ALLOPRZECIWCIA ŁŁŁŁA ANTY -HLA - rckik. · PDF fileDost ęp do przeszczepu zimmunizowanych: ... 33 m-ce x 4800 z ł = 158 400 z ... B27 B*2705 H sV R gR A Ee G Re qIc aKa D Ed

1

ALLOPRZECIWCIAALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁA A ANTYANTY--HLAHLAW NOWOCZESNEJ DIAGNOSTYCE W NOWOCZESNEJ DIAGNOSTYCE

TRANSPLANTACYJNEJ TRANSPLANTACYJNEJ

Zastosowanie w doborze Zastosowanie w doborze immunologicznym do przeszczepu nerkiimmunologicznym do przeszczepu nerki

Hanna ZieliHanna Zielińńskaska

Laboratorium Immunologii Klinicznej, Transplantacyjnej i HematolLaboratorium Immunologii Klinicznej, Transplantacyjnej i Hematologiiogii

Uniwersyteckie Centrum Kliniczne w GdaUniwersyteckie Centrum Kliniczne w Gdańńskusku

Obecna Transplantacyjna diagnostyka immunologiczna przed przeszczepieniem nerki

� PRA-CDC co 3 miesiące

� Dobór HLA locus A, B, DR� Próba krzyżowa CM-CDC

(FCXM u zimmunizowanych?)

� Brak możliwości przeszczepu biorcy z powtórzonąniezgodnością !!!...?Przeciwciała anty-HLA dawcy (MM) tylko u 10% biorców

� Punkty za immunizację:

PRA 50-79%: 7 pkt

PRA >80%: przeszczep obligatoryjny

Brak diagnostyki posttransplantacyjnej

ZaletyZalety� Panel odzwierciedla fenotyp

HLA regionu … (vPRA też)

� Poziom detekcji odzwierciedlający reakcjęalloprzeciwciał in vivo (główna zaleta CM ,

wykluczenie odrzutu nadostrego)

� Selektywne wykrywanie alloprzeciwciał wiążących dopełniacz (flow wykrywa

IgG)

WadyWady� Wynik badania ściśle uzależniony

od panelu (zmienność odsetku PRA pochodną zmienności

panelu?) � Problem pacjentów

nowozgłoszonych (obserwacja) � NISKA CZUłłłłOŚĆŚĆŚĆŚĆ NA POZIOMIE

CM-CDC (pacjenci do retransplantacji, w trakcie terapii, leki, monitorowanie po tx)

� Wykrywamy tylko przeciwciała

anty-HLA klasa I� Fałszywie (+) r-cje od IgM.

BADANIE STOPNIA ZIMMUNIZOWANIA BADANIE STOPNIA ZIMMUNIZOWANIA -- DZIDZIŚŚPRA /metodPRA /metodąąąąąąąą CDC/CDC/

Proponowany algorytm badawczy monitorowania immunizacji

Screening: LABScreenMixed

Wynik (-) Wynik (+)

Powtótka co 6 tyg.(okołłłło 60%)

LABScreen PRAkl. I i/lub II

PRA 1-80 % PRA > 80 %(17 pacjentów)

Powtórka co 6 tyg Single Antigen

Programy HS

5

�� ~ 20% Oczekuj~ 20% Oczekująących cych (~ 500 os(~ 500 osóób, PRA>50: 100 osb, PRA>50: 100 osóób)b)

�� DostDostęęp do przeszczepu zimmunizowanych:p do przeszczepu zimmunizowanych:

[PRA>10%] ~15% przeszczep[PRA>10%] ~15% przeszczepóów od zmarw od zmarłłych dawcych dawcóów, w,

[PRA>80%] ~ 3% [PRA>80%] ~ 3% [wg UNOS 2007][wg UNOS 2007]

�� Czas oczekiwania Czas oczekiwania ((PoltransplantPoltransplant, 2009r), 2009r)

NiezimmunizowaniNiezimmunizowani: ~ 2 lata 8,5 m: ~ 2 lata 8,5 m--caca

ZimmunizowaniZimmunizowani PRA [80PRA [80--100%]: 100%]: 6 lat, 11 6 lat, 11 mm--cycy

Prawie 2x krPrawie 2x króótszy czas przetszy czas przeżżycia przeszczepu ycia przeszczepu

PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCHPROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH

6

�� Czas oczekiwania Czas oczekiwania -- aspekt finansowyaspekt finansowy

NiezimmunizowaniNiezimmunizowani: : 33 miesi33 miesiąąąąąąąącece

ZimmunizowaniZimmunizowani [HS] PRA [80[HS] PRA [80--100%]: 100%]: 83 miesi83 miesiąąąąąąąącece

Koszt miesiKoszt miesięęcznej dializy 1 osoby: cznej dializy 1 osoby:

400 z400 złł x 3(tyg) x 4 = x 3(tyg) x 4 = 4800 z4800 złł

Koszt dializy HS: 83 miesiKoszt dializy HS: 83 miesiąące x 4800 zce x 4800 złł = = 398 400 z398 400 złłKoszt nie HS: 33 Koszt nie HS: 33 mm--cece x 4800 zx 4800 złł = = 158 400 z158 400 złł

RRóóżżnica: nica: 240 000 z240 000 złł~20 pacjent~20 pacjentóów: 240 tys. x 20 = w: 240 tys. x 20 = 4 4 mlnmln 800 tys. z800 tys. złł

Brak Brak śśrodkrodkóów na diagnostykw na diagnostykęę ??????

PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH -- kosztykoszty

7

�� ZimmunizowaniZimmunizowani [PRA>0%, min 2x]:

Określenie grupy ryzyka z danym dawcą => badania: FCXM, FlowC4d

�� WysokozimmunizowaniWysokozimmunizowani[cPRA>80% = PRA-CDC >50% ?]

I. Efekty wdrożenia programów dla wysokozimmunizowanych na świecie

II. Praktyka: Identyfikacja aloprzeciwciał anty-HLA: testy typu Single Antigen – podstawy, różnice z PRAScreen

Algorytm badawczy Algorytm badawczy

8

…Przyjęcie obligatoryjnego (-) wyniku FCXM nie miałoby sensu z uwagi na wyłączenie z szansy transplantacji 28% biorców, u których w 1-szym roku graft funkcjonuje dobrze, bez incydentów AR….ale

ZIMMUNIZOWANI (ZIMMUNIZOWANI (PRAPRA--CDCCDC > 0% min. 2x)> 0% min. 2x)

PrPróóba krzyba krzyżżowa z wykorzystaniem owa z wykorzystaniem cytometrucytometru

przepprzepłływowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucaniaywowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucania

9

OSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIE –– ok. 20ok. 20--30% 30%

W grupie pacjentów z (+) FCXM dochodzi dwukrotnie częśęśęśęściej do odrzucania naczyniowego (n=455):28,9% z (+) FCXM vs. 12,6% z (-) FCXM;

Roczne przeżżżżycie przeszczepu 10% niższe (84% vs. 94%)

Ilham M.A. et.al.: Clinical significance of a positive flow crossmatch on the outcomes of cadaveric renal transplants. Transplant. Proc. 2008; 40(6):1839-43

ZIMMUNIZOWANIZIMMUNIZOWANI

PrPróóba krzyba krzyżżżżżżżżowa z wykorzystaniem owa z wykorzystaniem cytometrucytometruprzepprzepłłłłłłłływowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucaniaywowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucania

10

n=24 429

n=733

n=18 440

n=688

6%

12%

5,2%

7,8%

T-B+ 2,4%%; 5,3%T-B+ 1,8%%; 6,5%

1995 - 2005

11

LitycznoLitycznośćśćśćśćśćśćśćść przeciwciaprzeciwciałłłłłłłł –– [C4d]FlowPRA[C4d]FlowPRA

12

Zimmunizowani: wnioski

� Diagnostyka AR: wzrost kreatyniny następuje dopiero przy obniżeniu o połowę wartości GFR i aż 1/3 potwierdzonych histologicznie epizodów AR w pierwszych trzech miesiącach przebiega subklinicznie, tzn. przy prawidłowych wartościach kreatyniny, stąd

� (+) FCXM może stanowić niezależny czynnik ryzyka ostrego odrzucania (AR)wskazując grupę, która najbardziej skorzysta z indukcji

