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  • 8/4/2019 1941 Nutrilites

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    NUTRILITE REQUIREMENTS OF OSMOPHILIC YEASTS'A . G . L O CHHE AD A N D G . B . LANDERKIND e p a r t m e n t o f A g r i c u l t u r e , O t t a w a , C a n a d a

    R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n D e c e m b e r 6 , 1 9 4 1INTRODUCTION

    O s m o p h i l i c y e a s t s c o m p r i s e a n e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t g r o u p o f o r g a n i s m st h r o u g h t h e i r a b i l i t y t o g r o w i n c o n c e n t r a t i o n s o f s u g a r w h i c h s u p p r e s s " o r d i -n a r y " y e a s t s a n d t h e r e b y c a u s e s p o i l a g e o f v a r i o u s f o o d p r o d u c t s o f h i g h s u g a rc o n t e n t b y a l c o h o l i c f e r m e n t a t i o n . V a r i o u s s p e c i e s c a u s i n g s p o i l a g e o f h o n e yh a v e b e e n d e s c r i b e d b y N u s s b a u m e r ( 1 9 1 0 ) , R i c h t e r ( 1 9 1 2 ) , M a r v i n ( 1 9 2 8 ) ,F a b i a n a n d Q u i n e t ( 1 9 2 8 ) , L o c h h e a d a n d H e r o n ( 1 9 2 9 ) a n d S a c c h e t t i ( 1 9 3 2 a ) .S u g a r - t o l e r a n t y e a s t s h a v e b e e n i s o l a t e d f r o m c a n e s y r u p b y Owen ( 1 9 1 3 ) a n dH a l l , J a m e s a n d N e l s o n ( 1 9 3 7 ) , f r o m m a p l e s y r u p b y F a b i a n a n d H a l l ( 1 9 3 3 ) ,f r o m c o n c e n t r a t e d g r a p e m u s t b y K r o e m e r a n d K r u m b h o l z ( 1 9 3 1 ) a n d S a c -c h e t t i ( 1 9 3 2 b ) , f r o m c r e a m f o n d a n t c a n d i e s b y S h u t t ( 1 9 2 5 ) a n d C h u r c h , P a i n ea n d H a m i l t o n ( 1 9 2 7 ) , f r o m d r i e d f r u i t s b y Mrak a n d B a k e r ( 1 9 4 0 ) , w h i l e i n t h i sl a b o r a t o r y s i m i l a r t y p e s h a v e b e e n f o u n d a s t h e c a u s e o f s p o i l a g e o f o r a n g em a r m a l a d e , m o l a s s e s , m a p l e b u t t e r a n d c a n d i e s .T h o u g h s p e c i e s o f S a c c h a r o m y c e s , S c h i z o s a c c h a r o m y c e s , T o r u l a a n d M y c o t o r u l ah a v e b e e n f o u n d c a p a b l e o f g r o w i n g i n s o l u t i o n s o f h i g h s u g a r c o n c e n t r a t i o n ,m e m b e r s o f t h e g e n u s Z y g o s a c c h a r o m y c e s a r e p a r t i c u l a r l y p r o m i n e n t a s s u g a r -t o l e r a n t f o r m s . N o t o n l y a r e t h e s e y e a s t s t h e m o s t c o m m o n l y e n c o u n t e r e do s m o p h i l i c t y p e s , b u t c e r t a i n s p e c i e s o f Z y g o s a c c h a r o m y c e s , e v e n w h e n o u t n u m -b e r e d b y o t h e r y e a s t s , may d e v e l o p a n d p l a y t h e c h i e f p a r t i n f e r m e n t a t i o n( L o c h h e a d a n d F a r r e l l , 1 9 3 1 ) .

    F o r t h e p r o p e r n u t r i t i o n o f t h e common y e a s t , S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e , i t i snow r e c o g n i z e d t h a t i n a d d i t i o n t o a s u i t a b l e s u p p l y o f s a l t s a n d s u g a r w i t ha d e q u a t e n i t r o g e n s o u r c e , a c c e s s o r y g r o w t h - p r o m o t i n g n u t r i l i t e s a r e r e q u i r e d .S u c h g r o w t h f a c t o r s h a v e u s u a l l y b e e n r e f e r r e d t o c o l l e c t i v e l y a s " b i o s " o r a sc o n t r i b u t i n g t o t h e s o - c a l l e d " b i o s e f f e c t " f i r s t d e m o n s t r a t e d b y W i l d i e r s ( 1 9 0 1 ) .T h e m u l t i p l e n a t u r e o f " b i o s " c a m e t o b e r e c o g n i z e d c h i e f l y t h r o u g h t h e w o r ko f M i l l e r a n d a s s o c i a t e s ( c f . E a s t c o t t , 1 9 4 1 ) . F o l l o w i n g t h e d i s c o v e r y b y E a s t -c o t t ( 1 9 2 8 ) o f i n o s i t o l a s t h e f i r s t p u r e s u b s t a n c e w i t h " b i o s " a c t i v i t y , y e a s t -g r o w t h - p r o m o t i n g p r o p e r t i e s o f o t h e r c o m p o u n d s h a v e b e e n d e m o n s t r a t e d -t h i a m i n b y W i l l i a m s a n d Roehm ( 1 9 3 0 ) ; b i o t i n b y K o g l a n d T o n n i s ( 1 9 3 6 ) ;p a n t o t h e n i c a c i d b y W i l l i a m s e t a l . ( 1 9 3 3 ) a s w e l l a s i t s c l e a v a g e p r o d u c t , # - a l a -n i n e b y W i l l i a m s a n d R o h r m a n n ( 1 9 3 6 ) ; a n d p y r i d o x i n ( v i t a m i n B 6 ) b y S c h u l t z ,A t k i n a n d F r e y ( 1 9 3 9 ) a n d E a k i n a n d W i l l i a m s ( 1 9 3 9 ) .M o r e r e c e n t l y W i l l i a m s , E a k i n a n d S n e l l ( 1 9 4 0 ) h a v e s h o w n t h e r e l a t i o n s h i p

    I C o n t r i b u t i o n N o . 1 3 9 ( J o u r n a l S e r i e s ) f r o m t h e D i v i s i o n o f B a c t e r i o l o g y a n d D a i r yR e s e a r c h , S c i e n c e S e r v i c e , D e p a r t m e n t o f A g r i c u l t u r e , O t t a w a .

