#4 dilución bacteriana, nmp, cultivo puro

CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO, INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 128

Práctica No. 4 Dilución bacteriana, número más probable y cultivo puro.

Sub-modulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de microorganismos con base en las

normas.

Integrantes: Quistián García Hylary Estefanía, Ramírez Arellanos Génesis, Ramírez

Hernández Jessica, Ramos Franco Michelle Valeria, Ramos Juárez Mario Antonio, Rangel

Osorio Hugo Cesar, Rascón Castrejón Lizeth Guadalupe, Reyes Marcial Luis Diego, Ríos Palacios Selene.

Facilitadora: Ing. Jessica Alicia Acosta Bezada

Fecha: se inició el 20 de octubre del 2014 y se terminó el 28 de octubre del 2014.

Introducción

El conteo bacteriano señala la magnitud de la

población total bacteriana. En ese sentido se puede

determinar por diversas técnicas que se basan en

algunos de los siguientes tipos de medida: cuenta

celular (directamente al microscopio o mediante un

contador electrónico de partículas o indirectamente

con la cuenta de colonias), masa celular (en forma

directa pesando el contenido celular del nitrógeno o

indirectamente por turbidimetría, proporcional al

número de células) y actividad celular

(indirectamente relacionando el grado de actividad

bioquímica al tamaño de la población bacteriana).

Existen muchos medios diferenciales, en la práctica

utilizaremos el de dilución bacteriana.

Para empezar esta práctica 4 debemos definir

primero el concepto de dilución y se puede decir que

es la “es la reducción de la concentración de una

sustancia química en una disolución. La dilución

consiste en rebajar la cantidad de soluto por unidad

de volumen de disolución. Se logra adicionando más

diluyente a la misma cantidad de soluto: se toma

una poca porción de una solución alícuota y

después esta misma se introduce en más

disolvente.”

Una vez definido lo que es dilución podremos decir

que dilución bacteriana consiste en inocular una

serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml

del medio de cultivo apropiado según el tipo de

bacteria que se quiera evaluar además. El método

de dilución para el caso de bacterias ofrece mayor

sencillez y menor cantidad de contaminantes y es

uno de las maneras más comunes en el aislamiento

de este tipo de microorganismos. En esta práctica

les explicaremos como es que se realiza la dilución

bacteriana junto con sus técnicas.

Resumen

En esta práctica se realizaron tres métodos para la

identificación de microorganismos incluyendo su

conteo aproximado, estos fueron: dilución

bacteriana, número más probable y cultivo puro.

En la primera se pudieron evaluar diferentes grupos

bacterianos según el medio de cultivo (nutritivo) con

la muestra que se inoculó, en este caso agua del

grifo. En el segundo se realizó una estrategia

eficiente para estimar las densidades de población

ya que una evaluación cuantitativa de elementos

individuales no fue factible. En un cultivo puro se

obtuvieron colonias aisladas visiblemente.

En la serie de pruebas bioquímicas caldo nutritivo se

observó la turbidez de los tubos con el fin de

obtener resultados correctos puesto que si en el

último tubo a analizar la turbidez era mayor que el

primero indicaba que el procedimiento se realizó de

manera incorrecta.

De esta manera se pudieron observar las colonias

presentes en las cajas Petri con el medio de cultivo

nutritivo y en los tubos de ensaye con caldo nutritivo

obteniendo el número de poblaciones aproximadas.

Abstract


Bacterial dilution, the most probable number and

pure culture: in practice three methods for identifying

microorganisms including approximate counting,

they were performed.

The first could be evaluated according to different

bacterial groups culture medium (nutrient) with the

sample to be inoculated, in this case tap water. In

the second efficient to estimate population densities

strategy was performed as a quantitative

assessment of individual items was not feasible. In

pure culture visibly isolated colonies were obtained.

In the series of biochemical tests are nutrient broth

was observing the turbidity of the tubes in order to

obtain correct results because if the last tube to

analyze the turbidity was higher than the first

indicating that the procedure was performed

incorrectly.

Thus were visible bacteria in Petri dishes with

nutrient culture medium and test tubes with nutrient

broth obtaining the approximate number of

populations.

