“AÑO DE LA INTEGRACIÓN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD” Universidad Nacional “Hermilio Valdizán” FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS E.A.P. AGRONOMÍA DOCENTE : Ing. MARIA GUTIEREZ SOLORZANO CURSO : MICROBIOLOGIA Y NEMATOLGIA AGRICOLA INTEGRANTES: DURAN VILLANUEVA JORGE LUIS HUARAUYA GERONIMO ADRIANO EDGAR ESPINOZA FIRMA BEATRIZ RODRIGUEZ ARTETA JAUN AÑO/ SEMESTRE : tercero - VI HUÁNUCO – PERÚ 2013-I INFORME DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA
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“AÑO DE LA INTEGRACIÓN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE
NUESTRA DIVERSIDAD”
Universidad Nacional “Hermilio Valdizán”
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
E.A.P. AGRONOMÍA
DOCENTE : Ing. MARIA GUTIEREZ SOLORZANO
CURSO : MICROBIOLOGIA Y NEMATOLGIA AGRICOLA
INTEGRANTES:
DURAN VILLANUEVA JORGE LUIS HUARAUYA GERONIMO ADRIANO EDGAR ESPINOZA FIRMA BEATRIZ RODRIGUEZ ARTETA JAUN
AÑO/ SEMESTRE : tercero - VI
HUÁNUCO – PERÚ
2013-I
INFORME DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA
MEDIOS DE CULTIVO
1. DEFINICIONES
(Eduardo y Teddy 1980: 33) sostienen las siguientes
definiciones:
MEDIOS DE CULTIVO
Son soluciones estériles que tienen macro y
micronutrientes, sustancias que permiten el crecimiento
de organismos.
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución
de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de
cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias
LOS MICROORGANISMOS
Son los seres más abundantes de la tierra, pueden
vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad
de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más
importantes para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra
de factores de crecimiento específicos en forma de
suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
CULTIVO
Es el producto del crecimiento de organismos o
grupos de organismos, establecidos con fines
experimentales o industriales.
CULTIVO PURO
Es la presencia de una sola especie de
microrganismo libre de todo contaminante, a esto que
también se le denomina AXENICO.
OBJETIVO
Aprender la clasificación y uso de los medios de
cultivo.
Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente
la autoclave.
PROCEDIMIENTO
1) Sacar las proporciones.
2) Pesar sustancias.
3) Medir el agua destilada y trasvasarlo a matraz de
Erlenmeyer.
4) Homogenizar las sustancias más el agua
5) Hervir, este proceso se realiza de acuerdo a que medio
se va a preparar.
6) Añadir y homogenizar las sustancias, hasta disolver las
sustancias.
7) Trasvasar a la botella.
8) Acondicionar el medio.
9) Rotular
10) Esterilizar (autoclave)
11) usar el medio de cultivo.
AGENTES SOLIDIFICANTES
1. AGAR-AGAR
(Eduardo y Teddy 1980: 34) refiere que el agar
agar es una gelatina vegetal, un polisacárido que se
extrae de las algas por medio del ácido sulfúrico
diluido a una temperatura de 80 ºC. La especie de
producción comercial se extrae de las siguientes
especies: Gelidium corneum; gracillaria; gigartina y
pterocladia.
PROPIEDADES
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indica las propiedades
del agar agar:
Se derrite a 80 -100 ºC. Tolera altas temperaturas
de esterilización sin descomponerse.
Se solidifica a 35 – 50 ºC.
Adquiere firmeza en medios de cultivos a
concentraciones de 1,5 a 2,0 %.
Se hidroliza a pH de 2 y pH 9. Su valor nutritivo
es casi nulo y contiene algunos factores de
crecimiento.
2. GELATINA
(Eduardo y Teddy 1980: 35) es una sustancia
derivada de huesos, ligamentos y piel de animales, por
ebullición de ácido clorhídrico diluido.
Propiedades
Se derrite a 37 ºC
Se solidifica a 20 a 25 ºC, usando 10 a 12 % en
solución y también se derrite a esa temperatura.
Se descompone a 121 ºC y es digerida por los
microorganismos.
A pH extrema se hidroliza.
A pH ácidos no se solidifica.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS
POR SU CONSISTENCIA:
1. Líquidos
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican que los medios
líquidos se usan en principalmente en el incremento de
bacterias, en la determinación de sus propiedades
fisiológicas, para el incremento masivo de bacterias y
hongos con fines de experimentales (generalmente bajo
agitación) y para estudios de crecimiento de
microorganismos. Industrialmente tienen uso en la
preparación de productos accesorios al crecimiento los
microorganismos, (ácidos orgánicos, antibióticos,
etc.).
