EVIDENTIEREA ACTIUNII AINS
Evidenierea aciunii antinflamatoarelor nesteroidaleSe lucreaz pe
obolani albi, Wistar, masculi, aduli, cu masa cuprins ntre 150g
i160g. Volumul labei obolanilor se determin pletismometric prin
introducerea labei piciorului (pna la nivelul articulaiei
tibio-tarsiene) ntr-un rezervor cu ap care face parte dintr-un
sistem de vase comunicante aflat n legtura cu un sistem tubular
gradat, conectat la un aparat care detecteaz n mod automat creterea
de volum). Se stabilete diferena intre nivelul lichidului din tubul
gradat nainte i dup introducerea labei obolanului). La
pletismometrele de ultima generaie determinarea este realizat
digital.
Ambilor loturi de obolani li se provoac edem inflamator acut la
una din labele posterioare (de exemplu cea dreapt), prin injectarea
subcutanata, la nivelul regiunii plantare, unei soluii de
carageenina 1%, (volum 0,2ml). Aceasta substana determina un edem
inflamator puternic de tip iritativ.Imediat dupa administrarea
carageeninei, obolanilor din lotul nr. 1 li se administreaz
intraperitoneal indometacin 15mg/kg (sau fenilbutazona 40mg/kg).
obolanilor din lotul nr. 2 i se administreaz intraperitoneal ser
fiziologic, 1ml/kg.
nainte de administrarea substanelor, precum i la 30 minute, 1
or, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 de ore dup administrare se determina
volumul labei posterioare injectate la ambele loturi de
animale.
La animalul 2 la locul injectrii carageeninei apar fenomene
inflamatorii acute (tumor, calor, rubor, dolor i functio laesa).
Durerea se deduce din comportamentul obolanului care este agitat si
i linge laba injectata.Volumul labei obolanilor din lotul 1 este
semnificativ mai mic comparativ cu cel al obolanului din lotul 2,
fapt ce confirma aciunea anti-inflamatoare a indometacinului.
Volum initialVolum la 60 minute
Lot 11mL1,5mL
lot 21 mL2mL
Determinarea tensiunii arteriale la animale mici prin metode
nesngerngeMetodele de determinare a tensiunii arteriale pot fi
sngernde = invazive (presupun introducerea unei cateter cu senzor
la nivel arterial, metod dificil) sau ne sngernde = neinvazive.
La obolani, exist posibilitatea de a determina tensiunea
arterial prin metode nesngernde la nivelul cozii.
Animalul este introdus ntr-un cilindru din plastic, care apoi se
nchide la ambele capete (unul din capete, cel care corespund ca
plasament capului animalului, este prevzut cu orificii, pentru ca
animalul s poat respira). Coada obolanului iese prin orificiul de
la cellalt capt.
Cilindrul cu animalul n interior este apoi introdus ntr-o incint
de pexiglas i meninut 20 minute la 37C (pentru a se realiza la
nivelul vaselor cozii vasodilataie, metod care asigur o oarecare
standardizare a determinrii, animalului crescndu-i tensiunea
arterial n condiii de experiment datorit stresului).
Aparatul SFINGOMANOMETRU.
Determinarea propriu-zis:
se trece coada prin manonul penumatic;
se monteaz, distal de manon, senzorul care va detecta pulsaiile
arteriale; se umfl manonul (prin apsarea butonului INFLATE) pn ce
indicatorul aparatului arat o valoare superioar valorii presupuse a
maximei (pn la aproximativ 150 mm Hg); n acel moment pe ecranul
osciloscopului apare linie izoelectric (deoarece senzorul nu
percepe pulsaiile arteriale, care sunt suprimate de care presiunea
aplicat prin intermediul manonului);
se dezumfl uor (prin apsarea butonului DEFLATE) manonul, iar n
momentul n care pe ecranul osciloscopului apar sinusoide n locul
liniei izoelectrice (fapt care traduce reaparitia pulsaiilor
arteriale) se marcheaz valoare tensiunii arteriale maxime
(sistolice) care se citete pe display-ul corespunztor din aparat (n
jur de aproximativ 90 mm Hg la obolani).
