Le potentiel antioxydant in vitro et l’activité biologique ... Nacira... · Chapitre III : Activité antioxydante et activité anticoagulant . Sommaire VIII III.1.2 III.2 III.2.1
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Reacutepublique Algeacuterienne Deacutemocratique et Populaire
Ministegravere de lrsquoEnseignement Supeacuterieur et de la Recherche Scientifique
Universiteacute Kasdi Merbah-Ouargla
Faculteacute des Matheacutematiques et des Sciences de la matiegravere
Deacutepartement de Chimie
Meacutemoire de Master Acadeacutemique
Filiegravere Chimie
Speacutecialiteacute Chimie appliqueacutee
Preacutesenteacute par Bellaouar Nacira
Khemgani Ouarda
Thegraveme
Soutenu publiquement
Le 26 05 2016
M Dendougui Hocine Universiteacute drsquoOuargla Preacutesident
Mme Slougui Nabila Universiteacute drsquoOuargla Examinateur
Melle Zehour Rahmani Universiteacute drsquoOuargla Encadreur
Anneacutee universitaire 20152016
Le potentiel antioxydant in vitro et lrsquoactiviteacute
biologique des dithiolethiones
Nnnnkllb
Nous remercions tout drsquoabord ALLAH le tout puissant
de nous avoir donneacute la santeacute et la patience la puissance et
la volonteacute pour reacutealiser ce travail
Nous remercions chaleureusement notre encadreur Melle Zehour Rahmani Docteur agrave lrsquouniversiteacute drsquoOuargla
pour son aide preacutecieuse et ses conseils eacuteclaireacutes dans la direction de nos travaux ainsi que pour sa grande
disponibiliteacute et son immense gentillesse
A cette mecircme occasion nous tenons agrave remercier les Professeurs Hocine Dendougui et Nabila Slougui pour
avoir accepteacute drsquoeacutevaluer ce travail en deacutepit de leurs nombreuses autres obligations
Nous remercions eacutegalement le personnel du laboratoire peacutedagogique faculteacute des matheacutematiques et science de la matiegravere de lrsquouniversiteacute de Kasdi Merbah
drsquoOuargla et le personnel du laboratoire de lrsquohocircpital de Mohammed Boudiaf drsquoOuargla
Nous sommes reconnaissants aussi envers nos enseignants et nos camarades de promotion
Enfin nos penseacutees particuliegraveres vont agrave nos parents et le reste de la famille car ils eacutetaient notre soutien dans nos
eacutetudes et notre projet
Nous rendons gracircce agrave ALLAH le tout puissant et
miseacutericordieux qui nous a donneacute la force et les
moyens de reacutealiser ce travail
Nous deacutedions ce travail
Agrave nos parents pour leur irremplaccedilable et
inconditionnel amour leurs encouragements et
pour avoir cru agrave nos ambition
Agrave nos familles et nos chegraveres copines pour tous les
sacrifices consentis et le soutien moral pendent tout
ce projet
Agrave nos enseignants qui nous ont aideacutes pendant cette anneacutee universitaire
Liste des abreacuteviations
III
Liste des abreacuteviations
pf Point de fusion AEAC Ascorbic Acid Equivalent Antioxidant Capacity
R2 coefficient de determination Abs Absorbance Mo Molybdate PI le potentiel drsquoionisation
Kcal Kilocalories LogP coefficient de partage EOA espegraveces oxygeacuteneacutees activeacutees ADN Acide Deacutesoxyribonucleacuteique ARN Acide ribonucleacuteique DRO deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene DMF dimethylformamide p
- constante de Hammett Adeg Angstrom RX rayons X
KHPM kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids moleacuteculaire OMS Organisation Mondiale de la Santeacute TCA temps de ceacutephaline + activateur TCK Temps de Ceacutephaline Kaolin TQ temps de quick TP taux de prothrombine
DMSO Dimethyl sulfoxide DTT Dithiolethione
s Seconde min Minute PM phospho-molybdate
Liste des figures
IV
Liste des figures
Figure Titre Page Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones 10
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione 10
Figure I3 La meacutethode de lrsquoEK Field 11
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique 12
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de
moments dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
13
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain 18
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage 18
Figure II3 Sang coaguleacute 20
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation 21
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement 24
Figure III1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C) 29
Figure III2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones
eacutetudieacutes
29
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC 30
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation 31
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage 32
FigureIII6 Tube Citrate apregraves centrifugation 34
FigureIII7 Appareil de mesure coagulomegravetre (thrombotimer 1) 35
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin 36
Figure III9 des valeurs TCA de malade 37
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage 38
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage 38
Figure III12 Classification des valeurs TQ 40
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage 41
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
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17
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20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
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34
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35
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37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Nnnnkllb
Nous remercions tout drsquoabord ALLAH le tout puissant
de nous avoir donneacute la santeacute et la patience la puissance et
la volonteacute pour reacutealiser ce travail
Nous remercions chaleureusement notre encadreur Melle Zehour Rahmani Docteur agrave lrsquouniversiteacute drsquoOuargla
pour son aide preacutecieuse et ses conseils eacuteclaireacutes dans la direction de nos travaux ainsi que pour sa grande
disponibiliteacute et son immense gentillesse
A cette mecircme occasion nous tenons agrave remercier les Professeurs Hocine Dendougui et Nabila Slougui pour
avoir accepteacute drsquoeacutevaluer ce travail en deacutepit de leurs nombreuses autres obligations
Nous remercions eacutegalement le personnel du laboratoire peacutedagogique faculteacute des matheacutematiques et science de la matiegravere de lrsquouniversiteacute de Kasdi Merbah
drsquoOuargla et le personnel du laboratoire de lrsquohocircpital de Mohammed Boudiaf drsquoOuargla
Nous sommes reconnaissants aussi envers nos enseignants et nos camarades de promotion
Enfin nos penseacutees particuliegraveres vont agrave nos parents et le reste de la famille car ils eacutetaient notre soutien dans nos
eacutetudes et notre projet
Nous rendons gracircce agrave ALLAH le tout puissant et
miseacutericordieux qui nous a donneacute la force et les
moyens de reacutealiser ce travail
Nous deacutedions ce travail
Agrave nos parents pour leur irremplaccedilable et
inconditionnel amour leurs encouragements et
pour avoir cru agrave nos ambition
Agrave nos familles et nos chegraveres copines pour tous les
sacrifices consentis et le soutien moral pendent tout
ce projet
Agrave nos enseignants qui nous ont aideacutes pendant cette anneacutee universitaire
Liste des abreacuteviations
III
Liste des abreacuteviations
pf Point de fusion AEAC Ascorbic Acid Equivalent Antioxidant Capacity
R2 coefficient de determination Abs Absorbance Mo Molybdate PI le potentiel drsquoionisation
Kcal Kilocalories LogP coefficient de partage EOA espegraveces oxygeacuteneacutees activeacutees ADN Acide Deacutesoxyribonucleacuteique ARN Acide ribonucleacuteique DRO deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene DMF dimethylformamide p
- constante de Hammett Adeg Angstrom RX rayons X
KHPM kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids moleacuteculaire OMS Organisation Mondiale de la Santeacute TCA temps de ceacutephaline + activateur TCK Temps de Ceacutephaline Kaolin TQ temps de quick TP taux de prothrombine
DMSO Dimethyl sulfoxide DTT Dithiolethione
s Seconde min Minute PM phospho-molybdate
Liste des figures
IV
Liste des figures
Figure Titre Page Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones 10
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione 10
Figure I3 La meacutethode de lrsquoEK Field 11
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique 12
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de
moments dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
13
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain 18
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage 18
Figure II3 Sang coaguleacute 20
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation 21
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement 24
Figure III1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C) 29
Figure III2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones
eacutetudieacutes
29
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC 30
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation 31
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage 32
FigureIII6 Tube Citrate apregraves centrifugation 34
FigureIII7 Appareil de mesure coagulomegravetre (thrombotimer 1) 35
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin 36
Figure III9 des valeurs TCA de malade 37
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage 38
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage 38
Figure III12 Classification des valeurs TQ 40
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage 41
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Nous rendons gracircce agrave ALLAH le tout puissant et
miseacutericordieux qui nous a donneacute la force et les
moyens de reacutealiser ce travail
Nous deacutedions ce travail
Agrave nos parents pour leur irremplaccedilable et
inconditionnel amour leurs encouragements et
pour avoir cru agrave nos ambition
Agrave nos familles et nos chegraveres copines pour tous les
sacrifices consentis et le soutien moral pendent tout
ce projet
Agrave nos enseignants qui nous ont aideacutes pendant cette anneacutee universitaire
Liste des abreacuteviations
III
Liste des abreacuteviations
pf Point de fusion AEAC Ascorbic Acid Equivalent Antioxidant Capacity
R2 coefficient de determination Abs Absorbance Mo Molybdate PI le potentiel drsquoionisation
Kcal Kilocalories LogP coefficient de partage EOA espegraveces oxygeacuteneacutees activeacutees ADN Acide Deacutesoxyribonucleacuteique ARN Acide ribonucleacuteique DRO deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene DMF dimethylformamide p
- constante de Hammett Adeg Angstrom RX rayons X
KHPM kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids moleacuteculaire OMS Organisation Mondiale de la Santeacute TCA temps de ceacutephaline + activateur TCK Temps de Ceacutephaline Kaolin TQ temps de quick TP taux de prothrombine
DMSO Dimethyl sulfoxide DTT Dithiolethione
s Seconde min Minute PM phospho-molybdate
Liste des figures
IV
Liste des figures
Figure Titre Page Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones 10
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione 10
Figure I3 La meacutethode de lrsquoEK Field 11
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique 12
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de
moments dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
13
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain 18
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage 18
Figure II3 Sang coaguleacute 20
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation 21
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement 24
Figure III1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C) 29
Figure III2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones
eacutetudieacutes
29
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC 30
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation 31
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage 32
FigureIII6 Tube Citrate apregraves centrifugation 34
FigureIII7 Appareil de mesure coagulomegravetre (thrombotimer 1) 35
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin 36
Figure III9 des valeurs TCA de malade 37
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage 38
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage 38
Figure III12 Classification des valeurs TQ 40
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage 41
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Liste des abreacuteviations
III
Liste des abreacuteviations
pf Point de fusion AEAC Ascorbic Acid Equivalent Antioxidant Capacity
R2 coefficient de determination Abs Absorbance Mo Molybdate PI le potentiel drsquoionisation
Kcal Kilocalories LogP coefficient de partage EOA espegraveces oxygeacuteneacutees activeacutees ADN Acide Deacutesoxyribonucleacuteique ARN Acide ribonucleacuteique DRO deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene DMF dimethylformamide p