� (+) FCXM wiąże się ze zwiększonym ryzykiem przewlekłego odrzucania

13

Wysokozimmunizowani PRA > 80%

I. Efekty wdrożenia programów dla wysoko

zimmunizowanych na świecie

II. Identyfikacja aloprzeciwciał anty-HLA: testy typu

Single Antigen – podstawy, różnice z PRAScreen

14

�� Farmakologiczne Farmakologiczne

�� Biologiczne Biologiczne �� AAlgorytm „Emory” USA, UNOS

� „HLA-matchmaker” z AM Programme (ET-KIDNEYALLOCATION SYSTEM),

� FAMHS (Find Acceptable Mischmatches for HighlySensitized Patients), Barcelona

� British Transplantation Society

� Inne: “paired donor exchange”, „proxy donation”

15

EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY ALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHM

�� FlowPRAFlowPRA

�� Identyfikacja alloprzeciwciaIdentyfikacja alloprzeciwciałłSwoistoSwoistośści (odpowiedniki MM) ci (odpowiedniki MM)

wprowadzane do bazy danych wprowadzane do bazy danych

UNETUNET

HLA dawcy porHLA dawcy poróównywane z wnywane z

bazbaząą UNET => 0 MM => UNET => 0 MM =>

kwalifikacja wytypowanego kwalifikacja wytypowanego

biorcy do transplantacjibiorcy do transplantacji

(tzw. wirtualny CM)(tzw. wirtualny CM)

�� CrossCross--matchmatch (FCXM T, B) w (FCXM T, B) w

oośśrodku przeszczepiajrodku przeszczepiająącymcym

16

�� DostDostęęp do przeszczepu zimmunizowanych (PRA>30%):p do przeszczepu zimmunizowanych (PRA>30%):

25% 25% vsvs. 12% w tym samym czasie w UNOS. 12% w tym samym czasie w UNOS

n=220 n=220 txtx zimmunizowanymzimmunizowanym, 5 lat, 5 lat

�� Czas przeCzas przeżżycia przeszczepu (5 lat)ycia przeszczepu (5 lat)::

PRA>30%: 69% PRA>30%: 69% vsvs. 70% w grupie . 70% w grupie niezimmunizowanychniezimmunizowanych

PRA>80%: brak statystycznie znamiennej rPRA>80%: brak statystycznie znamiennej róóżżnicynicy

�� Schemat immunosupresji identyczny jak w grupie nie Schemat immunosupresji identyczny jak w grupie nie

obarczonej ryzykiemobarczonej ryzykiem

EMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHM

17

EurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantAMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptable MischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatch Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + �� HLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmaker�� vPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAKryteria włączenia:

1. Wynik testu PRA > 85% stwierdzony co najmniej dwukrotnie w teście virtual PRA + potwierdzona lityczność przeciwciał w

klasycznym PRA-CDC z panelem 50 populacji limfocytów)

2. Wykluczenie obecności autoprzeciwciał anty-HLA u biorcy (próba autologiczna) oraz przeciwciał klasy IgM (test

mikrolimfocytotoksyczny PRA z dodatkiem DTT)

3. Dobór w zakresie HLA-A,B,C,DR,DQ

http://etrl.eurotransplant.nl/cms/index.php?page=amprogram

18

Programy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentóóóóóóóów wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych –––––––– EurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplant

1. Analiza HLA dawców z panelu PRA z (-) reakcjami w PRA-CDC

2. Testy typu Single Antigen

3. Program HLA-Matchmakerwww.matchmaker.net

HLA pacjenta (biorcy):

A24, 31; B27, 51; DR4, 8

AM: A25, 26; B44; DR 9

HLA potencjalnych dawców (test PRA)A25, 31; B27, 51; DR4, 8

A26, 31; B27, - ; DR4, 8

A25, 26; B44, 51; DR4, 9A24, 26; B27, 51; DR4, 8

A24, 25; B27, 51; DR4, 8

A24, 31; B44, 51; DR4, -

A24, 31; B27, 44; DR4, 8

A25, 31; B44, 51; DR4, 8

A25, 31; B44, 51; DR4, 9A25, 31; B44, 51; DR8, 9

Określenie akceptowalnych niezgodnośśśści (Acceptable

Mismstch) przez ETRL:

Standards for Histocompatibility Testing, wersja 5.6, kwiecień 2008; punkt G 3.110

Akredytacja EFI lub ASHI

19

VirtualVirtual PRAPRA

20

ET: ET: AcceptableAcceptable MischmatchMischmatch ProgramProgramDostDostęęęęęęęęp do przeszczepup do przeszczepu

W pierwszym roku

przeszczepiono 68 z 129 wysoko zimmunizowanych. W tym 57 z 68 pacjentówotrzymało nerkę z programuET-AMP (średnia oczekiwania9,7 miesięcy, w tym większośćznalazła odpowiedniego dawcęw pierwszych sześciumiesiącach).

