ALERGIA MECANISMOS INMUNOLOGICOS METODOS DE DIAGNOSTICO Dr. Edgar Matos Benavides Inmunologo Alergologo
ALERGIA MECANISMOS INMUNOLOGICOS
METODOS DE DIAGNOSTICO
Dr. Edgar Matos BenavidesInmunologo Alergologo
PREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICASPREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICASEN LA POBLACION PEDIATRICA GENERALEN LA POBLACION PEDIATRICA GENERAL
En la actualidad se estima que:En la actualidad se estima que:• un 3% de los niños son alérgicos a alimentosun 3% de los niños son alérgicos a alimentos• un 8 % presentan dermatitis atópicaun 8 % presentan dermatitis atópica• entre un 8 % y un 10% padecen asma entre un 8 % y un 10% padecen asma • casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis.casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis.
La mitad de la población mundial será alérgica en 2050
La mitad de la población mundial será alérgica en 2050
El País, martes 24 de junio de 2003El País, martes 24 de junio de 2003
ENFERMEDAD ALERGICA: ETIOLOGIA
PredisposiciónGENETICA
Exposición aALERGENOS
ENFERMEDAD ALERGICA
CONTAMINACION
HUMO TABACO
VIRUS-BACTERIAS
ALERGIA
“ “ Reacción exagerada de defensa a Reacción exagerada de defensa a una sustancia particular, que puede una sustancia particular, que puede ser inhalada, ingerida o inoculada en ser inhalada, ingerida o inoculada en nuestro cuerpo y provocar una nuestro cuerpo y provocar una respuesta inmunológica de tipo respuesta inmunológica de tipo inflamatorio. ” inflamatorio. ”
Alergia una Enfermedad Sistémica RINITIS ALERGICA
CONJUNTIVITISSINUSITISOTITISRGE
ALERGIA ALIMENTARIA
DERMATITIS ATOPICA
ASMA BRONQUIAL
Alergia
URTICARIAANGIOEDEMAPRURIGO PORINSECTOS
histamina,factor quimiotáctico de los eosinófilosfactor quimiotáctico de los neutrófilos
leucotrienos prostaglandinas y tromboxanos
factor activador de las plaquetas IL- 4 e IL- 5
• vasodilatación• aumento de la permeabilidad vascular postcapilar• edema• contracción de la musculatura lisa• aumento de la secreción de las glándulas mucosas
Componentes principales que se requieren para que la reacción alérgica se desencadene
IgEIgEALERGENOSALERGENOS
MastocitosMastocitos HistaminaHistamina
LeucotrienosLeucotrienos
1ªIdentificar y relacionar la clínica
del paciente con los posibles alérgenos: HISTORIA CLÍNICA
Etapas diagnósticas
2ªDemostración de sensibilización mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:Pª CUTÁNEA, IgE SÉRICA ESPECÍFICA
3ªConfirmación de que el alérgeno es el responsable de
la clínica:Pª de PROVOCACION o EXPOSICIÓN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS
PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA
PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA
+ Diámetro 3 mm
15 minutos
solo están indicadas en el estudio de la alergia medicamentosa y venenos
Prick-Film. Lectura de prick test con Escáner
Prick-Film. Lectura de prick test con Escáner
Aplicación Alergenos Punción con LancetaSecado Piel Espera de Reacción
Contorneado de Habones Traslado a Hoja Codificada Lectura Escáner Impresión Resultados
FUNDAMENTO RIDA.pdf
La prueba se basa en el principio del análisis del immunoblot. Los alérgenos especiales están pegados a la superficie de las membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reacción.
.
B
NBT
B
B NBT
Comparación con el método de referencia (IgE):
Comparación con el skin-prick test:
Sensibilidad: 84.3 % Sensibilidad: 95.1 %
FUNDAMENTO immulite.pdf
•IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgE Específica es un análisis enzimoinmunométrico quimioluminiscente en fase sólida, en dos pasos,
•Se basa en cinéticas en fase líquida en formato de bola10,11 .
• Representa un avance significativo sobre los métodos convencionales basados en la unión de los alérgenos a un soporte sólido, como los discos de papel.
•Los alérgenos se unen covalentemente a una matriz polímero/copolímero soluble, la cual a su vez está marcada con un ligando. El uso de un copolímero aminoacídico aumenta la cantidad de alérgeno que puede soportar la matriz.
FA
FA
FA
S
FUNDAMENTOUNICAPSYSTEM.doc
UniCAP IgE total es un análisis cuantitativo in vitro para la medida de IgE total en muestras humanas del suero o del plasma.
Anti-IgE, covalente unida a ImmunoCAP, reacciona con el IgE total en el espécimen paciente.
Se los anticuerpos contra IgE marcados con una enzima se agregan para formar un complejo.
Se agrega una solución de desarrollo y una para parar la reacción.
Después de parar la reacción, la fluorescencia se mide. La fluorescencia es directamente proporcional con la concentración de IgE en la muestra..
