Page 1
Δρ.Δρ. Ε.Τρίκκα-ΓραφάκουΕ.Τρίκκα-ΓραφάκουΒιοπαθολόγος-Κλινικός Βιοπαθολόγος-Κλινικός
ΜικροβιολόγοςΜικροβιολόγοςΔιευθύντρια Μικροβιολογικού & Διευθύντρια Μικροβιολογικού &
Βιοχημικού Εργαστηρίου Βιοχημικού Εργαστηρίου Γ.Ν.Ελευσίνας <<Θριάσιο>>Γ.Ν.Ελευσίνας <<Θριάσιο>>
Καλλιεργητικά υλικά Καλλιεργητικά υλικά και επιλογή τους και επιλογή τους
στο Κλινικό στο Κλινικό Εργαστήριο.Εργαστήριο.
Τρόπος εμβολιασμού Τρόπος εμβολιασμού κλινικών δειγμάτων – κλινικών δειγμάτων –
Ανάγνωση Ανάγνωση καλλιεργειών καλλιεργειών
Page 2
Καλλιεργητικά Καλλιεργητικά (θρεπτικά(θρεπτικά) ) υλικάυλικά
Τεχνητά υλικά που περιέχουν θρεπτικές ουσίες και παράγοντες κατάλληλους για την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό των μικροβίων
Η σπορά στα θρεπτικά υλικά επιτρέπει: την απομόνωση του πιθανού αιτίου της
λοίμωξης ταυτοποίηση του απομονωθέντος
μικροβίου τον έλεγχο ευαισθησίας στα
αντιμικροβιακά
Page 3
Παρασκευή Θρεπτικών Παρασκευή Θρεπτικών υλικώνυλικών
Παρασκευή στο Εργαστήριο από πρώτες ύλες
Παρασκευή στο Εργαστήριο από αφυδατωμένη σκόνη έτοιμου θρεπτικού υλικού
Έτοιμα θρεπτικά υλικά εμπορίου
Page 4
πεπτόνες (τρυπτόζη, τρυπτόνη, πρωτεόζη)εκχύλισμα κρέατος (Bacto-Beef-Extract)εκχύλισμα μυκήτων (Yeast Extract)σάκχαρα(τροφή ή μελέτη βιολογικών
ιδιοτήτων)άγαρ (στερεωτικό ζωμού, όχι τροφή για
μικρόβια)αναγωγικές ουσίες (αναερόβιο
περιβάλλον)Θειογλυκολικό ή θειοθειϊκό Na, κυστεΐνη,
ασκορβικό οξύεκλεκτικές ουσίες ή εκλεκτικά μίγματα
(χρωστικές, άλατα, pH, αντιβιοτικά, εμπλουτιστικές ουσίες)
χρωματομετρικοί δείκτες (ερυθρό της φαινόλης, ιώδες της βρωμοκρεσόλης, ουδέτερο ερυθρό)
Πρώτες ύλες θρεπτικών υλικώνΠρώτες ύλες θρεπτικών υλικών
Page 5
Παρασκευή θρεπτικών Παρασκευή θρεπτικών υλικώνυλικών Ζύγισμα και διάλυση ουσίας/ουσιών Ρύθμιση pH Αποστείρωση
• Θερμότης (αυτόκαυστο, 1210C, 1 atm για 15’) αιματούχο: προσθήκη αίματος όταν θ= 500C
σοκολατόχρωμο: μετά προσθήκη αίματος, στους 80-1000C για 10 min υπό ανακίνηση
• Διήθηση (υλικά που δεν αντέχουν στον κλιβανισμό)