- constante de Hammett Adeg Angstrom RX rayons X
KHPM kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids moleacuteculaire OMS Organisation Mondiale de la Santeacute TCA temps de ceacutephaline + activateur TCK Temps de Ceacutephaline Kaolin TQ temps de quick TP taux de prothrombine
DMSO Dimethyl sulfoxide DTT Dithiolethione
s Seconde min Minute PM phospho-molybdate
Liste des figures
IV
Liste des figures
Figure Titre Page Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones 10
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione 10
Figure I3 La meacutethode de lrsquoEK Field 11
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique 12
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de
moments dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
13
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain 18
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage 18
Figure II3 Sang coaguleacute 20
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation 21
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement 24
Figure III1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C) 29
Figure III2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones
eacutetudieacutes
29
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC 30
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation 31
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage 32
FigureIII6 Tube Citrate apregraves centrifugation 34
FigureIII7 Appareil de mesure coagulomegravetre (thrombotimer 1) 35
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin 36
Figure III9 des valeurs TCA de malade 37
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage 38
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage 38
Figure III12 Classification des valeurs TQ 40
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage 41
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Liste des figures
IV
Liste des figures
Figure Titre Page Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones 10
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione 10
Figure I3 La meacutethode de lrsquoEK Field 11
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique 12
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de
moments dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
13
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain 18
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage 18
Figure II3 Sang coaguleacute 20
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation 21
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement 24
Figure III1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C) 29
Figure III2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones
eacutetudieacutes
29
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC 30
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation 31
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage 32
FigureIII6 Tube Citrate apregraves centrifugation 34
FigureIII7 Appareil de mesure coagulomegravetre (thrombotimer 1) 35
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin 36
Figure III9 des valeurs TCA de malade 37
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage 38
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage 38
Figure III12 Classification des valeurs TQ 40
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage 41
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Liste des tableaux
V
Liste des tableaux
Tableau titre page Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres 5
Tableau I2 valeurs de pde reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-
dithiole-3-thione-yl
13
TableauII1 facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et
particulariteacutes
22
Tableau III1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques 27
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC) 30
Tableau III3 Les valeurs de PI 31
Tableau III4 Les valeurs de Log P 32
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin 36
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade 37
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ 39
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Sommaire
VI
Sommaire
I
I1
I11
I12
I13
I14
I2
I21
I22
I23
I24
I3
I311
I312
I32
I321
I322
I33
Remerciement
Deacutedicaces
Liste des abreacuteviationshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Liste de tableauxhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Sommairehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Introduction geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libres Et antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les radicaux libreshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Production de radicaux libres helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans
lrsquoorganismehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition du stress oxydant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydantshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants syntheacutetiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les antioxydants naturels helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydanthelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Geacuteneacuteraliteacutessur les 12-dithiole-3-thioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 12-dithiole-3-thione helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithioliumcations helliphelliphelliphelliphellip
Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacute eacutelectrochimique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Proprieacuteteacutes physiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl
et 4-[12-dithiole-3-thiones] helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I
II
III
IV
V
4
4
4
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
11
12
12
12
13
Partie I Synthegravese bibliographique
Chapitre I Les radicaux libres Et antioxydants
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
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21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Sommaire
VII
I331
I34
II1
II11
II2
II3
II31
II32
II321
II322
II323
II4
II41
II42
II43
II44
II45
III1
III11
Aromaticiteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Domain drsquoapplication des dithiolethiones helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le sang helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Les cellules helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Leucocytes (globules blancs) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Plaquettes et heacutemostase helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La coagulationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Facteur de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
les eacutetapes de la coagulation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Etapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase helliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de la thrombinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoeacutetape de La fibrinoformationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Deacutefinition de la maladie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Historique de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophiliehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement helliphelliphelliphelliphelliphellip
Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un
homme sans anomalie XYhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme
heacutemophile (XY)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les
femmes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute antioxydante helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
La structure des composeacutes eacutetudieacutes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
14
15
17
17
17
18
19
20
20
20
20
21
21
22
22
22
23
24
24
24
25
25
28
28
Chapitre II Le sang et la coagulation
Partie II Partie expeacuterimentales
Chapitre III Activiteacute antioxydante et activiteacute anticoagulant
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Sommaire
VIII
III12
III2
III21
III22
Test de Phosphomolybdate (PM) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Proceacutedurehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Activiteacute anticoagulant helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Echantillonnage helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Mateacuteriel helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
d Reacuteactifs helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
e Mode opeacuteratoire (TCK)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
f Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Le temps de quick TQhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
a Principe helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
b Mode opeacuteratoire(TP) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
c Reacutesultats et discussionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Conclusion geacuteneacuterale helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
Reacutefeacuterence bibliographiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
29
29
29
29
34
34
34
35
35
35
36
37
40
40
40
40
44
46
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Introduction
geacuteneacuterale
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Introduction geacuteneacuterale
2
Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces
oxygeacuteneacutees activeacutees (EOA) [1]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant Plus ils sont nombreux agrave assaillir votre ADN
plus le laquo taux drsquooxydants raquo est eacuteleveacute [2]
Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont
produits par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de
lrsquoalimentation ou la meacutedication et sont donc exogegravenes [3]
Parmi les antioxydants qui nous inteacuteresseront les 12-dithiolethiones ces composeacutes sont des
heacuteteacuterocycles contentant trios soufres possegravedent un caractegravere aromatiques et polaire S S
S
R4
R5
1 234
5
Lrsquoobjectif de ce travail sinscrit dans le cadre dune eacutetude des proprieacuteteacutes antioxydantes des
dithiolethiones avec une application potentielle dans le domaine meacutedical (activiteacute anti
coagulante)Ce travail combure entre la Chimie et la Biologie Car il consiste a deacuteterminer
de la relation entre la structure chimique des deacuteriveacutes dithioliques et lactiviteacute anti
coagulante du sang
Pour reacutealiser ces objectifs traceacutes notre travail sur reparti comme suit
Dans le 1ere chapitre nous avons commenceacute par quelques notions de base sur les
radicaux libres les diffeacuterents systegravemes dantioxydant Aussi nous mentionnons
certaines proprieacuteteacutes physico-chimiques des dithiolethiones
Le 2eme chapitre intituleacutee eacutevaluation de sang et la coagulation nous rappellerons
certaines deacutefinitions sur le sang et les constituants du sang et la coagulation
Le dernier chapitre est consacreacute aux proceacutedures expeacuterimentales utiliseacutees nous
preacutesentons le protocole expeacuterimental puis nous discuterons les reacutesultats obtenus
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Partie I Synthegravese
bibliographique
Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
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Les radicaux libres et antioxydants
3
Chapitre I
Les radicaux libres et
antioxydants
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
4
I Les radicaux libres et antioxydants Ce premier chapitre preacutesente le contexte de cette eacutetude Les notions de stress oxydant et les
moleacutecules antioxydantes seront abordeacutees Une description succincte de la structure des
composeacutes dithioliques ainsi que quelques unes de leurs caracteacuteristiques physicochimiques
seront preacutesenteacutees I1 Les radicaux libres Lrsquooxygegravene moleacutecule indispensable agrave la vie est susceptible drsquoentraicircner des effets
dommageables dans lrsquoorganisme via la formation de radicaux libres et drsquoespegraveces oxygeacuteneacutees
activeacutees (EOA) [1]
Les radicaux libres sont des atomes des groupes datomes ou des moleacutecules qui preacutesentent un
ou plusieurs eacutelectrons non apparieacutes sur leur couche externe Ces moleacutecules qui contiennent
geacuteneacuteralement de loxygegravene sont aussi tregraves reacuteactives Elles interagissent en une fraction de
seconde avec dautres moleacutecules [4]
Dans lrsquoorganisme les radicaux libres sont responsables du dommage cellulaire lieacute au
vieillissement aux maladies cardio-vasculaires au cancer et agrave la plupart des maladies
deacutegeacuteneacuteratives quelle que soit la toxine agrave lrsquoorigine du processus Ces radicaux libres
srsquoattaquent agrave lrsquoADN agrave un rythme alarmant [2]
