Click to edit Master subtitle style 20.05.11 Isolasi dan Elusidasi Flavonoid Dr.rer.nat. Yosi B. Murti Sumber: Andersen, O.M. & Markam, K.R. 2006, Flavonoids: Chemistry,Biochemistry and Applications. CRC
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 1/23
Click to edit Master subtitle style
20.05.11
Isolasi dan Elusidasi Flavonoid
Dr.rer.nat. Yosi B. Murti
Sumber:
Andersen, O.M. & Markam, K.R. 2006, Flavonoids: Chemistry,Biochemistry and
Applications. CRC
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 2/23
Click to edit Master subtitle style
20.05.11
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 3/23
Click to edit Master subtitle style
20.05.11
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 4/23
20.05.11
Ekstraksi: Pemilihan pelarut
•Flavonoid (terutama glikosida) mudah mengalami degradasi enzimatik
ketika dikoleksi dalam bentuk segar. Oleh karena itu disarankan koleksi
yang dikeringkan atau dibekukan.
•Ekstraksi menggunakan solven yang sesuai dengan tipe flavonoid yg
dikehendaki. Polaritas menjadi pertimbangan utama. Flavonoid kurang
polar (seperti isoflavones, flavanones, flavones termetilasi, dan
flavonol) terekstraksi dengan chloroform, dichloromethane, diethyl
ether, atau ethyl acetate, sedangkan flavonoid glycosides dan aglikon
yang lebih polar terekstraksi dengan alcohols atau campuran alkoholair. Glikosida meningkatkan kelarutan ke air dan alkohol-air.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 5/23
20.05.11
Ekstraksi: Pemilihan metode
•Maserasi
•Soxhlet
•SFE
•Ultra sonic extraction
•Microwave extraction
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 6/23
20.05.11
Maserasi
•Metode ekstraksi pada umumnya secara maserasi langsung dengan
pelarut tunggal seperti metanol atau etanol.
•Metode lain yang menguntungkan adalah dengan ekstraksi pelarut
secara bertahap. Tahap pertama misalnya dengan diklorometan akan
mengekstrak aglikon flavonoid dan bahan lain yang kurang polar. Tahap
selanjutnya dengan alkohol akan mengekstraksi glikosida flavonoid dan
senyawa polar lain. Flavanon dan khalkon tertentu sulit dilarutkan
dalam metanol, etanol atau campuran alkohol air. Kelarutan flavanon
tergantung kepada pH campuran pelarut berair.•
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 7/2320.05.11
Flavan-3-ols (catechins, proanthocyanidins, dan condensed tannins)
sering dapat diektraksi secara langsung dengan air. Meski demikian
komposisi ekstrak bervariasi tergantung solven yang digunakan, sebagai
contoh dinyatakan methanol adalah pelarut terbaik untuk catechins dan
70% acetone untuk procyanidins. Anthocyanins diekstraksi denganmetanol asam-dingin. Biasanya digunakan asam asetat 7% atau
trifluoroacetic acid (TFA) sekitar 3%. Penggunaan asam mineral dapat
menyebabkan putusnya gugus asil.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 8/2320.05.11
Ekstraksi dengan alat Soxhlet
•Ekstraksi dengan alat Soxhlet biasanya diawali dengan
heksan untuk menghilangkan lemak, dan kemudian
etilasetat atau etanol untuk memperoleh senyawa
fenolik. Metode ini tidak cocok untuk senyawa yangsensitif terhadap panas.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 9/2320.05.11
Supercritical Fluid Extraction
•Supercritical fluid lebih encer dan laju difusi lebih tinggi dari pada
pelarut cair, sehingga ideal untuk ekstraksi dari jaringan tumbuhan.
•Kelebihan metode ini adalah konsumsi pelarut sedikit, selektivitas
terkendali, kecil kemungkinan degradasi akibat panas dan kimiawi.
•Meskipun demikian untuk ekstraksi senyawa polar seperti flavonoid
dibutuhkan tambahan pelarut polar (modifier) seperti metanol,
dengan konsekuensi penurunan selektivitas. Hal ini menjelaskan
mengapa hanya sedikit penggunaannya untuk ekstraksi polifenol.
Bahkan dengan tekanan hingga 689 bar dan 20% modifier,menghasilkan rendemen senyawa polifenol yang tetap rendah.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 10/23
20.05.11
Ultrasonic assisted extraction
•Metode ekstraksi yang sangat cepat dan juga dapat dipakai
untuk ekstraksi dengan campuran pelarut yant tidak saling
bercampur. Contoh: hexan dengan methanol–air (9:1),
digunakan untuk ekstraksi senyawa dari tumbuhan BrazilLychnophora ericoides (Asteraceae).
•Fase heksan diperoleh fraksi kurang polar berupa
sesquiterpene lactones dan hydrocarbon, sedangkan fraksi
alkohol berair berisi flavonoid dan sesquiterpene lactonesyang lebih polar.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 11/23
20.05.11
Microwave assisted extraction
•Teknik ekstraksi sederhana yang dapat diselesaikan dalam
hitungan menit.
