AISLAMIENTO DE POLIOVIRUS: TRATAMIENTO DE LA MUESTRAI.
INTRODUCCINLos enterovirus pertenecen a la familia Picornaviridae,
con ms de 100 serotipos y representan en muchos pases la causa
principal de infecciones agudas del Sistema Nervioso Central cuyos
porcentajes varan entre 24 y el 95% segn el rea geogrfica.La
poliomielitis es la enfermedad infecto-contagiosa que afecta a nios
menores de 5 aos y est causada por poliovirus (PV) 1, PV-2 o PV-3
(gnero Enterovirus C), de los cuales el tipo 1 es el que se asla
con mayor frecuencia en los casos de paralticos siendo el hombre el
nico reservorio conocido.El virus ingres a travs de la cavidad oral
y la multiplicacin primaria tiene lugar en la bucofaringe o en el
intestino, y posteriormente hace viremia corta y llega al sistema
nervioso central.El diagnstico se confirma al aislar e identificar
el poliovirus en muestras biolgicas como heces, LCR, etc., as como
detectar anticuerpos en la sangre.Los poliovirus se aslan en
cultivos de clulas renales de rin de mono (VERO) o fibroblastos a
partir de muestras farngeas durante los primeros das de la
enfermedad y de las heces por varias semanas.II. OBJETIVOSAdiestrar
al estudiante en la toma de muestra de heces y tratamiento de la
muestra para el aislamiento de poliovirus en cultivo celular y su
identificacin.III. MATERIAL Y MTODOS3.1 MATERIAL Heces PBS 1x o
Hanks 1x con antibiticos Frascos de vidrio de boca ancha 50 mL
Cloroformo Perlas de vidrio Tubos con tapa rosca de 10x150 mm Tubos
de centrfuga Pipetas de 5 y 10 mL Viales Bagueta Centrfuga
Balanza3.2 PROCEDIMIENTO3.2.1 Toma de muestraRecolectar de 4 a 8
gramos de heces en recipiente con tapa hermtica, o hisopado rectal
que se coloca en medio de transporte.Guardar a -20C hasta el
momento de su procesamiento.3.2.2 Tratamiento de la materia
fecalColocar 15 mL de PBS 1x o Hanks 1X con antibiticos al
recipiente de boca ancha.Aadir al frasco las perlas de
vidrio.Colocar aproximadamente 1 gramo de heces con ayuda de una
bagueta de vidrio al frasco y disgregar las heces.Colocar el frasco
con un vibrador durante 10 minutos.Transferir el contenido sin las
perlas a un tubo de centrifuga.Centrifugar a 7000 o 10000 rpm
durante 10 minutos.Separar el sobrenadante y distribuirlo en
volmenes iguales en dos tubos con tapa rosca de 10 x 150 mm.A cada
uno de los sobrenadantes, agregar igual volumen de cloroformo y
agitar manualmente durante 2 a 3 minutos.Colocar los tubos con
refrigeracin a -5C durante 15 horas.Centrifugar los tubos a 2000
rpm durante 30 a 40 minutos.Separar el sobrenadante y distribuirlo
en viales estriles debidamente rotulados.Conservar a -4C hasta su
aislamiento en lneas celulares.IV. RESULTADO15 mL de PBS + 1gr de
hecesSobrenadante obtenido para prxima inoculacin
V. COMENTARIOEl aislamiento y la identificacin del poliovirus de
las heces es uno de los mejores mtodos para confirmar un diagnstico
de poliomielitis. Las muestras de heces de casos sospechosos de
esta enfermedad deben conseguir tan pronto como sea posible,
preferiblemente dentro de los 7 primeros das o al menos durante los
primeros 14 das despus de la aparicin de la enfermedad.La colecta
del sobrenadante estril de las muestras tratadas, segn el
protocolo, se puede usar para inocular en tubos de cultivos
celulares. Estos son revisados durante 5 das para observar una
posible aparicin del virus bajo el aspecto citopatognico.VI.
REFERENCIAS
http://www.scielosp.org/pdf/resp/v87n5/03_colaboracion_especial2.pdf
DIAGNOSTICO DE RABIA: INOCULACIN EN RATONES LACTANTES
I. INTRODUCCINLa rabia es una zoonosis importante para la cual
se han estandarizado internacionalmente las tcnicas de diagnstico.
Como en la rabia no existen lesiones patognomnicas visibles, el
diagnstico solo se puede hacer en el laboratorio. Las tcnicas de
laboratorio se realizan preferiblemente con tejido del sistema
nervioso central (SNC) extrado a travs del crneo. Se debe probar un
conjunto de muestras del SNC, y el tallo cerebral es el componente
ms importante de las muestras.La rabia est causada por un virus
neurotrpico del gnero Lyssavirus de la familia Rhabdoviridae y se
transmite a todos los mamferos. Como tambin se transmite a los
humanos por inoculacin o por inhalacin del virus infeccioso, todo
el material sospechoso de infeccin debe ser manejado bajo
condiciones apropiadas de seguridad especificadas por la
Organizacin Mundial de la Salud (OMS)II. OBJETIVOS2.1 Familiarizar
al alumno con las tcnicas de aislamiento e identificacin del virus
Rabia.III. MATERIAL Y MTODOS3.1 Materiales Asta de Ammon de perro
que se presume con Rabia. Mortero SSF + antibiticos (100ppm de
estreptomicina y 1000 UI/m L de penicilina). Tubo de ensayo.
Ratones lactantes Centrfuga3.2 Mtodos Extraer el asta de Ammon de
perro que se presume con rabia. Pesar 0,3 g de la muestra de asta
de Ammon, colocarlo en un mortero y triturar. Agregar 1,2 m L de
SSF + antibiticos (100ppm de estreptomicina y 1000 UI/m L de
penicilina), homogenizar y obtener una suspensin. Transferir la
suspensin a un tubo y dejar reposar en refrigeracin por 1 hora.
Centrifugar a 2000rpm por 10 minutos. Separar el sobrenadante.
Inocular por va intracerebral 0,03 m L el sobrenadante a cada ratn
lactante.IV. COMENTARIOSEl virus de la rabia aparentemente se
multiplica dentro delmsculo estriadodel sitio de inoculacin.Luego
penetra alsistema nervioso perifricosen las uniones neuromusculares
(las glicoproteinas G de la membrana se unen a los receptores
nicotnicos de la acetilcolina) y se propaga a lo largo de los
nervios hasta elsistema nervioso central. Ah se multiplica casi
exclusivamente en lasustancia grisy puede entonces propagarse
pornervios autonmicoshasta las glndulas salivales y otros tejidos
como la piel, medula suprarrenal, hgado, msculo estriado, corazn y
pulmn.V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Publications_%26_Documentation/docs/pdf/2.2.05_Rabia.pdf
http://publicaciones.ops.org.ar/publicaciones/publicaciones%20virtuales/cdmanualRabia/vigilancialaboratoriodiagnostico.html