Les radicaux libres interviennent dans un grand nombre de domaines en chimie aussi bien en
chimie sous rayonnement ionisant chimie des radioeacuteleacutements qursquoen chimie organique
inorganique photochimie Geacuteneacuteralement les reacuteactions drsquooxydoreacuteduction font intervenir des
intermeacutediaires radicalaires Ces reacuteactions sont omnipreacutesentes dans le milieu vivant et
gouvernent des processus aussi importants que la reproduction des espegraveces la mutageacutenegravese la
deacutefense contre les maladies [3]
I11 Production de radicaux libres La production de ces espegraveces oxydantes est une conseacutequence ineacutevitable du meacutetabolisme
aeacuterobie En effet lrsquoorganisme a besoin drsquoO2 pour produire de lrsquoeacutenergie au cours des reacuteactions
dites de respirations oxydatives Cependant une faible partie de lrsquooxygegravene eacutechappe agrave sa
reacuteduction en eau au niveau de la mitochondrie Elle peut alors ecirctre agrave lrsquoorigine de la
production de radicaux libres oxygeacuteneacutes
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
5
Les autres sources de production de radicaux libres sont repreacutesenteacutees dans le tableau I1 Elles
sont classeacutees en deux cateacutegories
les sources endogegravenes les radicaux libres sont des produits des reacuteactions de
lrsquoorganisme
les sources exogegravenes les ecirctres vivants sont exposeacutes quotidiennement agrave des polluants
(fumeacutee de cigarette rayons ultraviolets radiationshellip) susceptibles drsquoecirctre agrave lrsquoorigine de
la production de radicaux libres une fois dans lrsquoorganisme [5]
Tableau I1 Principales sources de production des radicaux libres
Sources
endogegravenes
Production de radicaux libres lors des respirations oxydatives
(mitochondries)
Cellules phagocytaires
Meacutetabolisme de lrsquoacide arachidonique
Systegraveme xanthineXanthine oxydase
Sources
exogegravenes
Rayonnement eacutelectromagneacutetique
Meacutetaux de transition
Pesticides
Meacutedicamentshellip
I12 Deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene Les principaux repreacutesentants des deacuteriveacutes reacuteactifs de loxygegravene (DRO) sont
le radical hydroxyle (HObull)
le radical peroxyde (ROObull)
le radical alkoxyle (RObull)
le peroxyde dhydrogegravene (H2O2)
lhydroperoxyde organique (ROOH)
loxygegravene singulet (O2)
La formation initiale des DRO se base sur la reacuteduction doxygegravene moleacuteculaire selon
leacutequation suivante [6]
푂2 + eacute rarr 푂2minus
La suite des reacuteactions peut ecirctre reacutesumeacutee comme suit
2푂 + 2퐻 rarr 퐻 푂 + 푂
퐻2푂2 + 푂2minus rarr 푂퐻 + 푂퐻minus + 푂2
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
6
I13Conseacutequences de la preacutesence des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Les radicaux libres jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la reacuteaction
immunitaire Ils sont produits par les cellules phagocytaires pour ecirctre utiliseacutes dans la
lutte contre les bacteacuteries
Les (DRO) peuvent agir en tant que laquo moleacutecule-signal raquo et ainsi intervenir dans la
communication intracellulaire et intercellulaire Ils participent agrave lrsquoexpression de
certains gegravenes et agrave leur reacutegulation Cela leur confegravere un rocircle important dans les
pheacutenomegravenes de croissance et de mort cellulaire
Les radicaux libres peuvent reacuteagir avec les diffeacuterents acides amineacutes et donc alteacuterer la
structure des proteacuteines Les fonctions de multiples enzymes de reacutecepteurs et de
proteacuteines de transport cellulaire peuvent ainsi ecirctre modifieacutees Crsquoest donc toute la
machinerie cellulaire qui peut ecirctre affecteacutee
Les radicaux libres peuvent aussi agir sur le glucose et geacuteneacuterer des intermeacutediaires
reacuteactifs Les dommages oxydatifs peuvent alors se propager via lrsquoattaque des radicaux
formeacutes sur drsquoautres moleacutecules
Les radicaux libres peuvent attaquer les lipides et notamment les acides gras mono- et
polyinsatureacutes des phospholipides membranaires Ils sont agrave lrsquoorigine de reacuteaction de
peroxydation
Les radicaux libres et en particulier OH peuvent srsquoattaquer agrave lrsquoADN Ils reacuteagissent
avec les nucleacuteotides Ils peuvent mener par exemple agrave des modifications des bases
azoteacutees agrave la fragmentation de lrsquoADN agrave des ruptures de brins ou agrave des pontages entre
des bases Les conseacutequences de ces alteacuterations peuvent ecirctre immeacutediates La cellule
nrsquoeacutetant plus capable de fonctionner correctement entre en apoptose Cependant ces
conseacutequences peuvent aussi srsquoexprimer sur du plus long terme Les modifications de
lrsquoexpression du programme geacuteneacutetique de la cellule peuvent ecirctre agrave lrsquoorigine drsquoun cancer
[5]
I14 Deacutefinition du stress oxydant En 1991 Sies a deacutefini la notion de stress oxydant comme lrsquoincapaciteacute de lrsquoorganisme agrave se
deacutefendre contre lrsquoagression des DRO suite agrave un deacuteseacutequilibre lieacute soit agrave une production accrue
de DRO soit agrave une diminution de la capaciteacute de deacutefenses antioxydantes [7]
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
7
La pollution le tabagisme lrsquoalcoolisme la prise des contraceptifs lrsquoexposition prolongeacutee au
soleil ou agrave des radiations la pratique du sport de haut niveau et lrsquoinflammation chronique sont
des sources de production des DRO Une alimentation pauvre en fruits et leacutegumes ougrave se
trouve la majeure partie des antioxydants exogegravenes neacutecessaires (vitamines C et E
caroteacutenoiumldes polypheacutenols) favorise une baisse de la capaciteacute antioxydante Le stress oxydant
peut ecirctre de courte dureacutee et gracircce aux systegravemes antioxydants limiteacute avec un retour rapide agrave
un eacutetat redox physiologique Un deacuteseacutequilibre redox prolongeacute a des conseacutequences en
pathologie et dans le vieillissement des tissus [3]
I2 Les antioxydants Les antioxydants peuvent ecirctre des enzymes ou de simples moleacutecules Certains sont produits
par lrsquoorganisme ce sont les antioxydants endogegravenes ou proviennent de lrsquoalimentation ou la
meacutedication et sont donc exogegravenes
Les antioxydants sont deacutefinis par HALLIWELL en (1999) comme laquo toute substance qui en
faible concentration par rapport au substrat susceptible drsquoecirctre oxydeacute preacutevient ou ralentit
lrsquooxydation de ce substrat raquo Ils peuvent ecirctre classeacutes selon leur mode drsquoaction leur
localisation cellulaire et leur origine [5]
Exemples
Le probucol (lurselle) la N-aceacutetylcysteacuteine acide ascorbique (vitamine C) tocopheacuterol
(vitamine E) le B-carotegravenehellip [8]
I21 Les antioxydants syntheacutetiques Dans lindustrie alimentaire les antioxydants syntheacutetiques tel que le butylhydroxyanisole
(BHA) butylhydroxytoluegravene (BHT) gallate propyleacutee (PG) et le tetra-butylhydroquinone
(TBHQ) sont largement utiliseacutes parce quils sont efficaces et moins chers que les
antioxydants naturels Cependant leur seacutecuriteacute est tregraves discuteacutee car ils geacutenegraverent un besoin de
recherche comme matiegraveres de substitution drsquoapregraves des sources naturelles comme antioxydants
de la nourriture [9] Exemples
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
8
BHA Gallate de propyle
I22 Les antioxydants naturels Tous les ecirctres vivants ont un meacutetabolisme primaire qui fournit les moleacutecules de base acides
nucleacuteiques (ARN ADN) lipides proteacuteines acides amineacutes carbohydrates Les meacutetabolites
primaires sont produits en quantiteacute eacuteleveacutee par les plantes et sont agrave faible prix de revient
Chez les plantes il existe aussi un meacutetabolisme secondaire cest une exclusiviteacute du monde
veacutegeacutetal Ces produits agrave structure chimique souvent complexe sont tregraves disperseacutes et tregraves
diffeacuterents selon les espegraveces Les meacutetabolites secondaires sont produits en tregraves faible quantiteacute
il existe plus de 200000 meacutetabolites secondaires classeacutes selon leur appartenance chimique en
lrsquooccurrence les terpegravenes les alcaloiumldes les composes aceacutetyleacuteniques les cires les acides
amineacutes et les composeacutes pheacutenoliques [10]
I23 Les meacutethodes drsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante Plusieurs meacutethodes sont disponibles pour mesurer lactiviteacute antioxydante des aliments et les
systegravemes biologiques [11] Elles peuvent ecirctre classeacutees en deux groupes selon deux
meacutecanismes soit par le transfert drsquoatome drsquohydrogegravene soit par le transfert drsquoun simple
eacutelectron
Les techniques du premier groupe sont employeacutees pour eacutevaluer la peroxydation lipidique en
utilisant un substrat lipidique ou lipoproteacuteique La quantification de cette proprieacuteteacute est
exprimeacutee par la mesure du degreacute drsquoinhibition de lrsquooxydation [12]
Alors les meacutethodes du deuxiegraveme groupe sont celles qui interviennent dans la mesure de
lrsquohabiliteacute du pieacutegeage des radicaux libres Elles comportent le balayage du peroxyde
drsquohydrogegravene (H2O2) de lrsquoacide hypochloreux (HOCl) de lrsquohydroxyle (OH) des anions
superoxyde (O-2) du peroxyle (ROO) et de lrsquooxyde nitrique (NO) [13]
Parmi ces techniques nous citons
la meacutethode drsquoORAC (Capaciteacute drsquoabsorbance du radical de lrsquooxygegravene) [14]
H3CO OHO
O
HO
HO
HO
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
9
la meacutethode drsquoABTS (22-azinobis (3-eacutethyle-benzothiazoline-6-sulphonate) ou TEAC
(Capaciteacute antioxydante eacutequivalente de Trolox) [15]
la meacutethode FRAP (Capaciteacutes reacuteductrices ferriques drsquoantioxydants) [16]
la meacutethode du radical DPPH (22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) [17]
la meacutethode de DMPD (Balayage du radical cation N N- dimethyl-phenylenediamine)
[18]
la meacutethode TOSC (Capaciteacute du pieacutegeage des oxy-radicaux totaux) [19]
la meacutethode TRAP (Paramegravetre du pieacutegeage du radical total) [20]
la meacutethode photocheacutemiluminescence (PCL) [21]
la meacutethode dheacutemolyse [22]
I24 Deacutefinition de lrsquoactiviteacute antioxydante Lrsquoactiviteacute antioxydante est consideacutereacutee comme la capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres par
lrsquoapport drsquoun atome hydrogegravene ou drsquoun eacutelectron et la stabilisation des espegraveces formeacutees Une
moleacutecule antioxydante est une espegravece chimique reacuteductrice agrave bas potentiel drsquooxydation
comportant des eacuteleacutements tels que des hydrogegravenes pheacutenoliques des cycles aromatiques et des
liaisons multiples
I3 Geacuteneacuteraliteacutes sur les 12-dithiole-3-thiones Le soufre est un eacuteleacutement dont la chimie est tregraves deacuteveloppeacutee Lrsquooxydation de Swern [23] est
certainement la reacuteaction la plus connue qui utilise cette chimie du soufre Dans la
classification peacuteriodique des eacuteleacutements le soufre se situe juste en dessous de lrsquooxygegravene on
aura donc des fonctions thiols (-SH) dont la reacuteactiviteacute est semblable agrave celle des fonctions
hydroxyles (-OH) De mecircme on rencontrera des fonctions C=S comme il existe des fonctions
C=O Neacuteanmoins il existe une grande diffeacuterence entre lrsquooxygegravene et le soufre en effet leur
structure eacutelectronique est bien diffeacuterente Lrsquooxygegravene O8 a pour structure 1s22s22p4 alors que le
soufre S16 pour structure le 1s22s22p63s23p4 Les composeacutes posseacutedant une double liaison C=S
sont en geacuteneacuteral moins stables que leurs homologues qui possegravedent une liaison C=O Et ceci agrave
cause du fait que dans le cas du soufre il existe des orbitales d libres dans lesquelles les
eacutelectrons de la liaison π peuvent aller ce qui nrsquoest pas le cas pour lrsquooxygegravene
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
10
Parmi les composeacutes soufreacutes on trouve les 12-dithiole-3-thiones qui sont des
heacuteteacuterocycles sulfureacutes dont la structure geacuteneacuterale est preacutesenteacutee sur la figure I1 naturellement
trouveacutes dans veacutegeacutetaux de la famille des crucifegraveres [24] S S
S
R4
R5
1 234
5
Figure I1 Formule geacuteneacuterale des 12-dithiole-3-thiones
Selon les radicaux R4 et R5 on distingue plusieurs composeacutes des dithiolethiones Il y a
principalement deux types des 12-dithiole-3-thiones
S S
R5S
R4
S S
SH2C
CH2nCH2
Figure I2 Les formes les plus ceacutelegravebres de 12dithiole-3-thione
I311 Synthegravese de 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese dun composeacute de cette classe semble avoir eacuteteacute par le chimiste italien
