This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
미생물학 실습 시 실험실내 주의사항
미생물학 실습은 병원균을 직접 다루는 실험이므로 사고 발생시 여러분 자신은 물론 주변 동료에게도 위험이 미칠 수 있다는 사실을 명심하여 안전문제와 실습관리에 각별히 주의해 주시기 바랍니다 .
1. 실습실내에서는 책을 보기 위한 테이블과 실험을 위한 테이블 ( 세이프 매트 ) 을 구분하여 사용하십시오 . 다른 용도로 사용하지 않기 바랍니다 . 실험실의 창문은 반드시 닫아 두시기 바랍니다 .
2. 실험실내에서는 반드시 실험가운을 착용하여야 하며 가방이나 옷가지 등 실험에 불필요한 물품들은 실습실 캐비닛에 보관하십시오 . 가운의 단추를 풀어 헤치는 일이 없도록 합시다 .
3. 현미경 운반 시는 오른손으로 손잡이를 잡고 왼손으로 받침대를 받쳐서 감싸 안 듯이 하여 운반하시기 바랍니다 . 절대로 한 손으로 운반하는 일이 없도록 합시다 . 현미경에 유침유 (immersion oil) 를 사용한 후 (1,000 배 배율 검경시 ) 반드시 lens paper 를 사용하여 렌즈를 가볍게 누르면서 닦아주시기 바랍니다 . Lenz paper 이외의 다른 종이를 사용하거나 문질러서 닦는 일이 절대 없도록 합시다 .
4. 각 방에 배당된 cart 의 사용수칙은 다음과 같습니다 .
4-1. Cart 의 윗칸에 놓아두어야 하는 물건 :실험에 사용할 균주 , 각종 배지 및 시약 , 실험하고 남은 시약 , 피펫 , 스포이드 , bulb 등의 각종 실험기구 , 크레졸통 , lens paper 및 immersion oil, 슬라이드 글래스
4-2.Cart 의 아랫 칸에 놓아 두어야 하는 물건 : 실험에 사용하고 남은 균주 , 균을 배양하여 판독이 끝난 배지
5. Cart 의 크레졸 통에 실험에사용한 유리제품 (ex. 피펫 , 슬라이드 글래스 ) 과 면봉을 넣어 주십시오 . 기타 다른 기구 (ex. loop) 를 넣는 일이 없도록 합시다 .
6. Loop 는 반환하지 말고 실습방별로 cart 위 보관통에 보관하여 사용한 후 실습 마지막 날 일괄적으로 반환해 주시기 바랍니다 .
7. 실험에 사용할 plate 나 배양중인 plate, 실험이 다 끝난 plate 는 뚜껑이 아래로 향하도록 놓으시기 바랍니다 . Plate 나 tube 에 표시를 할 때는 name pen 만을 사용하시기 바랍니다 . 다른 필기구나 white 등은 사용하는 일이 없도록 합시다 .
8. 균을 흘렸을 경우 곧바로 조교선생님께 알려서 크레졸을 부어 소독이 되도록 하고 다른 안전사고 발생시에도 조교선생님께 즉시 알려서 필요한 조치를 취해 주시기 바랍니다 .
9. 알코올 램프는 불을 켠 채 이동을 금지하며 메탄올은 조교선생님을 통해 채우도록 하기 바랍니다 .
10. 실습 후 매일 청소당번을 정하여 청소를 해 주시기 바랍니다 .
서울대학교 의과대학 미생물학교실
염 색
1. 단 염색2. 그람 염색3. 항산성 염색
10 월 18 일 목요일
실습 재료 ( 개인실험개인실험 )
실습 균주 : Nutrient agar slant 에 준비됨
1. Bacillus subtilis
2. Escherichia coli 3. Mycobacterium abscessus
4. Staphylococcus aureus
Staining solution Lens paper
Alcohol lamp Slide glass
Corne forceps Immersion oil
1.단염색 (Simple staining) – B. subtilis, E. coli, S. aureus
원리
강염기인 methylene blue 를 사용하여 세균의 모양과 배열을 관찰할 수 있다 . : 세균의 세포에는 (-) charge 를 띤 nucleic acid 가
Gram positive : primary stain(crystal violet) 을 유지
진청색 or 보라색 Gram negative : 탈색과정에 의해 primary stain 을 소실 counter stain(safranin) 에 의해 염색됨
적색 or 핑크색
Gram positive 세균은 cell 주위에 두껍고 , cross-linked, meshlike structure 를 가진 peptidoglycan layer 가 둘러싸고 있어 탈색되지 않고 crystal violet 을 유지하는 반면 , Gram negative 세균은 peptidoglycan layer 가 얇으므로 탈색제인 유기용매에 의해 crystal violet 상실 .
2. 그람염색 (Gram staining) ; E. coli, S. aureus, B. subtilis
50~90 개의 carbon 으로 구성된 Long-chain fatty acid (mycolic acid) 를 가지고 있는 세균들은 cell wall 이 lipid 가 풍부하여 hydrophobic 하고 염색약이 통과할 수 없다 .
Staining 과정 초기에 열을 가하여 일단 primary dye 가 들어간 후에는 acid-alcohol 로 처리해도 탈색되지 않는다 . 항산성 세균은 carbol fuchsin 에 의해 red 로 염색되고 Cellular background 나 다른 세균들은 blue 로 염색된다 .항산성이 있는 세균속에는 Mycobacterium, Nocardia 등이 있다 .
항산성 염색 원리
Carbol fuchsin 을 올려놓고 나무 집게로 slide glass 를 집어서 알콜램프 위에서 가열하여 증기가 오르면 빼낸다 . (끓지 않게 주의 ) 염색약을 보충하고 가열하는 것을
반복하며 이를 5 분간 지속한다 .
Acid alcohol 로 15~20초 동안 세척한다 .
물로 세척하여 acid alcohol 의 작용 중지시킨 후 methylene blue 로 20초 동안 대조염색한다 .