Materiales y métodos

ETAPA 1: Preparación del medio de cultivo y

esterilización de material

Material

Matraz Erlenmeyer 500 ml

Espátula

Mechero

Vidrio de reloj

9 cajas Petri

28 tubos de ensaye

Reactivos

Agua destilada

Caldo nutritivo

Procedimiento

1) A cada equipo se le asignó un medio de

cultivo para preparar, en este caso fue el

Caldo nutritivo.

2) Para esto se pesó 2.8 gr del polvo para

preparar el caldo nutritivo.

3) Se disolvió los 2.8 gr en 350 ml de agua

destilada o potable (se tuvo en cuenta el

margen de error).

4) Se calentó esta solución hasta que el medio

se disolvió por completo.

5) Posteriormente se dejó enfriar.

6) Se vació en cada tubo de ensaye 10 ml

(aproximadamente) del caldo preparado.

7) Se cubrió todos los tubos con un pedazo de

algodón y un “gorro” de papel canela.

8) Se procedió a su esterilización.

9) Se envolvió las cajas Petri con papel canela,

y se procedió a su esterilización.

ETAPA 2: Dilución e Inoculación

Material

7 tubos de ensaye

Asa de inoculación

Jeringa o pipeta

Gradilla

Mecheros bunsen

Reactivos

7 medios de cultivo

14 tubos de ensaye con caldo nutritivo

Agua destilada o potable

Muestra de agua (Zona sur)

Procedimiento


Nota: esta etapa se llevó a cabo dentro de un

triángulo de seguridad formado por mecheros

bunsen.

Para la dilución:

1) En cada uno de los 7 tubos de ensaye, se

colocó 9 ml de agua destilada o potable. Se

etiqueto cada tubo con el número

correspondiente a la dilución (-1, -2, -3, -4, -5, -

6, -7).

2) La jeringa o pipeta se “esterilizo” en uno de

los mecheros.

3) Con ayuda de la pipeta se tomó 1 ml del

agua de la muestra y se colocó en el tubo

de ensaye correspondiente a la dilución -1.

4) Se tomó 1 ml del tubo de ensaye al que se

le coloco el mililitro de la muestra y se pasó

al segundo tubo de ensaye.

5) Se repitió el procedimiento con los tubos

restantes, de forma que los primeros 6

tubos quedaron con 9 mililitros y el último

con 10.

Para la inoculación:

1) Se etiqueto cada medio de cultivo con un

número correspondiente a la dilución de uno

de los tubos (1-7)

2) En cada medio de cultivo se inoculo con una

muestra tomada del tubo con la dilución

correspondiente.

3) El estriado se realizó de la siguiente forma:

Se esterilizo el asa con un mechero bunsen, y con

ella se tomó una gota de muestra. Se estrió de

forma vertical en un lado de la caja, se esterilizo

nuevamente el asa. Para el siguiente estriado no se

tomó muestra, sino que se esparció un poco del 1er

estriado de forma horizontal, y se esterilizo el asa.

De la misma forma se realizó un estriado con el

estriado horizontal pero esta vez de nuevo de forma

vertical, para finalizar en el extremo contrario al

estriado horizontal se realizó un pequeño estriado

en “s”. El resultado fue como el que se mira abajo:

4) Para la inoculación en el caldo nutritivo se

realizó el mismo procedimiento que para la

dilución, excepto que en esta ocasión en lo

que se diluyo la muestra fue en el caldo

nutritivo.

ETAPA 3: lectura de colonias en caja y tubo

Material

Marcador

Mecheros Bunsen

Cajas Petri con muestra incubada

anteriormente

Procedimiento

En caja:

1) Se formó un triángulo de seguridad con mecheros

Bunsen y se trabajó dentro de él para evitar la

posible contaminación de bacterias. En ningún

momento se abrió alguna de las cajas Petri.

2) Se procedió a realizar la lectura de colonias. Para

ello primero se identificó los diversos tipos de

colonias que había en cada caja Petri.

3) Se contó el número de cada tipo de colonias que

había en cada caja Petri, para ello se vio la caja a

contra luz para poder ver colonias que no eran muy

claras, con ayuda del marcador se punteaba cada

colonia contada, se tomó notas sobre su:

Forma

Borde

Superficie

Color

(Véanse los resultados)

En tubo:

1. Se observó el crecimiento bacteriano en

cada tubo y en base a eso se identificó el

tipo de bacterias que crecieron en el tubo

(aerobias estrictas, anaerobias, facultativas,

etc.)