    3 4 3

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    A . G . L O C H H E A D AND G . B . LANDERKINo f i n o s i t o l , b i o t i n , p a n t o t h e n i c a c i d , t h i a m i n a n d p y r i d o x i n t o t h e g r o w t h o fs t r a i n s o f S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e . S u c h f i n d i n g s h a v e n o t o n l y h e l p e d t o c o n -f i r m M i l l e r ' s w o r k o n t h e c o m p l e m e n t a r y e f f e c t o f " b i o s " f r a c t i o n s , b u t h a v es h o w n t h a t t h e e f f e c t o f " b i o s " i s d u e e s s e n t i a l l y t o a m i x t u r e o f s u b s t a n c e s n owr e c o g n i z e d a s v i t a m i n s , a r e l a t i o n s h i p f i r s t p o s t u l a t e d b y W i l l i a m s ( 1 9 1 9 ) .G r o w t h - f a c t o r r e q u i r e m e n t s f o r o s m o p h i l i c y e a s t s w e r e f i r s t i n d i c a t e d b yF a r r e l l a n d L o c h h e a d ( 1 9 3 1 ) w h o f o u n d Z y g o s a c c h a r o m y c e s m e l l i s t o r e s p o n d t ot h e a d d i t i o n o f a t l e a s t t w o s u b s t a n c e s p r e s e n t i n c o m p l e m e n t a r y f r a c t i o n sd e r i v e d f r o m h o n e y . N e i t h e r s u b s t a n c e w a s i d e n t i c a l w i t h i n o s i t o l , w h e n t h ey e a s t w a s t e s t e d w i t h B i o s I a n d B i o s I I o f M i l l e r . F a r r e l l ( 1 9 3 5 ) l a t e r f o u n dB i o s I I A a n d B i o s I I B n e c e s s a r y f o r g r o w t h o f t h e s a m e s p e c i e s w h i c h , u n l i k eW i l d i e r ' s y e a s t , g a v e l i t t l e r e s p o n s e u p o n a d d i t i o n o f B i o s I .I n v i e w o f t h e l a c k o f i n f o r m a t i o n a s t o g r o w t h r e q u i r e m e n t s o f s u g a r - t o l e r a n ty e a s t s a s a g r o u p , a n d t h e a v a i l a b i l i t y o f c r y s t a l l i n e s u b s t a n c e s w i t h k n o w n" b i o s " e f f e c t , t h e e x p e r i m e n t s h e r e r e p o r t e d w e r e p l a n n e d t o n o t e t h e e f f e c t o ft h e i m p o r t a n t y e a s t n u t r i l i t e s ( c f . W i l l i a m s , 1 9 4 1 ) u p o n t h e g r o w t h o f 2 3 s t r a i n so f t h e g e n u s Z y g o s a c c h a r o m y c e s . T h e s e r e p r e s e n t e d 1 8 s p e c i e s , a l l b u t s i x o fw h i c h w e r e i s o l a t e d i n t h i s l a b o r a t o r y , t h e s o u r c e s b e i n g i n d i c a t e d i n t a b l e 1 .

    METHODST h e y e a s t s w e r e c u l t u r e d i n 2 0 0 - m l . E r l e n m e y e r f l a s k s c o n t a i n i n g 3 0 m l . o fb a s a l s a l t s - s u g a r s o l u t i o n , w i t h a d d e n d a a s r e q u i r e d t o g i v e a t o t a l v o l l u m e o f 4 0m l . T h e b a s a l s o l u t i o n w a s p r e p a r e d t o g i v e a f i n a l c o n c e n t r a t i o n a s f o l l o w s :

    K H 2 P O 4 , 0 . 2 p e r c e n t ; M g S O 4 * 7 H 2 0 , 0 . 0 5 p e r c e n t ; ( N H 4 ) 2 S O 4 , 0 . 3 p e r c e n t ;C a C l 2 , 0 . 0 2 5 p e r c e n t a n d g l u c o s e , 4 0 p e r c e n t . N u t r i l i t e s w e r e a d d e d a s r e -q u i r e d s u f f i c i e n t t o g i v e a f i n a l c o n c e n t r a t i o n p e r m l . a s f o l l o w s : i n o s i t o l , 5 0J u g ; p a n t o t h e n i c a c i d ( c a l c i u m p a n t o t h e n a t e M e r c k ) , 0 . 1 M g ; b i o t i n ( S . M . A .C o r p o r a t i o n ) , 0 . 0 0 0 1 M g ; t h i a m i n ( S . M . A . C o r p . ) , 0 . 1 , g a n d p y r i d o x i n ( S . M . A .C o r p . ) , 0 . 2 j g . B e t a - a l a n i n e , w h e n u s e d i n p l a c e o f p a n t o t h e n i c a c i d , w a s a d d e da t t h e s a m e c o n c e n t r a t i o n . T h e f l a s k s w e r e a u t o c l a v e d a t 1 5 l b . p r e s s u r e f o r1 0 m i n u t e s . T h i s t r e a t m e n t m i n i m i z e d c a r a m e l i z a t i o n o f s u g a r a n d p r o v e da d e q u a t e w i t h t h e c o n c e n t r a t i o n o f g l u c o s e u s e d .T h e y e a s t s u s p e n s i o n s f o r i n o d u l a t i o n w e r e p r e p a r e d f r o m 4 - t o 8 - d a y c u l t u r e so n g l u c o s e - h o n e y - y e a s t a g a r o f 4 0 p e r c e n t s u g a r c o n c e n t r a t i o n . C e l l s w e r ew a s h e d t h r e e t i m e s i n 1 0 p e r c e n t g l u c o s e s o l u t i o n a n d f i n a l l y s u s p e n d e d i n t h eb a s a l m e d i u m . A l l s u s p e n s i o n s w e r e s t a n d a r d i z e d t o a t u r b i d i t y g i v i n g 4 0p e r c e n t l i g h t t r a n s m i s s i o n o f t h e c l e a r b a s a l s o l u t i o n . F l a s k s w e r e i n o c u l a t e d ,i n d u p l i c a t e , w i t h 1 d r o p ( 0 . 0 5 m l . ) o f s t a n d a r d s u s p e n s i o n .C u l t u r e s w e r e i n c u b a t e d a t 2 8 C . S i n c e o s m o p h i l i c y e a s t s d i f f e r f r o m S a c -c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e i n b e i n g e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t a s s p o i l a g e o r g a n i s m sr a t h e r t h a n a s u s e f u l a g e n t s o f i n d u s t r i a l f e r m e n t a t i o n , a n d s i n c e t h e y d e v e l o pm o r e s l o w l y , g r o w t h a f t e r l o n g e r p e r i o d s o f i n c u b a t i o n may b e c o n s i d e r e d o f m o r ei m p o r t a n c e t h a n i n t h e c a s e o f t h e l a t t e r y e a s t . I n c u b a t i o n w a s c o n t i n u e d f o re i g h t d a y s d u r i n g w h i c h t i m e f l a s k s w e r e s h a k e n d a i l y . M e a s u r e m e n t s o fg r o w t h w e r e m a d e u s u a l l y a t t w o - d a y i n t e r v a l s b y m e a n s o f a L u x t r o l p h o t o -

