Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas
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Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas
• Laboratório Clínico• 4o ano Biomedicina
Enterobacteriaceaemaior e mais heterogênea família de bactérias Gram negativas de importância clínica
- representam 80% ou mais de todos os Gram negativos isolados na rotina microbiológica- são responsáveis por cerca de 70% das infecções urináias e 50% das septicemias
Constituída por 27 gêneros / 102 espécies / 08 grupos indefinidos.
Independente da complexidade, mais de 95% das amostras implicadas em caso clínicos são colocadas em 25 espécies
E. coliKlebsiella sp
Definição
• Bacilos Gram negativos • Fermentadores da glicose• Oxidase negativa e catalase +• Ausência da atividade da citocromo-oxidasediferencia de outros gram-
negativos • Móveis / imóveis • Crescem em meios comuns - meios básicos (caldo peptona) - meios ricos
(ágar sangue, ágar chocolate e CLED) – meios seletivos (Mac Conkey)• Reduzem os nitratos a nitritos
Habitat Plantas, solo, água, intestino do homem e animais
Enterobacteriaceae
Enterobacteriaceae
Nomenclatura e Classificação
• Métodos Fenotípicos• Moleculares novas espécies reclassificação
Classificação• Gêneros ( dezenas) • Espécies ( centenas )• biotipos e sorotipos Complexos
• Escherichia coli•Klebsiella pneumoniae•Proteus mirabilis e P. vulgaris•Enterobacter spp•Salmonella typhi e S. paratyphi A e B•Salmonella enteritidis e S. cholerae suis•Shigella spp•Yersinia pestis e Y. enterocolitica•Citrobacter spp•Serratia
Enterobacteriaceas com importância médica
Enterobacteriaceae
Grupos1- Escherichia2- Klebsiella-Enterobacter-Serratia3- Proteus-Morganell-Providencia4- Citrobacter5-Shigelas6 – Salmonelas7- Outras enterobacteriaceae
Identificação de Enterobactérias
Classificação - patogenia
- Enteropatógenos
- Infecções nosocomiais - espécies importantes
- Outras espécies - raras em material clínico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais
Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normaldo homem.
• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário
• Abcessos, pneumonia, meningites
• Infecções nosocomiais
Família EnterobacteriaceaePatogenia
Infecções intestinais
Características• normalmente na comunidade• DTA – doença transmitida por alimento • surtos / casos isolados• hospitalar
Patógenos entéricos clássicos
Salmonella sppShigella sppE.coli - categorias diarreiogênicasYersinia enterocolitica
Família EnterobacteriaceaePatogenia
Infecções extra-intestinais Comunidade Hospitalar
• Qualquer espécie• Fatores de risco:
PacienteVeículos de transmissãoAlimentos contaminados
Espécies mais comuns
Escherichia coliKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaProteus mirabilisEnterobacter sppSalmonella ( sorotipos)Serratia marcescensCitrobacter sppProvidencia spp
Família EnterobacteriaceaePatogenia
ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
Família Enterobacteriaceae
Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN( 18 a 24h 1 mm de diâmetro).
A enterobactéria sempre cresce nos meios ricos (ágar sangue, chocolate), bem como nos meios seletivos: ágar Mac Conkey e Salmonella-ShigellaOs Gram positivos como regra não crescem em ágar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, exceto os enterococos que podem crescer No ágar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, além das enterobactérias e dos enterococos, podemcrescer bactérias não fermentadoras e Candida
Secreções: ágar sangue e Mac Conkey
Líquidos nobres e biópsias: Ágar Chocolate e Mac Conkey
Fezes: Mac Conkey e Salmonella-Shigella
Urina: CLED ou ágar sangue e Mac Conkey, etc.
1- Exame macroscópico da cultura:• Aspecto morfológico das colônias• Tempo de crescimento e tamanho da colônia• Observar pureza da cultura
2-Exame microscópico da cultura:• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc
ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
Família Enterobacteriaceae
Aspecto das colônias
Agar MacConkey
Aspecto das colônias
Salmonella. E.cloacaeE.coli
1. Fermentação da glicose2. Fermentação da lactose3. Motilidade4. Utilização de citrato5. Descarboxilação da lisina6. Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)7. Produção de gás (CO2)8. Oxidase9. Produção de indol10. Produção de urease11. Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase12. Produção de gelatinase ou opção DNAse
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Principais provas para a identificação das enterobactérias de importância clínica
Provas complementares de Identificação
•Fermentação de outros carboidratos: sacarose, maltose, arabinose, salicina, dulcitol, manitol, etc.•Utilização de aminoácidos: arginina e ornitina•Hidrólise da esculina, etc.•Utilização de acetato•Provas úteis, mas pouco utilizadas: vermelho de metila (VM), voges-proskauer (VP), crescimento em KCN, tartarato de jordan e lipase.
