ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIRE Tél. : 33 (0)4 70 03 88 55 I Hotline : 33 (0)4 70 03 73 06 I E-mail : [email protected]I Fax : 33 (0)4 70 03 82 60 G.46 Coloration des cellules I Traceurs cellulaires Coloration des cellules fixées Cell Explorer™ pour cellules mortes Les Cell Explorer™ sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour les analyses en microscopie à fluorescence des fonctions cellulaires. Le marquage efficace de cellules fournit un procédé puissant pour étudier les événements cellulaires dans un contexte spatial et temporel. Les fluorochromes ont été sélectionnés pour leur photostabilité élevée. Produit Ex / Em (nm) Réf. Qté Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue 353 / 442 22600 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue Ex.405 410 / 450 22500 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green Ex.405 408 / 512 22501 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green 498 / 521 22601 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange Ex.405 398 / 550 22502 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange 547 / 573 22602 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red 583 / 603 22603 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red-FCM 523 / 617 22599 200 tests Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Deep Red 649 / 660 22604 200 tests Coloration des cellules vivantes Calcein Les calcéines sont des sondes fluorescentes pour le marquage du cytoplasme des cellules vivantes. Les formes AM sont perméables à la cellulaire. Une étape de lavage peut être nécessaire pour réduire au minimum le bruit de fond. Cell Explorer™ pour cellules vivantes Les kits Cell Explorer™ pour cellules vivantes sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour l'étude des fonctions cellulaires en microscopie à fluorescence. Le marquage est réalisé de manière uniforme dans les cellules vivantes. Dextrans fluorescents, fixables Les dextrans conjugués CF™ sont utilisés comme sonde fluorescente pour étudier des pro- cessus cellulaires tels que la perméabilité cellulaire, la phagocytose, l'endocytose ou pour étudier les mécanismes d'administration biomoléculaire. Les colorants CF™ sont des colo- rants fluorescents supérieures avec une luminosité exceptionnelle et photostabilité remar- quable. CFDA-SE Le CFDA-SE (aussi noté CFSE) est une sonde perméable au membrane cellulaire. Elle s'accumule facilement à l'intérieur des cellules viables où elle se fixe de façon covalente aux protéines intracellulaires. Les cellules marquées peuvent être suivies sur plusieurs semaines in vivo. Par ailleurs, des colorants de noyaux peuvent marquer les cellules vivantes. Ils sont décrits dans la section Sondes nucléaires | Colorants des ADN & ARN | Colorants des cellules vivantes Cellules vivantes marquées par le Cell Explorer Red. Cellules CPA marquées au CytoCalcein™ Violet 500.
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIRE Coloration des … · G.49 ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIRE Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité Resazurin Cet indicateur redox
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Cell Explorer™ pour cellules mortesLes Cell Explorer™ sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour les analyses en microscopie à fluorescence des fonctions cellulaires. Le marquage efficace de cellules fournit un procédé puissant pour étudier les événements cellulaires dans un contexte spatial et temporel. Les fluorochromes ont été sélectionnés pour leur photostabilité élevée.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue 353 / 442 22600 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue Ex.405 410 / 450 22500 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green Ex.405 408 / 512 22501 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green 498 / 521 22601 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange Ex.405 398 / 550 22502 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange 547 / 573 22602 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red 583 / 603 22603 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red-FCM 523 / 617 22599 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Deep Red 649 / 660 22604 200 tests
Coloration des cellules vivantes
CalceinLes calcéines sont des sondes fluorescentes pour le marquage du cytoplasme des cellules vivantes. Les formes AM sont perméables à la cellulaire. Une étape de lavage peut être nécessaire pour réduire au minimum le bruit de fond.
Cell Explorer™ pour cellules vivantesLes kits Cell Explorer™ pour cellules vivantes sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour l'étude des fonctions cellulaires en microscopie à fluorescence. Le marquage est réalisé de manière uniforme dans les cellules vivantes.
Dextrans fluorescents, fixablesLes dextrans conjugués CF™ sont utilisés comme sonde fluorescente pour étudier des pro-cessus cellulaires tels que la perméabilité cellulaire, la phagocytose, l'endocytose ou pour étudier les mécanismes d'administration biomoléculaire. Les colorants CF™ sont des colo-rants fluorescents supérieures avec une luminosité exceptionnelle et photostabilité remar-quable.
CFDA-SELe CFDA-SE (aussi noté CFSE) est une sonde perméable au membrane cellulaire. Elle s'accumule facilement à l'intérieur des cellules viables où elle se fixe de façon covalente aux protéines intracellulaires. Les cellules marquées peuvent être suivies sur plusieurs semaines in vivo.
Par ailleurs, des colorants de noyaux peuvent marquer les cellules vivantes. Ils sont décrits dans la section Sondes nucléaires | Colorants des ADN & ARN | Colorants des cellules vivantes
Cellules vivantes marquées par le Cell Explorer Red.
Cellules CPA marquées au CytoCalcein™ Violet 500.
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREAutres structures cellulaires I Traceurs cellulaires
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCalcein AM, Blue 360 / 445 FP-95397A 1 mgCalcein Blue 360 / 445 FP-11141B 25 mgCalcein AM 494 / 517 FP-895514 1 mg
FP-895515 20 x 50 µgCalcein AM, UltraPure Grade 494 / 517 FP-HG6250 1 mgCalcein AM, 1 mg/ml in dry DMSO 494 / 517 FP-855422 1 mlCalcein AM, 4mM in DMSO 494 / 517 FP-FI9820 100 µlCalcein 494 / 517 FP-466251 100 mgCalcein Orange AM 525 / 550 FP-ZE7840 1 mgCalcein Orange 525 / 550 FP-UVC280 1 mgCalcein Red AM 560 / 574 FP-UVC460 1 mgCalcein Red 560 / 574 FP-UVC470 1 mgCalcein Deep Red 646 / 659 FP-ZE7850 1 mgCytoCalcein Violet 450 408 / 450 22012 1 mgCytoCalcein Violet 500 410 / 500 22013 1 mgCell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit, Green 495 / 515 22621 200 testsCell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit, Red 575 / 600 22625 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Blue 360 / 445 22606 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Blue 403 / 445 22620 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Blue Ex.405 410 / 450 22614 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Green Ex.405 410 / 500 22615 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Green 495 / 515 22607 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Orange Ex.405 398 / 545 22616 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Orange 528 / 541 22622 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Red 575 / 600 22623 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Deep Red 637 / 650 22624 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Red 646 / 659 22609 200 testsCF™488A-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 490 / 515 80110 1 mgCF™543-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 541 / 560 80111 1 mgCF™555-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 555 / 565 80112 1 mgCF™568-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 562 / 583 80113 1 mgCF™594-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 583 / 614 80114 1 mgCF™640R-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 642 / 662 80115 1 mgCF™680R-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 680 / 701 80116 1 mgCMAC, Blue Cell Tracking Reagent 353 / 466 FP-63323A 5 mgCMHC, Blue Cell Tracking Reagent 373 / 470 FP-46539A 5 mgCMFDA, Green Cell Tracking Reagent 492 / 517 FP-38855A 1 mgCMTMR, Orange Cell Tracking Reagent 541 / 565 FP-12662A 1 mgCFDA-SE 494 / 521 FP-52493A 25 mg
Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité
Mesure de viabilité par colorimétrie
Cell Counting Kit (CCK-8)Le kit de comptage des cellules CCK-8 permet un dosage colorimétrique sensible pour la détermination de la viabilité cellulaire et leur prolifération.