BARBAGLIA GA qui en 1884 a isoleacute et a purifieacute une substance de la formule C5H6S3 de la
reacuteaction entre lisovaleacuteraldeacutehyde (3-meacutethylbutanal) et le soufre
BARBAGLIA nrsquoa pas deacutetermineacute sa structure mais il a mesureacute son point de fusion et a donneacute
la meacutethode de synthegravese il a stipuleacute que cette substance serait le 45-dimeacutethyl-12-dithiole-3-
thione la dithiolethione parent a eacuteteacute syntheacutetiseacutee pour la premiegravere fois en 1948 Nombreux
deacuteriveacutes ont eacuteteacute preacutepareacutes entre les anneacutees 1940 et 1950 [25]
Seules les positions 4 et 5 des 12-dithiole-3-thiones sont susceptibles drsquoecirctre occupeacutees
par des groupements qui doivent le plus souvent ecirctre inclus dans les preacutecurseurs
correspondants Cette condition limite les possibiliteacutes de synthegravese ce qui explique le nombre
reacuteduit de structures connues dans la seacuterie des 12-dithiole-3-thiones
La premiegravere synthegravese de 1 2-dithiole-3-thiones a eacuteteacute en 1954 par de E K Field [26]
Leurs sels ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes par B Boumlttcher
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
11
Selon EKField qui est en preacutesence de catalyseurs et sa reacuteaction avec du soufre ou
P4S10 peut donner de bons rendements daryl dithiolethione selon la reacuteaction
R = H ou CH3
R R
S S
S
6S
Figure I3 la meacutethode de lrsquoEK Field
I312 Synthegravese de 3- meacutethylthio-12- dithiolium cations Les sels de 12-dithiole-3-thiones ont eacuteteacute syntheacutetiseacutes drsquoapregraves B Boumlttcher [27] Cette
meacutethode fondeacutee sur la reacuteaction du sulfate de dimeacutethyle ou iodide de meacutethyle en excegraves avec
dithiolethiones correspondante dans le toluegravene agrave une tempeacuterature fixe de 35 degC dans les 4h
pour reacuteagir avec le sulfate de dimeacutethyle et agrave 40 degC pendant la journeacutee pour iodide de meacutethyle
Apregraves chaque reacutesidu a eacuteteacute filtreacute et seacutecheacute selon Leacutequation suivante (reacuteaction daddition ) S S
SH
R
CH3X
R
S S
H SCH3 X-
푨풗풆풄 푿 = 푰 풐풖 푪푯ퟑ푺푶ퟒ
I32 Les proprieacuteteacutes de dithiolethiones
I321 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique Beaucoup deacutetudes et drsquoanalyses par des meacutethodes eacutelectrochimiques ont eacuteteacute effectueacutees
sur les proprieacuteteacutes oxydo-reacuteductrices des dithiolethiones substitueacutes en position 5 et 4 par des
groupements non eacutelectro actifs (aryle ou alkyle) Drsquoune maniegravere geacuteneacuterale le comportement
cathodique habituel de ces composeacutes en milieux organiques (DMF) peut ecirctre deacutecrit par une
reacuteduction agrave deux eacutelectrons chimiquement reacuteversible conduisant aux dianions apregraves
lrsquoouverture de cycle dithiolique (Figure I4) [28]
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
12
S S
S
R4
R5
2eacute
R5 R4
CS2--S
RX
R5 R4
CS2RRS
Figure I4 Proprieacuteteacute eacutelectrochimique
I322 Proprieacuteteacutes physiques La plus part des 12-dithiole-3-thiones sont des cristaux coloreacutes ceux qui sont
substitueacutees par des composeacutes aromatiques ont des couleurs entre le rouge et lrsquoorange fonceacute et
ont des points de fusion supeacuterieur agrave ceux substitueacutes par des composeacutes aliphatique qui ont la
couleur jaune
Plusieurs des dithiolethiones sont insolubles dans les solvants polaires et peu solubles
dans les solvants aliphatique et soluble dans les hydrocarbures aromatiques et dans lrsquoacide
sulfurique concentreacute [29]
Les valeurs de dipocircles des sels sont plus eacuteleveacutees que celles de leurs dithiolethiones
origine et les facteurs heacuteteacuterogegravenes des derniers sont plus petits que ceux de leurs sels (Figure
I5) [30] S S
H S
S S
SHCH3
+ CH3SO4-
3387 Debye 1440 Debye
Figure I5 La densiteacute eacutelectronique de diffeacuterents atomes et les valeurs de moments
dipolaires des moleacutecules des inhibiteurs
I33 Les effets eacutelectroniques des restes 5-[12-dithiole-3-thiones]-yl et 4-
[12-dithiole-3-thiones] Les effets eacutelectroniques attracteurs des restes 5-[12-dithiole-3-thione]ndashyl et 4-12-dithiole-
3-thione-yl sont confirmeacutes quantitativement par les travaux de M Saiumldi et M Chollet [31]
Les valeurs de constante de Hammettp- sont
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
13
Tableau I2 Les valeurs de p de reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl et de 4-12-dithiole-3-
thione-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
Ces valeurs expriment que lrsquoeffet eacutelectro attracteur du reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl
possegravede un effet meacutesomegravere attracteur comparable agrave celui drsquoion reste cyano ou para nitro
(097et 125) [28]
La valeur de p du reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl est tregraves faible et indiquant que les restes
4-[12-dithiole-3-thiones]-yl sont faiblement attracteur par effet inducteur
Il nrsquoy a pas drsquoeffet meacutesomegravere attracteur du reste 4-[12-dithiole-3-thiones]-yl qui reacutesulterait de
la conjugaison entre le groupement amino donneur et ce reste 12-dithiole via le noyau pheacutenyl
selon S S
SH
NH2 NH2
S S
H S-
etc
La conjugaison entre le noyau pheacutenyl (et donc le groupement amino) et le noyau
dithiole possible drsquoun point de vue eacutenergeacutetique est inhibeacutee par le manque de coplaneacuteiteacute des
deux noyaux [32]
En conclusion nous pouvons dire que probablement les restes 4-[12-dithiole-3-thione]
nrsquoexercent pas drsquoeffet attracteur meacutesomegravere
S S
S
H
S S
SH
Le reste 5-[12-dithiole-3-thione]-yl Le reste 4-[12-dithiole-3-thione]-yl
Les restes p-
5-[12ndashdithiolethione]-yl 114
4-[12ndashdithiolethione]-yl 017
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
14
I331 Aromaticiteacute Lrsquoaromaticiteacute de dithiolethiones est manifesteacutee par deacutelocalisation de six eacutelectrons p
dans le systegraveme plans du dithiole La regravegle de Hucircckel indique que toute structure cyclique
siegravege drsquoune deacutelocalisation eacutelectronique couvrant lrsquoensemble du cycle et affectant un
ensemble de (4n+2) eacutelectrons (n=0 1 2 3 hellip) preacutesente le caractegravere aromatique
On peut consideacuterer que quatre eacutelectrons proviennent des deux doublets 3p des atomes de
soufre 1 et 2 et une double liaison (C4-C5) se trouvent rejeter sur le soufre du
thiocarbonyle ce dernier se trouve donc chargeacutee neacutegativement tandis que le cycle dithiolique
acquiert une charge positive
Un certain nombre de dithiolethione sont fait lrsquoobjet drsquoeacutetudes cristallographiques par rayons X
[33] elles conduisent aux reacutesultats suivants
La distance S1-S2 de lrsquoordre de 204Adeg possegravede la valeur trouveacutee dans les deacutesulfures drsquoalkyle
de lrsquoordre de 208 Adeg Mais il y a une grande diffeacuterence entre les disulfures drsquoalkyle et les
dithiolethiones Les longueurs des liaisons C3-S2 et C5- S1de lrsquoordre de 17 Adeg sont nettement
plus courts que la liaison C-S dans un sulfure drsquoalkyle (longueurs de liaison de lrsquoordre de
183 Adeg) Les longueurs des liaisons C3-C4 (142Adeg) et C4-C5 (183Adeg) sont celle rencontreacutees
dans les hydrocarbures aromatiques La longueur de la double liaison du thiocarbonyle est de
lrsquoordre de 166 Adeg Elle est leacutegegraverement supeacuterieure agrave la valeur de 161 Adeg retenue pour un
thiocarbonyle typique [34]
Ces reacutesultats confirment encore lrsquoexistence du caractegravere aromatique des dithiolethiones En
bref ces consideacuterations indiquent que les dithiolethiones sont des composeacutes aromatiques tregraves
stables
I34 Domaine drsquoapplication des dithiolethiones Les dithiolethiones jouent un rocircle tregraves important dans plusieurs domaines elles sont
utiliseacutees comme des promoteurs dans le champ de la pharmacologie ougrave la sulfarlem a eacuteteacute
utiliseacutees pendant longtemps comme meacutedicament theacuterapeutique aussi lrsquoOltipraz qui possegravede la
proprieacuteteacute drsquoun inhibiteur efficace au HIV-1 Un grand nombre des dithiolethiones sont connus
comme des agents chimio protecteurs et peuvent ecirctre accomplis par lusage de produits
chimiques naturels et syntheacutetiques pour retarder bloquez ou renversez le processus
canceacuterigegravene [35]
Les dithiolethiones eacutetudieacutes preacutesentent des capaciteacutes inhibitrices importantes que le
standard vitamine C que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione preacutesente un fort pourcentage
dinhibition dheacutemolyse (plus de 185 fois de vitamine C) par contre le faible inhibiteur est la
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Les radicaux libres et antioxydants
15
vitamine C Cette remarque sexplique par linfluence du facteur de lipophilie Lrsquoaneacutethol
dithiolethione (Sulfarlemreg) est une moleacutecule lipophile utiliseacutee en theacuterapeutique qui associe
des proprieacuteteacutes anti radicalaires et antioxydantes agrave une bonne diffusion tissulaire et une bonne
toleacuterance pour inhiber lheacutemolyse des eacuterythrocytes [36]
Certain nombre drsquoentre eux ont fait lrsquoobjet de brevets dans divers domaines drsquoapplication
Des inhibiteurs de corrosion [37] et sont utiliseacutes comme des fongicides [30]
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Chapitre II Le sang et la
coagulation
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
17
II1 Le sang Le sang est un tissu liquide de coloration rouge circulant agrave linteacuterieur dun systegraveme
vasculaire clos
Chez lrsquohomme lrsquoappareil circulatoire contient environ cinq litres de sang Ce qui repreacutesente
environ 7 du poids corporel (70 kg) le sang est un organe physiologique constitueacute du plasma
liquide salin tamponneacute de couleur jaune clair contenant entre autres eacutelectrolytes et proteacuteines
dans lequel baignent les eacuteleacutements figureacutes du sang les eacuterythrocytes les leucocytes ou globules
blancs (granulocytes monocytes et lymphocytes ) et les thrombocytes ( les plaquettes )
Lrsquoune des multiples fonctions du sang est le transport drsquoeacutelectrolytes et de substances nutritives
(glucose acides amineacuteshellip) et des gaz respiratoires (O2 CO2) Ce dernier est assureacute en majeure
partie par les eacuterythrocytes et lrsquoheacutemoglobine [38]
Le sang est constitueacute de plasma et de diffeacuterentes populations de cellules produites au niveau des
tissus heacutematopoiumleacutetiques (os plats du tronc extreacutemiteacutes du feacutemur et de lrsquohumeacuterus)
A partir drsquoune seule cellule (cellule souche) trois ligneacutees sont formeacutees celle des globules rouges
celle des globules blancs et celle des plaquettes
Chaque ligneacutee possegravede un processus de maturation diffeacuterent
Pour les globules rouges le processus de maturation se nomme lrsquoeacuterythropoiumlegravese [39]
Un mm3 de sang contient normalement 5 millions de globules rouges 6 agrave 7 000 de globules
blancs 200 agrave 400 000 plaquettes
Constituants du sang et leurs fonctions
Plasma (Eau _ Electrolytes)
Cellules (Erythrocytes _ Leucocytes _ Plaquettes)
II11 Les cellules a Lrsquoeacuterythrocyte (globule rouge)
Lrsquoeacuterythrocyte appeleacute aussi heacutematie normocyte ou globule rouge est une cellule tregraves simplifieacutee
anucleacute chez lrsquohomme et les mammifegraveres produite essentiellement dans la moelle osseuse agrave partir
de cellules megraveres les eacuterythroblastes meacutedullaires (chez le fœtus les eacuterythrocytes sont eacutegalement
produits par la rate et le foie) lrsquoeacuterythrocyte se preacutesente sous la forme drsquoun disque biconcave drsquoun
diamegravetre de 7 et 8 microm Il est doueacute drsquoune grande deacuteformabiliteacute qui lui permet de franchir des
capillaires drsquoun diamegravetre infeacuterieur au sien Ceci permet effectivement le transport drsquooxygegravene
depuis les poumons jusqursquoaux cellules de lrsquoorganisme mais cette speacutecialisation
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
18
implique une bregraveve survie cellulaire (environ 120 jours) une orientation speacutecifique du
meacutetabolisme pour proteacuteger le pigment respiratoire De fait la couleur rouge de lrsquoeacuterythrocyte
provient de ce pigment et constituant principal agrave savoir lrsquoheacutemoglobine La figure II2 ci-dessous
scheacutematise la forme de lrsquoeacuterythrocyte (section sagittale) et reacutesume les dimensions moyennes [39]
Figure II1 Dimensions moyennes du globule rouge humain
Figure II2 Globules rouges vus au microscope eacutelectronique agrave balayage
b Leucocytes (globules blancs)
Les leucocytes ou globules blancs du sang sont les cellules mobiles du systegraveme de deacutefense