Διαμοίραση Συντήρηση (διάρκεια ζωής:1-4 εβδομάδες) Υλικά εμπορίου: ημερομηνία λήξεως
Τα θρεπτικά υλικά πρέπει να είναι στείρα μικροβίων
Page 6
Αυτοματοποιημένο ΣύστημαΑυτοματοποιημένο Σύστημα Παρασκευής Υλικών Παρασκευής Υλικών
Page 7
Διάκριση θρεπτικών Διάκριση θρεπτικών υλικώνυλικών
Ρευστότητα
ΥγράΥγρά (χωρίς άγαρ) θρεπτικός ζωμός θειογλυκολικός ζωμός αλκαλικό πεπτονούχο νερό
Ημίρρευστα (άγαρ 0.3-0.5%) motility άγαρ, Stuart
Στερεά (άγαρ 1.5-2%) αιματούχο σοκολατόχρωμο MacConkey άγαρ Mueller-Hinton άγαρ
Page 8
ΜΗ ΕΚΛΕΚΤΙΚΑ: Δεν περιέχουν αναστολείς. Eπιτρέπουν την ανάπτυξη των περισσοτέρων μικροοργανισμών (αιματούχο & σοκολατόχρωμο άγαρ)
ΕΚΛΕΚΤΙΚΑ: Περιέχουν ανασταλτικές ουσίες. Eπιτρέπουν την ανάπτυξη των βακτηρίων εκλεκτικά (MacConkey άγαρ, KVLB άγαρ)
ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΤΙΚΑ: Περιέχουν ουσίες που καταδεικνύουν ιδιότητες των βακτηρίων (MacConkey άγαρ, Chapman)
ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΤΙΚΑ: Περιέχουν ουσίες που καταστέλλουν την ανάπτυξη συγκεκριμένων βακτηρίων και προάγουν την ανάπτυξη άλλων (ζωμός σεληνίτη)
ΣΥΝΤΗΡΗΣΗΣ: Περιέχουν συστατικά για επιβίωση μικροβίων για μεγάλο χρονικό διάστημα (Stuart, Amies, Cary-Blair,Skim milk, Brucella broth, Γλυκερόλη)
Σύσταση
Διάκριση θρεπτικών Διάκριση θρεπτικών υλικώνυλικών
Page 9
Έλεγχος ποιότηταςΈλεγχος ποιότητας θρεπτικών υλικών θρεπτικών υλικών
Είναι απαραίτητος γιατί διασφαλίζει την ακρίβεια και την επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων.
Η ποιότητα ελέγχεται από τους εξής χαρακτήρες:
1) Στειρότητα 2) pH 3) Θρεπτική ικανότητα 4) Εκλεκτική ικανότητα 5) Διαφοροποιητική ικανότητα
Page 10
Έλεγχος ΣτειρότηταςΈλεγχος Στειρότητας
Ι. Στερεά θρεπτικά υλικάΕλέγχεται το 5% της ποσότητας κάθε παρτίδας.Επώαση στους 35°-37°C επί 48h.Εμφάνιση >2 αποικίες σε κάθε τρυβλίο → απόρριψη
παρτίδας
ΙΙ. Υγρά θρεπτικά υλικάΕλέγχεται όλη η ποσότητα Επώαση στους 35°-37°C επί 18hΘόλωση του ζωμού → απόρριψη όλης της
ποσότητας
Page 11
Έλεγχος Έλεγχος pHpH
Ι. Στερεά θρεπτικά υλικάΧρησιμοποιείται ηλεκτρόδιο επιφάνειας.
