienta util en el diagnóstico delas enfermedades tiroideas.Números de Catálogo:L2KTO2 (200 tests), L2KTO6 (600 tests)Código del Test: ATA Color: Agua

Resumen y Explicacióndel TestLos anticuerpos anti-peroxidasa tiroidea(anti-TPO) son autoanticuerpos dirigidosdirectamente contra la enzima peroxidasadel tiroides. Esta enzima cataliza laiodación de la tirosina en la tiroglobulinadurante la biosíntesis de T3 y T4. 2

Historicamente, estos anticuerpos fuerondescritos como anticuerpos anti-microsomales (AMA), dado que se uníana la parte de los microsomas de lascelulas tiroideas. Recientesinvestigaciones, han identificado a laperoxidasa como el principal componenteantigénico de los microsomas.2,3,13

Las enfermedades tiroideas autoinmunesson la causa principal del hipotiroidismo ehipertiroidismo y ocurren con mayortendencia en población geneticamentepredispuesta.


Las principales enfermedadesautoinmunes son la tiroiditis de Hashimotoy la enfermedad de Graves.13

Prácticamente todos los casos de latiroiditis de Hashimoto y en la mayoría delos de la enfermedad de Graves, estanelevados los autoanticuerpos anti-TPO.13

Altos niveles de anti-TPO, en el marco deun hipotiroidismo clínico, confirmaría eldiagnostico de tiroiditis de Hashimoto.

Principio del AnalysisIMMULITE 2000 Anti-TPO es un ensayoinmunométrico enzimático secuencial enfase sólida por quimioluminiscencia.Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.

Recogida de la muestraSe recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.

La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Anti-TPO IMMULITE2000 no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.Volumen Requerido: 5 µl de muestra.Conservación: 2 días a 2–8°C, ocongelado a –20°C para periodos maslargos.

Factor de Predilución automático: 100.Dispensa el volumen necesario dediluyente (L2AAZ) al tubo específico.

Advertencias y PrecaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Seguir las precauciones universales ymanipular todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.

Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dL,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las canerias de cobre yplomo.Substrato quimioluminiscente: Evitar lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto).Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de AnticuerposAnti-TPO (L2TO12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas con anti-TPO humanopurificado. Estable a 2–8°C hasta la fechade caducidad.L2KTO2: 1 cartucho. L2KTO6: 3 cartuchos.

Vial de reactivo de AnticuerposAnti-TPO (L2TOA2)Con códigos de barras. 11,5 ml de matrizde buffer, con conservante. 11,5 ml defosfatasa alcalina (de intestino bovino)conjugado con un anticuerpo monoclonalanti-IgG de ratón en buffer, conconservante. Estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad.L2KTO2: 1 vial. L2KTO6: 3 viales.


Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de AnticuerposAnti-TPO (LTOL, LTOH)Dos viales (bajo y alto), con anti-TPO enuna matriz de suero/buffer humano, conconservante. 30 minutos, como mínimo,antes de su uso, reconstituya cada vialcon 4,0 ml de agua destilada odesionizada. Mezcle por agitación oinversión suave hasta que se hayadisuelto completamente el materialliofilizado. (No es necesaria ningunadilución más.) Alicuotar y congelar enrecipientes plásticos bien cerrados. Evitarlas congelaciones y descongelacionesrepetidas. Estable a 2–8°C durante 7 díasdespués de la reconstitución, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.L2KTO2: 1 juego. L2KTO6: 2 juegos.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Diluyente para AnticuerposAntitiroideos (L2AAZ)Codigo: TAD. Para la dilución de lasmuestras del paciente que van aanalizarse. 50 ml de un concentrado deuna matriz tamponada, con conservante,sin anticuerpos anti-TG/anti-TPO (listopara su uso). Estable a 2–8°C durante30 días después de abrise, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.L2KTO2: 1 vial. L2KTO6: 3 vials.

Se suministran etiquetas con códigos debarras para usarse con este diluyente.Antes de uso, colocar la etiqueta con elcódigo de barras en un tubo de ensayo de16 × 100 mm, así los códigos de barraspueden ser identificados por el lector delinstrumento.L2KTO2: 3 etiquetasL2KTO6: 5 etiquetas

Componentes del kit que sesuministran por separadoL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sonda

L2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)L2ZT: 250 Tubos De Prueba DelDiluyente De la Muestra (16 × 100 mm)L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo DelDiluyente De la MuestraLAACM: Modulo control con dos niveles.También disponiblesAgua destilada o desionizada; tubos deensayo; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2000.

Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.

Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de Calidad: Utilizarcontroles o pooles de sueros (bajo y alto)con al menos dos niveles diferentes deanti-TG y anti-TPO autoanticuerpos.

Valores EsperadosBasado en su relación con el IMMULITEAnticuerpos Anti-TPO de DPC (verMétodo de Comparación), se puedeesperar que el ensayo tengaesencialmente los mismos rangos dereferencia.

Los autoanticuerpos anti-TPO son únicospara cada paciente; por ello cada muestrade paciente podría mostrar sus propiascaracteristicas de unión. Los nivelesnormales para la mayoría de los pacienteshan sido definidos por debajo de 35 IU/mlen los ensayos con Anti-TPO IMMULITE.Un resultado igual o mayor a 35 IU/mlindicará una elevación de losautoanticuerpos anti-TPO en suero,mientras que resultados inferiores a35 IU/ml indican un nivel normal de anti-TPO en suero. Debido a la altavariabilidad entre individuos es posibleencontrar pacientes sin historia deenfermedad tiroidea con valores porencima de 35 IU/ml.


