aislamiento y cultivo de Hongos filamentosos y levaduras

Instituto Politécnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología General

“Aislamiento y cultivo de hongos filamentosos y levaduras”

Los Hongos

El término Fungi (latín, literalmente "hongos") designa a un reino de organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y las setas. Los hongos tienen como característica ausencia de clorofila.Deben de nutrirse a partir de materia orgánica generalmente muerta. Su pared celular esta conformada por quinina.Reproducción sexual o asexual

2http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article&id=682&Itemid=779

ImportanciaEcológica: La gran mayoría de los hongos se nutren de sustancia orgánica muerta, teniendo un papel clave en la eliminación de este tipo de materia del suelo, la cual descomponen a materia mineral y regresan al suelo, manteniendo su fertilidad.

Industrial: Gracias sus características bioquímicas son empleados en la fermentación de quesos, vinos, cervezas, pan y pulque.

Medicinal: Tienen capacidad de producir sustancias antibióticas, de igual forma algunas especies son patógenas a los seres humanos (aproximadamente 40).

Alimentaria: Las especies comestibles aportan una gran cantidad de proteínas y vitaminas, fibra y agua que los hace nutricionalmente importantes

http://facultad.bayamon.inter.edu/amlugo/biol2013/cultihongos.htm

Morfología Macroscópica La morfología colonial de los hongos puede guiarnos a su identificación, con base a sus características pueden identificarse por su:Aspecto, este puede ser: 1. Algodonoso 2. Pulverulenta 3. Granulosas 4. Cremosas 5. Vellosas 6.Aterciopeladas

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis226.pdf

Superficie: 1. Plana 2. Umbonada 3. Umbilicada 4.Crateriforme 5.Cerebriforme 6. Plegada

Color 1. Anverso 2. Reverso

Pigmento difusible al medio 1. Ausente 2. Presente

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis226.pdf

Su identificación puede también llevarse a cabo gracias a su tipo de micelio la cual puede ser por:Tamaño de la hifa 1. Macrosifonado (filamentosos) 2. Microsifonado (actinomicetos)

Morfología Microscópica

ALEXOPOULOS C.J. Y MIMS W. (1.985). Introducción a la Micología. Omega, pp 150-152

Modalidades de las hifas

Tabicación 1. Septado

2. Aseptado (Colonias algodonosas)

CALONGE F.D. (1.990). Setas (hongos). Guía ilustrada. Mundi-Prensa, pp 589, 590, 591

Tipos de septos

Pigmento 1. Hialino 2. Pigmentado Melanico Carotenoides

Función 1. Vegetativo 2. Aeroreproductor

ALEXOPOULOS C.J. Y MIMS W. (1.985). Introducción a la Micología. Omega, pp 150-152

Reproducción sexual Heterotálica: se requiere la unión de dos talos

diferentes (+y- / a y b). Dos cepas diferenciadas.

Homotálica: necesita de un solo talo (una sola cepa).

Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

Reproducción asexual Origen tálico o artrogénicoSe forman a partir de las hifas, como una

fragmentación o desarticulación

Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

Formas de reproducción asexual Talosporas o taloconidias

Aleurias o aleuriosporas

Artrosporas

Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

Talosporas o taloconidias

Dictiosporas

Clamidosporas

Blastosporas

Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

ConidiasMicroconidias

Macroconidias

Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

Levaduras: Son hongos de forma unicelular. La reproducción vegetativa normal es por gemación

Sacharomyces cerevisiae

15Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

16Christensen, Clyde M. Los hongos y el hombre. México, D. F.:McGraw-Hill - Interamericana de México, 1963. Obra de carácter divulgativo.

OBJETIVO AISLAR, CULTIVAR Y RECONOCER LA MORFOLOGIA COLONIAL

Y MICROSCOPICA DE ALGUNOS HONGOS A PARTIR DE UNA MUESTRA DE SUELO

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• Calcular UFC/gr en RB, SDA• Morfología colonial y microscópica de

2 colonias.

I. Aislamiento por diluciones

0.1mL

0.1mL

0.1mL

Incubar a 28ºC durante 48–72 h

METODOLOGÍA

II. Preparación de Microcultivo

PDA

Incubar a 28ºC durante 72-96 h con la tapaarriba

Extraer glicerol, inactivar hongos con formaldehìdo al 10% durante 1 h.

• Azul de algodón lactofenol

• Eliminar exceso de colorante.

• Observar• Describir

morfología microscópica

RESULTADOS

2.- Morfología macroscópica de colonias de hongos filamentosos aislados de muestra de suelo

Característica colonial Colonia 1 Colonia 2

Textura Algodonosa AterciopeladaSuperficie Plana Plana

ColorAnverso Blanco VerdeReverso Blanco BeigePigmento difusible ausente ausente

Penicillium sp. Alternaria sp.

3.- Morfología microscópica de los microcultivos

Curvularia sp. Geotrichum sp.

4.- Morfología general de levaduras

Característica colonial

Rhodotorula sp Saccharomyces cerevisiae

Tamaño 3 mm 5 mmColor Anaranjada BeigeForma Circular CircularElevación Convexa UmbonadaSuperficie Lisa LisaBordes Entero LaceradoLuz reflejada Brillante MateLuz transmitida Opaca OpacaAspecto Húmedo SecoConsistencia Butirosa Butirosa

5.- Morfología colonial de hongos filamentosos

Característica colonial

Geotrichum sp.

Penicillium sp.

Curvularia sp.

Alternaria sp.

Textura Pulverulenta

Pulverulenta

Aterciopelada

Aterciopelada

Superficie Plana Plana Plana Plana

ColorAnverso Blanco Verde

militarVerde oscuro

Verde militar

Reverso Amarillento

Amarillo Negro azulado

Negro

Pigmento difusible

Ausente Presente (amarillo)

Ausente Ausente

6.- Esporas sexuales

Basidiosporas Ascosporas Zigosporas

Discusión Los resultados obtenidos de UFC a partir de las diluciones no son

representativos de la presencia de hongos en suelo ya que las muestras provenían de diferentes suelos, aunado a que las muestras no fueron transportadas de forma que se conservaran todos los microorganismos presentes.

Realizamos adecuadamente la descripción de la morfología de colonias aisladas; guiándonos así en la identificación de su género, sin embargo fue un tanto difícil por la falta de experiencia y conocimiento de colonias de hongos.

El microcultivo de hongos nos permitió identificar estructuras fúngicas, nos permitió visualizar al microscopio el micelio en su conjunto no solo una parte del mismo, sin embargo en algunos casos fue difícil el desarrollo de dicha técnica esto por la naturaleza de los hongos o bien su identificación debido a su crecimiento excesivo.

Conclusión El suelo es un medio rico en hongos ya que encontramos un UFC de 160000 en

la dilución de 10-3 en la muestra de suelo lo que nos indica variedad debido a que los hongos pueden ser aerobios o anaerobios facultativos que se nutren por absorción.

Las características morfológicas coloniales y microscópicas nos ayudan a orientarnos en la identificación, dándonos información sobre cual es el género de un hongo.

Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgánico, generalmente azúcar, y de nitrógeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte sólido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelo aéreo, donde se localizan las estructuras reproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras.

Las aplicaciones de la identificación y cultivo de hongos y levaduras es de suma importancia debido a la presencia y utilidad de los mismos en diversos campos industriales.