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    NUTRILITE REQUIREMENTS OF OSMOPHILIC YEASTSe l e c t r i c t u r b i d i m e t e r . I n a d d i t i o n t o t h e v a r i a t i o n s i n g r o w t h f a c t o r a d d e n d ab e i n g s t u d i e d , a l l s e r i e s o f f l a s k s i n c l u d e d i n o c u l a t e d c o n t r o l s o f t h e b a s a l m e d i u m ,

    TABLE 1E f f e c t o f o m i s s i o n o f s i n g l e n u t r i l i t e s o n g r o w t h o f o s m o p h i l i c y e a s t si n 4 0 p e r c e n t g l u c o s e s o l u t i o n

    C U I L T U R 1 t E PERCENTAGE LIGHT T R A N S M I S S I O N ( 4 D A Y S , 2 8 T . )( U N I N O C U I r A u D C O N T R O L = 1 0 0 )W i t h a d d i t i o n o f g r o w t h f a c t o r sC a

    N o . Name S o u r c e o0 0 0 ~o 0 o 0 0 0Z Z Z z ZG r o u p AZ y g o s a c c h a r m o y c e s s p .Z y g o s a c c h a r o m y c e s s p .Z y g o s a c c h a r o m y c e s s p .Z y g o s a c c h a r o m y c e s s p .

    Z . v a r i a b i l i sZ . f e l s i n e u sZ . n a d s o n i i

    G r o u p BZ . r u g o s u sZ . r u g o s u sZ y g o s a c c h a r o m y c e s s p .Z . b a r k e r iZ . b a r k e r iZ y g o s a c c h a r o m y c e s s p .Z . r i c h t e r iZ . a m o e b o i d u sZ . a c i d i f a c i e n s

    G r o u p CZ . j a p o n i c u sZ . m e l l i sZ . n u s s b a u m e r iZ y g o s a c c h a r o m y c e s 8 p .Z . n e c t a r o p h i l u sZ . n e c t a r o p h i l u sZ . n e c t a r o p h i l u s

    M a p l e b u t t e rM a p l e e q u i p m e n tM a p l e e q u i p m e n t" E x p l o d e d " c a n d y( K . a n d K . ) 2 g r a p e s( S ) 5 c o n c . w i n e m u s tN . C . T . C . 4

    N o r m a l h o n e yH o n e y t a n kM a p l e e q u i p m e n tN o r m a l h o n e yN . C . T . C ." E x p l o d e d " c a n d yF e r m e n t e d h o n e y( K . a n d K . ) f r u i t

    s y r u p( N ) 5 a c i d w i n eN o r m a l h o n e yF e r m e n t e d h o n e yF e r m e n t e d h o n e yF e r m e n t e d h o n e yF l o r a l n e c t a rN o r m a l h o n e yS o i l

    9 7 . 39 7 . 39 7 . 49 8 . 19 7 . 69 7 . 39 8 . 9

    9 8 . 19 9 . 49 8 . 79 6 . 19 8 . 3

    1 0 0 . 09 9 . 1

    7 9 . 46 6 . 67 1 . 47 6 . 37 9 . 46 8 . 67 4 . 5

    6 8 . 06 4 . 17 7 . 37 1 . 07 1 . 07 0 . 26 7 . 7

    9 9 . 7 6 3 . 79 9 . 7 7 0 . 99 6 . 9

    1 0 0 . 09 9 . 29 9 . 49 9 . 59 8 . 59 9 . 4

    6 6 . 97 6 . 76 5 . 25 9 . 97 9 . 77 2 . 76 3 . 5

    7 8 . 36 7 . 17 5 . 17 6 . 38 1 . 36 8 . 27 4 . 7

    6 6 . 46 1 . 27 6 . 67 0 . 67 4 . 46 8 . 66 8 . 06 4 . 77 1 . 7

    6 8 . 47 7 . 27 3 . 16 7 . 19 3 . 48 4 . 66 7 . 9

    8 2 . 67 1 . 47 4 . 37 7 . 97 8 . 87 3 . 17 8 . 28 8 . 49 2 . 18 2 . 98 6 . 29 0 . 28 0 . 18 4 . 6

    9 7 . 29 9 . 49 9 . 49 9 . 99 6 . 69 5 . 69 7 . 09 7 . 99 9 . 8

    1 0 0 . 19 8 . 99 9 . 2

    1 0 0 . 09 7 . 4

    7 5 . 86 4 . 56 8 . 67 2 . 87 7 . 06 9 . 47 0 . 46 9 . 36 3 . 17 6 . 57 2 . 77 6 . 86 7 . 57 4 . 2

    7 8 . 46 7 . 17 4 . 07 5 . 77 9 . 17 1 . 37 1 . 27 0 . 46 3 . 87 7 . 57 2 . 07 5 . 07 1 . 77 1 . 3

    7 3 . 4 1 0 0 . 5 5 6 . 9 6 1 . 58 0 . 2 9 9 . 5 7 4 . 5 7 0 .39 6 . 29 8 . 99 3 . 79 9 . 29 8 . 59 3 . 19 8 . 2

    9 8 . 39 7 . 99 6 . 79 9 . 79 7 . 99 3 . 41 0 1 . 0

    6 5 . 57 3 . 77 3 . 26 2 . 08 2 . 18 0 . 56 3 . 6

    6 6 . 67 3 . 75 5 . 65 5 . 98 3 . 37 1 . 56 3 . 0

    B e t a - a l a n i n e i n p l a c e o f p a n t o t h e n i c a c i d .2 K r o e m e r a n d K r u m b h o l z .8 S a c c h e t t i .4 N a t i o n a l C o l l e c t i o n o f Type C u l t u r e s , L o n d o n .6 W. J . N i c k e r s o n , J r .

    b o t h a l o n e a n d w i t h t h e c o m b i n e d g r o w t h f a c t o r s , as w e l l as o f t h e u n i n o c u l a t e db a s a l m e d i u m .