2. Esto también nos permitió observar la

disminución de bacterias en cada tubo

gracias a la dilución bacteriana.


ETAPA 4: Tinción y morfología bacteriana

Material

Portaobjetos

Cubreobjetos

Asa microbiológica

Mecheros Bunsen

Microscopio

Reactivos

Agua destilada o potable

Cristal violeta

Yodo-Lugol

Alcohol-Acetona

Safranina

Aceite de inmersión

Procedimiento

1) Se formó un triángulo de seguridad con mecheros

Bunsen. La toma de muestras se realizó dentro de

él.

2) Para la toma de muestras, se colocó en un

portaobjetos una gota de agua, se colocó una caja

Petri dentro del triángulo de seguridad para evitar

una posible contaminación. Se esterilizó el asa

microbiológica, se abrió la caja y con el asa se tomó

una parte de una de las colonias, esta se disolvió

con movimientos circulares en la gota de agua

previamente puesta en el cubreobjetos. Se volvió a

esterilizar el asa.

3) Se tomó una muestra por cada colonia diferente

en cada agar, cabe destacar que se marcó cada

cubreobjetos con el número de agar y colonia a la

que pertenece la muestra.

4) Se dejó secar las muestras colocadas en los

portaobjetos. Una vez hecho esto se procedió a la

tinción:

-Se pasó el portaobjetos con la muestra por

la llama del mechero 3 veces rápidamente.

-Se le agregó una gota de Cristal violeta y

se dejó actuar durante un minuto. Se enjuagó el

portaobjetos hasta que el colorante dejó de escurrir.

-Se agregó una gota de Yodo-Lugol y se

dejó actuar por un minuto. Se procedió a enjuagar.

-Se agregó una gota de Alcohol-Cetona y se

dejó actuar durante 30 segundos. Se enjuagó.

-Por ultimó se agregó una gota de safranina

y se dejó actuar por 30 segundos, posteriormente se

volvió a enjuagar la muestra.

5) Se le agregó una gota de aceite de inmersión a la

muestra y se le colocó un cubreobjetos.

6) Se procedió a su observación a través del

microscopio y se identificó las distintas bacterias

contenidas en la muestra.


Resultados

Dentro de esta práctica número 4 los resultados se

enmarcan principalmente en las diluciones que se

utilizan para el conteo de bacterias, pero de igual

manera se dan los resultados de las morfologías

tanto bacterianas como coloniales. De esta manera

se muestran las siguientes tablas en donde se

observa todo lo anterior.

M e d i o d e c u l t i v o Número de caja petri o tubo Inoculado con

A g a r n u t r i t i v o 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Agua del sur oeste de la ciudad Serie 1 caldo nutri tiv o 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 .


Número de caja petri Colonia Morfología bacteriana

1 1 Cocos, Gram negativos.



4 1 Bacilos, Gram negativos.

2 Cocos, Gram negativos.

5 1 Bacilos, Gram negativos.

2 Estreptococos, Gram negativos.


4 Bacilos, Gram negativos.

Serie 2 caldo nutri tiv o 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 .

Número de caja petri C o l o n i a M o r f o l o g í a d e l a c o l o n i a Número de

colonias

1 1 Forma irregular, borde lobulado, superficie plana, color blanco.

1

2 1 Forma irregular, borde lobulado, superficie plana.

1

3 1 Forma circular, borde entero, superficie plana, color

blanc o.

195

4 1 Forma puntiforme, borde entero, superficie

acuminada.

20

2 Forma irregular, borde ondulado, superficie

plana.

2

5 1 Forma puntiforme, borde ondulado, superficie convexa, color amarillo.

10

2 Forma punti forme, borde entero, superfi c ie plana . 11

3 Forma irregular, borde ondulado, superficie plana, con

hemolisis.

9

4 Forma irregular, borde ondulado, superficie plana, color rosado.

1

6 1 Forma circular, borde entero, superficie convexa, color crema, con hemolisi s.

5

2 Forma irregular, superficie convexa, color amarill o.

1

3 Forma puntiforme, borde entero, superficie convexa.

56

4 Forma circular, borde entero, superficie convexa, color

blanco.