ΙΙ. Υγρά θρεπτικά υλικά Χρησιμοποιείται πεχάμετρο
Διαφορά >0,2‹ από την επιθυμητή τιμή αναζήτηση λάθους και διόρθωση
Page 12
Έλεγχος της Θρεπτικής, Έλεγχος της Θρεπτικής, Εκλεκτικής και Εκλεκτικής και
Διαφοροποιητικής ικανότηταςΔιαφοροποιητικής ικανότητας του θρεπτικού υλικού του θρεπτικού υλικού
I. Θρεπτικά υλικά εργαστηρίου
Ελέγχεται κάθε νέα παρτίδα που παρασκευάζεται με δύο τουλάχιστον πρότυπα στελέχη μικροβίων
Εμβολιασμός στα υπό έλεγχο θρεπτικά υλικά → επώαση αερόβια/μικροαερόφιλα/ αναερόβια → 18/24/48h
Θρεπτική ικανότητα: ικανοποιητική ανάπτυξη με την τυπική μορφολογία των αποικιών
Εκλεκτική ικανότητα: αναστολή της ανάπτυξης συγκεκριμένων μικροβίων
Διαφοροποιητική ικανότητα: παρουσία ή απουσία αναμενόμενων βιοχημικών αντιδράσεων
Page 13
II. Θρεπτικά υλικά εμπορίου Συνοδεύονται από πιστοποιητικό ποιότητας και
έχουν ελεγχθεί για τη θρεπτική, διαφοροποιητική και εκλεκτική ικανότητά τους
Εξαιρούνται υλικά με υψηλό ποσοστό ακαταλληλότητας → έλεγχος ποιότητας σε κάθε παρτίδα:
Σοκολατόχρωμο άγαρ Mueller Hinton άγαρ Εκλεκτικά υλικά για την απομόνωση παθογόνων
ναϊσσεριών Campylobacter agar
Έλεγχος της Θρεπτικής, Έλεγχος της Θρεπτικής, Εκλεκτικής και Εκλεκτικής και
Διαφοροποιητικής ικανότηταςΔιαφοροποιητικής ικανότητας του θρεπτικού υλικού του θρεπτικού υλικού
Page 14
ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΘΡΕΠΤΙΚΩΝ ΥΛΙΚΩΝΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΘΡΕΠΤΙΚΩΝ ΥΛΙΚΩΝΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΜΙΚΡΟΒΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Blood agar Streptococcus group AS. pneumoniae
Καλή ανάπτυξη, β-αιμόλυσηΚαλή ανάπτυξη, α-αιμόλυση
Ζωμοί αιμοκαλλιεργειών Bacteroides fragilisStreptococcus pneumoniae
Ανάπτυξη 24hΑνάπτυξη 24h
Brain heart infusion agar Staphylococcus aureus Ανάπτυξη 24h
Campylobacter medium
Campylobacter jejuniEscherichia coli
Καλή ανάπτυξη 24hΑναστολή 48h
Σοκολατόχρωμο Haemophilus influenzae Καλή ανάπτυξη 24h
MacConkey agar Escherichia coliProteus mirabilis
Ροζ αποικίες Άχροες αποικίες
Salmonella-Shigella agar
Salmonella typhimuriumEscherichia coli
Άχροες αποικίες / μαύρο κέντροΜικρή ή καθόλου ανάπτυξη
Urea broth Proteus vulgarisEscherichia coli
ΘετικόΑρνητικό
Bile-esculin agar Enterococcus sppa-Hemolytic Streptococcus,not D
Καλή ανάπτυξη,μαύρες αποικίεςΌχι ανάπτυξη
Indole (Kovac’s) Escherichia coliKlebsiella pneumoniae
Κόκκινο χρώμα (θετικό)Όχι χρώμα (αρνητικό)
Page 15
ΕπιλογήΕπιλογή κατάλληλων θρεπτικών υλικώνκατάλληλων θρεπτικών υλικών
Τρόπος ενοφθαλμισμού κλινικών δειγμάτωνΤρόπος ενοφθαλμισμού κλινικών δειγμάτων
Επιλογή συνθηκών επώασηςΕπιλογή συνθηκών επώασης
Άμεσο παρασκεύασμαΆμεσο παρασκεύασμα
Ερμηνεία πρωτοκαλλιέργειας Ερμηνεία πρωτοκαλλιέργειας
Προκαταρκτική ταυτοποίηση Προκαταρκτική ταυτοποίηση
Η σημασία του καθαρού καλλιεργήματοςΗ σημασία του καθαρού καλλιεργήματος
Η ανάπτυξη της Η ανάπτυξη της βακτηριακής καλλιέργειαςβακτηριακής καλλιέργειας
Page 16
ΕπιλογήΕπιλογή κατάλληλων κατάλληλων θρεπτικών υλικώνθρεπτικών υλικών
ΣτερεόΣτερεό θρεπτικό υλικό πάνταθρεπτικό υλικό πάντα
ΕπιπρόσθεταΕπιπρόσθετα:: ΥγρόΥγρό θρεπτικό υλικό θρεπτικό υλικό
στείρα βιολογικά υγράστείρα βιολογικά υγρά (πλην ούρων)(πλην ούρων)
Τεμάχια ιστού από Τεμάχια ιστού από χειρουργείοχειρουργείο
Επιλογή υλικών βάσει ειδικών πρωτοκόλλων
ΠΟΤΕ εκλεκτικά υλικά μόνα τους, ΠΑΝΤΑ σε συνδυασμό με μη εκλεκτικά.
