σ14 τεχνολογία ανασυνδυασμένου dna

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 11

ΒΙΟΛΟΓΙΑΒΙΟΛΟΓΙΑ θετικής κατεύθυνσηςθετικής κατεύθυνσης

Γ΄ ΤΑΞΗΣ ΕΝΙΑΙΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥΓ΄ ΤΑΞΗΣ ΕΝΙΑΙΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 22

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 4ΚΕΦΑΛΑΙΟ 4οο Τεχνολογία του Τεχνολογία του

ανασυνδυασμένου ανασυνδυασμένου DNADNA ΕισαγωγήΕισαγωγή Γονιδιωματική βιβλιοθήκηΓονιδιωματική βιβλιοθήκη cDNA cDNA βιβλιοθήκηβιβλιοθήκη Υβριδοποίηση νουκλεικών οξέωνΥβριδοποίηση νουκλεικών οξέων Αλυσιδωτή αντίδραση της Αλυσιδωτή αντίδραση της

πολυμεράσης (πολυμεράσης (PCR)PCR)

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 33

Τα τελευταία 60 χρόνιαΤα τελευταία 60 χρόνια

Χημεία του Χημεία του DNADNA Μοριακή βιολογίαΜοριακή βιολογία

• Ποια ένζυμα γνωρίζετε που εμπλέκονται Ποια ένζυμα γνωρίζετε που εμπλέκονται στις λειτουργίες του γενετικού υλικού;στις λειτουργίες του γενετικού υλικού;

• Ποιες διεργασίες μπορούν να γίνουν Ποιες διεργασίες μπορούν να γίνουν in in vitro;vitro;

+ + περιοριστικές ενδονουκλεάσεςπεριοριστικές ενδονουκλεάσες

= ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ= ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 44

ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΗΧΑΝΙΚΗ Θεμελιώδης στόχοιΘεμελιώδης στόχοι

• Κατανόηση της ζωήςΚατανόηση της ζωής• Βελτίωση της (ανθρώπινης) Βελτίωση της (ανθρώπινης)

ζωήςζωής ΙατρικήΙατρική ΓεωργίαΓεωργία ΚτηνοτροφίαΚτηνοτροφία

ΤεχνικέςΤεχνικές• Κατασκευή ανασυνδυασμένου Κατασκευή ανασυνδυασμένου

DNADNA• ΜετασχηματισμόςΜετασχηματισμός• Επιλογή – απομόνωσηΕπιλογή – απομόνωση• Δημιουργία βακτηριακού Δημιουργία βακτηριακού

κλώνουκλώνου

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 55

Γονιδιωματική βιβλιοθήκηΓονιδιωματική βιβλιοθήκη

όλο το γονιδίωμα όλο το γονιδίωμα . . .. . .

Περιοριστικές Περιοριστικές ενδονουκλεάσες ενδονουκλεάσες π.χ. π.χ. EcoRIEcoRI • 5’-G A A T T C5’-G A A T T C-3’-3’• 3’-C T T A A G-5’3’-C T T A A G-5’

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 66

Άσκηση Άσκηση

Δίνεται η αλληλουχίαΔίνεται η αλληλουχία5’-105’-1033 βάσεις- βάσεις-ATGATG CGACGA ATTATT CACCAC CAGCAG AGAAGA CCACCA-10-1044 βάσεις- βάσεις-3’3’

1.1. Βρείτε τη συμπληρωματική της ώστεΒρείτε τη συμπληρωματική της ώστε να προκύψει δίκλωνο να προκύψει δίκλωνο DNADNA

2.2. Τι θα προκύψει μετά την επώαση με Τι θα προκύψει μετά την επώαση με ΕΕcoRIcoRI;;

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 77

ΜετασχηματισμόςΜετασχηματισμός

ΑπομόνωσηΑπομόνωση ΚόψιμοΚόψιμο ΡάψιμοΡάψιμο ΜεταφοράΜεταφορά ΚαλλιέργειαΚαλλιέργεια Κλώνος Κλώνος

Δ. ΚελεφιώτηςΔ. Κελεφιώτης 88

Προς το μέλλονΠρος το μέλλον

Ένα Ένα εργαστήριο εργαστήριο γενετικής γενετικής μηχανικήςμηχανικής

Βιβλιοθήκη με Βιβλιοθήκη με E. coliE. coli BACBAC Βιβλιοθήκη λάμδα Βιβλιοθήκη λάμδα φάγωνφάγων