Dos estudios son presentados acontinuación con dos poblaciones demuestras al azar.Se relizaron ensayos de Anti-TPOIMMULITE, los niveles de autoanticuerposanti-TPO fueron evaluados en 75 sujetossanos (26 hombres y 49 mujeres), conedades comprendidas entre 13 y 87 años.Todos mostraron niveles normales deTSH, y ninguno tenía desordenesautoinmunes. Usando el punto de corte en35 IU/ml, el 79% (59/75) de los sujetosmostraron valores de anti-TPO normales.El siguiente histograma muestra ladistribución de los sujetos según losniveles de autoanticuerpos anti-TPO.

En otro estudio, Anti-TPO IMMULITE fueempleado para determinar los niveles deautoanticuerpos anti-TPO en 130 sujetossanos. Usando el punto de corterecomendado de 35 IU/ml, 92% (118/130)de ellos mostraron niveles normales deanti-TPO. El siguiente histograma muestrala distribución de los sujetos según losniveles de autoanticuerpos anti-TPO.

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada Laboratorio deberáestablecer sus propios rangos dereferencia.

LimitacionesPara uso diagnostico exclusivamente, losresultados anti-TG deberían ser usadosen combinación con otrasdeterminaciones, y los resultados clinicosser presentados al medico con toda lainformación oportuna. LosAutoanticuerpos son encontrados enmenos del 10% de la población normalmostrando bajos niveles y en pacientescon enfermedad no-tiroidea, como en lasenfermedades reumaticas inflamatorias.14

Las propiedades de unión de anticuerposanti-TPO de pacientes y los usados en lacalibración del ensayo, podrían serdiferentes. Esto podría dar lugar adesviaciones en los estudios delparalelismo de las diluciones paradeterminadas muestras de pacientes.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características AnalíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo ver las tablas y losgráficos. Los resultados se expresan enIU/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación).Rango de Calibración: hasta 1 000 IU/ml(WHO 1st IRP 66/387).Sensibilidad: 5,0 IU/ml.


Efecto de gancho a altas dosis:Ninguno hasta 16 624 IU/ml.

Precisión Intraensayo: Los calculosestadististicos fueron calculados para6 muestras con resultados de 20replicados en una unica tanda. (Ver tabla“Intraassay Precision”.)Precisión Interensayo: Los calculosestadististicos fueron calculados para6 muestras en 12 tandas diferentes. (Vertabla “Interassay Precision”.)Linealidad: Las muestras fueronanalizadas en varias diluciones. (Ver latabla de “Linearity” para resultadosrepresentativos.)

Recuperación: Se analizaron muestrassobrecargadas 1 en 19 con tressoluciones anti-TPO (63, 207 y 520 IU/ml).(Ver la tabla de “Recovery” pararesultados representativos.)Tipo de Muestra Alternativa: paraevaluar el efecto de los diferentes tipos demuestras alternativos, se recogió sangrede 20 voluntarios en tubos normales,tubos con Heparina, tubos con EDTA ytubos vacutainer SST® de BectonDickinson. Volúmenes iguales de lasdiferentes muestras fueron sobrecargadascon diferentes concentraciones deautoanticuerpos TPO, con la finalidad decubrir todo el rango de calibración delensayo, y procesadas con elprocedimiento Anti-TPO IMMULITE 2000.(Heparina) = 0,84 (Suero) + 17 IU/mlr = 0,984

(EDTA) = 0,89 (Suero) + 15 IU/mlr = 0,981

(SST) = 0,88 (tubos simples) + 17 IU/mLr = 0,984

Medias:299 IU/ml (Suero)268 IU/ml (Heparina)282 IU/ml (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirrubina: La presencia de bilirrubina,en concentraciones hasta 200 mg/l, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Hemolisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 381 mg/dl,notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Lipemia: La presencia de triglicéridos enconcentraciones hasta 3 000 mg/dl no

tiene efecto alguno en los resultados, enlo correspondiente a la precisión delensayo.Comparación del Método: El ensayo fuecomparado con el IMMULITE AnticuerpoAnti-TPO de DPC en 246 muestras depacientes. (Rango de Concentración:aproximadamente 10 a 1 000 IU/ml. Ver elgráfico.) Por regresión linear:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 2,6 IU/mlr = 0,987

Means:188 IU/ml (IMMULITE 2000)197 IU/ml (IMMULITE)

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Français

IMMULITE 2000 Anti-TPODomaine d'utilisation : Dosagequantitatif des anticorps dirigés contre lathyropéroxydase (TPO) dans le sérum etle plasma EDTA. Ce test est réservé à unusage diagnostic in vitro avec l'AnalyseurIMMULITE 2000 et constitue une aide audiagnostic dans les pathologiesthyroïdiennes.Référence catalogue :L2KTO2 (200 tests), L2KTO6 (600 tests).Code produit : ATA.Code couleur : bleu vert.