● Stable à +4°C ● Rapide à utiliser : prêt-à-l'emploi, sans attendre de décongélation et sans lavage● Procédure simple : ajouter le réactif et mesurer la DO
Principe : colorant moins toxique, car situé à l'extérieur de la cellule
Le sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST-8) est réduit par l'activité déshydrogénase dans les cellules pour donner du formazan de couleur orange, qui est soluble dans le mi-lieu de culture tissulaire. La quantité de colorant formazan, générée par les activités des déshydrogénases dans les cellules, est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes. La sensibilité de détection du CCK-8 est supérieure à celle des autres sels de tétrazolium tels que le MTT, XTT, MTS ou WST-1.
Analyse en microplaque
UptiBlue™, réactif de comptage des cellules vivantesL'UptiBlue™ est un indicateur d'oxydo-réduction, qui produit un changement colorimétrique et un signal fluorescent en réponse à l'activité métabolique. Le descriptif du produit est plus détaillé dans la section suivante pour la mesure de la viabilité par fluorescence.
La réduction liée à la croissance cellulaire provoque le changement de l'indicateur redox de la forme oxydée (bleue, non fluorescent) en forme réduite (rouge fluorescent).
Mode de détection au choix :● Spectrophotométrie : mesures d'absorbance à 570 nm et 600 nm● Fluorimétrie : excitation à 530-560 nm et émission à 590 nm
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Counting Kit (CCK8) 450 / - CK04-11 1 000 tests
UptiBlue™ de la forme oxydée (bleue) à la forme réduite (rouge)
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité
ResazurinCet indicateur redox est utilisé pour déterminer les niveaux d'énergie des cellules, et comme donneur d'électrons dans les dosages utilisant la Horseradish peroxydase (HRP). La HRP transforme la Resazurine en Résorufine, qui est détectée en colorimétrie ou fluorimétrie. L'application de la Résazurine est courante pour étudier la cytotoxicité à médiation cellulaire, la prolifération cellulaire et l'activité métabolique des mitochondries.
WST-1Le WST-1 en sel de tétrazolium est clivé en formazan par un mécanisme cellulaire complexe qui se produit principalement à la surface. Cette bioréduction est surtout dépendante de la production par glycolyse du NAD(P)H dans les cellules viables. Par conséquent, la quantité de colorant formazan formé est directement corrélée au nombre de cellules métabolique-ment actives dans la culture. Il convient pour la prolifération cellulaire et les dosages de cytotoxicité.
MTTLe MTT est un sel de tétrazolium qui est couramment utilisé pour détecter le métabolisme réducteur dans des cellules dans les études de viabilité, prolifération et cytotoxicité. Après réduction, les sels de tétrazolium sont transformés en produits très colorés qui peuvent être facilement quantifiés par mesure colorimétrique. Le MTT forme un produit formazan pourpre qui doit être solubilisé avant quantification. Le MTT est particulièrement utile pour le criblage de composés antiviraux et anticancéreux, et pour les études de l'effet de la cytokine sur la prolifération cellulaire.
XTTLe XTT fournit une méthode simple pour déterminer le nombre de cellules vivantes en uti-lisant les lecteurs de microplaques. La détermination du nombre de cellules vivantes est souvent utilisée pour évaluer la vitesse de prolifération cellulaire et pour cribler des agents cytotoxiques. Le XTT est un dérivé de tétrazolium. Similaire au MTT, le XTT mesure la via-bilité des cellules sur la base de l'activité des enzymes mitochondriales dans les cellules vivantes, qui réduisent le XTT, et qui sont inactivés peu de temps après la mort cellulaire. Contrairement au MTT, le XTT est réduit à un produit de couleur orange très soluble dans l'eau alors que le MTT formazan est insoluble. Il élimine ainsi l'étape de solubilisation requise pour le test au MTT. La quantité de produit soluble dans l'eau générée à partir de la réduc-tion du XTT est proportionnel au nombre de cellules vivantes dans l'échantillon et peut être quantifiée par photométrie à 475 nm. Le développement de la couleur en continu permet des mesures au cours du temps pour une gamme de détection étendue.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéResazurin Sodium Salt, >85 % 570, 600 / - FP-06224C 50 gResazurin Sodium Salt, >96 % 570, 600 / - FP-06224B 100 mg
Mesure de viabilité par fluorimétrie UptiBlue™, réactif de comptage des cellules vivantesL'UptiBlue™ est un indicateur d'oxydo-réduction, qui produit un changement colorimétrique et un signal fluorescent en réponse à l'activité métabolique. Ce colorant sans danger et non toxique a prouvé son utilité pour l'analyse quantitative de la viabilité cellulaire et de la proli-fération cellulaire, pour des analyses de cytokine et dans des études de cytotoxicité in vitro. Compatible avec de nombreuses espèces, l'UptiBlue™ est validé sur les lignées cellulaires animales et humaines, les bactéries et les champignons. Il ne nécessite pas de centrifuga-tion, et il fonctionne sur les cellules attachées ou en suspension. Sa sensibilité produit un signal reproductible à partir de 80 cellules.
Applications :● Déterminations de la prolifération cellulaire : soluble dans l'eau, stable en culture, et non toxique● Analyses de la viabilité cellulaire : activité métabolique et cytotoxicité influencent l'inten-sité du signal● Dosages des cytokines : mesure de la prolifération induite par les cytokines - les cellules peuvent être réutilisées ensuite pour d'autres expériences
La croissance cellulaire en continue maintient un environnement réduit tandis que l'inhibition de la croissance maintient un environnement oxydé. La réduction liée à la croissance pro-voque le changement de l'indicateur redox de la forme oxydée (bleue, non fluorescent) en forme réduite (rouge fluorescent).