    H3S 3S 5C 3z iZ 2Z 5

    1 3 9E x 4S 65 8Z 4A2MlZ 34 2 7

    9DlJ 7E6N41 5 5 YS 3 B 2

    7 8 . 06 6 . 97 3 . 87 4 . 57 8 . 27 2 . 27 2 . 4

    6 3 . 47 8 . 06 7 . 07 4 . 17 2 . 2

    6 1 . 7

    6 1 . 3

    6 4 . 87 0 . 36 3 . 4

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    A . G . LOCHHEAD AND G . B . LANDERKINEXPERIMENTAL RESULTS

    E f f e c t o f o m i s s i o n o f s i n g l e n u t r i l i t e sT h e e f f e c t o f o m i t t i n g s i n g l e g r o w t h f a c t o r s f r o m t h e c o m b i n a t i o n o f f i v e u p o nt h e g r o w t h o f 2 3 y e a s t s t r a i n s i s s h o w n i n t a b l e 1 , g i v i n g r e a d i n g s a f t e r 4 d a y sa t 2 8 0 0 . A t t h i s s t a g e o f d e v e l o p m e n t t h e a b i l i t y t o s y n t h e s i z e t h e m i s s i n gn u t r i l i t e , w h e r e s u c h e x i s t s , s h o u l d b e c o m e m a n i f e s t , s o t h a t i t i s p o s s i b l e t oe v a l u a t e t h e i m p o r t a n c e o f e a c h a s a n e s s e n t i a l f a c t o r f o r m o r e p r o l o n g e d g r o w t h .B i o t i n i s s e e n t o b e t h e m o s t i m p o r t a n t n u t r i l i t e , b e i n g e s s e n t i a l t o t h e g r o w t ho f a l l s t r a i n s o f Z y g o s a c c h a r o m y c e s s t u d i e d . I n i t s a b s e n c e , g r o w t h o f t h e o r g a n -

    i s m s i s l i t t l e o r n o b e t t e r t h a n t h a t i n p u r e s a l t s - s u g a r s o l u t i o n .W i t h r e s p e c t t o t h e i r n e e d f o r p a n t o t h e n i c a c i d , t h e y e a s t s c o u l d b e d i v i d e di n t o t h r e e g r o u p s , d e p e n d i n g u p o n w h e t h e r t h i s n u t r i l i t e w a s e s s e n t i a l , s t i m u l a -t o r y , o r r e l a t i v e l y u n i m p o r t a n t . T h e o r g a n i s m s i n g r o u p A a r e e v i d e n t l y a b l et o s y n t h e s i z e t h i s f a c t o r t o m e e t t h e i r r e q u i r e m e n t s , s i n c e i t s o m i s s i o n c a u s e sl i t t l e o r n o d i m i n u t i o n o f g r o w t h . T h e y e a s t s o f g r o u p B , t h o u g h a b l e t o g r o wi n t h e a b s e n c e o f p a n t o t h e n i c a c i d , d e v e l o p d e f i n i t e l y b e t t e r w h e n i t i s s u p p l i e d ,a n d t h u s c o m p r i s e a g r o u p i n t e r m e d i a t e b e t w e e n g r o u p A a n d g r o u p C . T h i sl a t t e r g r o u p i n c l u d e s y e a s t s f o r w h i c h p a n t o t h e n i c a c i d i s m o s t e s s e n t i a l , t h eo m i s s i o n o f t h i s n u t r i l i t e r e s u l t i n g i n g r o w t h a p p r o x i m a t i n g t h a t i n t h e s a l t s -s u g a r c o n t r o l a f t e r f o u r d a y s . T h i s p o i n t s t o a l a c k o f a b i l i t y t o s y n t h e s i z e t h i sf a c t o r u n d e r t h e t e s t c o n d i t i o n s . T a b l e 1 a l s o s h o w s t h a t , B - a l a n i n e , w h e r e i tw a s t e s t e d , w a s a b l e t o r e p l a c e p a n t o t h e n i c a c i d i n p r o v i d i n g t h e c o m b i n e dg r o w t h f a c t o r e f f e c t .T h e o m i s s i o n o f i n o s i t o l w a s , i n m o s t c a s e s , w i t h o u t e f f e c t o n g r o w t h . I nt h e c a s e o f f i v e s t r a i n s i n G r o u p C , r e p r e s e n t i n g t h r e e s p e c i e s , i n o s i t o l w a s f o u n dn e c e s s a r y f o r o p t i m u m g r o w t h , b e i n g p a r t i c u l a r l y i m p o r t a n t f o r Z y g o s a c -c h a r o m y c e s n e c t a r o p h i l u s . I n n o c a s e , h o w e v e r , d i d t h e l a c k o f t h i s f a c t o rp r e v e n t g r o w t h a s c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l , s u g g e s t i n g a c a p a c i t y e i t h e r f o rr e p l a c e m e n t b y o t h e r f a c t o r s , o r f o r s y n t h e s i s o f i n o s i t o l i n v a r y i n g d e g r e e .U n d e r t h e e x p e r i m e n t a l c o n d i t i o n s n e i t h e r t h i a m i n n o r p y r i d o x i n w a s i m p o r -t a n t f o r g r o w t h o f m o s t o f t h e y e a s t s . W i t h s o m e c u l t u r e s o m i s s i o n o f t h i a m i nr e s u l t e d i n s l i g h t l y d e p r e s s e d g r o w t h , m o s t n o t i c e a b l e i n t h e c a s e o f Z y g o s a c -c h a r o m y c e s r i c h t e r i , Z . a c i d i f a c i e n s , Z . n u s s b a u m e r i a n d o n e s t r a i n o f Z . n e c t a r o .p h i l u s . T h i s e f f e c t w a s l e s s p r o n o u n c e d a s g r o w t h p r o g r e s s e d , s u g g e s t i n g ac a p a c i t y f o r s y n t h e s i s o f t h i s f a c t o r . W i t h o t h e r y e a s t s , e s p e c i a l l y Z .a m o e b o i d u s , s o m e w h a t b e t t e r g r o w t h w a s n o t e d w i t h o u t t h i a m i n , p o i n t i n g t o as l i g h t l y d e p r e s s i n g e f f e c t o f t h i s f a c t o r a t t h e c o n c e n t r a t i o n u s e d . O m i s s i o n o fp y r i d o x i n c a u s e d l i t t l e o r n o d i f f e r e n c e i n t h e g r o w t h o f o s m o p h i l i c y e a s t s , t h em o s t p r o n o u n c e d e f f e c t b e i n g w i t h Z . n u s s b a u m e r i , o n w h i c h t h i s n u t r i l i t e a p -p e a r e d t o h a v e a s o m e w h a t d e p r e s s i n g a c t i o n .