IntroductionLes anticorps dirigés contre lathyropéroxydase (TPO) sont des auto-anticorps dirigés contre une enzyme, lapéroxydase thyroïdienne. Cette enzymecatalyse l'iodination de la tyrosine auniveau de la thyroglobuline durant labiosynthèse de la T3 et de la T4.2

Historiquement, ces anticorps furentd'abord assimilés aux anticorpsantimicrosomes (AMA) en raison de leurfixation sur les microsomes des cellulesde la thyroïde. De récentes recherches ontdémontré que la thyropéroxydase étaitl'antigène majeur des microsomes. 2,3,13


La pathologie thyroïdienne autoimmuneest la principale cause de l'hyperthyroïdie,et de l'hypothyroïdie, et semble apparaîtredans des populations génétiquementprédestinées.

Les principales pathologies autoimmunessont la thyroïdite de Hashimoto et lamaladie de Basedow.13 Virtuellement danstous les cas de maladie d'Hashimoto etdans la majorité des cas de la maladie deBasedow, les taux d'auto-anticorps anti-TPO sont élevés. 13 Ces taux élevésd'auto-anticorps, dans le contexte d'unesuspicion clinique d'hypothyroïdie,confirment le diagnostic de la maladied'Hashimoto.

Principe du testL'IMMULITE 2000 Anti-TPO est un testimmunométrique séquentielchimiluminescent par amplificationenzymatique, en phase solide.Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsIl est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.

La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret Anti-TPO IMMULITE 2000 n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pour

plus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Volume nécessaire : 5 µl d'échantillon.

Conditions de conservation : Stable2 jours à +2°C/+8°C ou plus longtemps à–20°C.Facteur de predilution automatique: 100Distribuer le volume de diluant (L2AAZ)nécessaire dans le tube avec code-barrecorrespondant.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : Conserver les réactifs à+2°C/+8°C. Éliminer les déchetsconformément aux lois en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter lacontamination et l'exposition directe ausoleil. (Voir notice).Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes Anti-TPO (L2TO12)Avec code-barres. 200 billes revêtues deTPO humaine hautement purifiée. Stableà +2°C/+8°C jusqu'à la date depéremption.L2KTO2 : 1 cartouche.L2KTO6 : 3 cartouches.


Cartouche à réactif Anti-TPO (L2TOA2)Avec code-barres. 11,5 ml de matricetamponnée, avec conservateur. 11,5 mld'anticorps monoclonal murin anti-IgGhumaines marqué à la phosphatasealcaline (provenant des intestins de veau)dans un tampon, avec conservateur.Stable à +2°C/+8°C jusqu'à la date depéremption.L2KTO2 : 1 cartouche.L2KTO6 : 3 cartouches.

Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs Anti-TPO (LTOL, LTOH)2 flacons d'ajusteurs (haut et bas)contenant d'auto-anticorps dans unematrice tampon / sérum humain, avecconservateur. 30 minutes au minimumavant l'emploi, reconstituer chaque flaconavec 4,0 ml d'eau distillée ou désionisée.Mélanger doucement jusqu'à complètedissolution de la substance lyophilisée.(Aucune dilution supplémentaire n'estrequise.) Aliquoter et congeler dans desrécipients en plastique bien hermétiques.Eviter de multiplier les cycles congélation/décongélation. Stable à +2/ +8 °C pendant7 jours après reconstitution, ou 6 mois(aliquoté) à –20 °C.L2KTO2 : 1 jeu. L2KTO6 : 2 jeux.Avant de procéder à un ajustement, placerles étiquettes correspondant à l'aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes àessai de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Diluant EchantillonAuto-Anticorps Thyroïdiens (L2AAZ)Code produit : TAD. Pour la dilution à borddes échantillons de patients. 50 ml dematrice tamponnée, avec conservateur,concentrée sans anticorps anti-TPO, niAnti-Tg, prête à l'emploi. Stable à+2°C/+8°C pendant 30 jours aprèsouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20°C.L2KTO2 : 1 flacon. L2KTO6 : 3 flacons.Les étiquttes code-barres sont fourniesavec le Diluant. Avant utilisation, placerl'étiquette appropriée sur un tube de16 × 100 mm de façon que le code-barre

puisse être lu par le lecteur de l'appareil.L2KTO2: 3 étiquettesL2KTO6: 5 étiquettes

Composants du coffret fournisséparémentL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)L2ZT : 250 Tubes À essai De Diluantéchantillon (16 × 100 mm)L2ZC : 250 Bouchons pour tubes dediluantsLAACM : Contrôle à deux niveaux,Egalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes àessai ; contrôles

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2000.Se reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2000 pour : la préparation, ledémarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.

Echantillons pour le contrôle de qualité :Utiliser des contrôles ou des pools desérums avec au moins deux niveaux deconcentration (faible ou élevé) d'anti-TG etd'anti-TPO auto-anticorps.

Valeurs attenduesCompte tenu de sa relation avec le testIMMULITE Anti-TPO de DPC (voirméthode de comparaison), le test doitavoir les mêmes valeurs de référence.

Le profil immunologique de chaque patientest unique, chacun présentant sespropres caractéristiques. Néanmoins, lestaux normaux pour la plupart des patientsont été trouvés < 35 UI/ml par la méthodeIMMULITE Anti-TPO. Une valeursupérieure ou égale à 35 UI/ml indique untaux élevé d'anticorps anti-TPO dans lesérum alors qu'un taux inférieur à 35 UI/mlsera considéré comme normal. Toutefois,


en raison de la variabilité individuelle, il estégalement possible qu'un patient normalsans antécédent de pathologiethyroïdienne présente des taux élevés etreproductibles d'anticorps anti-TPOsupérieurs à 35 UI/ml.Les deux études rapportées icidémontrent cette variabilité entre deuxpopulations prises au hasard.