Mode de détection au choix :● Spectrophotométrie : mesures d'absorbance à 570 nm et 600 nm● Fluorimétrie : excitation à 530-560 nm et émission à 590 nm
Calcein AM Cell Viability Assay KitLa Calcéine AM est un marqueur de cellules fluorescent vert largement utilisé. La Calcéine AM est perméable à la membrane, et peut donc être introduit dans les cellules par incubation. Une fois à l'intérieur des cellules, la calcéine AM est hydrolysée par les estérases endogènes en calcéine fortement chargée négativement. La calcéine fluorescente est retenue dans le cytoplasme des cellules vivantes. Le Calcein AM Cell Viability Assay Kit est conçu pour quantifier le nombre de cellules vivantes en fonction de l'intégrité de leur membrane cytoplas-mique. Il est un véritable test en point final pour la viabilité cellulaire. Le signal fluorescent est proportionnel au nombre de cellules vivantes dans l'échantillon.
UptiBlue™ de la forme oxydée (bleue) à la forme réduite (rouge).
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité
Réactifs avantageux à votre mesureViability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead CellsLe Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead Cells colore en vert et en rouge les cellules vivantes et mortes, respectivement. Le dosage utilise deux sondes qui détectent une activité d'estérase intracellulaire dans les cellules vivantes et l'intégrité de la membrane plasmique dans les cellules mortes. Les cellules vivantes sont marquées avec la Calcéine AM en solution. Les cellules mortes sont marquées en rouge grâce à une solution d'éthidium homodimère III (EthD-III), colorant de l'ADN imperméable à la membrane. Le kit est adapté à la microscopie en fluorescence, au lecteur de microplaques et à la cytométrie en flux. Les principes de dosage est applicable à la plupart des types de cellules eucaryotes, y com-pris les cellules adhérentes et certains tissus, mais pas aux bactéries ou aux levures. Cette méthode d'évaluation de la viabilité des cellules à base de fluorescence peut être utilisée à la place de l'exclusion du bleu de trypan, à la libération de 51Cr, et des méthodes similaires pour déterminer la viabilité cellulaire et la cytotoxicité. L'EthD-III a une plus grande affinité de liai-son à l'ADN et une fluorescence plus intense que l'EthD-I (70% plus lumineux que l'EthD-I).
Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells
● Double détection : détecter les cellules vivantes et mortes dans une même population de cellules● Simple et rapide : 15 min d'incubation et mesure sans lavage● Économique : Effectuer la viabilité et la cytotoxicité en même temps● Polyvalent : Analyse compatible en cytomètrie de flux et microscopie à fluorescence en utilisant les paramètres de la fluorescéine et de l'iodure de propidium.
Ce kit fournit une coloration fluorescente distincte sur les bactéries vivantes (en vert) et les bactéries mortes (rouge) à l'aide des sondes DMAO et EthD-III. Le kit fonctionne également sur les cellules mammifères. Le DMAO est un colorant d'acide nucléique-vert fluorescent qui colore toutes les cellules vivantes et mortes avec des membranes de cellules intactes ou endommagées. L'EthD-III est un colorant d'acide nucléique fluorescent rouge qui colore uniquement les cellules mortes avec les membranes cellulaires endommagées. Avec un mé-lange approprié de DMAO et d'EthD-III, les cellules avec des membranes cellulaires intactes ont une fluorescence verte, alors que les cellules avec des membranes cellulaires endomma-gées ont fluorescence rouge. Le kit est approprié pour une utilisation en microscope à fluo-rescence et en cytomètie de flux. Le principe d'analyse basé sur l'intégrité membranaire est général, et peut s'appliquer à la plupart des types de bactéries et des cellules mammifères.
Bacterial Viability and Gram Stain KitLe Bacterial Viability and Gram Stain Kit contient trois composants : CF™ 488A-WGA, DAPI et EthD-III en solutions pour distinguer les bactéries vivantes et mortes, ainsi que les gram-négatives et gram-positives. L'agglutinine de germe de blé marquée en vert se lie spécifiquement à la N-acétylglucosamine de la couche de peptidoglycanes de bactéries gram-positives. Le composant d'analyse de la viabilité bactérienne est basé sur l'intégrité de la membrane cellulaire. L'EthD-III est un colorant de liaison d'acide nucléique qui est imperméable à la membrane. Il colore sélectivement les cellules avec des membranes plas-miques dégradées. Toutes les cellules sont colorées en bleu avec le DAPI, colorant d'ADN perméable à la membrane.
Le Bacterial Viability and Gram Stain Kit a été testé sur les espèces bactériennes suivantes: Bacillus subtilis subsp. subtilis, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas fluores-cens, et Staphylococcus epidermidis.
Principe du dosage de la Viabilité avec la calcéine AM.
Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité
Réactifs avantageux à votre mesure Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining KitsLes Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining Kits sont conçus pour la discrimination entre les cellules vivantes et mortes en cytométrie de flux et en microscopie. Les colorants sont imper-méables à la membrane cellulaire et réagissent avec les amines. Les colorants pénètrent dans les cellules mortes qui ont une membrane dégradée, et se lient de manière covalente aux amines libres des protéines intracellulaires.Les Live-or-Dye™ sont extrêmement stables, permettant aux cellules d'être fixées et per-méabilisées sans perte de fluorescence ou de transfert de colorant entre les cellules. Le pro-tocole de coloration a été optimisé pour maximiser la discrimination entre cellules vivantes / mortes avec un minimum de coloration des cellules vivantes, afin d'éviter les interférences avec des immunomarquages. La gamme de huit colorants couvre un large spectre de fluo-rescence, pour une flexibilité maximale dans les analyses en multi-marquage.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéUptiBlue™, Viable Cell Counting Reagent 530-560 / 590 UP669412 25 ml
UP669413 100 mlUP669415 500 ml
Calcein AM Cell Viability Assay Kit 494 / 517 30026 1 000 testsViability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead Cells 494, 530 BF4710 300 tests
/ 517, 620 BF471E 150 testsViability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells 503, 530 / 530,
Cellules Jurkat tuées ou non à la châleur, puis marquées avec les colorants Live-or-Dye™.
Cellules HeLa marquées avec le Live-or-Dye™ 488/515, traitée à l'éthanol 15 % pendant 10 minutes pour tuer une fraction des cellules.
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité
Réactifs avantageux à votre mesureMesure de viabilité par Luminescence
ATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay KitL'ATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay Kit utilise l'oxydation dépendante de l'ATP de la D-luciférine par la luciférase. La lumière produite dépend de la quantité d'ATP dans une culture cellulaire, qui est proportionnelle au nombre de cellules viables. Le kit ATP-Glo™ peut être utilisé pour détecter l'ATP à partir d'une seule cellule ou de 0,01 picomole d'ATP. La linéarité du signal pour la détection de l'ATP est obtenue sur six ordres de magnitude. Le dosage est de type flash, conçu pour la détection en utilisant un luminomètre. Le signal luminescent est stable pendant au moins une minute.