immunitaire de lrsquoorganisme par immuniteacute on entend la capaciteacute de lrsquoorganisme agrave reacutesister agrave des
substances eacutetrangegraveres potentiellement dangereuses ou agrave des cellules anormales et agrave les eacuteliminer
les leucocytes et leurs produits ainsi qursquoun groupe de proteacuteines plasmatiques constituent le
systegraveme immunitaire un systegraveme de deacutefense interne qui joue un rocircle crucial dans la
reconnaissance et la destruction ou la neutralisation de mateacuteriaux diffeacuterents du laquo soi raquo normal
Plus speacutecifiquement le systegraveme immunitaire
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
19
1 Deacutefend contre des agents pathogegravenes (microorganismes bacteacuteriens ou viraux responsables
de maladie)
2 Fonctionne comme des laquo eacutequipes de nettoyage raquo qui deacutebarrassent lrsquoorganisme de cellules
useacutees (comme les globules rouges acircgeacutes) et de deacutebris tissulaires (par exemple des tissus
endommageacutes par blessure ou maladie)Cette derniegravere proprieacuteteacute est primordiale pour la
cicatrisation et la reacuteparation tissulaire
3 Identifie et deacutetruit des cellules anormales ou mutantes produites dans lrsquoorganisme Cette
fonction qui est appeleacutee surveillance immunitaire est le meacutecanisme primordial de deacutefense
contre le cancer
Pour remplir leur rocircle les leucocytes emploient une strateacutegie de recherche et drsquoattaque crsquoest- agrave -
dire qursquoils gagnent les tissus agresseacutes ou endommageacutes ils sont continuellement transporteacutes par le
sang depuis le site de leur production vers les zones ougrave ils doivent intervenir
Il y a cinq classes de leucocytes
Il y a cinq classes de leucocytes ndash neutrophiles eacuteosinophiles basophiles monocytes et
lymphocytes dont les caracteacuteristiques de structure et de fonction sont diffeacuterentes Ils sont dans
lrsquoensemble de plus grande taille que les eacuterythrocytes
II2 Plaquettes et heacutemostase Il y a normalement environ 150000 agrave350 plaquettes par mm3 de sang
Les plaquettes sont des fragments cellulaires provenant des meacutegacaryocytes
Les plaquettes (thrombocytes) sanguines ne sont pas des cellules proprement dites mais des
fragments cellulaires qui se sont deacutetacheacutes par bourgeonnement de tregraves grandes cellules reacutesidentes
de la moelle osseuse appeleacutees meacutegacaryocytes qui proviennent des mecircmes cellules souches
indiffeacuterencieacutees que les eacuterythrocytes et les ligneacutees de leucocytes
Un seul meacutegacaryocyte produit environ 1000 plaquettes
Les plaquettes sont scheacutematiquement des veacutesicules contenant un peu de cytoplasme du
meacutegacaryocyte et entoureacutees par un morceau de sa membrane
Les plaquettes sont fonctionnelles pendant une dizaine de jours au terme desquels elles sont
retireacutees de la circulation par les macrophages tissulaires de la rate et du foie essentiellement pour
ecirctre remplaceacutees par de nouvelles plaquettes qui sortent de la moelle osseuse [40]
II3 La coagulation La coagulation correspond agrave une cascade de reacuteactions enzymatiques aboutissant agrave la
transformation par la thrombine du fibrinogegravene soluble en fibrine insoluble qui constitue
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
20
lrsquoarmature du caillot Ce pheacutenomegravene est localiseacute et reacuteguleacute par un ensemble drsquoinhibiteurs
physiologiques Les deacuteregraveglements de ce systegraveme exposent agrave un risque de thrombose ou agrave un risque
heacutemorragique [41]
Figure II3 Sang coaguleacute
II31 Facteur de la coagulation Sont deacutesigneacutes par des chiffres romains et affecteacutes du signe ldquoardquo lorsque le facteur est activeacute
La synthegravese de ces facteurs a lieu pour la plus part dans le foie Pour certains la synthegravese deacutepend
de la vitamine K on les appelle facteurs deacutependant de la vitamine K Ce sont les facteurs X IX
VII II [42]
A cocircteacute de ces facteurs plasmatiques drsquoautres interviennent dans la coagulation ce sont
lapreacutekallicreacuteine dont lrsquoactivation aboutit agrave la formation de la kallicreacuteinekilinogegravene de haut poids
moleacuteculaire (KHPM) [43]
II32 Les eacutetapes de la coagulation a Leacutetapes de la geacuteneacuteration de la prothrombinase
Elle srsquoeffectue selon deux voies
La premiegravere voie dite intrinsegraveque qui implique des facteurs dits contacts agrave savoir le KHPM la
prekallicreacuteine les facteurs XII XI et drsquoautres facteurs plasmatiques qui sont les facteurs IX X V
II le facteur III plaquettaire et le calcium
Une deuxiegraveme voie dite extrinsegraveque qui implique lrsquoactiviteacute des facteurs VIII X V II la
thromboplastine tissulaire et le fibrinogegravene
Il y a eacutegalement une troisiegraveme voie dite voie cellulaire qui fait intervenir les monocytes et les
macrophages
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
21
b Lrsquoeacutetape de la thrombino formation
Elle assure la formation de la thrombine agrave partir de la prothrombine gracircce agrave lrsquoactiviteacute catalytique
de la prothrombinase
c Lrsquoeacutetape de La fibrino formation
Elle aboutit agrave la formation de la fibrine insoluble agrave partir du fibrinogegravene plasmatique [44]
Figure II4 Meacutecanismes de la coagulation
Cascade de la coagulation
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
22
Tableau II1 Les facteurs de la coagulation numeacutero de facteur nom et particulariteacutes
Ndeg de facteur Nom Particulariteacute
Facteur I Fibrinogeacutene
Facteur II Prothrombine Vit K deacutependant
Facteur III Thromboplastine tissulaire
Facteur IV Calcium
Facteur V Proacceacuteleacuterine
Facteur VI Acceacuteleacuterine
Facteur VII Proconvertine Vit K deacutependant
Facteur VIII Anti-heacutemoph A
Facteur IX Anti-heacutemoph B Vit K deacutependant
Facteur X Stuart Vit K deacutependant
Facteur XI Rosenthal
Facteur XII Hageman
Facteur XIII Stabilisant de fibrine
II4 Lrsquoheacutemophilie Le mot laquo heacutemophilie raquo provient de deux mots grecs haima qui signifie laquo sang raquo et philos qui
signifie laquo ami raquo [45]
II41 Deacutefinition de la maladie
Lrsquoheacutemophilie est une maladie heacutemorragique constitutionnelle agrave transmission reacutecessive lieacutee au sexe
reacutesultant drsquoun deacuteficit en facteur VIII (FVIII) pour lrsquoheacutemophilie A et en facteur IX (FIX) pour
lrsquoheacutemophilie B Lrsquoheacutemophilie B est environ cinq fois moins freacutequente que lrsquoheacutemophilie A [46]
Il existe une bonne correacutelation entre lrsquointensiteacute du deacuteficit en facteur antiheacutemophilique et la graviteacute
clinique de la maladie On deacutefinit ainsi
bull Lrsquoheacutemophilie seacutevegravere Facteurs VIII ou IX lt 1
bull Lrsquoheacutemophilie modeacutereacutee Facteurs VIII ou IX 1 agrave 5
bull Lrsquoheacutemophilie mineure Facteurs VIII ou IX 6 agrave 35
II42 Historique de lrsquoheacutemophilie -Quand lheacutemophilie a-t-elle eacuteteacute deacutecouverte
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
23
La deacutecouverte de lheacutemophilie qui navait pas encore de nom agrave leacutepoque remonte agrave lAntiquiteacute Le
Talmud recueil deacutecrits heacutebraiumlques du IIe siegravecle avant Jeacutesus-Christ relate que les beacutebeacutes macircles
navaient pas besoin de subir la circoncision si deux de leurs fregraveres avaient deacutejagrave succombeacute agrave cette
intervention avant eux
Abu Al-qasim Al-Zahrawi (1013-1106) fait mention drsquoune famille de Cordoue en Andalousie
dont les hommes meurent des suites drsquoheacutemorragies conseacutecutives agrave des blessures mineures
Mousa Ibn Maimoun (1135-1204) applique la regravegle concernant la circoncision agrave une famille en
Eacutegypte
En 1803 un meacutedecin de Philadelphie le Dr John Conrad Otto publie un traiteacute sur une certaine
preacutedisposition heacutemorragique familiale Il deacutecrit que la maladie est heacutereacuteditaire et transmise de megravere
en fils Il parvient agrave retracer lrsquoorigine de la maladie agrave une femme qui srsquoeacutetait eacutetablie pregraves de
Plymouth dans le New Hampshire en 1720
II43 Epideacutemiologie de lrsquoheacutemophilie -Dans le monde
Lheacutemophilie affecte 1 cas sur 10000 naissances dont 80 sont des heacutemophiles A et 20 des
heacutemophiles B LrsquoOrganisation Mondiale de la Santeacute (OMS) estime qursquoil existe actuellement 400
000 cas drsquoheacutemophiles dans le monde
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
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[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
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[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
24
En Algeacuterie LrsquoAlgeacuterie compte quelque 1600 malades recenseacutes par lrsquoAssociation algeacuterienne des
heacutemophiles (AAH) mais ils seraient plus de 3000 agrave souffrir de cette maladie orpheline qui touche
ndash sauf cas tregraves rares
ndash les garccedilons et qui se caracteacuterise par une grave insuffisance dans la coagulation du sang [47]
II44 Comment deacutemarrer et arrecircter le saignement Le sang circule dans le corps agrave travers les vaisseaux sanguins on peut reacutesumer le processus de
saignement et darrecircter ce saignement agrave les points suivants (voir la figureII5)
Figure II5 Eacutetapes pour deacutemarrer et arrecircter le saignement
lheacutemorragie commence lorsque le vaisseau sanguin est exposeacute agrave linfection et le sang se deacutegage
vers lexteacuterieure
Le vaisseau est diminueacute pour aider agrave ralenti lheacutemorragie
Les plaquettes sanguines forment un bouchon pour remplir le trou
Enfin un grand nombre des facteurs se rassembler et deacuteposeacute sur le bouchon qui se conduit agrave arrecircte
lheacutemorragie
II45 Transmission geacuteneacutetique de lrsquoheacutemophilie Trois situations peuvent se preacutesenter
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
25
Si on deacutesigne par X le gegravene porteur de lanomalie (sur les figures ccedila correspond agrave X eacutecrit en
rouge) et par X le gegravene sain on aura
1 Une femme porteuse de lanomalie (XX) marieacutee agrave un homme sans anomalie XY
Leurs filles peuvent ecirctre sans aucune anomalie (XX) ou porteuses de la maladie
(XX)
Les garccedilons peuvent eacutegalement ecirctre sains ou heacutemophiles (XY)
2 Une femme non porteuse (XX) marieacutee agrave un homme heacutemophile (XY)
Leurs filles seront toutes porteuses de la maladie (XX)
Leurs fils seront tous sains (XY)
3 Autres causes peuvent ecirctre agrave lorigine dheacutemophilie chez les femmes
Inactivation fortuite pendant lembryogeacutenegravese dune majoriteacute de X portant lallegravele normal
Syndrome de Turner (XO)
Translocation Xautosome
Isodomie maternelle du X (non disjonction au cours de la deuxiegraveme division de meacuteiose) on a
alors un zygote avec 2 X identiques maternelles agrave condition que le X du spermatozoiumlde ayant
participeacute agrave la feacutecondation ait eacuteteacute eacutelimineacute
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Le sang et la coagulation
26
Pourtant la notion dheacutereacutediteacute nest pas retrouveacutee chez tous les heacutemophiles Dans environ 13 des
cas il sagit dune mutation spontaneacutee du gegravene au niveau dun chromosome X cette neacuteo-mutation
peut avoir lieu dans lrsquoovule de la megravere ou les spermatozoiumldes du pegravere ou plus tard chez le foetus
lui-mecircme Cependant cette mutation bien que spontaneacutee va se transmettre de faccedilon heacutereacuteditaire agrave
la descendance du patient [48]
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Partie II Partie
expeacuterimentales
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
27
Chapitre III
Activiteacute antioxydante
et activiteacute anti
coagulant
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
28
III1 Activiteacute antioxydante
III11 La structure des composeacutes eacutetudieacutes Les composeacutes dithiolethioneset leurs deacuteriveacutes eacutetudieacutes dans ce travail sont repreacutesenteacutes dans
le tableauIII1
TableauIII1 Les structures et les abreacuteviations des deacuteriveacutes dithioliques [36]
Composeacute eacutetudieacute Structure Nom (abreacuteviation)
A S S
H S
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 120 degC
B S S
H S
CH3
4-p-tolyl-12-dithiole-3-
thione
pf = 130 degC
A1 S S
H SCH3
+ I-
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12-
Dithiolylium (contre) ion (I-
)
pf = 224 degC
B1 S S
H S
CH3
CH3
CH3SO4-
+
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12-
dithiolylium (contre) ion
(CH3SO4-)
pf = 230 degC)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
29