E
E4MUP
E4MUP
Tecnología ImmunoCAP CAP System™
ImmunoCAP®
ImmunoCAP™
Capacidad de ligando: tubo recubierto; disco papel; esponja celulosa
Tuborecubierto
ImmunoCAP
Disco papelactivado
Esponja celulosaactivada
1 50 150
™
Fases sólidas:
IgE del paciente
Alergenos (Anti-IgE acoplado al ImmunoCAP)
Anti-IgE paciente unido a enzima β-GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente
Sustrato de la enzima β-GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE
Reacción enzimática: β-Galactosidasa
Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente Detección
FEIA: FluoroenzimoimmunoensayoFEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo
N. Liappis, A. Starke, Allergologie, Jahrgang 20; no 6/1997: 291-295
Reproducibilidad del Sistema ImmunoCAPReproducibilidad del Sistema ImmunoCAP
Patrón WHO 75/502 Tecnología Patrón WHO 75/502 Tecnología ImmunoCAPImmunoCAP™™
W HO
El primer test alergológico del mundo con calibracióndirecta según patrones 2º IRP WHO 75/502 pera IgE.
Similitudes y diferencias entre la tecnología Phadia ImmunoCAP™
in vitro y la prueba cutánea in vivo
Características Tecnología Phadia ImmunoCAP
Prueba cutánea in vivo
Alta sensibilidad Sí SíAlta especificidad Sí Sí /NoAlta reproducibilidad Sí NoResultados cuantitativos Sí Sí /NoCalibrado según la OMS Sí NoPrograma con garantía de calidad Sí No
Prueba utilizable con independencia Sí Nodel tratamiento farmacéuticoPrueba utilizable con independencia Sí Nodel estado cutáneo del paciente(es decir, dermatitis atópica)
Referencia: From In Vitro Veritas Broschyre
IG E Especifica
Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening
1.-La identificación precoz de los niños que padecerán asma persistente es de capital importancia2.-La atopia es el principal factor de riesgo en el padecimiento de asma
3.-Es posible reconocer la atopia, desde muy temprana edad, identificando la sensibilización a alimentos y a inhalantes4.-En niños con dermatitis atópica, la presencia de esta sensibilización tiene un alto valor pronóstico de evolución futura a asma
Conclusiones
1ªIdentificar y relacionar la clínica
del paciente con los posibles alérgenos: HISTORIA CLÍNICA
Etapas diagnósticas
2ªDemostración de sensibilización mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:Pª CUTÁNEA, IgE SÉRICA ESPECÍFICA
3ªConfirmación de que el alérgeno es el responsable de
la clínica:Pª de PROVOCACION o EXPOSICIÓN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS
COMO SE Dx ALERGIAS22°PRUEBAS °PRUEBAS CUTANEASCUTANEAS
Ig E SéricaIg E Sérica
1° HISTORIA 1° HISTORIA
CLINICACLINICA
3°PRUEBAS DE PROVOCACION3°PRUEBAS DE PROVOCACIONTEST DE ACTIVACION BASOFILOSTEST DE ACTIVACION BASOFILOS
BASOFILOSBASOFILOS
TABTAB
CITOMETRIA DE FLUJO
CITOMETRIA DE FLUJOProcedimiento que mide características de dispersión y fluorescencia que poseen las células conforme pasan por un rayo de luzLas células interaccionan con un rayo de luz causando dispersión dependiendo del tamaño y la complejidad
CITOMETRIA DE FLUJO
DIGITALIZACION
REPRESENTACION GRAFICA
ANALISIS
LABORATORIO DE CITOMETRIA DE FLUJO Y BIOLOGIA MOLECULAR
IHEMATEC
Test de Activacion de Basofilos (TAB)Es una herramienta útil en el
diagnóstico in vitro de las reacciones de hipersensibilidad inmediata a los Alergenos, Medicamentos, si estas son causados por mecanismos dependientes de IgE u otros mecanismos que conduzcan a la liberación de histamina.
MARCADORES CELULARES
CD63 CD203c
•Es una proteína granular tetraespan de 53 Kda •Está anclada en los gránulos de la membrana de los basófilos •Por CM se detecta Anti CD63 PE y anti IgE FITC
•Es un Ag de superficie, expresado en basófilos humanos recientemente reconocida por el Acm 97A6•Es una ectoenzima multifuncional llamada pirofosfatasa ectonucleotide phophodiesterase 3 (E-NPP3)
La población celular de interés se marca con anticuerpos monoclonales en presencia del alérgeno. Previamente al análisis por citometría de flujo, los eritrocitos se someten a lisis. A continuación se excluyen los linfocitos T (células positivas CD3) y después se analizan los basófilos utilizando la expresión de CRTH2 y CD203c. Los basófilos no activados y en reposo se identifican como CRTH2posCD203cdimCD3neg, mientras que los basófilos activados in vitro se identifican como CRTH2posCD203cbrightCD3neg.