ATP Determination Kit, 0,1 to 100 pmolCe kit de dosage sensible est optimisé pour la détermination rapide de faibles niveaux d'ATP pré-existant ou d'ATP formé en systèmes cinétiques. Après 10 minutes d'incubation du réactif de dosage, les concentrations d'ATP à partir de 0,1 pmol peuvent être déterminées avec pré-cision en utilisant le signal luminescent linéaire de la réaction de la luciférase. La diminution du signal luminescent et de la sensibilité est observée après des temps d'incubation de plus de 30 minutes.
ATP Determination Kit, 0,01 to 10 µM, up to 4h readingLe kit de détermination de l'ATP à signal stable est basé sur le système de luciférase-lucifé-rine. Ce dosage est optimisé pour les applications pour des concentrations d'ATP allant de 10 nM à 10 µM en place. Le signal de luminescence est stable pendant au moins 4 heures.
PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, Bright GlowLe PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, Bright Glow fournit un test par lumines-cence rapide, simple et homogène pour la détermination de la prolifération cellulaire et la cytotoxicité dans des cellules de mammifères. Le dosage peut être effectué dans un format de plaque de 96 puits et de 384 puits. La grande sensibilité de ce test permet la détection de l'ATP dans de nombreux systèmes biologiques, les échantillons de l'environnement et les denrées alimentaires. Le kit Bright Glow peut détecter un signal à partir de 10 cellules/puits. Le signal est stable pendant plus d'une heure.
PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, DTT-FreeLe PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, DTT-Free n'utilise pas de DTT, et possède un signal de luminescence stable pendant 4 heures. Le dosage peut être effectué dans un format de plaque de 96 puits et de 384 puits. Le kit DTT-Free peut détecter un signal à partir de 100 cellules/puits.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay Kit - / 560 30020-T 50 tests
30020-1 200 tests30020-2 1 000 tests
ATP Determination Kit, 0,1 to 100 pmol , (20-100 tests/ml) - / 560 FP-S2841A 10 mlFP-S2841B 30 mlFP-S2841C 100 ml
ATP Determination Kit, 0,01 to 10 µM, up to 4h reading - / 560 FP-BU1200 10 ml(20-100 tests/ml) FP-BU1201 30 ml
Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Prolifération
Cycle cellulaire
CytoTell™ GreenPour analyser les populations cellulaires hétérogènes, le CFDA-SE est l'indicateur de la prolifération cellulaire préférée. Il est largement utilisé pour l'analyse en temps réel de la cellule. Cependant, il existe quelques problèmes graves associés à l'utilisation de CFDA-SE pour la prolifération des cellules : 1). Le CFDA-SE est toxique pour les cellules, car il affecte de nombreuses fonctions des protéines en se fixant dessus ; 2). Le CFDA-SE a une réponse lente et s'avère peu pratique à utiliser. L'intensité de fluorescence des cellules marquées CFDA-SE en deuxième génération est diminuée de plus de 10 fois par rapport à la première génération. Il faut à attendre une autre génération pour commencer l'analyse de la proliféra-tion cellulaire; 3). L'élimination du milieu est nécessaire. Les milieux pour l'analyse cellulaire contiennent des composants sur les quels le CFDA-SE va réagir.
Le CytoTell™ Green a été développé pour éliminer les limitations du CFDA-SE. Il peut être utilisé pour le suivi à long terme des cellules marquées. L'analyse peut débuter dès les cel-lules non divisées et la première génération. Les cellules marquées avec CytoTell™ peuvent être fixées et perméabilisées pour l'analyse de cibles intracellulaires à l'aide de fixateurs contenant du formaldéhyde et des tampons standards de perméabilisation à base de sapo-nine.
ViaFluor™Cell Proliferation KitLes colorants ViaFluor™ diffusent passivement dans les cellules et marquent de manière co-valente les protéines intracellulaires. Les cellules sont ainsi marquées sur le long terme. Les fluorochromes ne sont excitables qu'après leur hydrolyse par les estérases intracellulaires. Les colorants réagissent ensuite avec les amines intracellulaires formant des conjugués fluorescents qui sont conservés dans la cellule. Immédiatement après coloration, une seule population fluorescente sera détectée par cytométrie de flux. A chaque division cellulaire, les cellules filles héritent environ de la moitié du marqueur fluorescent, ce qui permet de déter-miner le nombre de divisions cellulaires qui se produisent après marquage. La coloration peut être fixée par le formaldéhyde. Les kits de dosage de prolifération cellulaire contiennent dix flacons à usage unique de colorants, du DMSO anhydre pour préparer les solutions de colorant, et un protocole de marquage détaillé.
Cell Clock™ AssayLe Cell Clock™ Assay est un système de mesure en temps réel des quatre phases prin-cipales du cycle cellulaire des cellules en culture in vitro. Le test utilise un colorant redox perméable à la membrane.Après incubation, un changement de couleur se produit dans les cellules, avec une couleur distincte dans les cellules en phases G0-G1, S, G2 et M.
Suivi de la prolifération cellulaire de cellules Jurkat avec le CytoTell Green et le CFDA-SE pendant 9 jours.
Le ViaFluor 568™ a été utilisé pour suivre la division cellulaire au cours du temps. Les pics apparaissent de droite à gauche avec un rouge atténué à chaque génération.
Analyse d'images de cellules CHO marquées avec le Cell Clock™ Assay (phases : GO/G1 en jaune, S en vert, et G2 et M en noir).
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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Prolifération
Prolifération cellulaire par dosage de la synthèse d'ADNFluoProbes® EdU, dosage de la prolifération cellulaire par "click chemistry"
● Quantification de l'ADN nouvellement synthétisé● Protocole simple : Evite la dénaturation de l'ADN ● Détection par petite molécule : excellente diffusion in vivo
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéEdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) FP-MM982A 10 mg
EdU-Click™Cell Proliferation Assay KitsLa détection de la prolifération cellulaire est d'une importance capitale pour suivre la vitalité de la cellule, la détermination ou l'évaluation de la génotoxicité des médicaments anticancéreux. Les essais de prolifération cellulaire, avec l'EdU (5-éthynyl-2'-désoxy-uridine),fournissent une alternative supérieure aux dosages au BrdU (5-bromo-2'-désoxy-uridine). Les analyses Edu-Click™ évite les anticorps, et donc ne nécessitent pas la dénaturation de l'ADN pour la détection du nucléoside incorporé. De plus l' Edu-Click™ utilise la chimie click pour la détec-tion avec un large choix de colorants fluorescents. Le protocole de détection simplifié réduit le nombre total d'étapes et diminue significativement le temps nécessaire à l'expérience.