1

7 1 Forma punti forme, borde entero, superfi c ie plana . 55

2 Forma irregular, borde filamentoso, superficie papilada.

10

3 Forma irregular, borde filamentoso, superficie plana, color blanco

opaco.

3






7 1 Estreptococos, Gram negativos.



N ú m e r o d e t u b o M o r f o l o g í a d e l c a l d o T i p o d e c r e c i m i e n t o

1 T u r b i d e z …

2 T u r b i d e z …

3 T u r b i d e z 1 x 1 0 - 3 b a c t e r i a s / m l

4 P e l í c u l a …

5 … … … . . …

6 … … … . . …

7 S e d i m e n t o …

Se muestra en estas dos últimas tablas el tipo de

crecimiento que presenta las series de diluciones, en las

que en las dos series el resultado fue de 1x10-3

bacterias por mililitro de muestra, que con ello se da el

objetivo principal de la práctica.

Conclusión

Quistián García Hylary: la dilución bacteriana y

el número más probable son técnicas de conteo

bacteriano. La primera consiste en diluir 7 veces

la muestra a analizar, esto se lleva a cabo de la

siguiente forma: se toman siete tubos de ensaye

y en ellos se vierten nueve mililitros de agua

destilada. Se etiquetan los 7 tubos del 1 al 7

según la dilución que van a contener. Se agrega

1 mililitro de la muestra en el 1er tubo, de esta

forma tiene 10 ml. Después se toma 1 ml del 1er

tubo con muestra diluida y se vierte en el

segundo, así el 1er tubo tendrá 9 mililitros y el

2do 10, se repite el procedimiento con los

demás tubos, de esta forma los 1eros 6 tubos

tendrán 9 mililitros y solo el último contendrá 10

ml. De esta forma se irá disminuyendo la

cantidad de bacterias conforme se va

aumentando de tubo (1-7).

La técnica del número más probable se basa en

diluciones seriadas, para ello primero se realiza

la dilución bacteriana y posteriormente se

inocula en medios de cultivo, basándose en el

crecimiento que en ellos se produzca se anotan

los resultados y con ayuda de una tabla se

realiza la estimación de la población bacteriana

presente en la muestra.

Esta práctica se llevó a cabo con el motivo de

observar la contaminación bacteriana presente

en el agua “potable” en las diferentes zonas de

la ciudad.

Ramírez Arellanos Génesis:

Ramírez Hernández Jessica: Dilución

bacteriana, número más probable y cultivo puro,

a pesar de ser aparentemente más complejos

en realidad facilitan el trabajo con el conteo de

microorganismos, dilución bacteriana nos

permite contar bacterias estimando el número

N ú m e r o d e t u b o M o r f o l o g í a d e l c a l d o T i p o d e c r e c i m i e n t o

1 Turbidez, con sedimento. …

2 T u r b i d e z . …

3 T u r b i d e z . 1 x 1 0 - 3 b a c t e r i a s / m l

4 … . . … . …

5 … … … . …

6 P e l í c u l a . …

7 … … … . . …


mediante la observación de la turbidez de un

tubo de ensaye con caldo nutritivo, número más

probable al estimar cantidades poblacionales sin

necesidad de contar individualmente ya que no

es un resultado exacto.

El cultivo puro nos sirvió para diferenciar unas

colonias de otras a partir de su aislamiento

inoculando con un mayor número de estrías.

Es decir, estas tres técnicas o métodos nos

permiten una determinación cuantitativa más

fiable y seguro que una empírica.

Aunque son métodos más seguros no

garantizan el resultado correcto en el conteo de

colonias puesto que siempre puede haber

variaciones en el crecimiento de estas, ya sea

por la técnica de siembra o el medio de cultivo

en que se realizó.

Ramos Franco Michelle: Mi conclusión seria que

el crecimiento en tubo o la morfología es algo

difícil de explicar, esto ya lo habíamos repetido

anteriormente, en esta práctica lo que vimos fue

algo muy interesante, como las bacterias

crecían dentro del tubo de ensaye y como era

para clasificarlos y verlos según su color o su

estructura, no lo podíamos oler o sentir o

saborear pero a simple vista se veían y se

observaban cada uno de ellos, lo cual en

algunos agares fueron contaminados, se

encontraban diferentes bacterias que no eran

comunes en la prueba que agarramos para

observar, es algo impactante y diferente a las

cajas Petri.