Les taux d'anticorps anti-TPO ont étémesurés avec la trousse IMMULITE anti-TPO chez 75 sujets apparemment enbonne santé (26 hommes et 49 femmes)dont l'âge était compris entre 13 et 87 ans.Tous ces sujets présentaient un tauxnormal de TSH et aucune trace depathologie thyroïdienne auto-immune. Enappliquant la valeur seuil de 35 UI/ml,79% (59/75) des patients présentaient untaux normal d'anti-TPO. L'histogramme ci-dessous présente la distribution desdifférents valeurs d'anti-TPO.

Number of Subjects : Nombre d'individus.

Dans une seconde étude, les tauxd'anticorps anti-TPO ont été mesurésavec la trousse IMMULITE Anti-TPO chez130 patients apparemment en bonnesanté. En utilisant la valeur seuilpréconisée à 35 UI/ml, 92% (118/130) despatients présentaient un taux normald'anti-TPO. L'histogramme ci-contreprésente la distribution des différentesvaleurs d'anti-TPO.

Number of Subjects : Nombre d'individus.

Ces valeurs sont fournies à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraitétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesLors d'une utilisation diagnostique, lesrésultats des dosages d'anti-TPO doiventêtre analysés en conjonction avec lerésultat d'autres tests et les donnéescliniques. Des auto-anticorps peuvent êtretrouvés à de faibles concentrations chezenviron 10% des sujets sains et chez lespatients souffrant de pathologies sévèresnon thyroïdiennes (NTI), comme lesmaladies inflammatoires rhumatismales.14

Les auto-anticorps Anti-TPO des patientset les anticorps utilisés pour la calibrationdu test peuvent présenter des capacitésde liaison différentes. Ceci peut expliquerdes différences observées lors des testsde dilution pour certains échantillons.Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés en


association avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances du test. Les résultats sontdonnés en UI/ml. (En l'absence deprécision supplémentaire, tous lesrésultats ont été obtenus sur deséchantillons sériques prélevés sur tubessans gel, ni activateur de la coagulation).Domaine de mesure : jusqu'à1 000 UI/ml (OMS 1st IRP 66/387).Sensibilité analytique : 5,0 UI/ml.Effet-crochet : aucun jusqu'à16 624 UI/ml.

Précision intra-essai : les valeurs ont étéétablies pour 6 échantillons dosés 20 foisdans une même série. (Voir le tableau“ Intraassay Precision ”.)

Précision inter-essais : les valeurs ontété établies pour 6 échantillons dosésdans 12 séries différentes. (Voir le tableau“ Interassay Precision ”.)

Linéarité : les échantillons ont été testésavec des taux de dilution variés (Voir letableau “ Linearity ” pour des donnéesreprésentatives.)

Test de récupération: les échantillonstestés ont été chargés dans un rapport de1 à 19 avec trois solutions (63, 207 et520 UI/ml). (Voir le tableau “ Recovery ”pour des données représentatives.)Autres types d'échantillons: pourestimer l'effet de l'utilisation de différentstype d'échantillons, 20 volontaires ont étéprélevés sur tubes secs, héparinés, EDTAet sur tubes vacutainer SST® BectonDickinson. Des volumes égaux de cesdifférents échantillons ont été mélangésavec plusieurs concentrations d' auto-anticorps anti-TPO pour obtenir desvaleurs à l'intérieur du domaine de mesuredu test puis dosés avec le protocolel'IMMULITE 2000 Anti-TPO.(Héparine) = 0,84 (Sérum) + 17 UI/mlr = 0,984

(EDTA) = 0,89 (Sérum) + 15 UI/mlr = 0,981

(SST) = 0,88 (tubes ordinaires) + 17 IU/mLr = 0,984

Moyennes :299 UI/ml (Sérum)268 UI/ml (Héparine)282 UI/ml (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirubine : La présence de bilirubine neprésente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.

Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 381 mg/dl.

Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.

Comparaison de méthodes : le test a étécomparé au test IMMULITE Anti-TPO deDPC sur 246 échantillons (dont lesconcentrations allaient d'environ 10 à1 000 UI/ml. Voir graphique.) Parrégression linéaire :(IML 2000) = 0,97 (IML) – 2,6 UI/mlr = 0,987

Moyennes :188 UI/ml (IMMULITE 2000)197 UI/ml (IMMULITE)

Assistance techniqueEn France distribué par DPC France 90bd National 92257 La Garenne-ColombesFabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadre d'unSystème Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

IMMULITE 2000 Anti-TPO AbUso: Per prove diagnostiche in vitro conl'analizzatore IMMULITE 2000 — diAnticorpi anti-perossidasi tiroidea (TPO)nel siero e nel plasma EDTA, quale ausilionella diagnosi clinica di patologie tiroidee.Codice: L2KTO2 (200 test), L2KTO6 (600test).Codice del Test: ATA Colore: Acqua


Riassunto e spiegazione delTestGli anticorpi anti-perossidasi tiroidea(TPO) sono autoanticorpi diretti control'enzima perossidasi tiroidea. Questoenzima catalizza la iodinazione dellatirosina in tireoglobulina durante labiosintesi del T3 e del T4.2

Storicamente, si è fatto riferimento aquesti anticorpi come ad anticorpiantimicrosomiali (AMA) poiché gli anticorpisi legano alla parte microsomiale dellecellule tiroidee. La ricerca recente haidentificato la perossidasi quale primacomponente antigenica dei microsomi.2,3,13

Le malattie tiroidee autoimmuni sono ilprincipale fattore che pone in evidenzal'ipotiroidismo e l'ipertiroidismo e tendonoa verificarsi in una popolazione conpredisposizione genetica.