Page 17
Θρεπτικά υλικά για Θρεπτικά υλικά για Αερόβια Αερόβια Καλλιέργεια ρουτίναςΚαλλιέργεια ρουτίνας
I.I. Μη εκλεκτικάΜη εκλεκτικά θρεπτικά υλικάθρεπτικά υλικά
αιματούχοαιματούχο (σε όλα τα δείγματα)(σε όλα τα δείγματα)
(αίμα προβάτου,ίππου,ανθρώπου)(αίμα προβάτου,ίππου,ανθρώπου)
σοκολατόχρωμοσοκολατόχρωμο (δείγματα
από στείρες περιοχές, γεννητικό, αναπνευστικό σύστημα)
(C02, 5-10%)
g(+), g(+), g(-)g(-)βακτήριαβακτήρια
α,β,γ αιμόλυσηα,β,γ αιμόλυση
g(+), g(+), g(-)g(-)βακτήριαβακτήρια
HH..influenzae,influenzae,
NN..gonorrhoeaegonorrhoeae
Page 18
ΑερόβιαΑερόβια καλλιέργεια καλλιέργεια ρουτίναςρουτίνας
II.II. Εκλεκτικά-ΔιαφοροποιητικάΕκλεκτικά-Διαφοροποιητικά
gram (-) gram (-) βακτηρίδιαβακτηρίδια λακτόζηλακτόζη(+): (+): ροζ αποικίεςροζ αποικίες λακτόζηλακτόζη(-): (-): άχροες αποικίεςάχροες αποικίες
gram(-) gram(-) βακτηρίδια,βακτηρίδια,gram (+)gram (+) κόκκοι κόκκοι
MacConkeyMacConkey άγαράγαρ
: : με χολικά με χολικά άλαταάλατα
: : με με crystal crystal violetviolet MacConkeyMacConkey άγαράγαρ :x:xωρίς άλατα, ωρίς άλατα, ::χωρίς χωρίς crystal crystal
violetviolet
Page 19
SS SS άγαράγαρ
Εκλεκτικό και Εκλεκτικό και διαφοροποιητικόδιαφοροποιητικό
Αναπτύσσονται:
Salmonella άχροες αποικίες με μαύρο κέντρο
Shigella άχροες αποικίες
Αναστέλλονται: τα περισσότερα εντεροβακτηριακά
Θειοθειικό Θειοθειικό Na:Na:πηγή S βακτήρια που παράγουν H2S μαύρες αποικίες
Page 20
XLD agarXLD agar SS agarSS agar
Salmonella spp.MacConkey agar MacConkey agar
Page 21
E.coliE.coli
MacConkeMacConkeyy
Chromoagar E.coli 0157:H7Chromoagar E.coli 0157:H7
• Διαφοροποιητικά υλικά. • Περιέχουν ειδικά χρωμογόνα υποστρώματα που όταν έρθουν σε
επαφή με τα ένζυμα του μικροβίου ή μύκητα παράγουν χρώμα.• Συμβάλλουν στην προκαταρκτική ταυτοποίηση.