● Très fiable et facile à réaliser grâce à la chimie click● Procédé de détection rapide (seulement 30 min.)● Compatible avec le multiplexage● Des conditions douces, sans dénaturation de l'ADN
BrdU Cell Proliferation Assay KitCe kit est basé sur l'incorporation de BrdU dans les cellules cultivées en plaques de culture. Au cours des dernières 2 à 24 heures de culture, le BrdU est ajouté. Le BrdU est incorporé dans l'ADN des cellules en division. Il est ensuite détecté par un anticorps, qui implique de fixer, perméabiliser et dénaturer l'ADN. Tout cela se fait en une seule étape par un traitement avec la solution de fixation. La HRP catalyse la conversion du substrat chromogénique tétra-methylbenzidine (TMB) d'une solution incolore en solution bleu (ou jaune après l'ajout du réactif d'arrêt), dont l'intensité est proportionnelle à la quantité de BrdU incorporée dans les cellules. Le produit de réaction coloré est quantifié en utilisant un spectrophotomètre.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéEdU-Click™ 488 496 / 516 BCK-EdU488-1 100 testsEdU-Click™ 555 546 / 579 BCK-EdU555-1 100 testsEdU-Click™ 594 584 / 603 BCK-EdU594-1 100 testsEdU-Click™ 647 646 / 662 BCK-EdU647-1 100 testsBrdU FP-18538A 100 mgBrdUTP, 10 mM in TE buffer FP-T8199A 25 µl
FluoProbes EdU, dosage de la prolifération cellulaire par "click che-mistry" (suite)
Méristème d'Orge marqué avec l'EdU-Click™ 555.
G.57
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Cytotoxicité
Cytotoxicité cellulaireaCella™-TOX : Bioluminescence Non Radioactive Cytotoxicity Assay (GAPDH)
● Polyvalent - utile pour mesurer l'activité des cellules T, des cellules primaires, NK,complé-ment et autres agents lytiques. Le test peut être réalisé dans un milieu complété en sérum.● Homogène - en une seule étape, aucun lavage. ● Rapide – résultats en 3-5 minutes● Non destructif – permet d'analyser d'autres paramètres
Le kit aCella™-TOX mesure la libération de glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) dans les cellules mammifères et bactériennes. La méthode Acella™-TOX a été validée avec de nombreux modes de cytolyse, dont la cytotoxicité cellulaire (cellules T) dé-pendante du complément, des agents porogènes, la lyse par antibiotique des bactéries, et lyse mécanique ou par un détergent. La méthode est très générale, étant donné que toutes les cellules connues expriment de grandes quantités de GAPDH, et, contrairement à d'autres enzymes, le GAPDH est très facilement libéré du cytoplasme lors de la lyse cellulaire. Grâce aux formulations spécialement adaptées, la sensibilité de la méthode peut être amenée au niveau d'une cellule eucaryote, ce qui est impossible avec une autre méthode en phase liquide.
● Facilement adaptable à l'automatisation sans mélanger ou de séparation.● Mesure par absorbance en plaques 96 ou 384 puits ● Sensible et précis: à partir de 300 cellules.
Ce kit ne nécessite pas de pré-mélange des composants et a une sensibilité plus élevée par rapport aux dosages à base de tétrazolium (tels que MTT et XTT). Les composants du kit sont très stables et à la faible cytotoxicité, donc l'incubation de 1h peut être prolongée de 24 à 48h. La cytotoxicité est proportionnelle au ratio DO570/DO605.
Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit Ce kit fournit un test rapide, simple, précis et homogène pour la détection par fluorescence des cellules viables. Ce dosage est basé sur la résazurine oxydée bleu non fluorescente, qui est réduite à un colorant fluorescent rouge (résorufine) en acceptant un électron de la chaîne respiratoire mitochondriale dans les cellules vivantes. La quantité de résorufine produite est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes.
Cytotoxicity LDH Assay Kit
● Système de dosage colorimétrique basé sur le WST● Solution de travail stable 2 mois après reconstitution
Le Cytotoxicity LDH Assay Kit détermine la cytotoxicité en mesurant l'activité lactate dés-hydrogénase (LDH) libérée des cellules endommagées. La LDH libérée selon le schéma suivant. La LDH catalyse la déshydrogénation du lactate en pyruvate qui réduit le NAD en NADH. Le NADH réduit le sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST) en présence d'un médiateur d'électrons pour produire un colorant formazan orange. La quantité du colorant formazan ainsi formée est proportionnelle à celle du LDH libérée dans le milieu.La cytotoxicité peut être mesurée avec les cellules vivantes (dosage homogène). En outre, un dosage non homogène, qui est effectué en utilisant le surnageant de culture de cellules, est également possible. Contrairement aux produits concurrents, la solution de travail re-constituée est stable plusieurs mois.
Les valeurs de Log(EC50) sont -2,612 pour l'aCella™-TOX et -2,77 pour 51Cr.
Comparaison directe du 51Cr et de l'aCella™-TOX sur un même donneur avec des cellules Daudi.
0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10log Rituxan µg/mL
%AD
CC +
/-SD
-50
0
50
100aCella-TOX51Cr
La solution de travail est stable 2 mois.
Kit Dojindo
Concurrent P
Concurrent R
Condition de stockage (+4°C)
1 semaine
Non stockable
2 mois
Mesure des doses de D-LDH avec l'Amplite Fluori-metric D-LDH Assay Kit.
Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Cytotoxicité
Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kit (LDH assay)Les LDH Assay Kits offrent deux méthodes, par fluorescence ou par absorbance, pour détec-ter soit la L-lactate déshydrogénase (L-LDH) ou la D-lactate déshydrogénase (D-LDH). Les dosages sont robustes, et peuvent être facilement adaptés pour une grande variété d'appli-cations qui nécessitent la mesure de la L-LDH / D-LDH.Les Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kits 13809 et 13813 Kits fournissent une méthode basée sur l'absorption pour la détection de lactate déshydrogénases dans des échantillons biologiques tels que le sérum, le plasma, l'urine, ainsi que dans des échantillons de culture cellulaire. Dans le dosage enzymatique couplé, la LDH est proportionnellement liée à la concentration de NADH qui est spécifiquement suivie par une sonde du NADH chromogène. Les dosages sont spécifiques pour la LDH. Le signal d'absorption peut être lu en utilisant un lecteur de microplaque à ~ 575 nm. La sensibilité est de 3 mU/ml de lactate déshydrogénase dans un volume réactionnel de 100 µl.Les Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kits 13808 et 13812 sont basés sur la détection de la lactate déshydrogénase par fluorescence. Dans ces dosages enzymatiques couplées, la LDH est proportionnellement liée à la concentration de NADH, qui est spécifiquement suivie par une sonde fluorescente du NADH. Les dosages sont spécifiques pour la LDH. Le signal de fluorescence peut être lu en utilisant un lecteur de microplaques à fluorescence avec λex/em = 540 / 590 nm. La sensibilité est de 1 mU/ml de lactate déshydrogénase dans un volume réactionnel de 100 µl.