Le principali malattie tiroidee autoimmunisono: la tiroidite di Hashimoto, e lamalattia di Graves.13 Virtualmente in tutti icasi di Malattia di Hashimoto e nellamaggior parte dei casi di Malattia diGraves, gli autoanticorpi anti-TPO sonoelevati.13 Livelli elevati di autoanticorpianti-TPO all'interno di un quadro clinico diipotiroidismo, conferma la diagnosi diMalattia di Hashimoto.

Principio del procedimentoIMMULITE 2000 Anti-TPO é un dosaggiochemiluninescente sequenzialeimmunometrico in fase solida marcato conenzima.Cicli d'incubazione: 2 × 30 minuti.

Raccolta del CampioneSi consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazienti

sottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2000 Anti-TPO Ab non éstato verificato con tutte le possibilivariazioni di tipi di provette. Consultare lasezione riguardante Campioni Alternativiper dettagli sulle provette testate.Volume richiesto: 5 µL di campione.

Conservazione: 2 giorni a 2–8°C ocongelati per periodi più lunghi a –20°C.Fattore Automatico di Pre-Diluizione:100.Dispensare il volume richiesto di diluente(L2AAZ) all'interno di una provettaetichettata con codice a barre.

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare a 2–8°C. Scartarein conformità alle leggi applicabili.Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la Sifilide, gliAnticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli Anticorpianti-Epatite C.

E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.


Contenitore di Sferette anti-TPO Ab(L2TO12)Con codice a barre. 200 sferette coattatecon TPO umano altamente purificato.Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.L2KTO2: 1 confezioneL2KTO6: 3 confezioni

Porta Reagente anti-TPO Ab (L2TOA2)Con codice a barre. 11,5 mL di unamatrice/tampone, con conservanti. 11,5mL di fosfatasi alcalina (intestino di vitello)coniugata con anticorpi monoclonali ditopo anti-IgG umane in tampone, conconservanti. Stabile a 2–8°C fino alla datadi scadenza.L2KTO2: 1 Porta ReagenteL2KTO6: 3 Porta ReagentiPrima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori anti-TPO Ab (LTOL, LTOH)Due flaconi (Basso ed Alto), conautoanticorpi anti-TPO in una matriceumana di siero/tampone, con conservanti.Almeno 30 minuti prima dell'uso,ricostituire ogni flacone con 4,0 mL diacqua distillata o deionizzata. Mescolareagitando delicatamente o invertendo lamiscela finchè il materiale liofilo siacompletamente dissolto. (Non ènecessaria ulteriore diluizione.) Aliquotaree congelare in contenitori di plastica concoperchio a chiusura ermetica. Evitarecicli di congelo/scongelo ripetuti. Stabile a2–8°C per 7 giorni dopo la ricostituzione, eper 6 mesi (aliquotato) a –20°C.L2KTO2: 1 set. L2KTO6: 2 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote (fornitecol kit) cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Diluente del Campione (L2AAZ)Codice del Test: TAD. Per la diluizioneinterna dei campioni dei pazienti. 50 mL diuna matrice/tampone, con conservanti,priva di anticorpi anti-TG/anti-TPO,concentrata e (pronta all'uso). Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per

6 mesi (aliquotata) a –20°C.L2KTO2: 1 flacone. L2KTO6: 3 flaconi.

Vengono Fornite Le provette da utilizzarsicon il diluente. Prima dell'utilizzo,collocare un'etichetta appropriata su unaprovetta 16 × 100 mm cosicchè i codici abarre possano essere letti dal lettoreinternoL2KTO2: 3 etichetteL2KTO6: 5 etichette

Componenti del kit fornitiseparatamenteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)L2ZT: 250 Provette (16 x 100 mm) perDiluente del CampioneL2ZC: 250 Tappini per Provette perDiluente del CampioneLAACM: Modulo di controllo a due livelli

Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; provette divetro; controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE 2000.

Vedere il manuale dell'operatoreIMMULITE 2000 per: la preparazione, lamessa a punto, la regolazione, la prova edi procedimenti per il controllo della qualità.

Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.Controllo di Qualità: Utilizzare controlli opool di sieri con almeno due livelli (Alto eBasso) di autoanticorpi anti-TG ed anti-TPO.

Valori AttesiData l'affinità con l'Anti-TPO AbIMMULITE della DPC (vedi"Comparazione dei Metodi") ci si attendeche il dosaggio abbia gli stessi range diriferimento.Gli autoanticorpi anti-perossidasi tiroideasono peculiari di ogni paziente; quindi,ogni campione presenterà le propriecaratteristiche di legame. Per il dosaggio


IMMULITE Anti-TPO Ab sono stati definiti ilivelli normali per la maggior parte deipazienti inferiori a 35 IU/mL. Un risultatonumerico più elevato o uguale a 35 IU/mLindica un livello sierico di anti-TPOelevato, mentre un risultato inferiore a35 IU/mL indica un livello sierico di Anti-TPO normale. Tuttavia, a causa dellavariabilità individuale è anche possibileche un paziente normale con nessunprecedente di malattia tiroidea possapresentare livelli elevati riproducibilisuperiori a 35 IU/mL.A seguire sono stati presentati due studiche dimostrano la variabilità tra duepopolazioni prese a caso.

