RESUMO RESULTADOS MÉTODOS Apoio Financeiro: FAPESP . CONCLUSÕES A proteína tub é regulada por insulina, leptina e pelo estado nutricional em hipotálamo e em tecido adiposo de camundongos C57BL/6J Santos, A.C ; Quaresma, P.G.F; Weissman, L; Caricilli, A.M; Mendes, M.C; Cesquini; Saad, MJA; Prada,PO. 1,2 Departamento de Clínica Médica da Faculdade de Ciências Médicas – UNICAMP, Campinas, SP. 2 Faculdade de Ciências Aplicadas – UNICAMP,Limeira, SP - Brasil Caracterização do modelo de restrição calórica Extração de tecidos e “Westernblotting” Camundongos C57 Implantação de cânula no ventrículo lateral para injeções I.C.V. Extração dos tecidos após estímulo I.C.V.. Homogeneização do tecidos e quantificação de proteínas Imunoprecipitação e aplicação em gel de poliacrilamida. Transferência para membrana de poliacrilamida. Bloqueio, incubação com anticorpos primário e secundário e reação com kit de quimioluminesc ência. Densitometria óptica das bandas. Regulação da fosforilação em tirosina da tub em hipotálamo de animais controles Regulação da tub em Hipotálamo Regulação da tub induzida por insulina e leptina em tecido adiposo branco Animais Controles Animais DIO Animais db/db Tecido Adiposo Epidididmal A inibição da expressão da tub altera a regulação de proteínas ligadas à lipogênese e lipólise induzidas por insulina Animais com RC Camundongos tubby são obesos na idade adulta. Recentemente demonstramos insulina (INS) e leptina induzem fosforilação em tirosina (pTYR) da tub in vivo em hipotálamo. Os objetivos do estudo são: a) investigar a regulação da tub induzida por INS e leptina (LEP) in vivo em hipotálamo de animais com obesidade induzida por dieta (DIO) ou em restrição calórica (RC); b) investigar a regulação da tub induzida por INS e LEP in vivo em tecido adiposo epididimal (TAE) de animais DIO. A RC (60 dias) reduziu a adiposidade e aumentou a fosforilação em tirosina da tub induzida por INS. Em paralelo, aumentou a fosforilação do IR, IRS-1 e Akt após injeção intracerebroventricular (ICV) de INS. Neste mesmo modelo, a injeção ICV de LEP aumentou a pTYR da tub, em paralelo à ativação da via OBR/JAK2/STAT3 em hipotálamo. Em contraste, em animais obesos o inverso ocorreu. A pTYR da tub induzida por INS também foi investigada no TAE e estava reduzida em animais com DIO e em db/db após injeção na veia cava de INS. Após inibição da expressão da tub com ASO (IP) houve aumento da expressão e fosforilação de proteínas ligadas à lipólise e redução da modulação das proteínas ligadas à lipogênese. Peso Corpóreo Massa de Tecido Adiposo Epididimal semanas Massa de Tecido Adiposo Retroperitonial Massa de Tecido Adiposo Mesentérico CTL RC Insulina Leptina ICV CTL DIO Insulina ICV - + + CTL DIO Leptina ICV + + Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica Sinalização Clássica da Insulina e da Leptina em hipotálamo de animais em RC ou em DIO Leptina ICV ICV CTL RC Tecido Adiposo Epidididmal Tecido Adiposo Epidididmal PI3K P IRS1/2 P AKT STAT3 P núcleo FOXO1 P STAT3 P P JAK2 OBR Leptina P P P IR Insulina P FOXO1 TUB TYR TYR PO 4 PO 4 Efeitos Anorexigênicos neuropeptídeos TUB Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica ? Núcleos do Hipotálamo Tecido Adiposo Epidididmal Insulina ICV Proteínas ligadas à Lipogênese Proteínas ligadas à Lipólise IP: IP: SENSE ASO Expressão da tub IP: - + - + + TUB TYR TYR PO 4 PO 4 Hipotálamo Modulação da Ingestão alimentar PI3K P IRS1/2 P AKT P STAT3 P P JAK2 OBR Leptina P P P IR Insulina TUB TYR TYR PO 4 PO 4 RC DIO TUB TYR TYR PO 4 PO 4 TUB TYR TYR PO 4 PO 4 Tecido adiposo IR Insulina Lipogênese e Lipólise Insulina (veia cava) Insulina (veia cava) Insulina (veia cava) Insulina Leptina