Minima nu poate fi determinat prin aceast metod.Administrarea de
adrenalin (5-15g/kg) determin o cretere rapid a tensiunii
arteriale, urmat de o revenire treptat la valoare iniial, apoi de
coborrea sub valoare iniial i din nou de revenire.
Administrarea de noradrenalin (5-15g/kg) determin o cretere a
tensiunii arteriale (mai evident dect creterea care apare ca efect
al aceleiai doze de adrenalin), urmat de revenire la valoare
iniial. Creterea determinat de noradrenalin este mai intens dect
cea determinat de adrenalin.
Aciunea bifazic a adrenalinei (care nu apare la noradrenalin,
unde avem doar faza de cretere) se datoreaz aciunii predominante
iniiale a adrenalinei pe receptorii , iar faza ulterioar (scderea
tensional, respectiv vasodilataia) se datoreaz metabolizrii unei
pri a adrenalinei, urmat de aciunea cantitii rmase predominant pe
receptorii , pe care afinitatea adrenalinei este superioar.
Noradrenalina are aciune fff slab pe receptorii .
Determinarea experimental a efectului analgezic al morfinei
Aparatul analgezimetru tip tail-flick.
Aparatul proiecteaz un fascicul focalizat de raze infraroii, la
aproximativ 2 cm de baza cozii, determinnd durere prin
supranclzirea regiunii la nivelul creia este aplicat (intensitatea
setat la 80%). Printr-o micare brusc a cozii, animalul poate
retrage n mod reflex coada stimulului dureros.
Animalele care nu vor exprima un rspuns de micare brusc a cozii
n maxim 12 secunde de la momentul aplicrii stimulului (timp
cut-off) sunt excluse din experiment. Latena rspunsului (de micare
a cozii) este nregistrat (exactitate de zecime de secund).
Pentru testarea aciunii morfinei, se va proceda n felul
urmtor:
Testarea timpului latenei bazale (TLB) (nainte de administrarea
morfinei) aproximativ 10 secunde;
Timpul de laten la expunere (TEX) se face la 30 minute de la
administrarea unei doze de morfin de 5 mg/kg, intraperitoneal)
aproximativ 14 secunde.
Valorile obinute vor fi exprimate ca procent din efectul maximal
posibil (PEM). Exprimarea PEM se face dup fromula:
.
Determinarea experimental a efectului anestezicelor generale
lichide volatile
ntr-un borcan de 2 3 litri transparent introducem un tampon de
vat peste care se toarn aproximativ 2-3 mL de eter etilic
(CH3-CH2-O-CH2-CH3) sau cloroform (CHCl3). Intruducem obolanul n
borcan, nchidem cu capac i observm fazele anesteziei generale
(inducie animalul pare dezorientat; agitaie animalul se nvrte
rapid, ncearc s ias; anestezie propriu-zis animalul este la un
moment dat scos din borcan, se observ lipsa de reacii, tonusul
muscular sczut, respiraia de tip abdominal). De notat c n borcan
animalul se confrunt i cu hipoxia. Urmeaz faza de revenire
(animalul este scos la aer nainte de instalarea fazei toxice ar
determina moarte prin inhibarea centrilor respiratori).
Anestezicele generale sunt substane care produc o stare de
inhibiie sau de deprimare reversibila a SNC, stare care se numete
anestezie generala sau narcoza. Anestezia generala se caracterizeaz
prin: pierderea cunotinei sisomnprofund (bolnavul nu poate fi
trezit dect la stimuli foarte puternici), analgezie, amnezie
retrograd, pierderea sau diminuarea unor reflexe si relaxarea
musculaturii striate. Anestezia generala mai poate fi considerata i
o coma reversibila.