W oparciu o klasyczne zasady ET-KAS, dokonano 11-tu transplantacji (średniaoczekiwania 18,6 miesięcy).

21

ET: ET: AcceptableAcceptable MischmatchMischmatch ProgramProgramCzas przeCzas przeżżżżżżżżycia przeszczepuycia przeszczepu

22

� Zwyczajowo stopień doboru mierzony ilością niezgodnych z dawcąantygenów HLA-A, B, DR (0-6 MM: mismatch)

� Dlaczego obserwuje się tak duży rozrzut w funkcjonowaniu nerek o 5-6 MM u biorców przeszczepu?

ET: AMP + ET: AMP + HLAMatchmakerHLAMatchmaker

http://www.hlamatchmaker.net/

23

� Algorytm doboru pary na poziomie analizy podobieństwa epitopów (antygenowość +immunogenność), nie antygenów.

� Każdy antygen HLA przedstawiony w postaci ciągu krótkich sekwencji peptydowych (EAA: eplets amino acid), opisujących regiony polimorficzne zdolne do indukcji powstawania przeciwciał

ET: ET: HLAMatchmakerHLAMatchmaker

http://www.hlamatchmaker.net/

HLA-A2

24

� Rodzaj wytwarzanych przez biorcęprzeciwciał zależy od jego własnych HLA

� Każda nerka jest inaczej immunogenna względem danego biorcy o takiej samej liczbie niezgodnych HLA

ET: ET: HLAMatchmakerHLAMatchmaker

http://www.hlamatchmaker.net/

25

HLA-A2, 68;HLA-B27, 44

HLA-A2, 24;HLA-B7, 8

HLA-A2, 68;HLA-B35, 44

Polimorficzne epitopyHLA-B51(5)

HLAMatchmakerHLAMatchmakerImmunogenność HLA-B51dawcy dla

haplotypu biorcy:

α1

α2

α2 α1

β2M

α3

peptyd

26

Immunogenność.

Czy są różnice w immunogenności HLA-B8?

Biorca 1: HLA-A2,A30; B18,B27; Cw2,Cw4

Biorca 2: HLA-A2,A31; B42,B53; Cw2,Cw7

27

Biorca 1: HLABiorca 1: HLA--A2,30; B18, 27; Cw2,w4A2,30; B18, 27; Cw2,w4

82 90 105 107 127 131 138 142 144 147 149 151 156 158

A02 lRg A S W K R T T tKh W aAh aHv L A

A30 lRg A S G N R T I tQr W aAr aRw L A

B18 lRg A P G N S T I tQr W aAr aRv L A

B27 lLr A P G N S T I tQr W aAr aRv L A

Cw2 lRg A P G N R T I tQr W aAr aRe W A

Cw4 lRg D P G N R T I tQr W aAr aRe R A

Donor HLA

B8 lRg A P G N R T I tQr W aAr aRv D A

163 166 171 177 180 184 186 193 199 207 246 248 253

A02 T Ew Y Et Q A K Av A S A V Q

A30 T Ew Y Et Q P K Pi A G A V E

B18 T Ew H Et Q P K Pi A G A V E

B27 E* Ew Y Et Q P K Pi A G A V E

Cw2 E* Ew Y Et Q Eh K Pv A G A V E

Cw4 T Ew Y Et Q Eh K Pv A G A V E

Donor HLA

B8 T Ew Y Dt E P K Pi A G A V E

28

Patient HLA 9 12 14 17 41 45 56 62 66 70 74 76 80

A02 A*0201 F sV R gR A Me G Ge rKv aHs H Vd gTl

A30 A*3001 S sV R gS A Me R Qe rNv aQs D Vd gTl

B18 B*1801 H sV R GR A Te G Rn qIs tNt Y Es rNl

B27 B*2705 H sV R gR A Ee G Re qIc aKa D Ed rTl

Cw2 Cw*0202 Y aV R sR A Ge G Re qKy rQa D Vn rNl

Cw4 Cw*0401 S sV W gR A Ge G Re qKy rQa aD Vn rNl

Donor HLA

B8 B*0801 D aM R gR A Ee G Rn qIf tNt D Es rNl

Biorca 1: HLABiorca 1: HLA--A2,30; B18, 27; Cw2,w4A2,30; B18, 27; Cw2,w4

Biorca 1: Biorca 1: wzglwzglęędem HLAdem HLA--B8 ma 6 niezgodnych tripletB8 ma 6 niezgodnych tripletóóww