RubyGlow™ Luminescent Cytotoxicity Assay KitContrairement à d'autres dosages par luminescence émettant une lumière verte, ce kit de dosage luminescent produit une lumière rouge (619 nm) pour la mesure de la cytotoxicité en fonction de la production d'ATP dans les cellules métaboliquement actives. Cette longueur d'onde rend le kit compatible avec d'autres mesures simultanées sur les mêmes échantillons.
Mesure de la cytotoxicité : Des tests de cytotoxicité sont largement utilisés pour cribler la cytotoxicité dans des banques de composés. L'évaluation de l'intégrité de la membrane cellulaire est l'une des façons les plus courantes pour mesurer la viabilité cellulaire et les effets cytotoxiques. Le colorants peuvent être soit libérés des cellules (LDH), soit disponibles pour un marquage cellulaire en passant à travers une membrane celluaire dégradée (bleu trypan, colorants de noyaux). La cytotoxicité peut également être contrôlée en utilisant un indicateur redox. Les cellules viables réduisent les réactifs (MTS, résazurine) en un produit coloré. En plus d'utiliser des colorants pour indiquer le potentiel redox des cellules afin de surveiller leur viabilité, les chercheurs ont mis au point des dosages qui utilisent la teneur en ATP en tant que marqueur de viabilité. Plusieurs approches sont décrites dans d'autres sections du catalogue : viabilité cellulaire, étude de l'intégrité membranaire, colorants de noyaux, mesure d'activité enzyma-tique.
G.59
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité bactérienne
Mesure de la viabilité bactérienneLes kits de dosage de la viabilité bactérienne sont décrits dans la section Biologie Cellulaire | Comptage de cellules, viabilité et prolifération | Mesure de viabilité par fluorimétrie. Les kits de dosage par qPCR avec possibilité de cibler le type de bactérie sont décrits dans la section Génomique | Amplification PCR | PMA Real Time PCR kits.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéViability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells 503, 530 / 530, 620 BU1040 1 000 testsBacterial Viability and Gram Stain Kit 358, 490, 530 32001 200 tests
● Double fonctions : détection de l'activité caspase-3/7 et visualisation de la morphologie nucléaire apoptotique● N'interfère pas avec l'activité de la caspase, permettant un suivi de la caspase en temps réel● Coloration rapide en milieu de culture cellulaire sans lavage● Tolérant à la fixation au formaldéhyde et à la perméabilisation● Détectable par microscopie à fluorescence, cytométrie en flux, ou lecteur de micro-plaques● Pour une utilisation avec des cellules adhérentes ou en suspension
Le subtrat de caspase NucView™ fournit un outil pratique pour la détection de l'apoptose dans des cellules intactes en microscopie confocale ou en cytométrie de flux.Contrairement à d'autres substrats fluorescents de la caspase ou inhibiteur de caspase (fluo-rescent), les substrats NucView™ peuvent être utilisés pour détecter l'activité caspase au sein des cellules intactes sans inhiber la progression de l'apoptose. Les substrats NucView™ sont constitués d'un colorant fluorescent de l'ADN couplé à la séquence de reconnaissance d'une caspase. Le substrat, qui est initialement non-fluorescent, pénètre dans la membrane plasmique, puis dans le cytoplasme. Dans les cellules apoptotiques, la caspase clive le subs-trat, libérant le colorant de l'ADN, qui migre vers le noyau de la cellule et marque l'ADN. Ainsi, les substrats NucView™ sont bifonctionnels, ce qui permet la détection de l'activité de la caspase et la visualisation des changements morphologiques dans le noyau au cours de l'apoptose. La coloration est également fixable au formaldéhyde.
Les colorants NucView™ 405 et NucView™ 488 sont excités par un laser à 405 nm et 488 nm, respectivement. Le NucView™ 530 est détecté avec les filtres de la CYanine3. Ils peuvent être associés à d'autres fluorochromes, comme le marqueur de mitochondries, Mito-View, le marqueur de noyau, RedDot ou l'indicateur d'apoptose, Annexin V marquée. Des combinaisons d'un colorant NucView avec une deuxième sonde fluorescente sont proposées sous forme de kits.
La technologie NucView™ est protégée par les brevet US N° 8.092.784 et 8.586.325
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéNucView™ 405 Caspase-3/7 Substrate, 1 mM in DMSO 429 / 469 10405-T 10 µl
10405 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO 500 / 530 10402 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in PBS 500 / 530 10403 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells 500 / 530 30029-T 25 tests
30029 100 testsNucView™ 530 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO 528 / 563 10406-T 10 µl
10406 100 µlNucView™ 488 and 500 / 530 30062 100 testsMitoView™ 633 Apoptosis Assay Kit 622 / 648NucView™ 488 and 500 / 530 30072 100 testsRedDot™ 2 Apoptosis/Necrosis Assay Kit 488-647 / 695Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and Sulforhodamine 101-Annexin V
500 / 530 594 /615
30030 50 tests
Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and CF™ 594 Annexin V
500 / 530 593 / 614
30067 50 tests
Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and CF640R Annexin V
500 / 530 642 / 662
30073 50 tests
Cellules HeLa colorées avec le NucView™ 405.
G.61
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements cytoplasmiques
Substrats des Caspases et HTS Assay kitsLes HTS Assay Kits sont spécialement conçus pour des analyses à haut débit. Le kit fournit un système de détection rapide et hautement sensible de l'activité caspase par fluorescence. Le kit de dosage comprend un inhibiteur de caspase, qui peut être utilisé comme témoin négatif. De plus, un colorant est fourni dans le kit pour générer une courbe étalon.Dans les Fluorometric and Colorimetric Assay Kit, les tampon de lyse cellulaire et tampon de dosage sont séparés. Ils contiennent également le substrat enzymatique, l'inhibiteur d'en-zyme et un colorant pour courbe standard Sinon les substrats sont aussi disponibles seuls en dehors des kits.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCaspase 3 Assay Kit DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit 488 / 520 FP-BR4930 1 ml
Cell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay KitCe kit particulier est conçu pour suivre simultanément quatre caspases clés (caspase 3/7, 8 et 9) impliquées dans l'activation de l'apoptose des cellules en utilisant trois couleurs fluo-rescentes distinctes. Ce kit utilise les DEVD-ProRed™, IETD-R110 et LEHD-AMC comme indicateurs fluorogènes pour l'activité des caspase 3/7, 8 et 9 respectivement. Après clivage par les caspases, les substrats DEVD-ProRed™, IETD-R110 et LEHD-AMC génèrent trois fluorophores distincts : ProRed™ (fluorescence rouge), R110 (fluorescence verte) et AMC (fluorescence bleue).
Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 and Phosphatidylserine Detection KitCe kit permet la détection simultané de l'activité caspase 3/7 et des phosphatidylserines, qui apparaissent à la surface des cellules apoptotiques. Un colorant Hoechst sert à la contre-coloration du noyau en bleu.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay Kit 351 / 430 22820 100 tests
Triple marquage avec le Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 and Phosphatidylserine Detection Kit.
G.63
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements cytoplasmiques
Mesure du glutathion réduit (GSH)Le Cell Meter™ Intracellular GSH Assay Kit utilise le colorant non fluorescent Thiolite™ Green, qui devient fortement fluorescent après réaction avec un thiol (dont le GSH dans les cellules). Dans les cellules normales, le Thiolite™ Green est accumulé principalement dans le cytosol. Mais il est partiellement transporté vers les mitochondries dans des cellules apoptotiques faisant diminuer l'intensité de coloration. Les cellules colorées au Thiolite™ Green peuvent être visualisées en cytomètrie de flux (canal FL1). Le kit peut être utilisé en combinaison avec d'autres réactifs, tels que le 7-AAD pour une étude multi-paramétrique de la viabilité cellulaire et de l'apoptose. Le kit est optimisé pour le criblage des activateurs et des inhibiteurs de l'apoptose en cytomètrie de flux.
MCB Glutathione Detection KitLe MCB Glutathione Detection Kit mesure la diminution du niveau glutathion cellulaire (GSH), qui se produit pendant l'apoptose. Le Monochlorobimane (MCB), qui réagit avec des thiols pour former un produit fluorescent bleu, permet la quantification fluorométrique du GSH dans les lysats cellulaires.Le kit contient le tampon de lyse, le MCB et du GST pour le contrôle positif.
Détection du GSH dans les cellules Jurkat avec le Thiolite™ Green.
Cellules Jurkat traitées avec du DMSO (contrôle) ou de la stau-rosporine 1µM pendant 5h. Les niveaux de Glutathione sont déterminés avec le MCB Glutathione Detection Kit avec un lecteur de microplaque.
FluoProbes® 488 – Annexin VLe kit Annexin-V-FluoProbes® 488 contient l'annexine V, qui détecte les cellules apoptotiques. En effet peu de temps après que la cellule démarre l'apoptose, elle expose des phoshatidyl-serines (PS) à la surface de la membrane plasmique. L'Annexine V reconnaît les PS expo-sées à la surface cellulaire et se lie avec une grande affinité à elle. Les cellules apoptotiques sont colorées avec l'annexine-V marquée avec un protocole simple et rapide en une seule étape. Les cellules colorées peuvent être mesurées par microscopie à fluorescence ou en cytométrie de flux. Le kit Annexin-V-FluoProbes® 488 contient l'Annexin-V - FluoProbes® 488 et le tampon de liaison, assez pour effectuer au moins 100 tests.
Comme pour le marquage au FITC, le couplage est réalisé en dehors du site de reconnais-sance entre l'annexine V et les PS. Les conjugués FluoProbes permettent ainsi une meilleure efficacité de marquage et une plus grande reproductibilité.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéAnnexin V - FluoProbes® 488 (25µg/ml) + binding buffer 493 / 518 FP- BH4140 500 µlAnnexin V - FITC (50ug/ml) + binding buffer 494 / 518 FP-M1965C 500 testsAnnexin V - FITC (50ug/ml) 494 / 518 FP-M19651 500 µlAnnexin V – R-phycoerythrin (RPE) 565 / 578 FP-AH191B 100 tests
Stabilité du signal du FluoProbes 488 en comparai-son avec la fluorescéine.
Cellules Jurkat marquées avec le Apoptotic, Necrotic & Healthy Cells Quantitation Kit Plus Les cellules apoptotiques sont colorées avec CF™ 488A Annexin V (vert), les cellules apoptotiques nécrotiques avec EthDIII (rouge). Toutes les cellules sont colorées avec Hoechst 33342 (bleu).
G.65
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements de la membrane plasmique
Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Red Fluorescence Optimized for Microplate Readers
575 / 600 22792 100 tests
Détection de l'activité de liaison de l'Annexin V-iFluor™488 (# 20071) à la phosphatidylsérine dans des cellules Jurkat. Les cellules Jurkat ont été traitée avec la camptothécine 20 µM (rouge) ou non (bleu) dans un incubateur à 37°C, 5% de CO2 pendant 4-5 heures, puis colorées avec de l'Annexin V-iFluor™ 488 pendant 30 minutes. L'intensité de fluorescence de l'Annexin V-iFluor ™ 488 a été mesurée avec un cytomètre en flux FACSCalibur en utilisant le canal FL1.
Cell Meter™ Cell Viability Assay KitsL'intégrité de la membrane cellulaire est la méthode la plus fiable et pratique pour contrôler la cytotoxicité cellulaire. Basés sur le suivie de l'intégrité de la membrane cellulaire, les Cell Meter™ Cell Viability Assay Kits constituent un outil approprié pour étudier les fonctions des cellules proliférantes et non proliférantes. Les kits 22784, 22785, 22786 et 22787 utilisent des composés hydrophobes qui entrent facilement dans les cellules vivantes intactes.
Le kit 22789 utilise deux indicateurs, la CytoCalcein™ Green pour les cellules viables et un colorant d'ADN pour les cellules avec des membranes dégradées. La CytoCalcein™, forte-ment hydrophile, est bien conservée dans le cytoplasme de la cellule. L'activité estérase qui libère la fluorescence de la CytoCalcein™, est proportionnelle au nombre de cellules viables. Le colorant de liaison à l'ADN est très polaire et imperméable pour les cellules viables qui ont des membranes intactes. Il devient fluorescent seulement lors de la liaison à l'ADN des cellules mortes.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Blue Fluorescence 360 / 445 22785 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Blue with 405 nm Excitation 405 / 450 22784 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit,Green 495 / 515 22786 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Green/Red Dual 492 / 540 22789 200 tests
D'autres colorants pour déterminer l'intégrité membranaire sont décrits dans les sections :● Biologie Cellulaire (Analyse) | Sondes nucléaires | Colorants des ADN & ARN | Colorants des cellules fixées ou mortes● Biologie Cellulaire (Analyse) | Coloration des cellules | Traceurs cellulaires | Coloration des cellules vivantes | Calcein● Biologie Cellulaire (Analyse) | Comptage de cellules, viabilité et prolifération | Viabilité | Mesure de viabilité par fluorimétrie | Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining Kits
Changement dans la mitochondrieVoir les descriptifs dans les sections :● Biologie Cellulaire (Analyse) | Mitochondries | Sondes fluorescentes pour mitochondries | Mesure du potentiel membranaire mitochondriale● Biologie Cellulaire (Analyse) | Sondes membranaires | Mesure du potentiel membranaire | Marqueurs de potentiel membranaire mitochondriale● Biologie Cellulaire (Analyse) | Apoptose | Changements cytoplasmiques | Mesure du glutathion réduit
L'effet de la saponine sur la viabilité cellulaire dans des cellules Jurkat avec Cell Meter™ Cell Viability Assay Kit (# 22789). Des cellules Jurkat ont été trai-tées avec ou sans saponine 0,5% à 2x106 cellules/ml pendant 5 minutes. 100 ul de cellules non traitées (A), 50 ul de non traitée et 50 ul de cellules traitées (B), 25 ul de non traitée et 75 ul cellules traitées (C), et 100 ul de cellules traitées à la saponine 0,5% (D) ont été analysées en microplaque. Les cellules ont été incubées avec 100 µl/puits de CytoCalcein ™ Green / Iodure de propidium pendant 1 heure à 37°C. Le rapport d'intensité de fluorescence à 520 nm (exci-tation à 490 nm) sur 650 nm (excitation à 540 nm) est représenté dans le graphique ci-dessus (n = 6).