Utilizzando il dosaggio IMMULITE Anti-TPO Ab, i livelli di autoanticorpi anti-TPOsono stati determinati per 75 pazientiapparentemente sani (26 maschi e 49femmine), di età compresa tra 13 ed87 anni. Tutti presentavano livelli normalidi TSH e nessuno aveva disturbi tiroideiautoimmuni. Utilizzando il cut-offconsigliato di 35 IU/mL, il 79% (59/75) deisoggetti presentavano valori normali dianti-TPO. Il seguente istogramma mostrala distribuzione dei soggetti per livellidiversi di autoanticorpi anti-TPO.

In un altro studio, è stata utilizzata laprocedura dell' IMMULITE Anti-TPO Abper determinare i livelli di autoanticorpianti-TPO di 130 soggetti apparentementesani. Utilizzando il cut-off consigliato di35 IU/mL, il 92% (118/130) dei pazientipresentavano livelli normali di anti-TPO. Ilseguente istogramma mostra ladistribuzione dei pazienti per livelli diversidi autoanticorpi.

Detti valori dovrebbero essere consideratisolo come suggerimento. Ogni laboratoriodovrebbe stabilire i propri range diriferimento.

LimitiA scopo diagnostico, i risultati anti-TPOdevono essere utilizzati unitamente ad altririsultati del test quali la presentazioneclinica al medico, ed altre informazionipertinenti. Gli autoanticorpi sonoriscontrabili a livelli bassi in meno del 10%della popolazione normale ed in pazienticon malattie non-tiroidee, quali leinfiammazioni reumatiche.14

Pazienti con autoanticorpi anti-TPO edanticorpi utilizzati per calibrare il dosaggiopossono differire nelle loro proprietàleganti. Ciò può portare, per alcunicampioni, a deviazioni dallo strettoparallelismo di diluizione.Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.


Prestazioni del DosaggioVedi tavole e grafici per datirappresentativi. I risultati sono indicati inIU/mL. (Laddove non diversamentespecificato, tutti i dati sono stati generatisu campioni di siero raccolti in provettesenza gel separatore o additivi chefavoriscano la formazione di coaguli.)Range di calibrazione: a 1 000 IU/mL.(WHO 1st IRP 66/387).Sensibilità analitica: 5,0 IU/mL.

Effetto Gancio per Dosi Elevate:Nessuno fino a 16 624 IU/mL.

Precisione Intra-dosaggio: Le statistichesono state calcolate su sei campioni dairisultati di 20 replicati in un'unica seduta.(Vedi tabella “Intraassay Precision”.)

Precisione Inter-dosaggio: Le statistichesono state calcolate su sei campionidosati in 12 sedute diverse. (Vedi tabella“Interassay Precision”.)

Linearità: Sono stati dosati campioni invarie forme diluite. (Vedi la Tabella"Linearity" per dati rappresentativi.)Recupero: Sono stati dosati campioni1:19 ai quali sono state aggiunte tresoluzioni di anti-TPO (63, 207 e520 IU/mL. Vedi la Tabella "Recovery" perdati rappresentativi.)

Tipo di Campione Alternativo: Perdeterminare l'effetto di campionialternativi, è stato prelevato del sangue da20 volontari in provette semplici,eparinizzate, EDTA e Becton Dickinsonvacutainer SST®. Ad ugual volumi dicampioni misti sono state aggiunte varieconcentrazioni di autoanticorpi TPO perottenere valori lungo l'intero range dicalibrazione del dosaggio e quindi dosaticon il kit IMMULITE 2000 Anti-TPO Ab.(Eparina) = 0,84 (Siero) + 17 IU/mLr = 0,984

(EDTA) = 0,89 (Siero) + 15 IU/mLr = 0,981

(SST) = 0,88 (tubi semplici) + 17 IU/mLr = 0.984

Valore Medio:299 IU/mL (Siero)268 IU/mL (Eparina)282 IU/mL (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirubina: La presenza di bilirubina inconcentrazioni fino a 200 mg/L non ha

nessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 381 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Comparazione dei Metodi: Il dosaggio èstato comparato all'Anti-TPO AbIMMULITE della DPC su 246 campioni dipazienti. (Range di concentrazione: da10 fino a 1 000 IU/mL. Vedi grafico.) Conregressione lineare:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 2,6 IU/mLr = 0,987

Valore medio:188 IU/mL (IMMULITE 2000)197 IU/mL (IMMULITE)

Assistenza TecnicaAll'estero: Si prega di contattare il proprioDistributore DPC Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell'ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

Português

Anti-TPOUtilização: Para o diagnóstico in vitro.Doseamento quantitativo da anti-peroxidase no soro e plasma EDTA emconjunto com o analisador IMMULITE2000, no auxílio da avaliação clínica dafunção tiroideia.