    S u p p l e m e n t a r y e f f e c t s o f n u t r i l i t e sW i t h b i o t i n , p a n t o t h e n i c a c i d ( o r B 3 - a l a n i n e ) a n d i n o s i t o l s e e n a s t h e i m p o r t a n tn u t r i l i t e s f o r o s m o p h i l i c y e a s t s , f u r t h e r s t u d i e s w e r e m a d e o f i n d i v i d u a l a n d

    3 4 6

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    NUTRILITE REQUIREMENTS OF OSMOPHILIC YEASTSc o m b i n e d e f f e c t s i n t h e l i g h t o f t h e d a t a i n t a b l e 1 . F o r t h i s s e r i e s r e p r e s e n t a t i v ey e a s t s f r o m e a c h o f g r o u p s A , B a n d C w e r e c h o s e n , Z y g o s a c c h a r o m y c e s v a r i a b i l t i( Z i ) , Z . r u g o s u s ( 1 3 9 ) , a n d Z . n e c t a r o p h i l u s ( N 4 ) . I n a d d i t i o n t o t h e f l a s k sc o n t a i n i g t h e b a s a l a n d c o m b i n e d g r o w t h f a c t o r c o n t r o l s a s w e l l a s t h o s e i nw h i c h i n d i v i d u a l n u t r i l i t e s w e r e o m i t t e d , t h e s e r i e s i n c l u d e d t h e m o d i f i c a t i o n s o fa d d e n d a o u t l i n e d i n t a b l e 2 .T h e e f f e c t o f s i n g l e a n d c o m b i n e d n u t r i l i t e s o n t h e t h r e e t y p e s o f y e a s t i si l l u s t r a t e d i n t a b l e 2 , g i v i n g t h e r e a d i n g s a f t e r s i x d a y s . H o w e v e r , t h e s a l i e n tf e a t u r e s a r e s h o w n g r a p h i c a l l y i n f i g u r e s 1 - 4 , w h i c h i n d i c a t e m o r e c l e a r l yd i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e s p e c i e s w i t h r e s p e c t t o t h e i r r e q u i r e m e n t s o f b i o t i n ,p a n t o t h e n i c a c i d a n d i n o s i t o l d u r i n g t h e c o u r s e o f g r o w t h f o r 8 d a y s .

    TABLE 2E f f e c t o f s i n g l e a n d c o m b i n e d n u t r i l i t e s o n t h r e e y e a s t s o fd i f f e r e n t g r o w t h r e q u i r e m e n t s

    P E R C E N T A G E L I G H T T R A N s m I S S I O N ( 6 DAYS 2 8 t C . )S A L T S - S U G A R ( 4 0 P E R CENT G L U C O S E ) P L U S A D D E N D A AS BELOW Z . v a r i a b i l i s Z . r u g o s s Z.| scaro-

    ( g r o u p A ) ( g r o u p B ) ( g r u " o u p C )( 1 ) N i l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 9 . 4 9 6 . 9 9 7 . 7( 2 ) C o m b i n e d n u t r i l i t e s .......................... 7 9 . 2 6 3 . 4 6 2 . 8( 3 ) No i n o s i t o l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 8 . 7 6 2 . 4 7 9 . 2( 4 ) No p a n t o t h e n i c a c i d . . . . . . . . . . . . . . ............ 7 8 . 8 7 4 . 7 9 5 . 7( 5 ) No b i o t i n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 7 . 7 9 6 . 3 9 6 . 1( 6 ) No t h i a m i n ................................... 7 4 . 7 6 4 . 6 6 3 . 3( 7 ) No p y r i d o x i n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 8 . 8 6 4 . 7 6 4 . 0( 8 ) B i o t i n a l o n e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 5 . 7 7 5 . 8 9 8 . 7( 9 ) P a n t o t h e n i c a c i dalone.97.9 9 4 . 8 9 7 . 4( 1 0 ) B i o t i n + i n o s i t o l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 . 9 6 8 . 3 9 8 . 7( 1 1 ) B i o t i n + p a n t o t h e n i c a c i d .................... 7 5 . 1 6 4 . 5 8 5 . 7( 1 2 ) B i o t i n + t h i a m i n ............................. 8 2 . 4 7 1 . 8 9 8 . 9( 1 3 ) B i o t i n + p y r i d o x i n ........................... 8 3 . 7 7 0 . 7 9 9 . 2( 1 4 ) B i o t i n + p a n t o t h e n i c a c i d + i n o s i t o l . . . . . . . . . 7 8 . 8 6 2 . 1 6 2 . 0( 1 5 ) B i o t i n + p a n t o t h e n i c a c i d + t h i a m i n ......... 8 3 . 1 6 3 . 3 7 9 . 1( 1 6 ) B i o t i n + p a n t o t h e n i c a c i d + p y r i d o x i n ....... 7 9 . 1 6 3 . 7 8 1 . 6T h o u g h a l l t h r e e s p e c i e s a r e a l i k e i n r e q u i r i n g b i o t i n f o r g r o w t h , t h e y v a r y

    m a r k e d l y i n t h e i r c a p a c i t y f o r g r o w t h w i t h o u t p a n t o t h e n i c a c i d . I n c o n t r a s t t oZ . n e c d a r o p h i l u s , f o r w h i c h t h e l a t t e r i s e s s e n t i a l , Z . v a r i a b i l i s i s a b l e t o s y n t h e s i z et h i s f a c t o r i n s u f f i c i e n t a m o u n t s f o r a b u n d a n t g r o w t h , e v e n t h o u g h d e v e l o p m e n ti s s o m e w h a t r e t a r d e d a t f i r s t . F o r Z . v a r i a b i l i s a n d Z . r u g o s u s b i o t i n a l o n ep r o d u c e s d e f i n i t e t h o u g h s u b - m a x i m a l g r o w t h ; t o g e t h e r w i t h p a n t o t h e n i c a c i d ,w h i c h a l o n e i s i p e f f e c t i v e , i t g i v e s g r o w t h e q u a l t o t h e c o m b i n e d n u t r i l i t e e f f e c t .W i t h t h e f o r m e r y e a s t t h e r e i s e v i d e n c e t h a t i n t h e p r e s e n c e o f b i o t i n , t h e o t h e rn u t r i l i t e s c a n r e p l a c e p a n t o t h e n i c a c i d i n p r o m o t i n g g r o w t h , a n e f f e c t n o tn o t i c e a b l e w i t h Z . r u g o s u s .W i t h Z . n e c t a r o p h i l u s b i o t i n o r p a n t o t h e n i c a c i d a l o n e i s i n e f f e c t i v e , t h o u g h

    3 4 7

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    6/9

    &4 70,0 )

    8 0

    9 00c J0 :0 4100

    F I G . 1 . GROWTH OF Z Y G O S A C C H A R O M Y C E S VARIABILIS K . A ND K. I N 4 0 PER CENTG L U C O S E S O L U T I O N

    6 0

    c o 70U )

    E C : 8 000)

    1 . 1C,

    R 9 00 s :

    1 0 02 4 6 8 D A Y S

    F I G . 2 . GROWTH OF Z Y G O S A C C H A R O M Y C E S RUGOSUS L . A ND F . I N 4 0 PER CENTG L U C O S E S O L U T I O N

    / L S T T E P A N I N O So ' 601

    70

    / NO INOSITOL8 0 BIOT P A N

    90

    NO BIOTIN.NO PANTOTHENIC

    10 0 CONTROL2 4 6 8 DAYS

    F I G . 3 . GROWTH IN Z Y G O S A C C H A R O M Y C E S NECTAROPHILUS L . AND F . IN 4 0 P E R CENTG L U C O S E S O L U T I O N3 4 8

