1 UNAM FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE PARÁSITOS EQUIPO: 3 Barrientos Hernández Fernando García Flores Eduardo Romero Medina Luz Elena
1UNAM
FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II
TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE PARÁSITOS
EQUIPO: 3
Barrientos Hernández FernandoGarcía Flores Eduardo
Romero Medina Luz Elena
Que el alumno aprenda a colectarmaterial parasitario de animales deexperimentación y domésticos.
Que el alumno utilice y practique lasdiferentes técnicas de tinción,utilizadas en parasitología.
Que el alumno aprenda a conocerlas preparaciones, de diversosparásitos colectados por él.
A los animales
solicitados se les sacrifica
en una forma rápida y los
menos dolorosa posible,
se les toma sangre y se
realiza lo siguiente:
MÉTODO
Materia fecal: Frasco limpio de boca ancha
lejos del calor y el frío.
Muestra de orina: 1ª parte de la micción de
preferencia en tubo de ensayo e hisopo.
Muestra sanguínea: Punción o extracción en
tubo.
Los embases deben estar completamente
limpios y secos antes de usarse.
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Radicará en el mantenimiento
del parásito en condiciones
apropiadas, en donde se
asegure la integridad de este,
para el desarrollo de un
diagnóstico apropiado.
IMPORTANCIA DE LA
COLECTA.
Conservación:
Puede ser física: Temperatura
Puede ser química : Soluciones
químicas
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Impregnación que se
produce al ejercer presión
con un portaobjetos sobre
el tejido que va a ser
examinado.
Se fijan y se tiñen como un
frotis sanguíneo.
IMPRONTA
a) Técnica
de gota
gruesa
I) SANGRE
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b) Frotis o extensión fina de sangre:
Fijación:
Los procedimientos químicos son los
más utilizados para matar y fijar
parásitos.
El objetivo de la fijación es detener los
procesos metabólicos.
Los fijadores conservan indefinidamente
la muestra.
FIJADORES
Schaudinn
PVA
MIF
PAFAFA
For-malina
Glicerolgelatina
Útil para diferentes
formas
parasitarias
Estas se colorean
en verde-amarillo
o marrón
Composición ya
antes
mencionada, se
toman 2 o 3 gotas
de MIF más
heces, ya antes
tratadas y se pone
en un porta
objetos limpio.
Tinción MIF
Fijador de quistes,
protozoarios,huevos,
helmintos.
Se recomienda calentar la
formalina a 60 grados C al
usarse para huevos de
helmintos (inhibe su
desarrollo infectivo)
Formula
Formaldehído
Soloucion salina 0.85%
Proporcion de uso
3 partes de formalina por
una parte de materia fecal
Formalina
Fijador de trofozoitos
y quistes
(combinación
Shaudinn más resina)
PVA
Etanol 95%
HgCl2
Ácido acetico
glacial
Glicerina
Proporción 1:3
(muestra/fijador)
PVA (Alcohol polivinilico)
Tinción:
Las tinciones pueden realizarse en dosformas:
Progresivas: son aquellas en las que elmaterial se coloca en colorante diluido,durante el tiempo necesario para lograr latinción hasta la intensidad deseada.
Regresivas: son las tinciones en las que elmaterial o preparaciones se colocan encolorante concentrado hasta lograr unasobre tinción y posteriormente decolorarhasta lograr la intensidad deseada.
TIPOS DE TINCION
SU FORMA DE ACCION
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Para que los productos tomen el colorde un colorante, ya sea uno a uno omezclados adecuadamente a veces esnecesario la acción de un mordente;generalmente se utiliza una salcompuesta de aluminio o hierro o bienun ácido, ya sea antes del colorante, oadicionado a la solución de tinción.Para procesos contrastantes esnecesario utilizar más.
Montaje:
Los especimenes ya aclarados , se montan con
bálsamo de Canadá o resina sintética. Para
piezas grandes como proglótidos de cestodos
o trematodos como F. Hepática, se requiere un
medio de montaje espeso, mientras que para
frotes debe estar diluido para posteriormente
hacer una buena observación con objetivos de
inmersión.
Identificación de parásitos de
carácter uni o pluricelular para
la realización de un diagnostico
confirmativo.
Ciclo
biológico
Enfermedades
Vectores
Parásitos
de
Importancia
Médica
Ectoparásitos
Endoparásitos
Hemoparásitos
MANIPULACIÓN DEL VECTOR
› Mantener la integridad del capturador.
› Mantener vivo e integro al vector hasta la
recolección del parásito.
› El parásito debe ser recién extraído.
› Debe ser representativo a la enfermedad
que produce.
› Representa la magnitud de la enfermedad
en el paciente y en la población.
Parásito
representati
vo
Colorante
de
contras
te
Fresco
Fijación
Pluricelulares Aseguramiento de la
eliminación de la
patogenicidad
Unicelulares.