D (0.001)
C (0.5)
B (1.1)
A (1.6)
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
RFU
Ratio
(490
/520 n
m :
540/6
50 n
m)
G.67
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Fragmentation de l'ADN
Mesure d'apoptose par TUNEL
TACS® XL Kits
● Détection de l'apoptose in situ (par TUNEL) dans des sections de tissus congelés ou fixés en paraffine.● Aide à l'identification des morphologies apoptotiques
Le TACS® XL Kit incarne une approche robuste pour la détection in situ de l'apoptose. Il est basé sur l'incorporation de bromodésoxyuridine (BrdU) à l'extrémité 3'-OH des fragments d'ADN qui se forment au cours de l'apoptose. L'incorporation de BrdU par la TdT est plus efficace que les nucléotides Biotinylés ou marqués à la digoxigénine utilisés dans les autres analyses en TUNEL. Le système de détection utilise un anticorps anti-BrdU conjugué à la Biotine et une streptavidine-HRP. La combinaison de la spécificité de l'anticorps avec l'ampli-fication du signal avec les streptavidines / Biotines permet d'obtenir le meilleur rapport signal / bruit.
Le Kit TACS XL® DAB est fourni avec le subtstrat DAB et le contre-colorant Methyl Green. Le Kit TACS XL® Blue Label contient le subtsrat TACS® Blue Label et le contre-colorant Nuclear Fast Red. Ces kits fournissent également le réactif exclusif de perméabilisation Cytonin™ et les réactifs de contrôle TACS-nucléase™.
Produit Réf. QtéTACS® XL DAB Kit 4828-30-DK 30 testsTACS® XL Blue Label Kit 4828-30-BK 30 testsTACS® XL Basic Kit 4828-30-K 30 testsTerminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 9510-01K-EB 1 000 uTdT Enzyme 4821-96-05 25 µlCytonin™ permeabilization reagent 4876-05-01 5 mlBrdU FP-18538A 100 mgBrdUTP, 10 mM in TE buffer FP-T8199A 25 µl
Kits TUNEL avec colorants CF™ dyes et dUTP marquésLa technique TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling) est très sélective pour la détection de cellules apoptotiques, et non de la nécrose des cellules ou des cassures de brins d'ADN résultant d'irradiation ou de médicaments. Dans ce test, l'enzyme TdT catalyse l'ajout de dUTP marqué aux extrémités 3 des fragments d'ADN clivés. Le conjugué fluorescent du dUTP peut être utilisé pour la détection directe de l'ADN fragmenté par microscopie à fluorescence ou cytométrie de flux.
Coloration TUNEL de coupes en paraffine de glande mammaire de rat, 5 jours après sevrage en utilisant le CF™ 594-dUTP (rouge). Les noyaux sont colorés au DAPI (bleu).
Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection KitsLe Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit # 22840 contient l'Annexin V fluores-cente pour l'identification des cellules apoptotiques, qui expose les phosphatidyl serine à leur surface, le CytoCalcein Violet 450 pour marquer le cytoplasme des cellules vivantes et le colorant d'ADN, 7-AAD, pour marquer les cellules dont la membrane est dégradée.
Le Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit # 22843 contient l'Annexin V fluores-cente rouge, le CytoCalcein Violet 450 et le colorant d'ADN vert, DNA Nuclear Green™ DCS1.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit 405 / 450 22840 100 tests
PathoGreen™ Histofluorescent StainLe PathoGreen™ Histofluorescent Stain est un fluorochrome vert anionique fonctionnelle-ment similaire aux colorants Fluoro-Jade®. Ces produits colorent les neurones en dégénères-cence dans des coupes de cerveau fixées et des neurones en culture. Les produits colorent les neurones apoptotiques et nécrotiques après une exposition à des neurotoxiques. Le mé-canisme de coloration neuronale par des colorants fluorescents anioniques n'a pas été déter-minée. Il a été proposé que les colorants chargées négativement se lient à la charge positive des polyamines ou d'autres molécules spécifiquement générées à la mort des neurones.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéPathoGreen™ Histofluorescent Stain, 1000X in water 497 / 520 80027-5ml 5 ml
Neurones en dégénérescence dans une section d'hippocampe de souris marqués avec le Patho-Green™ Histofluorescent Stain.
G.71
ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Autophagie
Glowing Products for ScienceTM
Autophagie
Cell Meter™ Autophagy Assay Kit Le Cell Meter™ Autophagy Assay Kit utilise le colorant Autophagy Blue pour analyser l'acti-vité de l'autophagie. Le dosage est optimisé pour la détection directe de l'autophagie dans les cellules détachées et attachées. Le kit fournit tous les composants essentiels pour le protocole de dosage.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Autophagy Assay Kit 333 / 518 23000 200 testsMonodansyl cadaverine, Lysosomotropic Fluorescent Probe 333 / 518 FP-75581A 100 mg
FP-75581B 250 mgFP-75581C 1 g
Autophagy/Cytotoxicity Dual Staining KitLe Autophagy/Cytotoxicity Dual Staining Kit fournit un outil pratique pour étudier la régulation de l'autophagie et la cytotoxicité au niveau cellulaire. Le kit utilise le monodansylcadavérine (MDC), une substance incorporée dans les corps multilamellaires à la fois par un mécanisme de piégeage d'ions et par l'interaction avec les lipides membranaires, en tant que sonde pour la détection de vacuoles d'autophagiques. L'iodure de propidium est utilisé comme un marqueur de mort cellulaire. Le tamoxifène, un inducteur connu de l'autophagie, est inclus comme un contrôle positif.
Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéAutophagy/Cytotoxicity Dual Staining Kit 335 / 512 600140 100 tests