Números de catálogo:L2KTO2 (200 testes)L2KTO6 (600 testes).Código do teste: ATA. Cor: Aqua

Sumário e explicação do testeOs anticorpos antiperoxidase da tiroide(anti-TPO) são autoanticorposdireccionados contra a enzima peroxidaseda tiroide. Esta enzima cataliza aiodonização da tiroxina na tiroglobulinadurante a biosíntese da T3 e da T4.2

Historicamente, estes anticorpos foramreferidos como sendo anticorpos


antimicrossomais (AMA) devido à ligaçãodos anticorpos à zona microssomal dascélulas tiroideias. Investigações recentestêm identificado a peroxidase da tiroidecomo o componente antigénico primáriodos microssomas.2,3,13

A doença autoimune da tiroide é oprincipal factor que sustenta ohipotiroidismo e o hipertiroidismo e tendea ocorrer numa população genéticamentepredisposta.As doenças de autoimunidade da tiroidesão essencialmente: a tiroidite deHashimoto e a doença de Graves.13 Osautoanticorpos anti-TPO, apresentam-seelevados em virtualmente todos os casosde doença de Hashimoto e na maioria doscasos da doença de Graves.13 Elevadosníveis de anticorpos anti-TPO, no contextode uma apresentação clínica dehipotiroidismo, confirma o diagnóstico dadoença de Hashimoto.

Princípio do procedimentoIMMULITE 2000 Ab Anti-TPO é um ensaioimunométrico sequencial de fase sólida,de enzimas quimicoluminosas.Ciclos de incubação: 2 × 30 minutos.

ColheitaRecomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.

Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coágulo

e/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000Anti-TPO não foram ainda testados comtodas as possiveis variações originadaspelos tipos de tubos. Consultar a secçãoTipos de Amostras Alternativas para obterdetalhes sobre os tubos que foramtestados.Volume de amostra: 5 µl de amostraEstabilidade: 2 dias a 2–8°C, paraperíodos mais longos, congelar a –20°C.Factor de pré-diluição automática: 100.

Dispensar o volume de diluente (L2AAZ)necessário para um tubo de ensaioapropriado com etiqueta de código debarras aplicada.

PrecauçõesPara diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8°C. Elimine deacordo com as leis aplicáveis.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primasobtidas de soro humano foram testadas,dando resultados negativos para a sífilis,para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HbsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.

Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.

Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula).Água: Utilize água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. As etiquetas no interior dascaixas são necessárias para o ensaio.

Embalagem de pérolas de Anti-TPO Ab(L2TO12)Com código de barras. Contém200 pérolas revestidas com TPO humana,altamente purificada. Estável até a data


de validade a 2–8°C.L2KTO2: 1 embalagem.L2KTO6: 3 embalagens.

Embalagem de reagentes de Anti-TPOAb (L2TOA2)Com código de barras. 11,5 ml de matrizem tampãp, com conservante. 11,5 ml defosfatase alcalina (intestino de vitela)conjugada com anticorpo monoclonal demurino, anti-IgG em tampão, comconservante. Estável até a data devalidade a 2–8°C.L2KTO2: 1 embalagem.L2KTO6: 3 embalagens.Antes de utilizar, retire a parte superior daetiqueta na perfuração, sem danificar ocódigo de barras. Remova o selo dealumínio do topo da embalagem, eencaixe a tampa deslizante nas rampasna tampa do reagente.

Ajustes de Anti-TPO Ab (LTOL, LTOH)Contém dois frascos (nível alto e baixo)com autoanticorpos TPO, numa matriz desoro humano tamponizada, comconservante. Pelo menos 30 minutosantes do uso, reconstitua cada frasco com4,0 mL de água destilada ou desionizada.Misture por inversão ou movimentoslentos até o material liofilizado dissolvercompletamente. (Não é necessáriadiluição adicional.) Divida em alíquotas econgele em recipientes plásticos bemfechados. Evite ciclos repetidos decongelamento/ descongelamento. Estável,após a reconstituição, durante 7 dias a 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C.L2KTO2: 1 conjunto L2KTO6: 2 conjuntosAntes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas de alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") em tubos deamostra de forma que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.

Diluente da amostra de autoanticorposda tiroide (L2AAZ):Código do teste: TAD. Para a diluiçãoautomática no aparelho de amostras dedoentes. 50 mL de concentrado (pronto ausar) constituido de matriz tamponizada,com conservante, livre de anticorpos anti-TG/anti-TPO. Estável, após a abertura,durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses(aliquotado) a

–20°C.L2KTO2: 1 frasco. L2KTO6: 3 frascos.

Etiquetas de código de barras sãofornecidas para usar com o diluente.Antes de usar, colocar a etiquetaapropriada num tubo de teste(16 × 100 mm) de modo a que o códigode barras possa ser lido pelo dispositivode leitura do aparelho.L2KTO2: 3 etiquetasL2KTO6: 5 etiquetas

Componentes do kit fornecidosseparadamenteL2SUBM: Substrato quimioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)L2ZT: 250 Tubos de diluente da amostra(16 x 100 mm)L2ZC: 250 Tampas para tubos de diluenteda amostraLAACM: Módulo de controlo com 2 níveisTambém necessárioÁgua destilada ou desionizada; tubos deamostra; controlos.

Procedimento do doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador do IMMULITE2000.Consulte o Manual do Operador deIMMULITE 2000 para para instruçõessobre preparação, ajuste, doseamento eprocedimentos de controlo de qualidade.Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.Amostras de controlo de qualidade:utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) deanticorpos de TG e TPO.