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Esquemas de identificação - determinação dos gêneros e espécies mais isolados na clínica, utilizando provas características de cada gênero e espécie.Critérios para identificação - facilidade de execução, facilidade de interpretação, custo, rapidez para leitura
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivos• IAL (Pessoa e Silva) • EPM-MILI• TSI
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivosIAL (Pessoa e Silva) - “Instituto Adolfo Lutz” – triagem de enterobactérias – 9 provas
em apenas um tubo de ensaio: indol (tampa), fermentação da sacarose e glicose e produção de gás, fenilalanina, uréia, H2S, Lisina, Motilidade
- E. coli- Shigella (indol positiva)- Shigella (indol negativa)- Enterobacter aerogenes- Klebsiella pneumoniae- Klebsiella spp. (sacarose negativa)
Baseado nestas provas é possível identificar as seguintes bactérias:
- Enterobacter cloacae- Providencia spp. (uréia positiva) ou Morganella morganii- Providencia spp. (uréia negativa)- Proteus mirabilis- Proteus vulgaris- Salmonella spp.
- Salmonella typhi- Citrobacter freundii- Serratia marcescens (provascomplementares)- Vibrio cholerae- Vibrio spp.- bactérias não fermentadoras
Meio IAL - vantagem = prático para inoculação e de baixo custo - desvantagem = dificuldade de interpretação de tantas provas (experiência)
Família Enterobacteriaceae Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivosEPM-MILI-Citrato - mesma combinação de reações do meio IAL ou Rugai (fenilalanina,
fermentação da glicose, gás, H2S, uréia), separados em 2 tubos, passando a verificação do indol da tampa do IAL, para o meio MILi após adição do reativo de Kovacs
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivosTSI – Tríplice Açucar Ferro - O meio de TSI é inclinado em bico de flauta, de cor
vermelho-cereja e deve ser inoculado por picada central até o fundo, seguido de espalhamento na superfície e incubação durante 18-24h a 35oC
a) Púrpura/amarelo (ápice púrpuro e base amarela) = fermentação apenas da glicose (lactose e sacarose negativas)b) Amarelo/amarelo (ápice e base amarelos) = fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açúcares)c) Presença de gás (CO2) = bolhas ou meio fragmentadod) H2S positivo = presença de precipitado negro
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Família Enterobacteriaceae Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Provas complementares:
Fermentação de açúcares
Pesquisa de enzimasDNasegelatinase,lipase
Identificação Bioquímica
Gram Oxidase VM e VP
Família Enterobacteriaceae
Série completa - 47 testes
vermelho de metila (VM)produção de acetilmetilcarbinol a partir dextrose - voges-proskauer (VP)
Reação de VM e VP
Família Enterobacteriaceae
• Enterobacter• Klebsiella• Serratia
Maioria das espécies dos outros Gêneros• Salmonella• Shigella• E.coli• Proteus• Morganella• Providencia• Citrobacter• Kluyvera
Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -
vermelho de metila (VM), voges-proskauer (VP),
Família Enterobacteriaceae
Identificação
A fonte de informação mais utilizada baseia-se na tabela organizada por Farmer (1991) contando com 47 provas, e os respectivos percentuais de positividade para 28 diferentes gêneros e 121 espécies de enterobactérias. Os principais gêneros e espécies de importância clínica podem ser caracterizados com >95% de acerto com poucas provasValores positivos ou negativos referem-se a 80% ou mais de definiçãoPB (padrão bioquímico) = probabilidade teórica da bactéria em questão; apresentar o padrãobioquímico analisado (Exemplo: PB para Proteus vulgaris em relação às provas, H2S +(98%) FA +(95%) Indol + (98%) (multiplicar os percentuais de ocorrência)= 92% PB baixo significa ter outro padrão mais frequente
Gram da colônia isolada – sempre fazer o Gram para evitar enganos de interpretação (diferenciar cocos de bacilos, Gram positivos de Gram negativoe e leveduras).Prova da oxidase – indicada para detectar e/ou diferenciar o grupo Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio que também são fermentadores.Prova do metabolismo fermentador – triagem utilizando os meios de OF glicose (quando suspeitar de não fermentador), TSI (Tríplice Açucar Ferro) ou EPM (Rugai sem sacarose), para enterobactérias.Série bioquímica complementar – sempre necessária para caracterizar gênero e espécie. O número de provas vai permitir maior ou menor discriminação
BGN BGN OxidaseOxidase
Lac + Lac -
E.coliEnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
ShigellaSalmonellaSerratiaProteusProvidenciaMorganella
Ágar Mac ConkeyÁgar Mac Conkey
IALIALIALIAL
Cit. SimmonsCit. SimmonsCit. SimmonsCit. Simmons
+
EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter
-E.coliE.coli
VP +VP +
+
SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)
SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)