29

THE NUMBER OF AMINO ACID TRIPLET DIFFERENCES BETWEEN PATIENT AND DONOR IS

PREDICTIVE FOR THE ANTIBODY REACTIVITY AGAINST MISMATCHED HUMAN LEUKOCYTE

ANTIGENS

Transplantation. 2007 Apr 27;77(8):1236-9.

30HLA-B8 nie jest niezgodnośśśściąąąą dla biorcy nr 2

Biorca 2: HLA-A2, 31; B42, 53; Cw2, w7

31

� Przykład:

Pacjent PRA=94% o genotypie

HLA-A24,-;B38,35;Cw4,-. PFD na znalezienie dawcy wynoszą PFD=0,007% (1 na 14000dawców bez ryzyka immunologicznego).

Zastosowanie aplikacji HLAMatchmaker w połączeniu z PRA-CDC (panel 50-dawców o znanych HLA), PFD zwiększa do 0,115%

(1 na 870 dawców).

źródło: Transpl. Vol. 75, 889-897, No. 6, 2003

HLAMatchmaker a pacjenci HS:

32

HLAMatchmaker korzyści:

� Możliwość określenia najmniej immunogennej pary dawca – biorca

� Określenie dodatkowych, akceptowalnych niezgodności dla zimmunnizowanych pacjentów

� Ograniczanie liczby zimmunizowanych po przeszczepie

� Poprawa przeżycia przeszczepu

� Pacjenci zgłoszeni do retransplantacji: Możliwość przeszczepiania z powtórzonym MM

33

WysokozimmunizowaniEfekty programów dla wysoko zimmunizowanych

wdrożone na świecie

Programy skierowane głównie do pacjentów

wysoko zimmunizowanych (HS) celem:

� Poprawy dostępu do przeszczepu� Wydłużenia czasu przeżycia przeszczepu

34

II. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁw praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktyce

HLA-A2

HLA-B7

PE anty- human IgG

Grupy testów serii LABScreen

Screening

PRA

Single Antigen

HLA-A2

HLA-A24

HLA-B27

HLA-B44

HLA-Cw1

HLA-Cw5

Proponowany algorytm badawczy monitorowania immunizacji

Screening: LABScreenMixed

Wynik (-) Wynik (+)

Powtótka co 6 tyg.(okołłłło 60%)

LABScreen PRAkl. I i/lub II

PRA 1-80 % PRA > 80 %(17 pacjentów)

Powtórka co 6 tyg Single Antigen

Programy HS

20 µ l surowicy 5µ l „beadsów”

klasa I i /lub klasa II(lub wariant combo)

Inkubacja 30 min, RT

3x płukanie

+ PE-anty IgG, 30 min RT

2x płukanie

Luminex

IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁ

37

ZielonyZielony laser laser oznacza ilooznacza ilośćśćanalituanalitu

Czerwony laser wykrywa i identyfikuje mikrokulkę, badany

analit

Rozdzielczość =>

Ponad 155 specyficzności klasy I, II

Patient Typing Abs Produced

A*0302 A*0301

A*2403 A*2402

DRB1*1337 DRB1*1301

Sandra Rosen-Bronson, Ph.D; Georgetown University; OLI Visuals, 2003

Carol Pancoska, Ph.D, DIP; The Sharing Network; OLI Visuals, 2003

IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁSingle Single Single Single Single Single Single Single AntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigen

HLA Fusion® Software

kalkulacja wynikkalkulacja wynikóów dla w dla

alloprzeciwciaalloprzeciwciałłłłłłłł

� NBG Ratio = Normalized Background ratio

[Sample bead#N - Sample bead#NC (001)][LSNC bead#N - LSNC bead#NC (001)]

Normalization by Subtraction

122.07 – 39.02121.31 – 147.12

= 1.661

Zasada kwalifikacji reakcji (+/-)

� NBG (normalized background ratio) dla wariantu LS-NC(alternate BG)

�NBG > 1,6: pozytywne.