Ramos Juárez Mario:

Rangel Osorio Hugo: Aprendimos otra forma de

aislar microorganismos en este caso se

aprendió con el método de dilución ya que es

más accesible y con una contaminación menor.

Además la técnica de dilución es precisa y

confiable y se debe de manejar con sumo

cuidado ya que si no es así de podrían obtener

resultados negativos, en lo personal pude

observar que del tubo 1 al tubo 7 si hubo una

disminución de bacterias y el 7 quedo casi sin

bacterias.

Rascón Castrejón Lizeth: Los medios de cultivo

en un laboratorio de microbiología son de suma

importancia ya que, son instrumentos de

diagnóstico de bacterias patógenas dentro de

los individuos. Los medios de cultivo son un

método fundamental para estudiar las bacterias

es cultivarlas en un medio líquido o en la

superficie de un medio En microbiología se

emplea medios de cultivos por la simple razón

que los organismos a estudiar necesitan una

fuente de energía, para vivir y así desarrollarse,

por tal motivo, la preparación de los medios de

cultivos varían ya que deben de prepararse

según las necesidades nutricionales del

organismo, esto es fundamental para su

estudios. Esto consta en disponibilidad de

nutrientes, presencia (o ausencia) de oxígeno y

distintos gases, condiciones adecuadas de

humedad, luz ambiental, pH, temperatura,

adecuados para el microorganismo. Una vez

cultivados dichos microorganismos no podemos

dejar de lado las técnicas de tinción que muy

importantes para el estudio de microorganismos

inertes. Para las técnicas de tinción se aplica un

colorante simple (un solo colorante) o diferencial

(dos o más colorantes). Esto nos servirá para

una mejor visualización y con ellos un mejor

análisis de los microorganismos deseados.

Las pruebas bioquímicas se emplean para

identificar de forma clara y precisa, la presencia

o ausencia de una enzima, de un grupo de

enzimas, o de una vía metabólica completa en

uno o más microorganismos. Una de las

técnicas rápidas más usadas para la

identificación de bacterias son las galerías API

de bioMerieuxMR, las cuales permiten identificar

levaduras, bacterias entéricas, no entéricas,

especies de Listeria, Staphylococcus,

Streptococcus, Corynebacterium,

Campylobacter, y otras más. En el laboratorio se

emplean frecuentemente dichas pruebas

bioquímicas Kliger, Voges-Proskaver, SIM, LIA,

MIO, Urea. El conteo bacteriano señala la

magnitud de la población total bacteriana. En

ese sentido se puede determinar por diversas

técnicas que se basan en algunos de los

siguientes tipos de medida.

Reyes Marcial Luis Diego: La práctica trataba de

observar el método por el cual se realiza el

recuento por dilución y con ello comprender un

método más para poder verificar el crecimiento

bacteriano. En esta parte se dio el resultado

final en el que la muestra tomada contaba con

1x10-3 bacterias por cada mililitro, lo cual son

demasiadas células que se reprodujeron en un

tiempo prolongado de aproximadamente 24

horas.

Aparte de la importancia y el objetivo de esta

práctica se pudo observar como resultaron las

diluciones en los diferentes cultivos a los cuales

se les inoculo con ellas, de igual manera se

observo su morfología colonial y después


desarrollada la tinción de Gram, su morfología

bacteriana.

Con todo esto se observó que en la parte sur

oeste hay una contaminación bacteriana menor

e poco significativa. Esto según lo que el

análisis arrojo, pero en todo caso no hay

evidencia ni comparación con otras pruebas de

diferentes partes de la ciudad.

Ríos Palacios Selene: El crecimiento de una

población bacteriana puede ser entendido desde

diferentes perspectivas y de acuerdo a éstas se

puede llegar a determinar la medida del

crecimiento mediante diversas metodologías.

Para algunos, el crecimiento es la capacidad

para multiplicarse que tienen las células

individuales, esto es iniciar y completar una

división celular. De esta forma, se considera a

los microorganismos como partículas discretas y

el crecimiento es entendido como un aumento

en el número total de partículas bacterianas.