    IOT +PANTII./ D C O M ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ P A E N T H N I//~~LS/ / . ~ ~ ~ ~ ~I O T I N A I O } I E

    N O B I O T I NP A N T O ALONE= _ ~ ~ ~ C O N T R O L2 i 6 8 D k Y 5

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    NUTRILITE REQUIREMENTS OF OSMOPHILIC Y EASTS

    t o g e t h e r t h e y p r o m o t e s u b - m a x i m a l g r o w t h . U p o n t h e a d d i t i o n o f i n o s i t o l , an u t r i l i t e w h i c h i s n o n - e s s e n t i a l f o r t h e o t h e r s p e c i e s , t h e c o m b i n e d g r o w t h f a c t o re f f e c t i s o b t a i n e d , t h o u g h g r o w t h i s s o m e w h a t r e t a r d e d a t f i r s t . T h i s s u g g e s t ss o m e e a r l y i n f l u e n c e o f t h i a m i n a n d p y r i d o x i n , l a t e r s y n t h e s i z e d i n s u f f i c i e n ta m o u n t s f o r o p t i m u m g r o w t h . A s p e c i a l s e r i e s , i n w h i c h t h i s y e a s t w a s t e s t e dn a n u t r i e n t s o l u t i o n o f 6 0 p e r c e n t g l u c o s e , c o n f i r m e d t h e f i n d i n g s w i t h t h e 4 0p e r c e n t g l u c o s e m e d i u m ( f i g . 4 ) . T h e o s m o p h i l i c q u a l i t i e s o f t h e y e a s t w e r es h o w n b y t h e f a c t t h a t i n a n o t h e r w i s e s i m i l a r s e r i e s w i t h 1 0 p e r c e n t g l u c o s e n og r o w t h o f t h e o r g a n i s m w a s o b t a i n e d .

    I n i t s n u t r i l i t e r e q u i r e m e n t s Z . n e c t a r o p h i l m r e s e m b l e s t h e T o r o n t o s t r a i n o fS a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e w h i c h r e q u i r e s , i n a d d i t i o n t o B i o s I ( i n o s i t o l ) , B i o s I I Aa n d B i o s I I B , t h e g r o w t h - p r o m o t i n g e f f e c t s o f w h i c h a r e n o w c o m i n g t o b e r e -g a r d e d a s s i m i l a r t o t h o s e e x e r t e d r e s p e c t i v e l y b y p a n t o t h e n i c a c i d ( o r , - a l a n i n e )a n d b i o t i n .

    0 7 0 C O M P L E T EB I O T + P A N + I N O s

    8 0N O I N O S I T O L" " B I O T 4 P A N q

    9 0 1p4 ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ N OI O T I N2 4 6 8 D L T S

    F I G . 4 . GROWTH I N Z Y G O S A C C H A R O M Y C E S N E C T A R O P H I L U S L . A ND F . I N 6 0 PER CENTG L U C O S E S O L U T I O NDISCUSSION

    R e c e n t l y b i o c h e m i c a l c l a s s i f i c a t i o n o f S a c c h a r o m y c e s s t r a i n s , b a s e d o n g r o w t hf a c t o r t e s t s , h a v e b e e n d e s c r i b e d b y R a i n b o w ( 1 9 3 9 ) a n d S c h u l t z , A t k i n a n dF r e y ( 1 9 4 0 ) . T h e f o r m e r c l a s s i f i e d t h e y e a s t s a c c o r d i n g t o t h e i r r e a c t i o nt o w a x d s " b i o s " f r a c t i o n s . T h e l a t t e r b a s e d t h e i r c l a s s i f i c a t i o n o n t h e g r o w t hr e s p o n s e i n a b a s a l m e d i u m ( w h i c h i n c l u d e d i n o s i t o l , f l - a l a n i n e a n d B i o s I I B ) ,a n d i n t h e s a m e m e d i u m a f t e r t h e a d d i t i o n r e s p e c t i v e l y , o f t h i a m i n a n d t h i a m i np l u s p y r i d o x i n . O u r e x p e r i m e n t s i n c l u d e d a s t u d y o f t h i s p o i n t b u t u n d e r t h ec o n d i t i o n s o f o u r t e s t s , c a r r i e d o u t a s t h e y w e r e w i t h y e a s t s o f a d i f f e r e n t g e n u s ,w e w e r e u n a b l e t o o b s e r v e a n y s u c h c l e a r - c u t d i f f e r e n t i a t i o n i n t o t y p e s o n t h eb a s i s o f r e s p o n s e t o t h i a m i n a n d p y r i d o x i n . A n u m b e r o f o u r s t r a i n s m i g h t b er e g a r d e d a s b e l o n g i n g t o t h e i r t y p e B ( g r o w t h d e p r e s s e d s o m e w h a t b y t h i a ia n d n o r m a l w i t h t h i a m i n a n d p y r i d o x i n , a s c o m p a r e d w i t h g r o w t h i n p r e s e n c e o fi n o s i t o l , p a n t o t h e n i c a c i d a n d b i o t i n ) , t h o u g h n o n e w o u l d b e c o n s i d e r e d a sb e l o n g i n g t o t h e i r T y p e s A o r C .

    3 4 9

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    A . G . LOCHHEAD A ND G . B . LANDERKINI t w a s o f i n t e r e s t t o n o t e t h a t s t r a i n s o f Z y g o s a c c h a r o m y c e s w h i c h h a d b e e np r e v i o u s l y c o n s i d e r e d t h e s a m e s p e c i e s o n t h e b a s i s o f m o r p h o l o g i c a l a n d f e r m e n -

    t a t i o n t e s t s a g r e e d w i t h r e s p e c t t o t h e i r g r o u p c l a s s i f i c a t i o n o n t h e b a s i s o f t h e i rp a n t o t h e n i c a c i d r e q u i r e m e n t s ( t a b l e 1 ) . T h u s , c u l t u r e s S 3 a n d S 5 w e r e r e -g a r d e d a s t h e s a m e s p e c i e s i n G r o u p A , w h i l e G r o u p B c o n t a i n s t w o s t r a i n s e a c ho f Z . r u g o s u s a n d Z . b a r k e r i , a n d G r o u p C t h r e e s t r a i n s o f Z . n e c t a r o p h i l u s .S i n c e m o s t o f t h e s t r a i n s h a d b e e n i s o l a t e d m o r e t h a n t e n y e a r s p r e v i o u s t o t h ep r e s e n t t e s t s , i t a p p e a r s t h a t n u t r i l i t e r e q u i r e m e n t s o f o s m o p h i l i c y e a s t s r e p r e -s e n t , t o s o m e d e g r e e a t l e a s t , a s p e c i f i c c h a r a c t e r i s t i c w h i c h may a i d i n t h e i rc l a s s i f i c a t i o n .