III12Test de Phosphomolybdate(PM) Lanalyse de Molybdate Phosphate est un essai direct qui on emploi principalement pour
mesurer la possibiliteacute et la puissance des antioxydants non enzymatique
Cette meacutethode deacutepend de la reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V) et la formation
drsquoun complexe de Molybdate Phosphate de couleur verte qui est deacutetecteacutee par
spectrophotomeacutetrie en mesurant le changement de labsorption agrave 695 nm [16]
a Preacuteparation du reacuteactif de molybdate On preacutepare 500 ml dun meacutelange des trois solutions suivantes
06 mM acide sulfurique
28 mM phosphate sodium
4 mM molybdate ammonium
b Proceacutedure 01ml de chaque dithiolethione dilueacute est ajouteacute agrave 1ml du reacuteactif de molybdate Le meacutelange
est placeacute dans un bain marie agrave une tempeacuterature de 95 Cdeg pendant 90 min apregraves
refroidissement lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 695 nm
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme standard [49]
c Reacutesultats et discussion Lrsquoactiviteacute antioxydante est mesureacutee selon un nouveau terme appeleacute AEAC (Ascorbic Acid
Equivalent Antioxidant Capacity) On deacutefinit lAEAC comme la concentration molaire
de la solution dacide ascorbique qui possegravede un pouvoir reacuteducteur eacutequivalent agrave solution de
concentration 1 M de composeacute eacutetudieacute
Lrsquoeacutevolution de lrsquoactiviteacute antioxydante de nos produits est compareacutee par rapport agrave lrsquoacide
ascorbique (vitamine C) et cela en traccedilant une courbe drsquoeacutetalonnage de ce dernier
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
30
FigureIII1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique (vitamine C)
FigureIII2 Courbes repreacutesentants le pouvoir reacuteducteur de dithiolethiones eacutetudieacutes
-01 00 01 02 03 04 05 06 07 08
00000
00002
00004
00006
00008
00010
00012
Abs
a 69
5 nm
C (M)
AY=6650X+0030R2 = 0990
00 02 04 06 08 10
00000
00005
00010
00015
00020Ab
s a
695
nm
C(M)
BY=4674X+0050R2 =099
00 02 04 06 08 10
00000
00001
00002
00003
00004
00005
00006
00007
Abs
a 69
5 nm
C(M)
Y=1488X+0028R2 =0991
A1
00 01 02 03 04 05
00000
00001
00002
00003
00004
00005
Abs
a 69
5 nm
C(M)
B1Y=9560X+0014R2 =0990
-000005 000000 000005 000010 000015 000020 000025 000030 000035
000
002
004
006
008
010
012
Abs
a 69
5 nm
C(M)
R2=0989
acide ascorbique
Y= 3264X - 0004
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
31
Le coefficient de deacutetermination des proprieacuteteacutes antioxydante a eacuteteacute deacutetermineacute en utilisant le
programme Origine 8 On reacutesume les reacutesultats des tests du pouvoir reacuteducteur dans le
tableau III2
Tableau III2 Les reacutesultats de test du pouvoir reacuteducteur (AEAC)
Eacutechantillons Activiteacute antioxydante AEAC (M)
A 2166
B 17656
A1 4314
B1 273
La preacutesence des antioxydants dans les eacutechantillons aurait comme conseacutequence la reacuteduction
de Mo (VI) en Mo (V) en donnant un eacutelectron
La croissance dabsorbance agrave 695 nm indique une augmentation des capaciteacutes reacuteductrices
On a constateacute que les activiteacutes reacuteductrices de tous les dithiolethiones eacutetudieacutes ont eacutegalement
augmenteacute avec laugmentation de leurs concentrations
Nos composeacutes ont montreacute une bonne activiteacute reacuteductrice qui eacutetait comparable agrave lacide
ascorbique Lrsquoefficaciteacute de la reacuteduction du molybdate est directement proportionnelle agrave la
valeur AEAC elle est dans lrsquoordre croissant selon le classement suivant
Figure III3 Classification de la capaciteacute reacuteductive selon les valeurs dAEAC
Les reacutesultats obtenus dans le tableau III2 montrent que les composeacutes eacutetudieacutes possegravedent
une activiteacute antioxydante tregraves varieacutee et les valeurs dAEAC sont entre 17656 M et 4314M
0
05
1
15
2
25
3
35
4
45
A1 B1 A B
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
32
La valeur dAEAC le plus faible est signaleacutee pour le composeacute B En effet lAEAC la plus
eacuteleveacutee est enregistreacutee pour le A1 et B1 (431 M et 273 M respectivement)
On peut expliquer ces reacutesultats par le potentiel doxydation des composeacutes eacutetudieacutes cest agrave
dire si le deacuteriveacute dithiolique possegravede un potentiel doxydation faible il donnera des
eacutelectrons pour participer agrave la reacuteduction des Mo (VI) ce qui conduit agrave une bonne activiteacute
reacuteductrice
Encore un autre critegravere pris en consideacuteration pour lactiviteacute reacuteductrice cest le potentiel
drsquoionisation (PI) drsquoune moleacutecule agrave laquelle correspond lrsquoeacutenergie minimale qursquoil faut lui
fournir pour lui arracher un eacutelectron Il peut alors subir une oxydation mono-eacutelectronique
qui conduit au radical correspondant [36]
Le composeacute A1 preacutesente une grande capaciteacute reacuteductive nous attribuons ce reacutesultat au
faible potentiel dionisation PI=198919Kcalmol
Les valeurs de PI sont regroupeacutees dans le tableau III3
Tableau III3 Les valeurs de PI
Composeacute eacutetudieacute PI (Kcalmol)
A 206114
B 205469
A1 198919
B1 208236
Figure III4 La relation dAEAC avec le potentiel dionisation
Nous rappelons que les composeacutes entrant dans cette correacutelation sont tous les deacuteriveacutes
dithioliques sauf A1
198 199 200 201 202 203 204 205 206 20715
20
25
30
35
40
45
AEAC
(M)
PI (Kcalmol)
R2=0949
Y = -0335X + 7099
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Reacutefeacuterence bibliographique
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
33
En conclusion selon la figure III4 (correacutelation AEAC vs PI) nous pouvons dire que
presque tous nos dithiolethiones sont des composeacutes reacuteducteurs
Aussi un autre critegravere peut ecirctre influeacute sur lactiviteacute reacuteductrice cest le coefficient de
partage eaun-octanol (Log P) qui est une mesure de la solubiliteacute diffeacuterentielle des
composeacutes chimiques dans deux solvants non miscible donc pour la discussion sont baseacute
sur la courbe drsquoAEAC avec le coefficient de partage [34]
Les valeurs de Log P sont regroupeacutees dans le tableau III4
Tableau III4 Les valeurs de Log P
Dithiolethiones Log P
A 323
B 349
A1 1947
B1 124
Figure III5 La relation dAEAC avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre la capaciteacute reacuteductrice et le coefficient de
partage avec un coefficient de deacutetermination R2 = 099 (voir la figure III5)
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correlation sont tous les dithiolethiones
eacutetudies sauf le compose B1
18 20 22 24 26 28 30 32 34 3615
20
25
30
35
40
45
AEA
C (M
)
logP (uv-vis)
R2=099
Y = -1658X + 7540
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
34
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent une grande
capaciteacute reacuteductrice
III2 Activiteacute anticoagulant La coagulation sanguine peut ecirctre deacuteclencheacutee par les voies intrinsegraveque etou extrinsegraveque
ces deux voies constituant lrsquoheacutemostase
Crsquoest pourquoi des bilans drsquoheacutemostase sont freacutequemment pratiqueacutes par exemple avant tout
acte chirurgicalla plupart de ces analyses meacutedicales reposent sur la mesure de temps de
coagulation Ainsi la voie intrinsegraveque est exploreacutee par le temps de ceacutephaline + activateur et
la voie extrinsegraveque est exploreacutee par le temps de quick
En dehors de la numeacuteration plaquettaire le temps de ceacutephaline + activateur (TCA) (appeleacute
aussi TCK si lrsquoactivateur de contact utiliseacute est le kaolin) et le temps de quick (TQ)
improprement deacutenommeacute TP (taux de prothrombine) sont les deux examens biologiques les
plus freacutequemment prescrits pour le deacutepistage drsquoune maladie heacutemorragique qursquoelle soit
acquise ou constitutionnelle
Partie pratique
Notre travail a eacuteteacute reacutealiseacute au sein du laboratoire de sang dans lhocircpital Mohamed
BOUDIAF de (Ouargla) service dheacutematologie
Nos recherches ont pour but de faire des explorations dheacutemostase TCK TP agrave fin de
deacutetecter deacuteventuelles anomalies sanguines chez les patients drsquoheacutemophilie et un volontaire
sain
III21Temps de Ceacutephaline Kaolin (TCK)
a Principe Crsquoest le temps de coagulation agrave 37degC drsquoun plasma citrateacute en preacutesence drsquoun eacutequivalent des
phospholipides plaquettaires (la ceacutephaline) de Ca+2et drsquoun activateur de la phase contact
(kaolin silice ceacutelite acide ellagiquehellip) [50]
Les valeurs de reacutefeacuterence chez lrsquoadulte sont habituellement comprises entre 30 et 40
secondes (selon le reacuteactif utiliseacute)
Un allongement significatif du TCA et deacutefini par un rapport temps maladetemps teacutemoin
supeacuterieur agrave 12
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
35
b Echantillonnage Preacuteparation des eacutechantillons Pour le dosage de TP et TCK il faut suivre les eacutetapes
mentionneacutees Le plasma pool deacuteplaquetteacutes est un meacutelange de plasmas deacuteplaquetteacutes de 2
volontaires sains non traiteacutes
Aussi nous avonstravailleacute sur un plasma dun malade dheacutemophilie
Preacutelever du sang sur citrate tri sodique par ponction veineuse
Centrifuger agrave 40 toursminute et laisser seacutedimenter afin dobtenir un plasma pauvre
en plaquettes
Figure III6 Tube Citrate apregraves centrifugation
Le test doit ecirctre reacutealiseacute dans les quatre heures qui suivent le preacutelegravevement
Laisser le plasma agrave une tempeacuterature entre 20 agrave 27degC avant le test
c Mateacuteriel
Centrifugeuse
Bain-marieacuteagrave 37degC
Micropipettes reacuteglables (50-200 (JI)
Tubes agrave heacutemolyse
Chronomegravetre
Appareil de mesure
d Reacuteactifs
Ceacutephaline plus Kaolin agrave reconstituer selon les recommandations du fabricant
Solution Chlorure de calcium (CaCl2) agrave 0025 M
Plasma pauvre en plaquettes (PPP)
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
36
Figure III7 Appareil de mesure coagulomeacutetre (thrombotimer 1)
e Mode opeacuteratoire (TCK) La technique peut se faire soit avec un coagulomegravetre et bain-marie on utilise ce dernier agrave
une tempeacuterature constante 37degC
Les reacuteactifs du TCK sont reconstitueacutes agrave lrsquoavance en diluant le reacuteactif (Dapttinreg TC) par
lrsquoeau distilleacutee Ensuite on deacutepose le reacuteactif dans les eppendorfs qui doivent ecirctre conserveacutes
agrave 2-8degC
prendre 4 tubes agrave heacutemolyse de 5 ml et verser dans chaque tube 240microl Plasma
(teacutemoin malade et controcircle)
verser dans chaque tube 60microl de dithiolethiones (A ndash A1 ndash B ndash B1)
placeacute dans un bain marie agrave 37degC pour meacutelanger incuber exactement pendant 5 agrave 15
min
Pour deacutebuter la manipulation preacutechauffer la solution de CaCl2 et le reacuteactif
reconstitueacute
Dapttinreg TC agrave 37degC
Puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les puits de Lrsquoappareil
coagulometre et on distribue la bille magneacutetique Ensuite introduit dans chaque
cupule 100 μl drsquoeacutechantillon de (plasma+DTT)
Agiter par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
ajouter 100 microl de la solution de TCK
Puis ajouter 100 microl de la solution de CaCl2 0025 M (25 mmolL 37degC)
puis noter le temps de coagulation
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
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[26] Fields E J Amer Chem Soc 77 p 4255 (1955) [27] Mollier Y et lozach N Bull Soc Chim Fr p 614 (1961)
[28] Saiumldi M Thegravese de Doctorat luniversiteacute de Rennes 1 (1988)
[29] Dietzsch W Olk R M Puaux J P et Anorg Z Allg Chem 31 p 600 (1991)
[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
(1998)
[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
107(2005)
[40] Lauralee Sh physiologie humaine 2e eacutedition de boeck (2006)
[41] Butenaset S Mann K G Biochemistry (Moscow) 67(1) p 3-12 (2002)
[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
Nursing 24(3) p 123-131(2007)
[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
37
f Reacutesultats et discussion
Tableau III5 Les reacutesultats de dosage TCA de teacutemoin
Composeacute eacutetudieacute A A1 B B1 Controcircle
TCA (s) 531 501 435 50 382
Figure III8 Classification des valeurs TCA de teacutemoin
Les reacutesultats est exprimeacute en secondes par rapport agrave un teacutemoin (meacutelange de plasmas de
sujets normaux) dont la valeur se situe en moyenne entre 25 et 40 seconde selon le reacuteactif
utiliseacute
Le TCA du patient est consideacutereacute comme allongeacute srsquoil excegravede de 20 celui du teacutemoin [50] Le TCK est allongeacutee dans les cas suivants
Deacuteficit important en fibrinogegravene (infeacuterieur agrave 1gl)
Deacuteficit en facteurs anti-heacutemophiliques A et B et en facteur XII et XI