-ShigellaMorganellaShigellaMorganella
Fluxograma identificação bacilos gram negativos
• LPS Antígeno somático O polissacarídico Polissacárido do core (comum a todas)Lipidio A
•Antígeno K (Kapsel) = cápsula, proteico ou polissacarídico•Antígeno H = proteínas flagelares (flagelina). Enterobactérias móveis
Importância dos Ag da parede celular
Enterobacteriaceae
A classificação antigênica das Enterobacteriáceas baseia-se na presença dos Ags O, K, e H e detecta-se por aglutinação com soros específcos
Enterobactérias Antígeno completo denominadas lisas
Que não contem rugosas
Identificação Sorológica
Identificação SorológicaFamília Enterobacteriaceae
Sorotipos são divisões baseadas no relacionamento antigênicoBiotipos são amostras do mesmo sorotipo que diferem em características bioquímicas
Em atividades de rotina de Bacteriologia Clínica, a identificação ou confirmação sorológica é feita apenas com germes comprovadamente patogênicos e de importância epidemiológica como Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli Yersina enterocolitica
•Gota do anti-soro (coelhos: polivalente – Ac contra várias enterobactérias monovalente – Ac individuais contra antígenos O, K e H
Suspensão densa (leitosa) bactéria salina 0,85%
Aglutinação Teste positivo
Gênero:Escherichia
Compreende as espécies E. coli, E. hermanii, E. fergusonii, E.vulneris e E. blattae. Seis são as categorias de E. coli enteropatogênicas: E. coli enteropatogênica clássica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC) E. coli enteroaderente (EAEC) e E. coli enteroagregativa (EAggEC).
Trato unrinário , doenças diarréicas , sepse , meningite
Identificação Sorológica
E. coli
Gênero: Salmonella
Bactéria do gênero Salmonella vista por microscopia eletrônica. Bactéria do gênero Salmonella vista por microscopia eletrônica.
Febre entérica (febre tifóide), bacteremia com lesões focais , enterocolite
a) Anti-Salmonella polivalente somático (Grupos A,B,C,D,E)b) Anti-Salmonella somático, Grupo D (S. typhi)c) Anti-Salmonella, anti Vi
Identificação Sorológica
Salmonella
Gênero: Klebsiella
Trato respiratório – pneumonias (3%)
Gênero:Enterobacter,Citrobacter Serratia,Providencia
•Estão associadas a infecções hospitalares
•Observa-se resistência a múltiplos antibióticos
Enterobacter – capsulas pequenas – trato intestinal, urinaria e sepse
Serratia – pneumonia, bacteremia e endocardite (pacientes viviados em narcotios)
Gênero: YersiniaComposto de no mínimo sete espécie
Yersinia Pestis
•Agente causador de uma das doenças mais devastadora na história•Peste urbana e peste silvestre•Peste bubônica e peste pneumônica
Yersinia enterocolítica
•Causam enterocolite• gastroenterite diarréia, febre e dor abdominal
Yersinia PestisYersinia enterocolítica
Image Courtesy: Wyoming Animal Health and Disease Information Network
Ágar MacConkey
Gênero: Proteus
Associadas a infecção urinárias
As cepas produz grandes quantidades de urease que degrada a uréiacom Co2 e NH3 eleva o Ph da urina facilitando a formação de cálculos renais
Proteus mirabilis
Escherichia coli e Proteus mirabilis: são suscetíveis a vários antibióticos
A maioria das enterobactérias são sensíveis a cefalosporina, aminoglicosídeos, tetraciclinas, cloranfenicol, cotrimoxazol e aos derivados de quilônicos Proteus,Providencia e Serratia resistentes a polimixinas
Klebsiella,Enterobacter e Serratia resistencia a ampicilina
Tratamento
Infecção endógena difícil de ser controlada Evitar o uso irrestrito de antibióticos-> resistência bacteriana
Infecção exógenamais fácil controle
Eficaz com educação e introdução de procedimentos adequados de controle de infecçaop.ex.: lavar bem as mãos E eliminação de roupas sujas em meio com surto identificado
Prevenção e Controle
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
bacilos Gram negativos classificados como não fermentadores (BNFs) são microrganismos aeróbios, não esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia através de fermentação, degradando-os pela via oxidativa
A maioria dos laboratórios de microbiologia clínica não realiza provas de identificação desses microrganismos visto a pouca incidência em amostras ambulatoriais
A caracterização é importante nos casos de infecção hospitalar , embora a incidencia seja pequena, mas esses microrganismos apresentam resistência elevada a vários antibióticos e são capazes de causar infecções graves
BNFs de importância clínica
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
Testes para identificação de BNFs
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
Testes para identificação de BNFs
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
Testes para identificação de BNFs
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
Testes para identificação de BNFs
Bastonetes Gram negativos não fermentadores
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