Analyseurs « Seahorse » - reseau MeetOchondriemeetochondrie.ibgc.cnrs.fr/colloques/colloque6/presentations... · Seahorse XF Extracellular Flux Analyzers and Assay Kits XF96 & XF24

Analyseurs « Seahorse »

CommentairesF Bouillaud

Meetochondrie 2012

Seahorse XF Extracellular Flux Analyzersand Assay Kits

XF Stress Test KitsXF96 & XF24 FluxPaks XF24 Islet FluxPaks

XF Cell Culture Microplate

Assay Medium

Solid State Sensor

Cell Monolayer

Sensor Probes

Fiber Optics

Well 1 Well 2

Measuring Mitochondrial Respirationand Glycolysis in a Microplate

A temporary7µl (XF24)

micro-chamber is

formed

The bio-cartridge is

raised,bringing thesystem backto baseline

The bio-cartridge is

raised,bringing thesystem backto baseline

The bio-cartridge is

raised,bringing thesystem backto baseline

Measuring Oxygen Consumption Rate (OCR) andMeasuring Oxygen Consumption Rate (OCR) andExtracellular Acidification Rate (ECAR)Extracellular Acidification Rate (ECAR)

Well 1 Well 2

Time (min)

100

120

130

140

150

160

1 2 3 47.20

7.25

7.30

7.35

7.40

7.45

pH (E

CA

R)

5 6 7

mm

Hg

(OC

R) C2 C2 C2 C2

C2

C2 C2C2

C2

C2C2

C2

C2

C2C2

C2

C2C2

C2C2

C2

C2C2

C2

C2 C2 C2 C2C2 C2 C2 C2 C2 C2 C2

C2C2

C2

C2

C2

C2

C2C2

C2

C2

C2

C2C2

C2

C2

C2

C2 C2 C2 C2 C2

ECAR

OCR

The rate iscalculatedfrom the

slope

0

100

200

300

400

500

600

0 50 100 150 200

Glycolysis (ECAR, mpH/min)

Aer

obic

Res

pira

tion

(OC

R, p

mol

es/m

in)

LessEnergy

MoreGlycolytic

MoreAerobic

MoreEnergy

FCCP

Basal2-DG

Rot2-DG+ Rot

2 or 4 Injection Ports/Well

Multiple Automatic Injection Ports Allows MoreConditions to be Assessed

Samplesinjected

automatically

O2 trace and OCR in Multiwell formatO2 trace and OCR in Multiwell format

Seahorse Simplifies Measuring CellularMetabolism

XF  Cell  Mito  Stress  Test  Profile

Notre expérience– Lignées établies (nombreuses)– Cultures primaires (MF, neurones, Myotubes)– Fragment d’organes (XF 24).– Mais pas d’expérience sur du matériel « flottant »: mitochondries, levures cellules non

adhérentes...

• Les « plus »– Consommation O2 : Basale / fuite / Réserve / non mitoch– Facilité de mise en oeuvre.– Cellules attachées donc dans leur état « normal ».– Accès à des « N » élevés.– Rendement coût/information (consommables).

• Les « moins »– Equipement couteux– Réponse lente / interactivité faible– Normalisation mal résolue.– La variable pH (= glycolyse) contrainte sur le milieu et interprétation...– O2 « atmosphérique ».

L’heure du choix