METODE STERILISASI
OvenDigunakan untuk peralatan gelas : cawan petri, pipetukur dan labu erlenmyer.Alat gelas yang disterilisasi dengan udara panas tidakakan timbul kondensasi sehingga tidak ada tetes air (embun) didalam alat gelas.Bungkus alat-alat gelas dengan kertas payung atau aluminium foilAtur pengatur suhu oven menjadi 180 0C dan alatdisterilkan selama 2-3 jam.STERILISASIProses dari penghancuran atau eliminasi mikroorganisme yang hadir pada objek atau sediaan untuk mencapai suatu keadaan steril
Metode SterilisasiSterilisasi MekanikLarutan dapat dibebaskan dari mikroorganisme vegetatif dan sporanya melalui filter bakteri. Filter bakteri tidak dapat membebaskan larutan dari virus; bagaimanapun alat ini tidak mengurangi jumlah virus. Pada prinsipnya dengan absorbsi ke dalam dinding filter dan dengan menghilangkan partikel kasar dari bahan yang mengandung virus. Sterilisasi MekanikUntuk dapat membuat larutan bebas bakteri dan steril, digunakan filter dengan berbagai tipe. Tipe ini termasuk filter yang terbuat dari silikon murni, porselin, asbes, dan glass-fritted. Macam-Macam MikrofilterFilter SeitzFilter ini dibuat dari bahan asbes yang dijepit pada dasar wadah besi. Keuntungan utama dari filter Seitz ini adalah lapisan filter dapat dibuang setelah digunakan dan masalah pembersihannya berkurang.
Filter Seitz Filter ini mampu dengan volume dari 30 ml hingga lebih dari 100 ml. Kerugian pertama dari filter ini adalah cenderung memberikan komponen magnesium pada filtrat. Bahan alkali ini dapat menyebabkan konsentrasi pengendapan alkaloid bebas dari garamnya dan dapat menginaktifkan seperti insulin, ekstrak pituari, epinefrin dan apomorfin.Filter SwinnySebuah adaptasi dari filter seitzFilter swinny mempunyai alat khusus yang terdiri dari lapisan hasbes, bersama dengan screen dan pencuci. Bagian yang dipasang dihubungkan pada spoit dan cairan dimasukkan melalui disk asbes dengan menggunakan tekanan pada saluran spoit.
Filter Fritted-Glass Sterilisasi MekanikFiltrasi, microfilter : 2,5 - 3 / 0,22 - 0,45 Prinsip : -Cairan lewat saringan berpori (ditekan dengan gaya sentrifugasi atau pompa vakum). Bakteri tertahan pada saringan-Virus tidak tersaring.Bahan tidak tahan panas atau mudah menguap:vitamin, antibiotik, enzimLangkah :1. Sterilkan tempat yang digunakan sebagai wadah2.Media disaring menggunakan mikrofilter (2,5 - 3) dan langsungditempatkan pada wadah steril3.Ditutup rapat dengan aluminium foil4.Dilakukan dalam laminar flowMacam-Macam Mikrofilter1. Non-disposable filtration apparatus- Disedot dengan pompa vakum- Volume 20-1000 ml2. Disposable filter cup unit- Disedot dengan pompa vakum- Volume 15-1000 ml3. Disposable filtration unit dengan botol penyimpan- Disedot dengan pompa vakum- Volume 15-1000 ml4. Syringe filters- Ditekan seperti jarum suntik- Volume 1-20 ml5. Spin filters- Ditekan dengan gaya setrifugasi- Volume kurang dari 1 ml
Sterilisasi Fisika Cara Panas
Cara Bukan PanasSinar UVDigunakan untuk membantu mengurangi kontaminasi di udara dan pemusnahan selama proses di lingkungan. Sinar yang bersifat membunuh mikroorganisme (germisida) diproduksi oleh lampu kabut merkuri yang dipancarkan secara eksklusif pada 2537 nm.
Sinar UVKetika sinar UV melewati bahan, energi bebas ke elektron orbital dalam atom-atom dan mengubah kereaktivannya.Absorpsi energi ini menyebabkan meningginya keadaan tertinggi atom-atom dan mengubah kereaktivannya. Ketika eksitasi dan perubahan aktivitas atom-atom utama terjadi dalam molekul-molekul mikroorganisme atau metabolit utamnya, organisme itu mati atau tidak dapat berproduksi.Radiasi PengionRadiasi pengion adalah energi tinggi yang terpancar dari radiasi isotop radioaktif seperti kobalt-60 (sinar gamma) atau yang dihasilkan oleh percepatan mekanis elektron sampai ke kecepatan den energi tinggi (sinar katode, sinar beta).Aksi letal radiasi pengionan menghancurkan mikroorganisme dengan menghentikan reproduksi sebagai hasil mutasi letalSterilisasi KimiaEtilen oksida Etilen oksida (ETO) adalah eter siklik, gas pada suhu kamar mudah terbakar, dan meledak ketika dikurung dan adanya oksigen. Bahaya peledakan bisa dihilangkan jika tidak ada cetusan dan/atau kehadiran O2. Metode Pemanasan dengan uap air dan pengaruh tekananSampel ditaruh di ats lempengan saringan dan tidak mengenai air dibawahnya.Pemanasan dilakukan hingga air mendidihOrganisme yang tidak berspora akan mati dalam 10 menit.Organisme yang berspora akan mati dalam jangka waktu 30 menit. Ada beberapa jenis sporabertahan hingga beberapa jam maka ditambahkan Natrium Karbonat ( Na2CO3) dlm jangka 30 menit mati.