Existen varias técnica para el conteo de bacteria

el que utilizamos esta vez fue la de “Numero

más Probable” con esta nos pudimos dar

conocimiento más preciso de las bacterias que

se desarrollaron en el tubo de ensayo,

revelándose una turbidez.

Se entiende por turbidez o turbiedad la falta de

transparencia de un líquido debido a la

presencia de partículas en suspensión. Cuantos

más sólidos en suspensión haya en el líquido

(generalmente se hace referencia al agua), más

sucia parecerá ésta y más alta será la turbidez.

La turbidez es considerada una buena medida

de la calidad del agua, cuanto más turbia, menor

será su calidad.

Con esto nos concientizamos de los distintos

organismos que se desarrollaban y crecían en

distintas muestras de agua de varios lugares en

la ciudad.

Discusión

Sembrar es el acto de colocar el material bacteriológico

en el medio de cultivo para promover su crecimiento y

desarrollo, y subsiguiente multiplicación.

El resultado de una siembra se llama: Cultivo

• Las siembras pueden ser:

- Primarias: cuando el material es inoculado en los

medios por primera vez

- Secundarias: cuando el material a inocular procede de

una siembra primaria

En este caso utilizamos la Siembra por dilución se toma

el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo

simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el

tubo con el uso del asa cargada con el material

bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

Después del tiempo de incubación, realizamos un

análisis al tubo de crecimiento pendiendo del tipo de

respuesta producida por los microorganismos, la

evaluación del crecimiento (turbidez), cambio de color

del medio de cultivo, dándose a conocer un color

significativo en el tubo.

Utilizamos la técnica de el “Número más probable”

(NMP) También llamada técnica de dilución en tubo,

proporciona una estimación estadística de la densidad

microbiana presente con base a que la probabilidad de

obtener tubos con crecimiento positivo disminuye

conforme es menor el volumen de muestra inoculado.

Obtuvimos tubos con una ligera turbidez. La turbidez se

determina por la densidad óptica (DO) que puede ser

expresada como Absorbancia, % de Transmitancia o

Unidades Klett (UK).

La turbidez producida por el crecimiento microbiano de

microorganismos unicelulares puede ser medida de

acuerdo a la capacidad de absorber la luz. Las muestras

a determinar son generalmente translúcidas cuando no

presentan crecimiento microbiano.

Por lo tanto, las partes espaciadas de la superficie

interior del tubo se fuerzan radialmente con una parte

de la reducción del diámetro de la superficie exterior. La

memoria indica que la técnica es útil para la producción

de bacterias en agar nutritivo similares.

Bibliografía Lira, Q. L. (2003). Microbitos.files.wordpress.com.

Recuperado el 28 de Octubre de 2014, de

http://microbitos.files.wordpress.com/2010/06

/atlasmicrobiologia1.pdf

Anexos

Técnica de Recuento por Dilución

Las bacterias, son las más pequeñas y numerosos

microorganismos que se encuentran en el suelo, el


número de bacterias en el suelo pueden o salar desde o

menos a varios millones de estimaciones se realizan en

cultivos o mediante examen microscópico. La técnica de

dilución en placa se usa más frecuentemente.

Mediante el uso de esta técnica de simple ejecución y

fácil interpretación, se pueden evaluar diferentes grupos

bacterianos según el medio de cultivo que contenga el

frasco.

Es aplicable para evaluar bacterias heterotróficas,

aerobias totales (BAT), bacterias reductoras de sulfato

(BRS), anaerobias heterotróficas totales (BAnT), etc.

Esta técnica está recomendada por el Instituto

Americano del Petróleo (API) para evaluar calidad

biológica en aguas de inyección en recuperación

secundaria y también es ampliamente usada en

evaluación de problemas microbiológicos en aguas de

refrigeración.

Procedimiento.

La técnica de dilución por extinción consiste en inocular

una serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml

del medio de cultivo apropiado según el tipo de bacteria

que se quiera evaluar.

Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa

descartable, estéril, de 1 o 2 ml de capacidad.

Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el

mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el

2° frasco.

Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2,

previamente agitado, y se inocula el frasco N° 3 y así

sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada

frasco.

Si no existe información previa sobre cantidad de

bacterias/ml. de la muestra suelen sembrarse 6 frascos.