Deacuteficit acquis des facteurs K-deacutependant
0
10
20
30
40
50
60
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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129-131 (2014)
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[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
38
Tableau III6 Les reacutesultats de dosage TCA de malade
Teacutemoin
Pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
254 38 382 281 1507 2534 1242 TCA (s)
Figure III9 Classification des valeurs TCA de malade
Agrave la lumiegravere des reacutesultats obtenus il apparait clairement que les dithiolethiones eacutetudies
exercent une activiteacute anticoagulante positivement
En effet les resultants montre que pas de difference significative entre le controcircle neacutegatif
(382 Sec) et le plasma standard (254 Sec pour le volontaire sain) ce qui confirme que
lrsquoeffet de DMSO sur la coagulation est neacutegligeable alors qursquoen preacutesence des
dithiolethiones lrsquoallongement du TCK est significatif
Le deacuteriveacute dithiolique B1 preacutesente un faible temps de TCA 281 Sec infeacuterieur au controcircle
Nous pensons que cette moleacutecule exerce un effet coagulante
Nous observons que la 4-tolyl-12-dithiole-3-thione B preacutesente un fort temps de TCA par
contre le faible temps est le sel B1 (reacutesultat de patient dheacutemophilie) Cette remarque
sexplique par linfluence du facteur de lipophilie
0
50
100
150
200
250
300
A1 B A Controcircle B1
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
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[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
39
Donc nous devons eacutetablir une relation entre le temps TCA et le coefficient de partage logP
Figure III10 La relation de TCA teacutemoin avec le coefficient de partage
Figure III11 La relation de TCA malade avec le coefficient de partage
A cause de la nature de plasma leffet de la lipophilie est tregraves important permettre de
diffuser les anticoagulants agrave travers de celle-ci
Jared Blum Et Coll ont constateacute que leffet anticoagulante par la Dabigatran (medicament
anticoagulante lipophile utiliseacute agrave USA) est correacuteleacute avec la lipophilie [51]
10 15 20 25 30 35
43
44
45
46
47
48
49
50
51
TCA
(s)
Log P
Y= 3114X + 5497
R2=0897
10 15 20 25 30 35
20
40
60
80
100
120
140
160
TCA
(s)
Log P
Y= 5214X-3734
R2 = 0989
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
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[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
40
En geacuteneacuterale agrave la comparaison des reacutesultats de malade dheacutemophilie et le teacutemoin nous
trouvons que les deacuteriveacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante
bien que le malade administre leur meacutedicament qui contient les facteurs coagulante au
matin de reacutealisation les expeacuteriences de meacutesure le TP et le TCA
III22Le temps de quick TQ
a Principe Le temps de Quick est le temps neacutecessaire agrave la coagulation du plasma traiteacute dans une
certaines conditions Cela permet dexplorer les facteurs de la coagulation dits vitamine K
deacutependants
Il est possible de convertir ce temps en taux de prothrombine TP par rapport agrave un plasma
teacutemoin deacutefinit agrave 100 (ou pourcentage dactiviteacute prothrombique globale)
b Mode opeacuteratoire(TP) Thromboplastine calcique (Neacuteoplastinereg CI) = Tube TP est preacutealablement Chauffeacute
agrave 37degC (15 minutes) puis on met deux cupules (pour avoir la moyenne) dans les
puits de lrsquoappareil coagulometre et on distribue la bille magneacutetique
Dans chaque cupule on introduit 100 μl plasma du patient
Agiter la cupule par le vortex et incuber 3 minutes exactement agrave 37degC
Puis ajouter 100 microl de la solution de Thromboplastine (reacuteactif Neacuteoplastinereg)
noter le temps de coagulation(en seconde)
La derniegravere eacutetape consiste agrave ranger les reacuteactifs deacutecontaminer le mateacuteriel utiliseacute et le
ranger retirer les gants et les jeter dans la poubelle adeacutequate enregistrer les reacutesultats et
faire la transmission en tenant compte de la confidentialiteacute
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
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[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
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ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
41
c Reacutesultats et discussion
Tableau III7 Les reacutesultats de dosage TQ
Teacutemoin
pure
Malade
pure
Controcircle B1 B A1 A Composeacute
eacutetudieacute
115 115 15 384 372 665 784 TQ(s)
100 100 11 115 49 38 TP ()
Figure III12 Classification de les valeurs TQ
Les reacutesultats obtenus lors de la mesure du TQ peuvent varier avec lrsquoorigine de la
thromboplastine la normale eacutetant de 10 agrave 14 secondes crsquoest pourquoi le TQ est converti en
pourcentage drsquoactiviteacute (appeleacute improprement taux de prothrombine ) par rapport agrave un
plasma teacutemoin dont diffeacuterentes dilutions ont permis de tracer une droite drsquoeacutetalonnagela
normale se situe entre 70 et 100 drsquoactiviteacute le taux vraie physiologiquement peu avec
lrsquoacircge sauf au moment de la naissance ou il peut baisser jusquagrave 15 pour revenir a la
normale vers le huitiegraveme jour [50]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A A1 B1 B Controcircle
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
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confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
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[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
Nursing 24(3) p 123-131(2007)
[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Activiteacute antioxydante et activiteacute anti coagulant
42
Figure III13 La relation de TQ avec le coefficient de partage
Nous avons trouveacute une bonne correacutelation entre le TQ et le coefficient de partage avec un
coefficient de deacutetermination R2 = 0851
Nous rappelons que les composeacutes entreacutes dans cette correacutelation sont tous les
dithiolethiones eacutetudies sauf le compose A1
A la lumiegravere de ces reacutesultats les composeacutes qui ont une faible lipophilie donnent un faible
temps de quick
10 15 20 25 30 35
40
50
60
70
80
TQ(s
)
Log P
Y=1879X+2090
R2 =0851
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
62(10) p 628 (2007)
[2] Favier A Lrsquoactualiteacute Chimique p108 - 115 (2003)
[3] Benaissa B thegravese de doctorat universiteacute de Toulouse (2012)
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[5] Paster J O C thegravese de doctorat universiteacute de Paul-Sabatier de Toulouse (2005)
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FOOD SAFETY3 p 21-33 (2004)
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[8] Igor P L B thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[9] Lisu W Jui H Y Hsiao L L et Ming J W Journal of Food and Drug Analysis 11(1)
p 60-66 (2003)
[10] Cavin A L thegravese de doctorat universiteacute de Genegraveve p 24 (2007)
[11] Ali SS Kasoju N Luthra A Singh A Sharanabasava H Sahu A et Bora U Food
Res Int 41p 1ndash15(2008)
[12] Sanchez-Moreno C Larrauri J A et Saura-Calixto F J Sci Food Agric 76 p 270ndash
276(1998)
[13] Sanchez-Moreno C Food Sci Tech Int 8(3) p 121-137(2002)
[14] Cao GH Alessio HM et Cutler RG Free Radical Biol Med 14 p 303-311(1993)
[15] Miller N J Rice-Evans C Davies M J Gopinathan V et Milner A Clin Sci 84 p
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[17] Brand-Williams W Cuvelier M E et Berset C Food Sci Technol 28 p 25ndash30(1995)
[18] Oldham Li C May C D SWN Biochem J 300 p 31-36(1994)
[19] Winston GW Regoli F Dugas A Fong J J H et Blanchard K A Free Radical Biol
Med 24 p 480ndash493 (1998)
[20] Wayner D D M Burton G W Ingold K U et Locke S FEBS Letters 187 p 33-
37(1985)
[21] Popov I Lewin G et Baehr R Biomed Biochim Acta 46 p 775ndash779(1987)
[22] Charfi D Thegravese de doctorat universiteacute de Sfax(1995)
[23] Nicolas R Chimie organique 2 Heacuteteacutero eacuteleacutements strateacutegies de synthegravese et chimie
organomeacutetallique De Boeck Supeacuterieur p 189(2009)
Reacutefeacuterence bibliographique
47
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[28] Saiumldi M Thegravese de Doctorat luniversiteacute de Rennes 1 (1988)
[29] Dietzsch W Olk R M Puaux J P et Anorg Z Allg Chem 31 p 600 (1991)
[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
(1998)
[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
107(2005)
[40] Lauralee Sh physiologie humaine 2e eacutedition de boeck (2006)
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[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
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[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
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[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Conclusion geacuteneacuterale
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
62(10) p 628 (2007)
[2] Favier A Lrsquoactualiteacute Chimique p108 - 115 (2003)
[3] Benaissa B thegravese de doctorat universiteacute de Toulouse (2012)
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[5] Paster J O C thegravese de doctorat universiteacute de Paul-Sabatier de Toulouse (2005)
[6] Lee J Koo N et Min DB COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND
FOOD SAFETY3 p 21-33 (2004)
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[8] Igor P L B thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
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p 60-66 (2003)
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[11] Ali SS Kasoju N Luthra A Singh A Sharanabasava H Sahu A et Bora U Food
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[12] Sanchez-Moreno C Larrauri J A et Saura-Calixto F J Sci Food Agric 76 p 270ndash
276(1998)
[13] Sanchez-Moreno C Food Sci Tech Int 8(3) p 121-137(2002)
[14] Cao GH Alessio HM et Cutler RG Free Radical Biol Med 14 p 303-311(1993)
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[19] Winston GW Regoli F Dugas A Fong J J H et Blanchard K A Free Radical Biol
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[20] Wayner D D M Burton G W Ingold K U et Locke S FEBS Letters 187 p 33-
37(1985)
[21] Popov I Lewin G et Baehr R Biomed Biochim Acta 46 p 775ndash779(1987)
[22] Charfi D Thegravese de doctorat universiteacute de Sfax(1995)
[23] Nicolas R Chimie organique 2 Heacuteteacutero eacuteleacutements strateacutegies de synthegravese et chimie
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[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
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[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
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107(2005)
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[41] Butenaset S Mann K G Biochemistry (Moscow) 67(1) p 3-12 (2002)
[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
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[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Conclusion geacuteneacuterale
44
Au cours de ces travaux nous avons eacutetudieacute deux composeacutes dithiolethiones et leur deacuteriveacutes
4-pheacutenyl-12-dithiole-3-thione (A)
3-meacutethylthio-4-pheacutenyl-12- Dithiolyliumcontreion (I-) (A1)
4-p-tolyl-12-dithiole-3-thione(B)
3-meacutethylthio-4-p-tolyl-12- dithiolyliumcontreion (CH3SO4-) (B1)
Comme nous avons eacutetudieacute les proprieacuteteacutes physicochimiques de quelques dithiolethiones
Ce travail est une contribution agrave lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute antioxydante des dithiolethiones et
lrsquoeffet anti coagulation de ces composeacutes
Enfin pour les dithiolethiones nous trouvons que le composeacute 4-pheacutenyl-12-dithiole-3- thione
a une grande capaciteacute reacuteductrice AEAC=0460 M cependant le composeacute A1 donne une
faible valeur dAEAC=0301M
Alors les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes
eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Notre travail de PFE Paramegravetres de lrsquoHeacutemostase (TP TCK) et le suivi des patients
heacutemophiles de sang au sein du laboratoire du sang Ouargla nous donne loccasion de
confirmer lrsquointeacuterecirct pratique des tests du taux de prothrombine (TP) du temps de ceacutephaline
Kaolin (TCK) Ces paramegravetres jouent un rocircle agrave la fois dans le diagnostic et le suivi
theacuterapeutique
Les dithiolethiones eacutetudieacutees preacutesentent une activiteacute anticoagulation tregraves importante
Ce travail a aussi permis drsquoeacutetablir la relation et le rocircle des trois responsables sanitaires qui
sont le meacutedecin le biologiste et le pharmacien qursquoon peut aussi appeler les trois points du
triangle de sanitaire dont leurs fonctions sont attacheacutees et enchaicircneacutees