Faza I-a (de inducie, analgezie, de beie). Pacientul are
contienta prezent, dar afectat, este euforic, poate avea
halucinaii, poate rspunde la ntrebri, sensibilitatea dureroas este
sczuta variabil (analgezie superficial), respiraia este neregulat
si tahipneic, presiunea arteriala uor crescut, pupile uor
midriatice, amnezie caracteristic.
Faza a II-a (de excitaie, agitaie, delir). Se datoreaz inhibrii
de ctre anestezic preponderent a circuitelor inhibitorii cerebrale.
ncepe cnd bolnavul i pierde contienta, prezint fenomene de agitaie
psiho-motorie, micri involuntare, accese de rs sau plns. Reflexele
sunt exagerate, tonusul muscular crescut, respiraia neregulat, puls
frecvent i tahicardie. Pupila este midriatica, se produc micri
rapide ale globilor oculari, amnezia este complet, poate apare
voma. n aceasta faza nu se pot face intervenii chirurgicale din
cauza tonusului muscular crescut i a tonusului simpatic crescut
(pericol dearitmiicardiace grave, faza cea mai periculoas
Faza a III-a (chirurgical, anestezie propriu-zis). Evolueaz in
patru planuri:Planul 1 (somn superficiaL). Bolnavul este imobil,
respiraia este ampla i regulat, tonusul musculaturii este uor
crescut, presiune arteriala normala, reflexul de clipire
(conjunctival) dispare treptat, dispar reflexele faringiene, pupile
slab miotice, dispar micrile globilor oculari.Planul 2 (somn
profund). Reflexele dispar treptat astfel, iniial dispare reflexul
laringian apoi reflexul corneean de clipire, reflexele peritoneale.
Tonusul muscular este sczut, pupile de dimensiuni normale,
respiraia,pulsuli presiunea arterial sunt normale sau uor
diminuate. n acest plan se efectueaz majoritatea interveniilor
chirurgicale majore. Planul 3. Se caracterizeaz prin paralizia
muchilor intercostali inferiori, are loc o relaxare musculara
marcata, ncepe paralizia diafragmului. Planul 4. Se produce
paralizia intercostala completa, paralizia completa a diafragmului,
dispare reflexul corneean, midriaz maxima, circulaia deprimat.Faza
a IV-a (toxic). Se caracterizeaz prin frecventa respiratorie foarte
sczut spre stop respirator,tensiunearteriala prbuit i colaps,
dispariia completa a reflexelor, midriaz paralitic i oprirea inimii
(moarte).Determinarea experimental a efectului sedativ al
diazepamului
Substanele sedativ-tranchilizante (care n marea majoritate au i
un efect aoxiolitic) deprim att motilitatea voluntar ct i tonusul
musculaturii striate.
Efectul acestor substane se evideniaz cu ajutorul testului
actografic.
Animalul (oarecele) martor primete ser fiziologic, 1 mL/kg,
intraperitoneal, cellalt primete diazepam, 5mg/kg,
intraperitoneal.
Exist mai multe tipuri de actograf. Utilizm n mod obinuit un
actograf format din dou sfere de plastic care se desface n dou
semisfere i n care se introduce animalul de experien.
Sfera are guri ce permit intrarea aerului i respiraia
animalului.
Sfera de plastic este suspendat de un resort elastic prin
intermediul unui sistem cardonic ce permite micarea uoar n dou
planuri. Resortul elastic este suspendat ntr-un stativ, n aa fel
nct sfera s nu ating n miscrile ei planul mesei.
De resortul elastic este fixat o peni inscriptoare fin, care
nscrie orice micare fcut de animal pe un cilindru inscriptor, sub
forma unor linii verticale. Analiznd numrul i amplitudinea micrilor
produse de animal ntr-o unitate de timp, se poate cuantifica
comportamentul motor al acestuia.
