Citogenetica : analisi dei cromosomi NUMERO , MORFOLOGIA e…. • CROMATINA : contenuto granulare del nucleo (DNA e proteine) - eterocromatina (elementi ripetitivi) - eucromatina (sequenze trascritte) • CROMOSOMI : 46 molecole di DNA duplicate e spiralizzate visibili durante la divisione cellulare (metafase) - n° caratteristico per ogni specie - lunghezza e morfologia definite - bandeggio caratteristico con sostanze coloranti (Giemsa, Quinacrine)
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Citogenetica : analisi dei cromosomi
NUMERO , MORFOLOGIA e….
• CROMATINA : contenuto granulare del nucleo (DNA e proteine)
- eterocromatina (elementi ripetitivi)
- eucromatina (sequenze trascritte)
• CROMOSOMI : 46 molecole di DNA duplicate e spiralizzate
visibili durante la divisione cellulare (metafase)
- n° caratteristico per ogni specie
- lunghezza e morfologia definite
- bandeggio caratteristico con sostanze coloranti
(Giemsa, Quinacrine)
1956Tijo e Levan46 cromosomi umani
1959Anomalie di numerotrisomia 21: s. di Down45, X : s. di Turner47, XXY : s. di Klinefelter
1960Anomalie di strutturaCromosoma di Philadelphia (LMC)
1968CasperssonBandeggio cromosomico
Trattamento di cellule inmetafase con soluzione ipotonica
t(7;11)(p15;p15)
Linfociti T
PHA
Colchicina
Blocco in metafase
Soluzione ipotonicae fissazione
FISH (1982)ibridazione fluorescente in situdenaturazione del DNA cromosomicoe ibridazione con sonda fluorescente
microscopio ottico - bandeggio G
Analisi convenzionale del cariotipo
ideo
gram
mi
p = braccio cortoq = braccio lungo
numerazione delle bande dal centromero al telomero
Analisi convenzionale (microscopio ottico)
Come si riconoscono i singoli cromosomi ?
Posizione delcentromero
metacentrico acrocentrico
p
q
p
q
Analisi convenzionale (microscopio ottico)
telomero
telomero
centromero
Bandeggio G caratteristico
bande GCHIARE
ricche in GCmolti geni
bande GSCURE
ricche in ATpochi geni
risoluzione cariotipo: 400 550 850 ( n. bande totali per corredo aploide )
Cromosoma 7
Diverse risoluzioni di bandeggio G
16 bande 24 bande 46 bande
Bandeggio C(eterocromatina)
Notare le grandi regioni eterocromatiche deicromosomi 1 e 9
Analisi convenzionale (microscopio ottico)
9
9
1
1
Indicazioni all’analisi del cariotipo
• Cariotipo costituzionale :– sospetto clinico di patologia cromosomica– ritardo di crescita o di sviluppo, facies dismorfica,
malformazioni multiple– ritardo mentale– genitali ambigui o disgenesia gonadica– sterilità e coppie con aborti ripetuti– storia famigliare positiva per anomalie
cromosomiche• Aborto spontaneo, morte alla nascita o neonatale• Gravidanze con età materna > 35 anni• Neoplasie (ematologiche)
Anomalie del cariotipo
• Anomalie di numero :– Trisomie (21, 13, 18, X, Y)
– Monosomie (45, X)
– Tri- Tetra-ploidie (3N, 4N con N=23)
• Anomalie di struttura :– Traslocazioni (bilanciate e non)
– Inversioni, cromosomi ad anello, isocromosomi
– Delezioni, duplicazioni
• Sindromi da instabilità cromosomica e siti fragili :– Atassia-Telangiectasia, Anemia di Fanconi, S. di Bloom..
• interessamento di un gene/i nel punto di rottura– perdita di funzione di un gene– formazione di un gene di fusione– difetto di imprinting
• nessuna conseguenza in termini quantitativi o di funzione genica ma:– inattivazione della X normale nelle t (X;A)– segregazione sbilanciata alla meiosi o mitosi– predisposizione ad ulteriori riarrangiamenti
https://hcforum.imag.fr/H_A/index.html
17/03/2004
7 sett
8 sett
2 2
Sindrome di Miller-Dieker
Genitore sano: inv. peric. crom.17
Figlio con M-D:dup (17q), del (17p)
Sonde:LIS-1 (17p13.3)RAR(17q12)
Caso 510/02 madre
PAINTING CROM. 9
510/02
Madre a mosaico e unica linea nella figlia
SP510/02
SONDA BCR(22q11)-ABL(9q34)
crom. 22
crom. 22
crom. 9
crom. 9
NEGATIVA
presenzadi un cromosoma Filadelfia
presenzadi un doppiocromosoma Filadelfia
Sonda:
DiGeorge 22q11.2 (gene Tuple1)
Controllo 22q13.3 (gene ARSA)
Sindrome da delezione 22q11.23 fenotipi, anche nella stessa famiglia:
• sindrome di DiGeorge (in neonati):– difetto cell. T (ipoplasia timo)– ipo-calcemia (ipoparatirodismo)
• sindrome Velo-Cardio-Faciale (di Shprintzen):– anomalie cranio-faciali e del palato– bambini con voce nasale
• Cardiopatia tronco-conale (sindrome di Takao):– predominano le anomalie cardiache– tetralogia di Fallot, interruzzione arco aortico (tipo B)– tronco arterioso, destropos. arco aortico, art. succl. destra aber.
Fenotipo “CATCH”:Cardiac Abnormality, T cell defect, Clefting, Hypocalcemia
Sindrome da delezione 22q11.2
• Incidenza : 1/2000-4000 nati• 5% dei neonati con difetti cardiaci• > 40% di Tetralogia di Fallot + atresia v. polmonare• > 60% di Tetralogia di Fallot + assenza di v. polmonare
3 Mb
delezionesindrome del 22q11.2
duplicazionesindrome “cat eye”
Sonde:
• Williams 7q11.23
• controllo 7q31
Sindromedi Williams
Delezione 7q11.23
Sindrome di Williams-Beuren
Volto caratteristico:
ripienezza peri / supra orbitale (specie supero-laterale),sopraciglia e ciglia rade nella regione mediana, gote gonfie ribassate….
Volto caratteristico:
…. naso corto con sella nasale schiacciatafiltro liscio e lungoiride stellata
Difetto cardiaco:stenosi aortica sopra-valvolare
Ritardo mentale con personalità estroversa
A volte ipercalcemia nell’infanziasinostosi radio-ulnare (10% dei casi)
Delezioni sub-telomeriche
Sonda cromosoma-
specifica
nucleo in interfase
cromosomi in metafase
FISH su nuclei in interfase
Normale Trisomia 21
Anomalie cromosomiche multiple (cromos. 1, 3, 6 e 11)