    SUMMARYT w e n t y - t h r e e s t r a i n s o f o s m o p h i l i c y e a s t s o f t h e g e n u s Z y g o s a c c h a r o m y c e s a n d

    r e p r e s e n t i n g 1 8 s p e c i e s , w e r e s t u d i e d w i t h r e s p e c t t o t h e i r r e q u i r e m e n t s o fi n o s i t o l , b i o t i n , p a n t o t h e n i c a c i d , t h i a m i n a n d p y r i d o x i n , a d d e d t o a b a s a ls o l u t i o n o f i n o r g a n i c s a l t s a n d 4 0 p e r c e n t g l u c o s e .B i o t i n w a s e s s e n t i a l t o t h e g r o w t h o f a l l s t r a i n s . On t h e b a s i s o f t h e i r n e e df o r p a n t o t h e n i c a c i d , t h e y e a s t s c o u l d b e d i v i d e d i n t o t h r e e g r o u p s a c c o r d i n gt o w h e t h e r t h i s n u t r i l i t e w a s e s s e n t i a l , s t i m u l a t i n g o r r e l a t i v e l y u n i m p o r t a n t .B e t a - a l a n i n e w a s a b l e t o r e p l a c e p a n t o t h e n i c a c i d i n p r o v i d i n g t h e c o m b i n e dg r o w t h f a c t o r e f f e c t .

    I n t h e c a s e o f t h r e e s p e c i e s i n o s i t o l w a s f o u n d n e c e s s a r y f o r o p t i m u m g r o w t h ,t h i s n u t r i l i t e b e i n g s p e c i a l l y i m p o r t a n t f o r Z y g o s a c c h a r o m y c e s n e c t a r o p h i l u s ,t h o u g h e f f e c t i v e o n l y i n t h e p r e s e n c e o f b i o t i n a n d p a n t o t h e n i c a c i d . W i t hy e a s t s n o t r e q u i r i n g i n o s i t o l t h e c o m b i n e d g r o w t h f a c t o r e f f e c t c o u l d b e o b t a i n e dw i t h b i o t i n a n d p a n t o t h e n i c a c i d .I n s o m e c a s e s t h i a m i n e x e r t e d s l i g h t l y s t i m u l a t i n g o r d e p r e s s i n g e f f e c t s ,b e i n g r a t h e r m o r e s i g n i f i c a n t i n p r o m o t i n g maximum g r o w t h i n t h e c a s e o f

    Z y g o s a c c h a r o m y c e s n u s s b a u m e r i , Z . r i c h t e r i a n d o n e s t r a i n o f Z . n e c t a r o p h i l u s .P y r i d o x i n w a s s t i l l l e s s i m p o r t a n t a s a n u t r i l i t e f o r o s m o p h i l i c y e a s t s .S t r a i n s p r e v i o u s l y c o n s i d e r e d s p e c i f i c a l l y i d e n t i c a l o n t h e b a s i s o f m o r p h o l o g ya n d f e r m e n t a t i v e c a p a c i t y s h o w e d g o o d a g r e e m e n t i n n u t r i l i t e r e q u i r e m e n t s ,s u g g e s t i n g t h e v a l u e o f t h e l a t t e r d e t e r m i n a t i o n a s a n a i d i n c l a s s i f i c a t i o n .REFERENCES

    C H U R C H , M. B . , P A I N E , H . S . , AND H A M I L T O N , J . 1 9 2 7 S u g a r - t o l e r a n t y e a s t s i n c h o c o l a t e -c o a t e d c r e a m s . I n d . E n g . C h e m . , 1 9 , 3 5 3 - 3 5 7 .E A K I N , R . E . , AND W I L L I A M S , R . J . 1 9 3 9 V i t a m i n B 6 a s a y e a s t n u t r i l i t e . J . Am. C h e m .S o c . , 6 1 , 1 9 3 2 .E A S T C O T T , E . V . 1 9 2 8 W i l d i e r ' s B i o s . T h e i s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f " b i o s I l l . J .P h y s . C h e m . , 3 2 , 1 0 9 4 - 1 1 1 1 .E A S c O T r , E . V . 1 9 4 1 T o x i c i t y a n d r e p r o d u c t i o n o f y e a s t . C a n . C h e m . a n d P r o c e s sI n d . , 2 5 , 3 0 8 - 3 1 2 .F A B I A N , F . W . , A N D H A L L , H . H . 1 9 3 3 Y e a s t s f o u n d i n f e r m e n t e d m a p l e s y r u p . Z e n t r .B a k t . P a r a s i t e n k . , I I , 8 9 , 3 1 - 4 7 .F A B I A N , F . W . , AND Q U I N E T , R . I . 1 9 2 8 A s t u d y o f t h e c a u s e o f h o n e y f e r m e n t a t i o n .T e c h . B u l l . N o . 9 2 , M i c h . S t a t e C o l l . A g r . E x p t . S t a .F A R R E L L , L E O N E 1 9 3 5 T h e i n f l u e n c e o f i n o s i t o l , B i o s I I A , a n d B i o s I I B o n t h e r e p r o d u c -

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  • 8/4/2019 1941 Nutrilites

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    NUTRILITE REQUIREMENTS OF OSMOPHILIC YEASTSt i o n o f t w e l v e s p e c i e s o f y e a s t . A new c o n s t i t u e n t o f B i o s . T r a n s . R o y . S o c . C a n .I I I , 2 9 , 1 6 7 - 1 7 3 .

    F A R R E L L , L E O N E , A N D L O C E H E A D , A . G . 1 9 3 1 A c c e s s o r y f o o d s u b s t a n c e s f o r o s m o p h i l i cy e a s t s . I I . C o m p a r i s o n o f h o n e y b i o a c t i v a t o r w i t h B i o s . C a n . J . R e s e a r c h , 5 ,5 3 9 - 5 4 3 .

    H A L L , H . H . , J A M E S , L . H . , A N D N E L S O N , E . K . 1 9 3 7 M i c r o o r g a n i s m s c a u s i n g f e r m e n t a -t i o n f l a v o r s i n c a n e s y r u p s , e s p e c i a l l y B a r b a d o s " m o l a s s e s . " J . B a c t . , 3 3 , 5 7 7 - 6 8 5 .K 8 G L , F . , AND T o N N I s , B . 1 9 3 6 t Y b e r d a s B i o s - P r o b l e m . D a r s t e l l u n g v o n k r y s t a l -l i s i e r t e m B i o t i n a u s E i g e l b . Z . p h y s i o l . C h e m . , 2 4 2 , 4 3 - 7 3 .K R O E M E R , K . , AND K R U M B H O L Z , G . 1 9 3 1 U n t e r s u c h u n g e n t i b e r o s m o p h i l e S p r o s s p i l z e .

