Tecnica delle Fette

TECNICA DELLE FETTE 1-Prelievo organo 2-Fissazione 3-Disidratazione (serie alcool ascendenti) 4-Chiarificazione in solventi organici (xilene –

Histolimon) 5-Inclusione in paraffina 6-Sezioni al microtomo 7-Distensione fette su vetrini 8-Sparaffinatura in solventi organici 9-Serie alcool discendenti 10-Colorazione 11-Disidratazione in serie ascendenti alcool 12-Chiarificazione 13-Montaggio in balsamo (resine sintetiche)

FISSAZIONE

Chimica

Fisica

Congelamento- Sostituzione

Congelamento- Essiccazione

Congelamento

Coagulanti

Non coagulanti

Alcool etilicoAlcool metilicoSublimato corrorivo

Formalina

Acido picrico

Acido aceticoAlcool tricloracetico

Tetrossido di osmio

Inclusione in paraffina

Raccolta delle fette

Fette al microtomo

Distensione delle fette

Colorazione – Disidratazione- Montaggio in balsamo

Tecnica delle fette in Microscopia elettronica

fissazioneinclusionesezionamentospessore fettesupportocolorazionemontaggio

Microscopia otticaformalina+ac.picricoparaffinamicrotomo7 µmvetrinocolarantibalsami

Microscopia elettronicaparaformald, ac. osmico

resine epossidicheultramicrotomo

100 nm ( 0,1 µm)retino di ramemetalli pesanti si butta

PARTICOLARI TECNICHE IN MICROSCOPIA ELETTRONICA

Colorazione negativa -campioni in rilievo contro uno sfondo scuro

Il campione, sospeso in un colorante elettrondenso, è

applicato su un retino ricoperto da un sottile film di plastica. Si asciuga all’aria e si osserva al TEM

Virus mosaico del tabacco

batteriofago

Ombreggiatura al platino

Criofrattura – freeze etching – deep etching

deep etching – vescicola legata a un microtubulo

Criofrattura –membrana di un globulo rosso

Composizione chimica del Protoplasma Acqua (H2O - libera e legata) 80%Proteine 15%Lipidi 2.5%Glucidi (zuccheri semplici e composti ) 1%Acidi nucleici (DNA, RNA) 1%Sali minerali (K+, Na+, Ca++, Mg++, Cl-, SO4

--, PO4

---,HCO3-, CO3

--, NO3-, elementi traccia) 0.5%

  Composizione percentuale di C+O+H+N 98% Unitarietà dei viventi = Stessa composizione chimica