عه راب ل له ا رح م ل – ا ات ن لب ل وم ل ع ل ا ه ي كل2008/2009 Enterobacterai ceae ا ري كت ن ل ا ه ي ض ر م ل ا ع ب را ل ر ا ت ت خ م ل ا ه وي ع م ل ا ا ري كت ن ل اEnterobacteraiceae دمه ق م ل ا ت ح ت ها ن@ بA ب ر ت@ ت م ت ل ا ت ع ص يدة عد ت م اس ن ج ا ات وي ع م ل ا لهO ي م عا ض يS ون ك ي ، لا ركه ح\ ت م ر ت غ او ركه ح\ ت م رام ، غ ه ع ت ص ي ه ي ل سا ات ن ص ع ر . ه ج م ل اS ن م ها م و ج ح ع ل ن ت ورات ب س3 - 5 ولا طS رون ك ي ما0.5 – 0.7 S رون ك ي ما ع م ر ي د ن س كلاور ا ا ن ت ح لا ه ي ل ، سا ور ك و ل لك ر ا سك ل رة م خ م ها ع ت م ج ها ، ض ر غ رات ت ت ل ل ا ر ت خ ت ، و ر لت الكاير ا ا ن ت ح لا ه ي ج و م واد ش ل ا ض ع بNO3 ى ل ا ت ي ر ت يNO2 . S سان ن لا ل ه ق ت قء الد عا ملا ا ها ل ي ع تA ت لط اS ن ط و م ل ا ل ن م ها من ما س قS ي ان ت جS وان ب ح ل واE. coli ه ي ع تA ت لط ا ا ري كت ن ل ل ا ك ش ن ال ل ن م رى خ اً عا وا ن اS انS ن ي ح ي ف عاء م لا لSalmonella والShigella . S سان ن لا ل رة ط خ ه ي ض ر م ر ت ت ع ب1
21
Embed
· Web viewKlebsiella culture Methyl-Red Indicator يضاف 3-4 قطرات من Methyl-Red Indicator الى الانابيب الحاويه على وسط MR-VP broth والملقحه
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
المختبر الرابع البكتريا المعويه
Enterobacteraiceaeالمقدمة
تضم عائلة المعويات اجناس متعددة يصعب التمييز بينها تحت المجهر .عصيات سالبة بصبغة غرام ،
متحركة او غير متحركة ، التكون سبورات تبلغ 0.7 – 0.5 مايكرون طوال 5-3حجومها من
مايكرون عرضها ، جميعها مخمرة لسكر الكلوكوز ، سالبة الختبار االوكسيديز مع بعض الشواذ موجبة
الى نتريت NO3الختبار الكاتاليز ، وتختزل النترات NO2 .الموطن الطبيعي لها االمعاء الدقيقة لالنسان
تشكل E. coliوالحيوان حتى ان قسما منها مثل البكتريا الطبيعية لالمعاء في حين ان انواعاً اخرى
تعتبر مرضية خطرة Shigella وال Salmonella مثل اللالنسان .
اهم االجناس التي تضمها Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter,
Barritt’sوالكشف عنه بواسطة كاشف بiiارييت reagent -MR(، عند تلقيح وسط KOH و alpha Naphthol)مكون من
VP brothافةiiوم باضiiام نقiiة ايiiدة ثالثiiا ولمiiبالبكتري الكاشف ، سيتحول لون الوسط الى اللiiون الiiوردي
دالله على الفحص الموجب(Pink-Burgundy)البيرغندي iللVP.