La manifestación de crecimiento bacteriano se observa

por la turbidez del medio de cultivo que se compara por

transparencia con un frasco sin inocular en el caso de

bacterias aerobias totales y bacterias anaerobias

totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos

se debe observar un ennegrecimiento del frasco.

Una vez inoculados los frascos y rotulados

convenientemente, se incuban durante 7 días (BAT,

BAT-RF, MFT) o 14 días (BPA) en estufa de cultivo a

±5ºC respecto de la temperatura del agua muestreada,

efectuando lecturas diarias para observar aquellos

frascos que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso

de los medios BRS y BRH, el plazo de lectura es de 28

días máximo, realizando también lecturas periódicas.

Cálculos de densidad bacteriana.

Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna

modificación como consecuencia del crecimiento

bacteriano; esta modificación puede ser turbidez,

cambio de color, ennegrecimiento, etc. Por ejemplo: si

se usó el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o

cambio de color hasta el frasco N° 4 el resultado sería

1000-10000 bact/ml o exponencialmente 103 104

bact/ml. Habitualmente se informa 104 bact/ml.

Problemas comunes en la interpretación del crecimiento

bacteriano cuando se utiliza la técnica de dilución por

extinción.

Hay una variedad de acontecimientos que interfieren

con la interpretación de resultados obtenidos utilizando

las diluciones seriadas. Algunos de los más comunes

son:

Todos los frascos muestran crecimiento.

Si esto sucede, no es posible estimar la población, por

ejemplo si en una serie de 6 frascos inoculados todos se

manifiestan positivos se debe informar: 106 bact/ml.

Para el próximo análisis de esa muestra habría que

considerar el empleo de 8 o 9 frascos.

Un frasco no denota crecimiento y el resto sí.

Algunas veces uno de los frascos permanece sin

cambios mientras que los ubicados anterior y

posteriormente en la serie inoculada muestran

positividad. Es decir, hay un “salto” en los frascos

positivos. Este “salto” debe ser anotado y se informará

la concentración bacteriana correspondiente al frasco de

mayor numeración que resultó positivo. Por ejemplo: El

crecimiento positivo se observa en los frascos 1, 2 y 4

mientras los frascos 3, 5 y 6 permanecen sin

modificaciones, todo después de incubar a la

temperatura y tiempo incubado. Hay varias

explicaciones posibles para esto, incluyendo una

contaminación accidental del frasco 4. Por lo tanto,

nunca se puede saber que ocurrió realmente y hay que


proceder de la forma más simple ante una situación

dudosa.

En el ejemplo anterior, si se confía razonablemente en

que los frascos fueron rotulados apropiadamente con su

número de orden, el informe será 104 bact/ml. anotando

el frasco que “saltó”.

Frascos que se manifiestan positivos inmediatamente.

Si el primer frasco con un medio de cultivo para BRS se

ennegrece dentro de las 2 horas de haber sido

inoculado con 1 ml. de agua muestra, este

ennegrecimiento no es producto del crecimiento

bacteriano dentro del frasco; el color negro es debido al

SFe proveniente de altos niveles de SH2 en la muestra

de agua que reaccionó con el Fe disuelto en el caldo de

cultivo. En estos casos se pueden seguir dos cursos de

acción:

1) Proceder con las diluciones seriadas. Los frascos 2 a

6 permanecerán generalmente sin cambios y pueden

ser usados para detectar el crecimiento bacteriano

incubándolos a temperatura y tiempo adecuado y

observando ennegrecimiento en los mismos transcurrido

el tiempo de incubación.

2) Colectar por lo menos 50 ml de agua en un frasco

estéril y agregarle una tableta de Alka-Seltzer que

puede despojar la mayoría del SH2 de la muestra.

Cuando la tableta cesa de burbujear, retirar 1 ml de

agua con jeringa estéril y llevar a cabo el procedimiento

habitual de las diluciones seriadas.

Crecimiento bacteriano en tubo

1. Bacterias aerobias estrictas

2. Bacterias anaerobias estrictas

3. Facultativas:

Son bacterias que se acoplan para crecer y

metabolizar tanto en presencia como en

ausencia de oxigeno

4. Microarofilo

Requieren oxigeno en niveles inferiores a los

presentes en la atmosfera

Las bacterias facultativas son bacterias que pueden

adaptarse para crecer y metabolizar tanto en

presencia como en ausencia de oxigeno, por lo

tanto también se les llama anaerobias facultativas

aerobias facultativas.