Χρωμογόνα θρεπτικά υλικάΧρωμογόνα θρεπτικά υλικά
Page 22
Sabouraud άγαρΚλασσικό μυκητολογικό υλικόΚατάλληλο για δείγματα
ρουτίνας Όχι πολύ καλό για απαιτητικούς και
βραδείας αναπτύξεως μύκητεςΤροποποιήσεις:με αντιβιοτικά με ακτιδιόνη με δεξτρόζη 2% με λάδι → Malassezia
Chapman (Mannitol άγαρ)
Εκλεκτικό και διαφοροποιητικόΑναπτύσσονται:όλοι οι σταφυλόκοκκοι και
αλατόφιλα βακτήριαS.aureus: ζύμωση μαννιτόλης κίτρινες
αποικίες
Page 23
III.III. ΕμπλουτιστικάΕμπλουτιστικά
Θρεπτικοί ζωμοίΘρεπτικοί ζωμοί
Brain heart infusion (BHI) Tryptic soy broth (TSB) Thioglycolate (THIO) Chopped meat broth
(CMB)
ΑερόβιαΑερόβια καλλιέργεια καλλιέργεια ρουτίναςρουτίνας
Page 24
Παρουσία αιμίνης (5 μg/ml) και βιταμίνης Κ (1μg/ml)
Ιδανικά υλικά τα λιγότερο εκτεθειμένα
στο Ο2, φρέσκα, προανηγμένα
ΑναερόβιαΑναερόβια καλλιέργεια καλλιέργεια ρουτίναςρουτίνας
Θρεπτικά υλικά αναεροβίωνΘρεπτικά υλικά αναεροβίων
Page 25
Αιματούχο αναερόβιοΑιματούχο αναερόβιο
Μη εκλεκτικό, εμπλουτιστικό
Αίμα προβάτου 5%Αναπτύσσονται: όλα τα
κλινικώς σημαντικά αναερόβια
BHI blood agar Brucella blood agar CDC anaerobe agar Columbia blood agar TSA blood agar Schaedler blood agar
Page 26
KVLB KVLB ή ή LKVLKV (Kanamycin-Vancomycin-Laked- (Kanamycin-Vancomycin-Laked-
Blood agar)Blood agar)
Εκλεκτικό υλικόΕκλεκτικό υλικό καναμυκίνη 75mg, βανκομυκίνη 7,5mg,
αιμολυμένο αίμα προβάτου
Αναπτύσσονται: βακτήρια ανθεκτικά στην καναμυκίνη και την βανκομυκίνη
Bacteroides group Prevotella spp (εμφάνιση χρωστικής)
Αναστέλλονται: τα περισσότερα αερόβια και αναερόβια ευαίσθητα στην καναμυκίνη και τη βανκομυκίνη
Porphyromonas spp
Page 27
BBEBBE(Bacteroides bile esculin
agar)
Εκλεκτικό και διαφοροποιητικόΧολή βοός 20%, εσκουλίνη,
εναμμώνιο κιτρικούχο σίδηρο, γενταμικίνη 100μg/ml
Aναπτύσσονται: Bacteroides fragilis group (μαύρες αποικίες), μερικά Fusobacterium, Bilophila wadsworthia Εντεροβακτηριακά ανθεκτικά στη γενταμυκίνη, Εντερόκοκκοι, μύκητες
Aναστέλλονται: τα περισσότερα αερόβια και αναερόβια
Page 28
PEA (Phenylethyl alcohol PEA (Phenylethyl alcohol agar)agar)
Εκλεκτικό υλικό με αίμα προβάτου L-κυστεϊνη, άγαρ, αίμα προβάτου, phenylethyl alcohol
Aναπτύσσονται: τα περισσότερα Gram-θετικά και Gram-αρνητικά αναερόβια βακτήρια
Aναστέλλονται: - δυνητικά αναερόβια Gram(-) βακτηρίδια - ερπυσμός του Proteus spp. και
του Clostridium septicum
Page 29
Ενοφθαλμισμός κλινικών Ενοφθαλμισμός κλινικών δειγμάτωνδειγμάτων