الموادMR-VP broth
E. coli and Enterobacter aerogenes or Klebsiella cultureBarritt’s reagent )Voges-Proskauer( Indicator قطiiره من محلiiول الكشiiف18 مiiل( 0.5يضاف )
الى الوسط الملقح الحاوي على(alpha naphthol)االول مل من الزرع ، ثم يضاف كميه مساويه للكاشiiف1
الى نفس االنبوبiiه،(KOH)االول من الكاشiiف الثiiاني يعتبر مهم جدا وذلك لغرضترج االنبوبه بقوه ))
ثانيه حتى تحول لون الوسط الى20(( كل التهويهاالحمر الغامق او الوردي
4
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
فحص استهالك الستراتCitrate Utilization
Enterobacterقابليiiiة بعض االحيiiiاء المجهريiiiه مثiiiل
aerogenes و Salmonella typhimuriumعلى اسiiتهالك السiiترات كمصiiدر وحيiiد ورئيسي للكiiاربون يمكن ان يعتiiبر مفيد جiiدا في عمليiiة التفريiiق بين البكتريiiiiا المتواجiiiiده في امعiiiiاء
االنسان.
Koser’s)وسiiiط السiiiترات بنوعيiiiه citrate medium and Simmons citrate agar) يمكن ان يسiiiiiتخدم في عمليiiiiiة الكشiiiف عن قابليiiiة البكتريiiiا في اسiiiiiiتهالك السiiiiiiترات. في كال
iادة الiiطين ، مiiالوسSodium Citrate درiiبر المصiiتعت الرئيسي للكاربون والنيتروجين يجهز بواسطة امالح
Ammoniumاالمونيوم salts. هiiبدال من االحماض االميني والذي له دور مهمBromthymol blueيحوي الوسط على
في تحويل لون الوسط الى االزرق عند iة الiاع قيمiiارتفpHطiiد تلقيح الوسiiعن .
ساعه بدرجة24بالبكتريا وحضنها لمدة Enterobacterم، في النتيجiiة االيجابيiiه )37
aerogenesيiiiون ازرق بروسiiiظ لiiiنالح ) .Prussian blue color)ازرق داكن(
فحص تحلل اليورياUrea Hydrolysis
منUreaseيعتiiبر انتiiاج انiiزيم اليiiوريز الخصiiائص المهمiiه في تفريiiق البكتريiiا
من االجناس المنتجه النiiزيم اليiiوريز. وسiiط اليوريiiا المنتجه منBuffered solutionيعتبر من الوساط البفريه
خالصات الخمiiائر باالضiiافه الى اليوريiiا. كمiiا يحiiوي iعلى الPhenol red iكمحدد لل pHيرiiا غiiا ان اليوريiiبم .
مسiiتقره وتتحطم في االوتوكليiiف عنiiد التعقيم لiiذا تعقم بواسiiiطة الترشiiiيح ثم تضiiiاف الى الوسiiiط المعقم. عند افiiراز اليiiوريز في الوسiiط الملقح من قبiiل البكتريiiا فiiان المونيiiا المنشiiطره من اليوريiiا
iة الiiع قيمiiوف ترفiiزيم سiiبواسطة االنpHببiiوبس . iالقيمه العاليه للpH فان Phenol redفرiiيتغير من االص
.Cerise Red colorالى االحمر الكرزي Triple السكر الثالثي الحديدي فحص
Sugar Iron (TSI)او
Kligler's كلكلر الحديدي فحص Iron agar (KIA)
( من الفحوصiiiiات المسiiiiتخدمهKIA( و )TSIيعتiiiiبر ) iاج الiiدراتي وانتiiر الكاربوهيiiف عن التخمiiللكشH2S
في البكتريا المعويه. هذه االوساط تمتلك العديد من المiiiواد االوليiiiه الiiiتي تسiiiتطيع البكتريiiiا المعويiiiه اسiiتهالكها متضiiمنة عiiدة انiiواع من الكاربوهيiiدرات والبروتينات اضiiافة الى الثايوسiiلفات. اعتمiiادا على نiiوع المiiواد المسiiتخدمه في عمليiiة التخمiiر يمكن تفريق البكتريا المعويه. كال الوسiiطين يحويiiان على
Beefخالصة لحم البقر والخمiiائر Extract و Yeast Extract والببتون.