    A r c h . M i k r o b i o l . , 2 , 3 5 2 - 4 1 0 .L O C H H E A D , A . G . , AND F A R R E L L , LEoNE 1 9 3 1 T h e t y p e s o f o s m o p h i l i c y e a s t s f o u n d i nn o r m a l h o n e y a n d t h e i r r e l a t i o n t o f e r m e n t a t i o n . C a n . J . R e s e a r c h , 5 , 6 6 5 - 6 7 2 .L O C H H E A D , A . G . , AND H E R O N , D . A . 1 9 2 9 M i c r o b i o l o g i c a l s t u d i e s o f h o n e y . I . H o n e y

    f e r m e n t a t i o n a n d i t s c a u s e . I I . I n f e c t i o n o f h o n e y b y s u g a r - t o l e r a n t y e a s t s . C a n .D e p t . A g r . B u l l . N o . 1 1 6 .

    M A R V I N , G . E . 1 9 2 8 T h e o c c u r r e n c e a n d c h a r a c t e r i s t i c s o f c e r t a i n y e a s t s f o u n d i n f e r -m e n t e d h o n e y . J . E c o n . E n t o m o l . , 3 1 , 3 6 3 - 3 7 0 .MRAK, E . M . , AND B A K E R , E . E . 1 9 4 0 S u g a r - t o l e r a n t y e a s t s c a u s i n g t h e s p o i l a g e o f d r i e df r u i t s . P r o c . 3 r d I n t e r n . C o n g r . M i c r o b i o l . 1 9 3 9 , 7 0 7 - 7 0 8 .N U S S B A U M E R , T H . 1 9 1 0 B e i t r a g z u r K e n n t n i s d e r H o n i g g a r u n g n e b s t N o t i z e n t i b e r d i ec h e m i s c h e Z u s a m m e n s e t z u n g d e s H o n i g s . Z . U n t e r s u c h . N a h r . G e n u s s . , 3 0 , 2 7 2 - 2 7 7 .O w E N , W. L . 1 9 1 3 T h e o c c u r r e n c e o f S a c c h a r o m y c e s z o p j i i i n c a n e s y r u p a n d v a r i a t i o ni n i t s r e s i s t a n c e t o h i g h t e m p e r a t u r e s w h e n g r o w n i n s o l u t i o n s o f v a r y i n g d e n s i t i e s .Z e n t r . B a k t . P a r a s i t e n k . , I I , 3 9 , 4 6 8 - 4 8 2 .R A I N B O W , C . 1 9 3 9 T h e b i o s r e q u i r e m e n t s o f v a r i o u s s t r a i n s o f S a c c h a r o m y c e 8 c e r e v i s i a e .J . I n s t . B r e w i n g , 4 5 , 5 3 3 - 5 4 5 .

    R I C H T E R , A . A . 1 9 1 2 t t b e r e i n e n o s m o p h i l e n O r g a n i s m u s , d e n H e f e p i l z Z y g o s a c c h a r o -m y c e s m e l l i s a c i d i s p . n . M y c o l o g . C e n t r . , 1 , 6 7 - 7 6 .

    S A C C H E T T I , M. 1 9 3 2 a I l i e v i t i d e l l a f e r m e n t a z i o n e d e l m i e l e i t a l i a n o . Mem. a c c a d .s c i . i s t . B o l o g n a , C l a s s e s c i . f i s . S e r . V I I I , 9 , 1 - 1 1 .S A C C H E T T I , M. 1 9 3 2 b R i c e r c e s u l l a f e r m e n t a z i o n e d i u n m o s t o d ' u v a c o n c e n t r a t o . A r c h .M i k r o b i o l . , 3 , 4 7 3 - 4 9 1 .S C H U L T Z , A . S . , A T K I N , L . , AND F R E Y , C . N . 1 9 3 9 V i t a m i n B o , a g r o w t h - p r o m o t i n g f a c t o rf o r y e a s t . J . Am. C h e m . S o c . , 6 1 , 1 9 3 1 .S C H U L T Z , A . S . , A T K I N , L . , AND F R E Y , C . N . 1 9 4 0 T h e b i o c h e m i c a l c l a s s i f i c a t i o n o f y e a s ts t r a i n s . J . B a c t . , 4 0 , 3 3 9 - 3 4 6 .S H U T T , D . B . 1 9 2 5 Y e a s t c o n t a m i n a t i o n a s a s o u r c e o f e x p l o s i o n i n c h o c o l a t e c o a t e dc a n d i e s . S c i . A g r . , 6 , 1 1 8 - 1 1 9 .W I L D I E R S , E . 1 9 0 1 N o u v e l l e s u b s t a n c e i n d i s p e n s a b l e a u d e v e l o p p e m e n t d e l a l e v u r e .La C e l l u l e , 1 8 , 3 1 3 - 3 3 1 .W I L L I A M S , R . J . 1 9 1 9 T h e v i t a m i n e r e q u i r e m e n t o f y e a s t , a s i m p l e b i o l o g i c a l t e s t f o rv i t a m i n e . J . B i o l . C h e m . , 3 8 , 4 6 5 - 4 8 6 .W I L L I A M S , R . J . 1 9 4 1 G r o w t h - p r o m o t i n g n u t r i l i t e s f o r y e a s t s . B i o l . R e v . C a m b r i d g eP h i l . S o c . , 1 6 , 4 9 - 8 0 .W I L L I A M S , R . J . , E A K I N , R . E . , AND S N E L L , E . E . 1 9 4 0 The r e l a t i o n s h i p o f i n o s i t o l ,t h i a m i n , b i o t i n , p a n t o t h e n i c a c i d a n d v i t a m i n B B on t h e g r o w t h o f y e a s t s . J . Am.C h e m . S o c . , 6 2 , 1 2 0 4 - 1 2 0 7 .W I L L I A M S , R . J . , L Y M A N , C . M . , G O O D Y E A R , G . E . , T R U E S D A I L , J . H . , A ND H O L A D A Y , D.

    1 9 3 3 " P a n t o t h e n i c a c i d " , a g r o w t h d e t e r m i n a n t o f u n i v e r s a l b i o l o g i c a l o c c u r r e n c e .J . Am. C h e m . S o c . , 5 5 , 2 9 1 2 - 2 9 2 7 .W I L L I A M S , R . J . , AND R O E H M , R . R . 1 9 3 0 The e f f e c t o f a n t i n e u r i t i c v i t a m i n p r e p a r a t i o n so n t h e g r o w t h o f y e a s t s . J . B i o l . C h e m . , 8 7 , 5 8 1 - 5 9 0 .W I L L I A M S , R . J . , AND R O H R M A N N , E . 1 9 3 6 j 9 - A l a n i n e a n d " b i o s . " J . Am. C h e m . S o c . ,5 8 , 6 9 5 .

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