Απαραίτητος εξοπλισμόςΑπαραίτητος εξοπλισμόςΚατάλληλα θρεπτικά υλικάΑντιδραστήρια χρώσεωνΑναλώσιμα όπως: κρίκοι ενοφθαλμισμού αντικειμενοφόρες πλάκες αποστειρωμένα: ψαλίδι, λαβίδα, νυστέρι, στυλεός, σωληνάριαΤεχνολογικός εξοπλισμός: Θάλαμος νηματικής ροής Επωαστικοί κλίβανοι Λύχνος Bunsen
Page 30
Προετοιμασία τρυβλίου Προετοιμασία τρυβλίου για ενοφθαλμισμόγια ενοφθαλμισμό
Στεγνώνουμε πάντα τα τρυβλία !!Στεγνώνουμε πάντα τα τρυβλία !!(κλίβανος (κλίβανος OO22, 10-30, 10-30 min)min)
Τρυβλίο με άγαρΤρυβλίο με άγαρ
Καπάκι τρυβλίουΚαπάκι τρυβλίου
Page 31
Τεχνικές Τεχνικές ενοφθαλμισμούενοφθαλμισμού
Σε στερεό Σε στερεό θρεπτικό υλικό (τρυβλίο)θρεπτικό υλικό (τρυβλίο)
-για απομόνωση μικροβίων-για απομόνωση μικροβίων
-ποσοτική/ημιποσοτική καλλιέργεια-ποσοτική/ημιποσοτική καλλιέργεια
ΣεΣε θρεπτικό υλικό θρεπτικό υλικό σε σωληνάριο σε σωληνάριο
(υγρό, στερεό, ημίρρευστο)(υγρό, στερεό, ημίρρευστο)
Page 32
Τεχνική για απομόνωση Τεχνική για απομόνωση αποικιώναποικιών
σε σε ολόκληροολόκληρο τρυβλίο τρυβλίο
Page 33
Τεχνική για απομόνωση Τεχνική για απομόνωση αποικιών σε αποικιών σε μισόμισό τρυβλίο τρυβλίο
ΒιολογικόΒιολογικό δείγμαδείγμα
Page 34
Προσδιορισμός των μονάδων Προσδιορισμός των μονάδων παραγωγής αποικιώνπαραγωγής αποικιών
( (colony forming units, cfu)colony forming units, cfu)
Βαθμονομημένος Βαθμονομημένος κρίκοςκρίκος
1μ1μll xx 1000 cfu/ml1000 cfu/ml
1010μμll xx 100100 cfu/mlcfu/ml
Καλλιέργεια ούρων
Page 35
Μετά από αραίωσηΜετά από αραίωση
1ml ΟΥΡΑ4 ml Φ.Ο.
Προσδιορισμός των Προσδιορισμός των μονάδων παραγωγής μονάδων παραγωγής
αποικιώναποικιών ( (colony forming units, colony forming units,
cfu)cfu)
Καλλιέργεια ούρων
Page 36
Δείγμα με προστατευμένη βούρτσαΔείγμα με προστατευμένη βούρτσα (PSB)(PSB) Βρογχοκυψελιδικό Έκπλυμα Βρογχοκυψελιδικό Έκπλυμα
(BAL) (BAL)
PSB BAL
10 μl100 μl
1:100 1:10
10 μl
1:100 1:1000 1:100,000
Isenberg, Clin Microbiol Procedures Handbook 2004
Page 37
Μέθοδος Μέθοδος MakiMaki
Ενοφθαλμισμός άκρου καθετήρα στο άγαρ
>15 cfu: πιθανή λοίμωξη σχετιζόμενη με τον καθετήρα
Page 38
Ενοφθαλμισμός σε σωληνάριο Ενοφθαλμισμός σε σωληνάριο με υγρό και στερεό θρεπτικό με υγρό και στερεό θρεπτικό
υλικόυλικό
Υγρό θρεπτικό υλικόΆγαρ με κεκλιμένη επιφάνεια
Page 39
Άμεσο παρασκεύασμα Άμεσο παρασκεύασμα
Page 40
Άμεσο παρασκεύασμα Άμεσο παρασκεύασμα κατά κατά GramGram
Γίνεται σε δείγματαΓίνεται σε δείγματα:: στείρων βιολογικών υγρών, πύου, κατώτερου αναπνευστικού, γεννητικού συστήματος, ούρων.
Δε γίνεταιΔε γίνεται σε δείγματασε δείγματα:: ρινικού, φαρυγγικού, κοπράνων, άκρων ενδαγγειακών καθετήρων.