Pueden desarrollar un metabolismo tanto

respiratorio usando el oxigeno como fermentativo en

ausencia de oxigeno


Las bacterias anaerobias facultativas pueden

obtener energía en ausencia de oxigeno, pero no es

toxico

Las proteobacteria son unos de los principales

grupos de bacterias son unos de los principales

grupos de bacterias. Incluyen una gran variedad de

patógenos como e-coli, salmonella, vibrio,

helicobacter, etc.

Son Gram- con una pared celular formada en

lipopolissacaridos son morfología es muy variable,

desde bacilos, hasta cocos simples hasta géneros

pros teca

Muchas de estas bacterias se mueven utilizando

flagelos por deslizamiento bacterial. Entre estos se

encuentran los mixobacterias son anaerobias, un

grupo único de bacterias que pueden agruparse

para formar cuerpos fructíferos

Contaminación del agua en Cd. Juárez

Alerta investigador por el deterioro en la calidad del

agua

Enfermedades gastrointestinales, diarreas y otra serie

de complicaciones en la salud son las que se desatan a

consecuencia de la falta de calidad y buen tratamiento

en el agua de la ciudad.

El cambio climático, la sequía, los altos contenidos

naturales de flúor y arsénico, así como los nitratos

originados en los residuos urbanos y líquidos

encontrados en las aguas subterráneas contribuyen a

que la calidad del agua en la ciudad se deteriore poco a

poco generando problemas en la salud de los

consumidores.

Enfermedades gastrointestinales, diarreas y otra serie

de complicaciones en la salud son las que se desatan a

consecuencia de la falta de calidad y buen tratamiento

en el agua de la ciudad.

Jorge Salas Platas, investigador de la UACJ, mencionó

que la problemática del agua y la mala calidad se debe

al crecimiento urbano y a la cantidad de cloruro, sulfatos

y arsénicos diluidas en las aguas, ya que en ocasiones

superan los valores máximos permitidos para ser

considerada como agua potable.

“Las enfermedades de origen hídrico tienen que ver

tanto con problemas epidemiológicos como con

elementos tóxicos de origen industrial por lo que al

momento de que el agua se consume produce

enfermedades gastrointestinales que comienzan con

diarreas y pueden llegar a serias intoxicaciones”,

mencionó Salas Platas.

Actualmente el agua que se consume es extraída por el

acuífero del Hueco del Bolsón, donde el

aprovechamiento subterráneo se encuentra con

condiciones de sobreexplotación desde hace ya varios

años.

Otro de los problemas de la mala calidad del agua es el

sistema de alcantarillado el cual cuenta con colectores,

subcolectores, emisores y dos plantas de tratamiento lo

que contribuye a que dentro del sistema y

procesamiento el agua se contamina más por la basura

y desechos que se cuelan dentro de estos.

En cuanto a la contaminación del agua existen ciertos

puntos que desencadenan a que se genere este tipo de

problemas como las descargas de agua industrial al

drenaje, agua residual a los cuerpos de agua y el uso de

los nutrientes agroquímicos.

Ante esta situación la Junta Municipal de Agua y

Saneamiento recomienda a la comunidad a darle un

buen manejo y cuidado a las aguas ya que diariamente

en cada hogar se llega a desperdiciar más de un litro de

agua lo que genera también otro problema además de la

contaminación y mala calidad en el líquido.

CAUSAS:

• Descargas de agua industrial al drenaje

• Descargas de agua residual a los cuerpos de agua

según origen

• Uso de nutrientes y agroquímicos

• Índice de la Calidad del Agua

• Concentración de nitrógeno, fósforo y pesticidas

• Por ciento de cuotas pagadas por descargas de agua

residual industrial y municipal


• Inversión de la industria en tecnología para el

tratamiento y pretratamiento de agua residual industrial

• Volumen tratado/volumen producido

• Inversión en plantas de tratamiento de agua residual

municipal

• Inversión en cultura del uso adecuado de

agroquímicos.

#4 dilución bacteriana, nmp, cultivo puro

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