�NBG pomiędzy 1.2 - 1.5 = szary kolor

�NBG < 1.2: negatywne

�Wszystkie „beadsy” muszą być negatywne aby kwalifikowały się jako (-)

�Nie wszystkie „beadsy” z danym Ag muszą być (+) aby kwalifikować alloswoistość jako obecną.

SPOSÓB OKREŚŚŚŚLANIASPECYFICZNOŚŚŚŚCI PRZEZ

OPROGRAMOWANIEEPITOPE ALGORITHM EPITOPE ALGORITHM

w wariancie LABScreenPRALABScreenPRA

Wstęp

� Ogon (Tail analysis) powinien być traktowany

jako wstęp do właściwej analizy specyficzności

obecnych w surowicy, ma jednak podstawy

teoretyczne.

� Algorytm wykorzystywany w OLI rozwinął siępodczas „8th International Histocompatibility

Workshop”:

� Formuła statystyczna odpowiednia do analizy

wieloswoistych surowic (opracowanie na podstawie analogii z panelami komórkowymi)

TAIL ANALYSIS

� Częstości antygenów obecnych na mikrosferach = częstościom w populacji

(odzwierciedlenie panelu) np. HLA-A2 vs. HLA-A66 dlatego

� Alloprzeciwciała anty-A2, A1, A3 lub Cw sąoceniane bardziej restrykcyjnie, wg algorytmu R-value (nie wg [% positive] czy [Stranght])

R-value. (Rvalue=√ Χ²/N gdzie Χ²=N[(ad-bc)-N/2]²/[(a+b)(c+d)(a+c)(b+d)]) gdzie (a)=rreal

positive, (b)=false positive, ©=false negative, (d)=true negative.

� Algorytm „naśladuje” manualne kreowanie „ogona” =>

� 61 surowic: wykryto łącznie 166 specyficzności alloab, 136 wykryto poprawnie (zgodność 83%). (Potwierdzenie na single antigen)

� Nie ma w 100% poprawnego algorytmu –poliklonalna odpowiedź, wysokie miana: testy typu single antigen.

�� PrzykPrzykłłłłłłłład 1 ad 1 ((Cz. M)Cz. M)

PRA (panel 43): 27%

Prawdopodobne źźźźródłłłła immunizacji: ciążążążąże (brak przetoczeńńńń)

1. Screen: klasa I (+++)klasa II (++) =>

2. Identyfikacja: Alloprzeciwciałłłła anty-HLA klasa I, II (mix, wskazana analiza single antigen)

ANALIZA ALLOPRZECIWCIAANALIZA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁ –– KLASA IKLASA I

KLASA I KLASA I –– CREG A1,11,9(23,24)CREG A1,11,9(23,24)

WYNIK:silna reakcja (MFI 10-14 tys) z antygenami HLA kl. IPRA: 25 % (reakcja pozytywna w 25% analizowanych beadsów)

SWOISTOŚŚŚŚCI POZYTYWNIE REAGUJĄĄĄĄCYCH AG: HLA A 23(9), 24(9)HLA A 23(9), 24(9)

ANALIZA ALLOPRZECIWCIAANALIZA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁ –– KLASA IIKLASA II

WYNIK:silna reakcja (MFI 8-15 tys) z antygenami HLA kl. IIPRA: 26 % (reakcja pozytywna w 26% analizowanych beadsów)

SWOISTOŚŚŚŚCI POZYTYWNIE REAGUJĄĄĄĄCYCH AG: HLA DR 7, 9

(Ostrożżżżnie z całąłąłąłą grupąąąą CREG DR4,7,9 )

„„RODZAJRODZAJ”” ODPOWIEDZI HUMORALNEJODPOWIEDZI HUMORALNEJA. A. „„monomono””swoistyswoisty

„„RODZAJRODZAJ”” ODPOWIEDZI HUMORALNEJODPOWIEDZI HUMORALNEJA. „poli”swoisty

korzyści: określenie „akceptowalnych antygenów”

58

Dziękuję za uwagę