Σε ανεπαρκή ποσότητα δείγματος Σε ανεπαρκή ποσότητα δείγματος παραλείπεται η παραλείπεται η Gram Gram χρώση και όχι η χρώση και όχι η καλλιέργειακαλλιέργεια
Page 41
Μετά τον εμβολιασμό θα Μετά τον εμβολιασμό θα φυλάξουμε τα βιολογικά φυλάξουμε τα βιολογικά
δείγματαδείγματα;; κόπρανα, ούρακόπρανα, ούρα
δείγματα από δείγματα από στείρες περιοχέςστείρες περιοχές
δείγματα απόδείγματα από μη μη στείρες περιοχέςστείρες περιοχές
ΕΝΥ (ΕΝΥ (PCR)PCR)
ΟΧΙΟΧΙ
7ημ.7ημ.,, 4 4ooCC
1-2ημ.1-2ημ.,, 4 4ooCC
-20-20 ooCC
Page 42
Ερμηνεία Ερμηνεία πρωτοκαλλιέργειαςπρωτοκαλλιέργειας
1. Αρίθμηση αποικιών 2. Μακροσκοπική εξέταση μορφολογίας
αποικιών3. Μικροσκοπική εξέταση μορφολογίας
μικροβίου (Gram χρώση)4. Προκαταρκτική ταυτοποίηση
παθογόνου μικροβίου - Αναφορά αποτελέσματος
5. Η σημασία της καθαρής καλλιέργειας
Page 43
Προσπίπτων–Προσπίπτων–Διελαύνων φωτισμόςΔιελαύνων φωτισμός
Αριστερά: προσπίπτων φωτισμόςΔεξιά: διελαύνων φωτισμός
Page 44
1.Αρίθμηση αποικιών1.Αρίθμηση αποικιών
Σπάνια Σπάνια ανάπτυξηανάπτυξη
1+ ή μικρή 1+ ή μικρή 2+ ή μέτρια2+ ή μέτρια 3+ ή μεγάλη3+ ή μεγάλη 4+ ή μεγάλη4+ ή μεγάλη
1-5 αποικίες1-5 αποικίες
Αριθμός + Αριθμός + cfu/ml cfu/ml ποσοτικές καλλιέργειες ποσοτικές καλλιέργειεςΑριθμός +Αριθμός + cfu cfu άκρα ενδαγγειακών καθετήρωνάκρα ενδαγγειακών καθετήρων
11οο τεταρτημόριο τεταρτημόριο 2ο τεταρτ
3ο τεταρτ
4ο τεταρτ
Page 45
2.2. Μακροσκοπική Μακροσκοπική εξέταση μορφολογίας εξέταση μορφολογίας
αποικιώναποικιών
Περιγραφή μορφολογίας Περιγραφή μορφολογίας αποικιώναποικιών
ΜέγεθοςΜέγεθος
ΣχήμαΣχήμα
ΎψοςΎψος
ΠεριφέρειαΠεριφέρεια
ΧρώμαΧρώμα
Εμφάνιση Εμφάνιση επιφανείαςεπιφανείας
ΠυκνότηταΠυκνότητα
ΣύστασηΣύσταση
Page 46
Περιγραφή μορφολογίας Περιγραφή μορφολογίας αποικιώναποικιών
ΣχήμαΣχήμα
ΎψοςΎψος
ΠεριφέρειαΠεριφέρεια
Page 47
S.pneumoniae
Pasterella multocida Serratia marcescens
Μορφολογία Μορφολογία αποικίαςαποικίας
Page 48
EE..colicoli
Blood agarBlood agarMacConkeMacConke
y agary agar
Συσχέτιση μορφολογίας αποικιώνΣυσχέτιση μορφολογίας αποικιών στα διάφορα υλικάστα διάφορα υλικά
Page 49
Proteus mirabilisProteus mirabilis
Blood Blood agaragar
MacConkeyMacConkeyagaragar
Page 50
Blood agarBlood agar
Mannitol salt agar Mannitol salt agar (Chapman)(Chapman)
St.aureusSt.aureus
Page 51
ΧρώμαΧρώμα αποικίαςαποικίας
Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa
Serratia marcescensSerratia marcescens
Page 52
Σύσταση αποικίαςΣύσταση αποικίας