FUNDAMENTO
muestraHISTOGRAMA DE MUESTRA
SANGUINEAMUESTRA CON METAMIZOL
1mg/2ml
CONTROL POSITIVO CONTROL NEGATIVO
MODELO DE RESULTADO DE TAB
TEST DE ACTIVACIÓN DE BASÓFILOS USANDO CD203C VERSUS PRUEBAS
CUTANEAS EN LA DETERMINACION DE REACCIONES ADVERSAS A METAMIZOL: UN
ESTUDIO PILOTOMatos Edgar1, Loyola-Sosa Steev1,2, Paredes José1,
Inocente Rosario1, Paiva Mario1, Ríos Hugo1, Álvarez Marco1
1 Instituto de Hemaféresis y Terapia Celular (IHEMATEC)2 Universidad Peruana Cayetano Heredia
Métodos y Materiales• Participaron 40 pacientes: 75.0% (30/40) con
historia clínica positiva.
Historia Clínica de RAM AINE
AINE no MetamizolMetamizol
Pruebas CutáneasTest de Activación de
Basófilos CD203c
Prick Test
Intradermorreacción
ResultadosPRUEBAS CUTÁNEAS
Prick Test IntradermorreaciónTAB
CD203cPositivo Negativo Positivo Negativo
Positivo 0 4 (FN) 1 3 (FN)Negativo 0 36 0 36
TOTAL 0 40 1 39
% sensibilización por RAM a Metamizol (30/40) según:Prick Test: 0.0% (0/30)Intradermorreación: 3.3% (1/30)TAB CD203c: 13.3% (4/30)
Resultados• PT vs. TAB-CD203c:
– Sensibilidad: 0.0%– Especificidad: 100.00% – Valor Predictivo Negativo: 90.0%
• IR vs. TAC-CD203c:– Sensibilidad: 25.0%– Especificidad: 100.00% – Valor Predictivo Negativo: 92.3%– Valor Predictivo Positivo: 100.0%
Conclusiones• Se tiene exitosamente una primera fase de
evaluación de desempeño del TAB-CD203c.• TAB-CD203c presenta mejor performance
para determinar alergia a fármacos; tipo Metamizol, frente a pruebas cutáneas.
• Es necesario realizar estudios que evalúen el costo-beneficio del uso del TAB-CD203c.
DISCUSION
• La BAT constituye una herramienta diagnóstica valiosa de interés en el estudio de reacciones de hipersensibilidad inmediata a los medicamentos.
• Reproduce in vitro mecanismos de hipersensibilidad involucrados en reacciones alérgicas inmediatas.
• También permite el diagnóstico de reacciones alérgicas y pseudoalérgicas, particularmente por medicamentos que a menudo no son detectables por técnicas serológicas como la determinación de IgE específica.
DISCUSION
La reproducibilidad intra-ensayo es muy notable en la alergia a medicamentos con coeficiente de variación intra-ensayo de 0.89 (P <0.0001) para beta-lactámicos, 0.99 (P <0.0001) para metamizol y 0.92 (P <0.0001) para determinados AINES
DISCUSION
Además, varios medicamentos pueden ser probados simultáneamente, con una pequeña cantidad de sangre La colaboración internacional será útil para facilitar un consenso sobre el uso de BAT en la evaluación de alergia inmediata a medicamentos.
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Mérida, 22 Noviembre 2012
AUTOINMUNIDADDiagnostico “in vitro”
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ENFERMEDADES AUTOINMUNES Primeros síntomas muy genéricos Síntomas clínicos similares Múltiples órganos afectados Diferentes facultativos implicados (médicos de atención
primaria, reumatólogos, medicina interna, gastroenterólogos, ginecólogos, etc.)
DIAGNÓSTICO DIFICIL
PRUEBAS DE LABORATORIO ESPECÍFICAS Y FIABLES COMO AYUDA
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AUTOANTICUERPOS Pruebas de laboratorio: técnicas de detección de
autoanticuerpos- Técnicas de Precipitación:
* Inmunoprecipitación* Inmunodifusión* Contrainmuno-electroforesis
- Técnicas de Aglutinación: Hemaglutinación- Inmunoensayos:
* Inmunoblotting* Radioinmunoensayo (RIA)* Inmunofluorescencia (IFI)* Enzimoinmunoensayo (ELISA)* Tecnología multiplex
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Reacciones antígeno-anticuerpo
antígenosautoanticuerpos
2º anticuerpos marcado
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EQUIPOS
Phadia 100 Phadia 250
AUTOINMUNIDAD DE PHADIA
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MARCAS
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TECNOLOGÍA EliA- Enzimoinmunoensayo por fluorescencia.- Pocillos individualizados EliA wells
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COLORIMETRÍA FLUORESCENCIA
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TECNOLOGÍA EliA Tecnología EliA
- Antígenos recombinantes o purificados producidos bajo condiciones controladas según las normas GMP (Good Manufacturing practice) e ISO.- Sistema de baculovirus- Diferentes analitos en el mismo ensayo- Sistema de calibración único e independiente del analito
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Analitos enfermedades autoinmunes
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GRACIAS|