Reacutefeacuterence bibliographique
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
62(10) p 628 (2007)
[2] Favier A Lrsquoactualiteacute Chimique p108 - 115 (2003)
[3] Benaissa B thegravese de doctorat universiteacute de Toulouse (2012)
[4] Halliwell B Br J Exp Pathol 70 p 737 - 757(1989)
[5] Paster J O C thegravese de doctorat universiteacute de Paul-Sabatier de Toulouse (2005)
[6] Lee J Koo N et Min DB COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND
FOOD SAFETY3 p 21-33 (2004)
[7] Sies H Am J Med91 p 31-38 (1991)
[8] Igor P L B thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[9] Lisu W Jui H Y Hsiao L L et Ming J W Journal of Food and Drug Analysis 11(1)
p 60-66 (2003)
[10] Cavin A L thegravese de doctorat universiteacute de Genegraveve p 24 (2007)
[11] Ali SS Kasoju N Luthra A Singh A Sharanabasava H Sahu A et Bora U Food
Res Int 41p 1ndash15(2008)
[12] Sanchez-Moreno C Larrauri J A et Saura-Calixto F J Sci Food Agric 76 p 270ndash
276(1998)
[13] Sanchez-Moreno C Food Sci Tech Int 8(3) p 121-137(2002)
[14] Cao GH Alessio HM et Cutler RG Free Radical Biol Med 14 p 303-311(1993)
[15] Miller N J Rice-Evans C Davies M J Gopinathan V et Milner A Clin Sci 84 p
407ndash412(1993) [16] Benzie I F F et Strain J J Analytical Biochemistry 239 p 70-76(1996)
[17] Brand-Williams W Cuvelier M E et Berset C Food Sci Technol 28 p 25ndash30(1995)
[18] Oldham Li C May C D SWN Biochem J 300 p 31-36(1994)
[19] Winston GW Regoli F Dugas A Fong J J H et Blanchard K A Free Radical Biol
Med 24 p 480ndash493 (1998)
[20] Wayner D D M Burton G W Ingold K U et Locke S FEBS Letters 187 p 33-
37(1985)
[21] Popov I Lewin G et Baehr R Biomed Biochim Acta 46 p 775ndash779(1987)
[22] Charfi D Thegravese de doctorat universiteacute de Sfax(1995)
[23] Nicolas R Chimie organique 2 Heacuteteacutero eacuteleacutements strateacutegies de synthegravese et chimie
organomeacutetallique De Boeck Supeacuterieur p 189(2009)
Reacutefeacuterence bibliographique
47
[24] Orsquodwyer P J szarka C brennan J M laub P B et GALLO J M Clinical Cancer
Research 6 p 4692ndash4696 (2000)
[25] Zhang Y et munda Y Mol Cancer Ther 7(11) pp 3470-3479 (2008)
[26] Fields E J Amer Chem Soc 77 p 4255 (1955) [27] Mollier Y et lozach N Bull Soc Chim Fr p 614 (1961)
[28] Saiumldi M Thegravese de Doctorat luniversiteacute de Rennes 1 (1988)
[29] Dietzsch W Olk R M Puaux J P et Anorg Z Allg Chem 31 p 600 (1991)
[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
(1998)
[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
107(2005)
[40] Lauralee Sh physiologie humaine 2e eacutedition de boeck (2006)
[41] Butenaset S Mann K G Biochemistry (Moscow) 67(1) p 3-12 (2002)
[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
Nursing 24(3) p 123-131(2007)
[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
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46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
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[5] Paster J O C thegravese de doctorat universiteacute de Paul-Sabatier de Toulouse (2005)
[6] Lee J Koo N et Min DB COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND
FOOD SAFETY3 p 21-33 (2004)
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[8] Igor P L B thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[9] Lisu W Jui H Y Hsiao L L et Ming J W Journal of Food and Drug Analysis 11(1)
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[11] Ali SS Kasoju N Luthra A Singh A Sharanabasava H Sahu A et Bora U Food
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276(1998)
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[15] Miller N J Rice-Evans C Davies M J Gopinathan V et Milner A Clin Sci 84 p
407ndash412(1993) [16] Benzie I F F et Strain J J Analytical Biochemistry 239 p 70-76(1996)
[17] Brand-Williams W Cuvelier M E et Berset C Food Sci Technol 28 p 25ndash30(1995)
[18] Oldham Li C May C D SWN Biochem J 300 p 31-36(1994)
[19] Winston GW Regoli F Dugas A Fong J J H et Blanchard K A Free Radical Biol
Med 24 p 480ndash493 (1998)
[20] Wayner D D M Burton G W Ingold K U et Locke S FEBS Letters 187 p 33-
37(1985)
[21] Popov I Lewin G et Baehr R Biomed Biochim Acta 46 p 775ndash779(1987)
[22] Charfi D Thegravese de doctorat universiteacute de Sfax(1995)
[23] Nicolas R Chimie organique 2 Heacuteteacutero eacuteleacutements strateacutegies de synthegravese et chimie
organomeacutetallique De Boeck Supeacuterieur p 189(2009)
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47
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Research 6 p 4692ndash4696 (2000)
[25] Zhang Y et munda Y Mol Cancer Ther 7(11) pp 3470-3479 (2008)
[26] Fields E J Amer Chem Soc 77 p 4255 (1955) [27] Mollier Y et lozach N Bull Soc Chim Fr p 614 (1961)
[28] Saiumldi M Thegravese de Doctorat luniversiteacute de Rennes 1 (1988)
[29] Dietzsch W Olk R M Puaux J P et Anorg Z Allg Chem 31 p 600 (1991)
[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
(1998)
[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
107(2005)
[40] Lauralee Sh physiologie humaine 2e eacutedition de boeck (2006)
[41] Butenaset S Mann K G Biochemistry (Moscow) 67(1) p 3-12 (2002)
[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
Nursing 24(3) p 123-131(2007)
[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
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48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Reacutefeacuterence bibliographique
46
Reacutefeacuterences bibliographiques
[1] Haleng J Pincemail J Defraigne JO charlier C et chapelle JP Rev Med Liege
62(10) p 628 (2007)
[2] Favier A Lrsquoactualiteacute Chimique p108 - 115 (2003)
[3] Benaissa B thegravese de doctorat universiteacute de Toulouse (2012)
[4] Halliwell B Br J Exp Pathol 70 p 737 - 757(1989)
[5] Paster J O C thegravese de doctorat universiteacute de Paul-Sabatier de Toulouse (2005)
[6] Lee J Koo N et Min DB COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND
FOOD SAFETY3 p 21-33 (2004)
[7] Sies H Am J Med91 p 31-38 (1991)
[8] Igor P L B thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[9] Lisu W Jui H Y Hsiao L L et Ming J W Journal of Food and Drug Analysis 11(1)
p 60-66 (2003)
[10] Cavin A L thegravese de doctorat universiteacute de Genegraveve p 24 (2007)
[11] Ali SS Kasoju N Luthra A Singh A Sharanabasava H Sahu A et Bora U Food
Res Int 41p 1ndash15(2008)
[12] Sanchez-Moreno C Larrauri J A et Saura-Calixto F J Sci Food Agric 76 p 270ndash
276(1998)
[13] Sanchez-Moreno C Food Sci Tech Int 8(3) p 121-137(2002)
[14] Cao GH Alessio HM et Cutler RG Free Radical Biol Med 14 p 303-311(1993)
[15] Miller N J Rice-Evans C Davies M J Gopinathan V et Milner A Clin Sci 84 p
407ndash412(1993) [16] Benzie I F F et Strain J J Analytical Biochemistry 239 p 70-76(1996)
[17] Brand-Williams W Cuvelier M E et Berset C Food Sci Technol 28 p 25ndash30(1995)
[18] Oldham Li C May C D SWN Biochem J 300 p 31-36(1994)
[19] Winston GW Regoli F Dugas A Fong J J H et Blanchard K A Free Radical Biol
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[20] Wayner D D M Burton G W Ingold K U et Locke S FEBS Letters 187 p 33-
37(1985)
[21] Popov I Lewin G et Baehr R Biomed Biochim Acta 46 p 775ndash779(1987)
[22] Charfi D Thegravese de doctorat universiteacute de Sfax(1995)
[23] Nicolas R Chimie organique 2 Heacuteteacutero eacuteleacutements strateacutegies de synthegravese et chimie
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[24] Orsquodwyer P J szarka C brennan J M laub P B et GALLO J M Clinical Cancer
Research 6 p 4692ndash4696 (2000)
[25] Zhang Y et munda Y Mol Cancer Ther 7(11) pp 3470-3479 (2008)
[26] Fields E J Amer Chem Soc 77 p 4255 (1955) [27] Mollier Y et lozach N Bull Soc Chim Fr p 614 (1961)
[28] Saiumldi M Thegravese de Doctorat luniversiteacute de Rennes 1 (1988)
[29] Dietzsch W Olk R M Puaux J P et Anorg Z Allg Chem 31 p 600 (1991)
[30] Rahmani Z Saiumldi M Dakmouche M et Yousfi M Journal of Life Sciences 8(1) p82-
88(2014)
[31] Chollet M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1997)
[32]Chollet M Legouin B et Burgot J L Chem J Soc Perkin Trans 2 p2228-2229
(1998)
[33] Kehl NL Jeffrey G A Acta cryst 11p 813(1958)
[34] Bona M Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de Rennes 1 (1995)
[35] Rahmani Z Saiumldi M et Dakmouche M Annales des Sciences et Technologie 6(2) p
129-131 (2014)
[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
[39]Bouckert I V walravens Th et isicht M Revue scientifique des ISILF 19 p 91-
107(2005)
[40] Lauralee Sh physiologie humaine 2e eacutedition de boeck (2006)
[41] Butenaset S Mann K G Biochemistry (Moscow) 67(1) p 3-12 (2002)
[42] Weston BW et monahan P E Haemophilia 14 p 1209ndash1213(2008)
[43] Monsieur I PB thegravese de doctorat universiteacute de Mali (2003)
[44] James P R Bradley E A Christine M David P L Journal of Pediatric Oncology
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[45] Belhani M Santeacute-MAG 7 p22-23 (2013)
[46] Sonny I G thegravese de doctorat universiteacute Cheikh antadiop de DAKAR (2006)
[47] Santeacute M - 05 p 37 Avril (2012)
[48] Rkain M thegravese de doctorat universiteacute de de Rabat p7-25(1981)
[49] Prieto P Pineda M et Aguilar M Anal Biochem 269 p 337-341(1999)
[50] Kramoroff A Thegravese de Doctorat de luniversiteacute de cergy-pontoise p37 (1999)
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48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
- _GoBack
Reacutefeacuterence bibliographique
47
[24] Orsquodwyer P J szarka C brennan J M laub P B et GALLO J M Clinical Cancer
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[36] Rahmani Z thegravese de doctorat universiteacute douargla (2015)
[37] Dakmouche M thegravese de doctorat universiteacute douargla (2014)
[38] Medkour T thegravese de doctorat universiteacute de Paris XII (2008)
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Reacutefeacuterence bibliographique
48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
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48
[51] Jared B Stephanie C et Jason B Hack Academic Emergency Medicine 20( 10)
(2013)
Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
- 12 concpdf (p55-56)
- 13 refepdf (p57-60)
- 14 reacutesumepdf (p61)
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Ce travail vise agrave eacutetudier lactiviteacute reacuteductrice des dithiolethiones qui sont deacutetermineacutees selon la meacutethode de
Phosphomolybdate(PM) baseacutee sur la reacuteaction chimique de reacuteduction du Molybdate (VI) au Molybdate (V)
Ainsi les dithiolethiones preacutesentent une activiteacute anticoagulante tregraves importante pour cette raison nous eacutetudions
leffet drsquoanticoagulante des dithiolethiones
Les reacutesultats de ces travaux nous ont permis drsquoaffirmer que lrsquoensemble des composeacutes eacutetudieacutes preacutesentent de tregraves
bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes comparativement aux antioxydants pris comme reacutefeacuterence
Et les composeacutes dithioliques donnent une activiteacute anticoagulante tregraves importante Sauf le deacuteriveacute dithiolique B1 cette
moleacutecule exerce un effet coagulant
Mots cleacutes dithiolethiones le stress oxydant anti coagulation Molybdate
Reacutesumeacute
ثنائي ثیولثیون الحلقي حیث نحددھا بطریقة مولیبدات للمركبات لألكسدة المضادة النشاطیة دراسة في مساھمة العمل یعتبرھذا (V)إلى مولیبدات (VI)الفوسفور التي تعتمد على إرجاع مولیبدات
مركبات ثنائي ثیولثیون لھا دور كبیر في النشاطیة المضادة للتخثر و لھذا السبب قمنا بدراسة نشاطیة المضادة للتخثر أیضا لمركبات ثنائي ثیول ثیون
مقارنة بمضادات معتبرة لألكسدة مضادة خصائص لدیھا المدروسة المركبات جمیع أن من بالتأكد لنا سمحت األعمال ھذه نتائج أكسدة التي أتخذت كمرجع
فكانت لھ خاصیة مخثرة B1المركبات الثیولیة المدروسة كانت لھا خاصیة مضادة لتخثر ماعدا المركب كل
كسدة مضادات التخثر المولیبداتثنائي ثیولثیون الحلقي مضادات األ مركباتالكلمات الدالة
Abstract
This work aims to study the reducing activity of dithiolethiones which are determined by the method of
phosphomolybdate (PM) based on the chemical reaction of reduction of molybdate (VI) in Molybdate
(V)
Thus dithiolethiones have very significant anticoagulant activity for this reason we study the
anticoagulant effect of dithiolethiones
The results of this work allowed us to confirm that all the compounds studied have very good antioxidant
properties compared to antioxidants as a reference
And dithioliques compounds give a major anticoagulant activity Except dithiolique B1 derivative molecule
that has a coagulant effect
Key words dithiolethiones oxidative stress anti coagulation Molybdate
ملخص
- 1 page de garde momoire copdf (p1)
- 2 remercipdf (p2)
- 3 deacutedicacespdf (p3)
- 4 Liste desabreacuteviations copdf (p4)
- 5 Liste des figures COpdf (p5)
- 6 Liste des tableaux COpdf (p6)
- 7 SOMpdf (p7-9)
- 8 Introductionpdf (p10-11)
- 9 Chapitre Ipdf (p12-26)
- 10 Chapitre IIpdf (p27-37)
- 11 chapitre IIIpdf (p38-54)
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