Klebsiella Klebsiella pneumoniaepneumoniae
Candida albicansCandida albicans
Nocardia asteroidesNocardia asteroides
Page 53
Μεταβολές στο Μεταβολές στο θρεπτικό υλικόθρεπτικό υλικό
Αιμόλυση (α, β, γ )Αιμόλυση (α, β, γ )
Ξάσπρισμα υλικούΞάσπρισμα υλικού Διαύγαση θολού υλικούΔιαύγαση θολού υλικού
Παραγωγή χρωστικήςΠαραγωγή χρωστικής
Θόλωση διαυγούς υλικούΘόλωση διαυγούς υλικούP.aeruginosaP.aeruginosa
Page 54
Χαρακτηριστική οσμήΧαρακτηριστική οσμή P.aeruginosaP.aeruginosa:: ««γιασεμίγιασεμί» »
Proteus mirabilisProteus mirabilis::««καμένη σοκολάτακαμένη σοκολάτα»»
Streptococcus milleriStreptococcus milleri group:group:««καραμέλακαραμέλα»»
Eikenella corrodensEikenella corrodens::««χλωρίνηχλωρίνη»»
Page 55
33..Μικροσκοπική Μικροσκοπική εξέτασηεξέταση
μορφολογίας μικροβίουμορφολογίας μικροβίου ( (Gram Gram χρώση)χρώση)
Gram (+) , Gram(-)Gram (+) , Gram(-)
Βακτηριακό κύτταροΒακτηριακό κύτταρο: : σχήμα, μέγεθος, σχήμα, μέγεθος, διάταξη, παρουσία ειδικών σχηματισμώνδιάταξη, παρουσία ειδικών σχηματισμών
Ανάλογα συνθηκών επώασης, ηλικίας Ανάλογα συνθηκών επώασης, ηλικίας καλλιέργειας και είδος θρεπτικού υλικούκαλλιέργειας και είδος θρεπτικού υλικού
Page 56
ΑναερόβιαΑναερόβια επώασηεπώαση
ΟξυγονοάντοχοΟξυγονοάντοχο C.tertiumC.tertium
Αερόβιες Αερόβιες συνθήκεςσυνθήκες
Page 57
Μορφολογία αποικίας στο Μορφολογία αποικίας στο θρεπτικό υλικόθρεπτικό υλικό
Μικροσκοπική εξέταση Μικροσκοπική εξέταση μορφολογίας μικροβίου (μορφολογίας μικροβίου (Gram Gram
χρώση)χρώση)
Προκαταρκτική ταυτοποίησηΠροκαταρκτική ταυτοποίηση
Page 58
B.cereuB.cereuss
C.perfringensC.perfringens
Page 59
S.aureusS.aureus S.epidermidisS.epidermidis
Page 60
Μεμονωμένες αποικίεςΜεμονωμένες αποικίες
Προκαταρκτική ταυτοποίηση με Προκαταρκτική ταυτοποίηση με άμεσες, ταχείες ταυτοποιητικές άμεσες, ταχείες ταυτοποιητικές δοκιμές και αναφορά αποτελέσματος.δοκιμές και αναφορά αποτελέσματος.
Ανακαλλιέργεια για μεμονωμένες Ανακαλλιέργεια για μεμονωμένες αποικίες.αποικίες.
Προκαταρκτική ταυτοποίηση Προκαταρκτική ταυτοποίηση του παθογόνου του παθογόνου
μικροοργανισμούμικροοργανισμού
Page 61
Τελική Τελική Ταυτοποίηση Ταυτοποίηση
μικροοργανισμούμικροοργανισμού
ΧρώσειςΧρώσεις Βιοχημικές δοκιμέςΒιοχημικές δοκιμές Ορολογικές δοκιμέςΟρολογικές δοκιμές Μοριακή τυποποίησηΜοριακή τυποποίηση
ΠροσδιορισμόΠροσδιορισμός ς
ευαισθησίαςευαισθησίαςστα στα
αντιμικροβιακαντιμικροβιακάά
Η σημασία της καθαρής Η σημασία της καθαρής καλλιέργειαςκαλλιέργειας