Fiecare animal, naintea testrii propriu-zise, se introduce 15 20
minute n aparat (sfer), pentru a se obinui cu noile condiii de
mediu.
Determinarea experimental a a influenei determinate de calea de
administrare asupra efectului farmacodinamic
Avem la dispoziie 4 oareci, crora li se injecteaz
intraperitoneal (i. p.), intramuscular (i. m.), subcutanat (s. c.),
respctiv li se administreaz oral (pe sonda endogastric) diazepam 10
mg/kg sau fenobarbital 80 mg/kg.Se urmrete latena de apariie a
efectului hipnotic. Efect hipnotic nseamn efect de inducere al
somnului (considerm animalul adormit dac, plasat n decubir lateral
de ctre experimentator, menine aceast poziie timp de minim 5
secunde).intraperitoneal (i. p.)intramuscular (i. m.)subcutanat (s.
c.)oral
Timp de laten
(minute)8111520
Peritoneul este bine vascularizat, de aceea absorbia se
realizeaz relativ rapid. Muchiul striat, mai ales daca este
antrenat (n activitate) are de asemenea o vascularizai bun. Zona
subcutanat are o vascularizaie mai slab. n cazul administrrii orale
absorbia se realizeaz cu ntrziere, uneori nu n totalitate, iar
efectul primului pasaj limiteaz uneori intensitatea efectului i
crete latena acestuia.
Cel mai rapid s-ar realiza efectul dac medicamentul ar fi dat
intravenos (i. v.), dar este foarte dificil de efectuat la animale
de laborator (mai ales la oareci).
Determinarea experimental a antagonismului funcional
medicamentos
Un oarece (obolan) primete intraperitoneal (i. p.) diazepam 10
mg/kg sau fenobarbital 80 mg/kg, cellalt primete diazepam 10 mg/kg
sau fenobarbital 80 mg/kg, dar i cofein (cafein) 10 mg/kg
intraperitoneal (i. p.).
Primul adoarme n maxim 10 minute, al doilea nu adoarme.
Concluzie fenobarbitatul (diazepamul) i respectiv cofeina au
efecte inverse.
Ar trebui n mod normal i un animal martor alb care primete ser
fiziologic, 1 mL/kg, intraperitoneal (i. p.) i un martor care
primete doar cofein (cafein) 10 mg/kg intraperitoneal (i. p.)
martorul alb nu are modificare comportamental, adic este exact ca i
cel care a primit att hipnoticul, ct i cofeina, iar cel care a
primit doar cofein este agitat.
De ce antagonism funcional?
Antagonismul ntre dou substane (faptul c cele dou substane dau
efecte opuse se poate realize n mai multe moduri:
competitiv: cele dou substane acioneaz la nivelul aceleiai inte
moleculare de exemplu una activeaz o enzim, una o inhib; o substan
acioneaz asupra unui sistem receptor ca agonist (direct) se leag de
receptor i activeaz o cale intracelular specific, cealalt ca
antagonist se leag de receptor dar nu activeaz respectiva cale
celular, dar ocup locul agonistului endogen al respectivului
receptor / ca agonist invers se leag de receptor, dar activeaz o
alt cale celular i n consecin genereaz efecte opuse agonistlui
direct;
funcional: cele dou substane acioneaz la niveluri diferite
asupra unui anumit sistem. De exemplu, n cazul nostru,
fenobarbitalul acioneaz asupra situsului barbiturat al receptorilor
GABAA, determinnd activarea canalului de clor Cl- (inhibiie
neuronal, prin hiperpolarizarea celulei, datorat ptrunderii
clorului), iar cofeina este antagonist al receptorilor adenozici +
stimuleaz eliberarea noradrenalinei din terminaiile nervoase (d
efecte excitatorii cerebrale). Diazepamul acioneaz asupra situsului
benzodiazepinic al receptorilor GABAA, determinnd de asemena
creterea ptrunderii neuronale a clorului.PAGE 6
_1367844913.unknown