Extremar
precaución
Aun patógeno
Aclaración de
tejidos y
tinción
Tipos de
muestra
Cuidados de la
muestra
Técnicas Parásitos
sangre
• Heparina
• Azida de
sodio
• Recién
extraída
•Gota gruesa
•Gota fina
•Hemoparásitos
intra/extra
eritrocitarios
ectoparásito vivo •Sacrificado
•Fraccionado
•garrapata
Heces fecales
•Frasco boca
ancha limpio y
seco ausencia de
orina y rotulado
Varios procesos
Parásitos
intestinales
sólidas
Cerradas( evitar
desecación) y
refrigeradas
2grados C
•Cps
•Flotación
•concentración
Huevos y/o
quistes
nemátodos
líquidas
37 grados C
recién
obtenidas
Observación
en fresco
Trofozoitos y
quistes
tejidos
frascos con
fijador
•formalina
Varios
procesos T. solium
•Orina
•exudados
Frascos
limpios,
secos, boca
ancha. Tubo
con sol’n
salina
isotónica
Observación
en fresco y/o
tinción de
exudado
Trichomonas
vaginalis
Obtención
Fijación
Conservador
Tinción
Montaje
Observación
Identificación
TINCIONES
Temporales
•Lugol
•Giemsa
•Eosina 5%
Fijas
•Hematoxilina
Férrica
•Tinción indica
Supravitales
•Azul de cresilo
•75% solución
Fijador de quistes, trofozoitos, huevos, larvas
Solución de trabajo más muestra ( no se almacena)
Proporción 1:3 (muestra/fijador)
Solución concentrada
HgCl2
Agua destilada
Etanol
Solución de trabajo
Solución concentrada
Acido acetico glacial
SHAUDIN
Fijador y conservador de casi todos los elementos parasitarios
1) Agua destilada
Tintura de merthiolate, formaldehído y glicerol
2) Lugol
Porción 14 mL de 1) más 1mL de 2) más 2g de muestra
MIF (Merthiolate-yodo-
formaldehído)
Preserva quistes y
trofozoitos, además
de huevos y larvas
de helmintos
Fórmula
Fenol
Solución salina
Etanol 95%
Formaldehído
Proporción 1:5
(muestra /fijador)
PAF (Fenol-alcohol-formaldehído)
Preservador de
trematodos y
cestodos
Fórmula
Etanol 95%
Formaldehído
Agua destilada
Ácido acético
glacial
AFA (Alcohol-formaldehído-ácido acético)
Preparaciones
permanentes
de nematodos
Formulación
Gelatina
Agua
destilada
Glicerina
Fenol
Glicerina-gelatina
Tinción de negro E de clorazol.Hematoxilina ferrica HeidenhainTinción tricomicaHematoxilina tungstica de DobellHematoxilina molibdica de DobellTinción de Hematoxilina y eosinaTinción de NobleColorante de MannTinción para Cryptosporidium ssp e isospora sppColoración de GiemsaTécnica de tinción para Trichomonas vaginalesColoración para parásitos sanguíneosTinción WrightTinción tricromica (modificada por Cerva), para amibas de vida libre.
TINCIONES PARA PROTOZOARIOS
Hematoxilina:colorante básico parateñir estructuras(núcleos celulares).
Existen distintas lacasalumínicas dehematoxilina:
Hematoxilina deHarris: Por suestabilidad (seconserva entre 6-12meses). Es de fácilmanejo.
Coloración regresiva,se elimina el excesode colorante conalcohol.
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Como agente oxidante se utiliza elóxido de mercurio.
Tiñe los núcleos de color azulado.Hematoxilina de Mayer: Es un tipo de
coloración progresiva (no requiere lavadoposterior). Se usa el yodato de sodiocomo agente oxidante.
Tiñe los núcleos de azul suave.Hematoxilina ácida de Erlich.Hemalumbre de Delafield: Utilizada en
técnicas histoquímicas e inmunológicas.
Coloración para platelmintos.
Tinción con alumbre carmín.
Hematoxilina Dalafield.
Tinción de Reynold.
Tinción de carmín acético de Semichon.
Tinción con hemateína de Roudabush.
Tinciones para
helmintos
2) Busqueda y estudio de
ectoparácitos.
a) Localice o obtenga los parásitos que se
encuentran sobre los animales asignados.
b) Sacrifique los ectoparásitos.
c) Haga observaciones de diferentes
porciones del artrópodo
d) Realice diversas preparaciones, ya sea
para sangre en solución salina, se utiliza
colorantes de contrastes.
Los pasos a seguir son:
Obtención fijación
conservación
Tinción
Montaje
Observación
Identificación
3) Obtención de protozoarios
y helmintos.
a) Al animal que se sacrifico se le hace unaincisión a lo largo de toda la línea mediaventral
b) Una vez abierto el animal se busca en lasuperficie de los órganos internos y lasmembranas serosas la presencia dequistes.
c) A continuación se va extrayendo órganopor órgano, estos se colocan en placascon solución salina.
TRATAMIENTO PARA ANIMALES Y
VÍSCERAS
a) Los órganos huecos se abrirán con tijeras ylos esponjosos se desmenuzaran en buscade helmintos, el contenido del intestino seobservara al microscopio en busca deprotozoarios y helmintos
b) A los helmintos encontrados se les quitarael moco y el resto de tejido
c) A los helmintos limpios se les conservaraen AFA y se les fijara posteriormente conalguna de las técnicas que se sugieren enanexo de la practica.
Manual de biología medica; Facultad de
Estudios Superiores Zaragoza; QFB
Manual de técnicas para el diagnostico
morfológico de las parasitosis; Paz María
Salazar S. Irene de Haro A.; Ed. Francisco
Méndez Cervantes.
BIBLIOGRAFÍA