6
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
هيTSIالسiiiiكريات القابلiiiiه للتخمiiiiر في وسiiiiط و السiiiكروزLactose ، الالكتiiiوز Glucose))الكلوكiiiوز
Sucrose طiiر في وسiiه للتخمiiكريات القابلiiالس .))KIA ((. يعتiiiبرLactose و الالكتiiiوز Glucoseهي ))الكلوكiiiوز
Litmus حليب اللتموس فحص Milk ReactionsSkim% من 10يحiiiiوي حليب اللتمiiiiوس على Milk
وكميات قليله من اللتموس )تعتبر كiiدليل على تغiiير iالpH iون الiiط يكiiير الوسiiعند تحض )pH . تعتiiبر6.8
هذه الدرجه من الحموضه ممتازه ومالئمه جدا لنمiiو العديiiiد من االحيiiiاء المجهريiiiه ويمكن ان يعتiiiبر مسiiاعدا جiiدا في عمليiiة التشiiخيص. باالضiiافه الى الى ذلك : لمعرفiiة وجiiود او عiiدم وجiiود تخمiiر في الوسiiiط يمكن من خاللiiiه معرفiiiة نشiiiاط بعض الخصائص االنزيميiiه البروتينيiiه للبكتريiiا. العديiiد من
8
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
البكتريا االختياريه التي تملك خاصيه االختزال القوي(Strong Reducing Powersاللتموس استهالك تتمكن من )
كبiiديل السiiتقبال االلكترونiiات مؤديiiه لتغiiير لiiون م37 ايiiام وبدرجiiه 5-4الوسط. يحتاج التفاعل الى ساعه.24لكي يكتمل مع مراقبته كل
التفاعالت : يصبح اللتموسAcid Reactionالتفاعل الحامضي .1
وردي اللون وهو مثالي للتخمر البكتيري.Alkalineالتفاعiiiل القاعiiiدي .2 Reactionولiiiيتح :
اللتمiiiiiiiiiiوس الى االزرق او البنفسiiiiiiiiiiجي الفاتح.العديد من البكتريا ذات النشiiاط المحلiiل
تخثر او ال.: Peptonizationالببتنه .5 يصبح الوسط نصف شiiفاف
وغالبا ما يعطي لون رمادي على السطح بسببالبكتريا ذات النشاط المحلل للبروتينات.
: تكوين نمو كثيف لزج في قعرRopiness اللزوجه.6االنبوبه.
9
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
Growth النمو على االوساط الزرعيه on Cultural Media
اوال/ وسط الماكونكيMacConkey agar
10
فحص حليب اللتموس Litmus milk reactions
)A( Alkaline. )B( Acid. )C( Upper transparent portion is Peptonization solid white portion in bottom is coagulation and litmus reduction; overall redness is
interpreted as acid. )D( Coagulation and litmus reduction in lower half; some Peptonization )transparency( and acid in top portion. )E( Litmus indicator is
masked by production of soluble pigment )Pseudomonas(; some Peptonization
A B C D E
كلية العلوم للبنات – المرحله الرابعه2008/2009
Enterobacteraiceae
البكترياالمرضيه
يعتiiiiiiبر من االوسiiiiiiاط على شكلEscherichia coliالتفريقيه حيث تظهر بكتريا
Nutrient agar رابعا/ وسط االكار المغذي يعتبر من االوسiiاط العامiiه الiiتي تنمiiو عليهiiا تقريبiiا جميع انواه البكتريا )الموجبه والسالبه لصبغة كرام ، الهوائيه والالهوائيه حسب ظiiروف الحضiiن(. تظهiiر االنواع البكتيريه على وسط االكار المغذي باشiiطال
Serratiaوالiiiوان مختلفiiiه، حيث تظهiiiر مسiiiتعمرات
المستعمرات الناميه مخاطية التكوين. Chromedia agar رابعا/ وسط االكار الملون
يعتبر من االوسiiاط العامiiه الiiتي تنمiiو عليهiiا تقريبiiا جميع انواه البكتريا )الموجبه والسالبه لصبغة كرام ، الهوائيه والالهوائيه حسب ظiiروف الحضiiن(. تظهiiر االنواع البكتيريه على وسط االكار المغذي باشiiطال