•Energi microwave diterapkan pada sampel yang
disuspensikan dalam pelarut, baik dalam wadah tertetupataupun terbuka (memungkinkan ekstraksi dalam jumlah
besar).
•Dalam teknik ini terlibat pemanasan pada tingkat tertentu.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 12/23
20.05.11
Pemisahan
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 14/23
20.05.11
Identifikasi : contoh quercitrin
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 15/23
20.05.11
Penjelasan gambar
Gambar didepan menunjukkan spectra UV dari no 4 (quercitrin) setelahpenambahan lima reagen geser.
pita II
Pergeseran 11 nm dengan basa lemah 0.1 M Na2HPO4 , adalah karakteristikuntuk gugus 7-OH nonsubtitusi
Pergeseran 15 nm dengan asam borat adalah tipikal ortho-dihydroxyl padacincin B
pita I
Pergeseran 42 nm akibat aluminum chloride tanpa netralisai eluat spesifik
menunjukkan subtituen a 5-hydroxyl. Penambahan aluminium chloridesetelah netralisasi memberikan pergeseran 56 nm pada pita I. Hal iniakibat kombinasi efek dari ortho-dihydroxyl group (C-3’ and C-4’) danpembentukan kompleks C-4 keto dan gugus 5-hydroxyl.
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 19/23
20.05.11
O
O
HO
OH
OH
OH
5.84
5.88
3.26
5.516.49
6.49
6.58
5.0
5.0
5.0
5.0
01234567
PPM
O
O
HO
OH
OH
OH
H5.95
5.95
6.60
6.51
6.69
5.0
5.0
5.0
5.0
6.71
01234567
PPM
O
O
HO
OH
OH
OH
OH5.95
5.95
6.60
6.51
6.69
5.0
5.0
5.0
5.0
15.0
246810121416PPM
H-NMR
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 20/23
20.05.11
O
O
HO
OH
OH
OH163.7
94.4
159.4102.9
161.7
93.9
197.6
49.1
73.2134.9
115.9
144.7
143.4
117.3
121.3
20406080100120140160180200
PPM
O
O
HO
OH
OH
OH165.2
97.6
160.6105.0
160.7
97.3
187.0
94.9
168.8128.9
114.8
144.4
143.7
117.0
120.2
O
O
HO
OH
OH
OH
OH
165.2
97.6
160.6105.0
160.7
97.3
187.0
122.6
133.5 128.9114.8
144.4
143.7
117.0
120.2
C-NMR
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 21/23
20.05.11
Isoflavon
O
O
HO
OH
OH
5.84
5.88
4.78
4.42
5.0
5.06.95
6.68
6.68
6.95
5.0
01234567
PPM
O
O
HO
OH
OH
163.7
94.4159.4
102.9
161.7
93.9
197.6
54.4
71.3
128.5
131.2
116.2
156.2
116.2
131.2
020406080100120140160180200
PPM
6 552 0
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 22/23
20.05.11
Subtitusi gula dan metoksi O
O
O
OH
OH
OH
O
OHHO
HO
OH
O
5.88
5.92
5.61
5.596.53
6.55
6.58
5.0
5.0
2.0
3.40
3.49
3.91
5.88
3.76
2.0
2.0
2.0
3.66
2.0
3.73
234567
PPM
O
O
O
OH
OH
OH
O
OHHO
HO
OH
O
165.2
92.9
158.6
101.9
160.9
92.4
197.692.1
78.5
134.5
114.3
149.4
141.8
116.9
121.0
69.1
73.0
73.4
104.2
75.1
65.5
56.3
6080100120140160180200
PPM
5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 23/23
20.05.11
Latihan: Isolasi Petalopurpurenol (1)
dan petalostemumol (2)
Extraction and Isolation. The ground roots (465 g) were extracted with50% MeOH/CHCl3 under reflux. The concentrated extract was partitioned
between water and 20% MeOH/CHCl3. The organic phase was
concentrated, and the residue was suspended in 90% MeOH/H2O and partitioned with hexane. The aqueous methanol portion (8.6 g) waschromatographed on a Si gel column (500 g), eluting with a CHCl3/MeOHmixture of increasing polarity. Fractions were combined based on their TLC
pattern to give 10 pooled fractions, F1- 10. Fractions F6 and F8 were found
to be active in DNA strand-scission assay. Fraction F6 (0.169 g) was further chromatographed on a Si gel column and finally purified by preparativeTLC (toluene:EtOAc 1:1) to afford petalopurpunol (1) (22 mg). Fraction F8(0.24 g) was subjected to a series of purification steps, including LH- 20CC, Si gel CC, and finally preparative TLC (MeOH: CHCl3 1:9) to obtain
pure petalostemumol (2) (57 mg).