Moist HeatAqueous injections are terminally sterilized by autoclaving, the exception being products containing heat-labile drugsMoist heat sterilization at a minimum temperature of 121 C maintained throughout the load during a holding period of 15 min.
MechanismThe principal mechanism for moist heat inactivation of spores is DNA denaturation.Moist Heat Small volume injection preparations of heatstable drugs are distributed into, and sterilized in, glass or plastic ampoules.The most critical operation during the preparation of glass ampoules is the ampoule-sealing process.To detect leakage, the most convenient method is to immerse ampoules in a heat-stable dye solution during autoclaving.Any seal failure will lead to loss of air from the ampoule during heating up and consequent ingress of dye during cooling, which is easily seen on inspection.Metode Pemanasan secara keringTemperatur mencapai 1600 1800C. Menyebabkan kerusakan sel-sel hidup karena auto oksidasi sehingga bakteri pathogen mati.Waktu pada suhu 1600 = 1 jamWaktu pada suhu 1800 = jamBiasanya untuk alat-alat pipet, tabung reaksi, jarum operasi, jarum suntik dll.
Metode Pemanasan secara intermittenJohn Tindall (1877) Temperatur didih selama 1 jam tidak membunuh organisme, akan tetapi jika dididihkan berulang-ulang selama 5 kali dan setiap mendidih istirahat 1 menit akan membunuh kuman. Why ???
Metode PenyaringanPemisahan mikroorganisme dari material. Bahan filter sejenis porselin yang berpori.Hanya untuk sterilisasi larutan gula, serum, hasil produksi mikroorganisme seperti enzim dan exotoxin, memisahkan fitrable virus dari bakteri.
SECARA KIMIABiasanya dipakai alkohol 96%,Acetone tab formalin, sulfur dioxide dan chlorine.Material yang akan disterilkan dibersihkan dulu kemudian direndam selama 24 jam.
Sterilisasi FisikaPemanasana. Pemijaran (dengan api langsung): membakar alat pada api secara langsungcontoh alat : jarum inokulum, pinset, batang L, dll.b. Panas kering: Oven (60-1800C).untuk alat dari kaca : erlenmeyer, tabung reaksi dll.c. Uap air panas:Konsep mirip mengukus. untuk Bahan yang mengandung air (tidak terjadi dehidrasi).d. Uap air panas bertekanan : autoklafPenyinarandengan UVcontoh : membunuh mikroba pada permukaan interior Safety Cabinetsterilisasi ruanganAutoklaf
Keuntungan dan Kerugian Metode SterilisasiMetode SterilisasiKeuntunganKerugianSterilisasi uap panasAdanya uap air dalam sel mikroba menimbulkan kerusakan pada temperatur yang relatif rendah Tidak digunakan untuk mensterilkan minyak lemak, sediaan berminyakUntuk sediaan farmasi dan bahan yang dapat tahan terhadap temperatur yang digunakan dan penembusan uap tidak menimbulkan efek yang tidak dikehendakiTidak untuk sediaan yang tidak dapat ditembus oleh uap airDigunakan untuk larutan dalam jumlah besar, alat-alat gelas, pembalut operasi dsbTidak untuk serbuk terbuka yang mungkin rusak oleh uap jenuhDapat membunuh semua bentuk mikroorganisme vegetatifSpora-spora yang kadar airnya sukar dihancurkanMetode sterilisasiKeuntunganKerugian Sterilisasi panas keringDapat digunakan untuk membunuh spora dan bentuk vegetatifnya dan semua mikroorganismeHanya digunakan untuk zat-zat yang tahan penguraian pada suhu diatas 140 0CUmumnya digunakan untuk senyawa-senyawa yang tidak efektif disterilkan dengan uap air panasKarena panas kering efektif membunuh mikroba dengan uap air panas maka diperlukan temperatur yang lebih tinggi dan waktu yang lebih lama.Sterilisasi gasBahan yang tidak tahan terhadap panas dan uap dapat disterilkan dengan baik dengan memaparkan gas etilen oksida dan propilen oksida bila dibandingan dengan cara lainGas-gas etilen oksida mudah terbakar bila tercampur dengan udaraDapat digunakan untuk membunuh mikroorganisme dan spora lainGas-gas sulit hilang pada kebanyakan bahan setelah pemaparanIritasi jaringan dapat terjadi jika etilen oksida tidak dihilangkan sama sekali, sifat karsinogenik dan mutagenik dari gas tersbutMetode sterilisasi KeuntunganKerugianPenyaringanPemanasan yang sedikit, jadi ideal untuk larutan TermolabilMembutuhkan teknik aseptis, ini membutuhkan susunan latihan yang lebih dan peralatan steril dan fasilitasMenghilangkan semua bakteri dan jamur, dan sering kali menjernihkan larutanVirus, bagian filtrat dari bakteri, produk bakteri, begitu juga toksin dan pirogen, tidak dihilangkan atau dihancurkan.Bermanfaat untuk tetes mata, botol tetes ini tidak tahan dengan proses pemanasanPenyerapan dapat terjadi dengan beberapa filter, misalnya lilin dan bahan berserat.Filtrasi tidak dapat digunakan untuk suspensi steril
