Reacciones Bisustrato
Reacciones Bisustratoo multisustratoDavid Zapata Carvajal5to19/06/2012Reaccin Bisustrato
Nomenclatura
Mtodo Cleland
Progreso de la reaccin se simboliza por una lnea horizontal.La entrada de sustratos y la salida de productos se representan por flechas verticalesEjemplosSecuencial: Bi-Bi ordenada
Desplazamiento: Uni-Uni-Uni-Uni Ping-Pong
EEEAEABABEQPQEPQEEEAEAPEBBQDesplazamiento secuencial
La formacin del complejo ternario es independiente del orden de unin de los sustratos. Reacciones secuenciales al azar,La formacin del complejo ternario orden determinado Complejo sea eficiente desde el punto de vista cataltico.
Reacciones secuenciales ordenadas.Rx. secuenciales ordenadas.
Enzimas con sustratos NAD+ o NADHLactato deshidrogenasa
EEEAEABABEQPQEPQ
Caso particularEEEAABEQPQEjemplo
Rx secuenciales al azar E + A EAE + B EB EAB EPQEQ E + QEP E + PBAPQEEABEABAEBEABQQPPEPEQEBAEPQEQP
Rx. secuenciales al azarOrden y liberacin de productos al azarCreatina quinasa Fosfocratina + ADP
Mecanismo ping-pong o de doble desplazamientoMecanismo ping-pong
Ejemplo: Nomenclatura de Cleland. EESuccinil-CoAHSCoAPiSuccinatoGDPGTPSuccinil-EE-PEcuaciones de velocidad de reaccin:(Eo) = (EXi)Mecanismo Secuencial Bi Bi al azar.
EABEAEBEABkcatKAKBKMABKMBAEBAE + P+ QA + B P +Qv = kcat [EAB=EBA]
[][][][][][][][][][][][][][][][][][][][][][]AMBATTAMMMKKBAEKBEKAEEEEABEBEAEEKKBAEEABKBEAEABEABBEAKABABABAB][][+++=+++====De Ec.3 despejo EAB= Ec.6Ec.1 en Ec.6Ec.1,2,6 en Ec.5
v = kcat [EAB] Vmax = kcat [ET]Concentraciones saturante de A y B
Igual se hace para [B] constante pero no saturante
[A]VmaxV`maxKMBA
K`[A]KBKMABObtencin de las constantes cinticas[A] =0[B]VmaxV`maxKMAB
K`[B]KAKMBA
[A] cte[B] cteAnlisis de la ecuacin: Un substrato constante y saturante
[B] Muy grandeAnlisis de la ecuacin: Un substrato constante y saturante
[A] Muy grande
Mecanismo secuencial Bi-Bi ordenado
KA KmAB kcat
V=kcat[EAB]
Constante B
[B]Vmax
V`maxRegresin No-linearVmax KMABK`KAConstante A
K`KMABPendiente es igual: KA KAB [A] k1 k2 k3 k4 E +A EA P + E* + B E*B E + Q k -1 k-3 KMAKMB
v = k4 [E*B]
Las constantes de Michaelis y el balance de masas en el estado estacionario
La velocidad de reaccin es la descomposicin del complejo EB
Despejando [E*B]de las ecuaciones anterioresECUACIN DE VELOCIDAD EN MECANISMO BI BI PING PONG
Paso limitanteConstante B
[B]Vmax
V`maxRegresin No-linearVmax KMBK`[B]KMBKMAKMBConstante A
[B]VmaxV`maxK`[B]KMAKMBKMARegresin No-linearVmax KMA