Transcript
МИТОХОНДРИИ И ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ
СТРЕСС
Древицкая Татьяна
к.б.н., cт.н.с., Институт физиологии им. А.А.Богомольца, Киев, Украина
Митохондрии в клетке и их функция
Функции митохондрий Синтез АТФ – «энергетический центр»
клетки (95% синтезируется в мт) Участие в метаболизме аминокислот,
липидов, холестерола, стероидов, нуклеотидов
Инициация процессов апоптоза (программируемой клеточной смерти)
Регуляция экспрессии ядерного генома Участие в собственном воспроизведении
Свободный радикал - частица (атом или молекула), имеющая на внешней
оболочке один или несколько неспаренных электронов.
Радикал может образоваться в результате потери одного электрона нерадикальной молекулой:
X e− + X+ →или при получении одного электрона нерадикальной молекулой:
Y + e− Y−→
Окислительное фосфорилирование в митохондриях - главный источник энергии и свободных радикалов.В норме свободные радикалы необходимы для:- выполнения сигнальной функции- индукции иммунной системы- мобилизации систем ионного транспорта - апоптоза
В норме свободные радикалы в клетке нейтрализуются собственными антиоксидантными системами, и только когда возникает или гиперпродукция свободных радикалов, илинедостаточны силы антиоксидантной защиты – возникают повреждения ДНК, органелл и мембран клетки
Для экспериментов используется первичная культура, полученная из желудочков 2-х дневных крыс линии Wistar дня.
КУЛЬТУРА НЕОНАТАЛЬНЫХКАРДИОМИОЦИТОВ – модель для изучения функций митохондрий
Использование такой модели позволяет оценить влияние различных веществ и факторов на:
- клеточную смерть- работу генов- функцию митохондрий- активность систем свободнорадикальной защиты- уровень свободных радикалов в клетке
Методы и подходы
- выделение и культивирование неонатальных кардиомиоцитов;
- флуорисцентная микроскопия;- моделирование аноксии/реоксигенации;- определение экспрессии генов;- трансфекция клеток и введение
интерферирующих РНК
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:
- флуоресцентная микроскопия;
- выделение ДНК, РНК, хроматина, белков, митохондрий;
- полимеразно-цепная реакция в режиме реального времени;
- определение уровня свободных радикалов;
- определение митохондриального потенциала;
REAL-TIME PCR
Флуоресцентная микроскопия
.
КРЫС
Флюоресцентная микроскопия для определения уровня свободных радикалов
Окраска с помощью DСFa – контрольб – моделирование окислительного стресса при аноксии/реоксигенации
.
MitoTracker Red CMXRos – окрашивает митохондрии с высоким митохондриальным потенциалом
1. контрольные кардиомиоциты2-3. использование активаторов митохондриального
дыхания
Что может нам сделать наш организм более подготовленным к таким неблагоприятным воздействиям, нехватка кислорода или окислительный стресс?
-отказ от вредных привычек
-здоровое и сбалансированное питание
-употребление преимущественно растительной пищи, которая содержит витамины и антиоксиданты
-физическая и умственная нагрузка
- активный отдых, в том числе в горах
- хорошее настроение и приятные эмоции
!
Спасибо
за внимание
!
Спасибо
за внимание
top related