Valores de ReferênciaBaseado na sua relção com a Anti-TPOAb IMMULITE da DPC (ver compara çãode métodos), pode-se esperar que odoseamento tenha valores de referênciaindênticos.

Os autoanticorpos para a peroxidase datiriode são únicos para cada paciente;


visto isto, cada paciente irá apresentar assuas próprias características de ligação.Os níveis normais para a maioria dospacientes têm sido defenidos como sendoinferiores a 35IU/mL pelo método dedoseamento dos anticorpos anti-TPO doIMMULITE. Um resultado numéricosuperior ou igual a 35 IU/mL é indicadorde um nível de anticorpos anti-TPOelevado no soro, enquanto que umresultado inferior a 35 IU/mL é indicadorde um nível de anticorpos anti-TPOnormal no soro. No entanto, devido àvariabilidade individual é possível que empacientes normais, sem historia dedoença tiroideia, surjam valoresreproductíveis superiores a 35 IU/mL.Dois estudos demonstrativos davariabilidade entre duas populaçõesaleatórias são apresentados em baixo.Utilizando o método de doseamento Anti-TPO Ab IMMULITE, os níveis deanticorpos TPO foram determinados para75 indivíduos aparentemente saudáveis(26 homens e 49 mulheres), com idadescompreendidas entre os 13 e os 87 anos.Todos tinham níveis normais de TSH, enenhum tinha doenças autoimunes detiroide. Utilizando o cutoff recomendadode 35 IU/mL, 79% (59/75) dos indivíduosapresentavam valores normais de anti-TPO. O seguinte histograma mostra adistribuição de indivíduos para níveisdiferentes de autoanticorpos de TPO.

Num outro estudo, o procedimento Anti-TPO Ab IMMULITE, foi utilizado paradeterminar níveis de autoanticorpos deTPO em 130 indivíduos aparentementesaudáveis. Utilizando o cutoffrecomendado de 35 IU/ml, 92% (118/130)dos indivíduos apresentavam valoresnormais de anti-TPO. O seguintehistograma mostra a distribuição de

indivíduos para níveis diferentes deautoanticorpos de TPO.

Estes valores devem ser consideradosapenas como directrizes. Cada laboratóriodeve estabelecer os seus própriosvalores.

LimitaçõesPara fins de diagnóstico, os resultados deanti-TPO devem ser usados em conjuntocom os resultados de outros testes, comtoda a apresentação clínica ao médico, ecom toda a restante informação clínicaapropriada. Baixos níveis deautoanticorpos poderão ser encontradosem menos de 10% da população normal eem pacientes com doenças não-tiroideias,como por exemplo doenças reumáticasinflamatórias.14

Os autoanticorpos de TPO de pacientes eos anticorpos utilizados para calibração doensaio podem diferir nas suaspropriedades de ligação. Isto poderáconduzir a desvios de paralelismo nasdiluições para algumas amostras depacientes.Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos neste


ensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em IU/mL. (Salvo referênciaem contrário, todos os dados provêm deamostras de soro colhidas em tubos semanticoagulantes, barreiras de gel ouaditivos promotores da coagulação.)Calibração: até 1 000 IU/ml. (WHO 1stIRP 66/387).Sensibilidade Analítica: 5,0 IU/ml.

Efeito Hook de Alta Dose: Nenhum até16 624 IU/ml.Precisão Intra-ensaio: Os resultados dasestatísticas baseiam-se num único ensaiode 6 amostras, cada com 20 réplicas.(Ver“Intraassay Precision” tabela.)Precisão Inter-ensaio: Os resultadosestatísticos baseiam-se em 12 ensaiosdiferentes, provenientes de 6 amostras.(See “Interassay Precision” table.)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob vários níveis de diluição.(Ver a tabela de "Linearity" para dadosrepresentativos.)Recuperação: Amostras adicionadas narelação de 1 para 19 com três soluções deanti-TPO Ab (63, 207 e 520 IU/ml) foramdoseadas. (Ver tabela "Recovery" paradados representativos.)Tipo de amostra alternativa: Paradeterminar o efeito de amostrasalternatives, foi colhido sangue de 20voluntários em tubos secos, com EDTA,heparinizados e tubos de vacum SST® daBecton Dickinson. A volumes iguais dasmesmas amostras foram adicionadasvárias concentrações de auto-anticorposTPO para obter valores ao longo da gamade calibração do ensaio. As amostrasforam doseadas com o IMMULITE 2000Anti-TPO.(Heparina) = 0,84 (Soro) + 17 IU/mlr = 0,984

(EDTA) = 0,89 (Soro) + 15 IU/mlr = 0,981

(SST) = 0,88 (tubos simples) + 17 IU/mLr = 0,984

Médias:299 IU/ml (Soro)268 IU/ml (Heparina)282 IU/ml (EDTA)279 IU/mL (SST)

Bilirrubina: A presença de bilirrubina emconcentrações até 200 mg/L não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Hemolise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 381 mg/dL não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Lipemia: A presença de trigliceridos emconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Comparação de métodos: Odoseamento foi comparado ao Anti-TPOAb IMMULITE da DPC em 246 amostrasde doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 10 a 1 000 IU/ml. Vergráfico.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,97 (IML) – 2,6 IU/mlr = 0,987

Médias:188 IU/ml (IMMULITE 2000)197 IU/ml (IMMULITE)

Assistência Técnica:Por favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.


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ANTI TPO

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