2. Sólidos
(Eduardo y Teddy 1980: 35) también sostiene que el
uso de principal de medios solidos es para el aislamiento
de hongos y bacterias, y para su mantenimiento. Se prepara
en frascos, placas Petri y tubos de prueba.
SEGÚN SUS PROPIEDADES NUTRITIVAS
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican las siguientes
propiedades:
A. CARENTES DE NUTRIENTES
Agua
El agua es para el mantenimiento de bacterias en
estado latente e inmutable, o clamidosporas de fusarium
(el agua destilada en destiladores metálicos es a veces
toxico y letal para las bacterias; es preferible usar
agua desmineralizada o agua potable no clorinada).
Sustancias que son carentes de nutrientes:
Laboratorio
Caño
Destilatorio
Dicionizada
Agar agua (sustancia solida)
Nitrógeno líquido: componente para mantener y
preservar sustancias como semen de animales.
B. NUTRITIVAS
1. NATURALES
Constituyen únicamente de material vegetal natuarl
2. SEMISINTETICOS COMPLEJOS
El componente posee 50 % natural y 50 % de
sustancias químicas.
3. SINTÉTICOS DEFINIDOS
Es químicamente definido.
PROCEDIMIENTO EN LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS
Se realiza el cálculo de la proporciones para 500
ml de preparado del medio del cultivo, utilizando 1
litro de agua destilada.
1. Sacar las proporciones
A. PDA (PAPA AGAR DEXTROSA)
PAPA: 200 gramos.
DEXTROSA: 10 gramos.
AGAR - AGAR: 15-18 gramos.
EXTRACTO DE CARNE: 5 gramos.
AGUA DESTILADA: 1000 ml/ 1lt.
500 ml de preparado
Proporciones para preparado de 1 litro de medio
del cultivo
PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟏𝟎𝟎 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
DEXTROSA:
𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
AGAR - AGAR:
𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟕. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
EXTARCTO DE CARNE:
𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟐. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
PREPARADO DEL MEDIO DE CULTIVO
I. PDA (AGAR PAPA DEXTROSA).
PROCEDIMIENTO
1. proporciones para preparado de 115 ml.
PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟐𝟑 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
DEXTROSA:
𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟏. 𝟏𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
AGAR AGAR:
𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟏. 𝟕𝟐𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
EXTARCTO DE CARNE:
𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶
𝑿 = 𝟎. 𝟓𝟕𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
2. LAVADO, PELADO Y PICADO DE PAPA
FIGURA 1
FIGURA 2
3. PESADO DE SUSTANCIAS
FIGURA 3
4. MEDIR AGUA DESTILADA
FIGURA 4
5. HOMOGENIZAR EL AGUA MÁS LA PAPA
FIGURA 5
6. HERVIR: durante 30 minutos
FIGURA 6
7. COLAR: con gaza o tamiz ( si hubiera)
FIGURA 7
8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS COMPONENTES
QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS PARTÍCULAS.
FIGURA 8
9. TRASVASAR: se transfiere del matraz a la botella antes
que se enfrié el medio.
FIGURA 9
10. ACONDICIONAR: (con una torunda de algodón y sobre
ello sellarlo con parafilm)
11. ROTULAR
12. USAR
II. OMA (OAL MEAL AGAR)
(Sifuentes 1990: 9) es medio de cultivo adecuado
para Pythium sp, Phytophthora sp, Fusarium sp., Phoma
sp, y otros patógenos.
Ingredientes
Quaker: 20 – 60 g.
Dextrosa: 10 g.
Agar: 15 – 18 g.
Agua destilada: 1000 ml.
Para preparado de 100 ml.
1. CALCULO DE PROPORCIONES
Quaker: 20𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 → 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 = 200 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.
Dextrosa: 10𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 100𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 1 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜.
Agar - Agar: 15𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂
𝑋 15 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.
2. PESO DE SUSTANCIAS
FIGURA 1
3. MEDIR AGUA DESTILADA
4. Medir el agua destilada
5. HOMOGENIZAR
6. HERVIR: este proceso tiene una duración de 30 a
45 minutos, removiendo constantemente, para
evitar la ebullición.
7. HOMOGENIZAR HASTA DISOLVER LAS OTRAS
PARTICULAS.
8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS
COMPONENTES QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS
PARTÍCULAS.
9. TRASVASAR
13. ACONDICIONAR (con una torunda de algodón y sobre
ello sellarlo con parafilm).
14. ROTULAR
15. USAR
III. AGAR HARINA DE MAÍZ (AHM)
(Eduardo y Teddy 1980: 38) menciona que es útil
para el aislamiento y esporulación de algunas especies