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CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA de la Aciduria Argininosuccínica en un ratón modelo. V. Reid Sutton, Yanzhen Pan, Erica C. Davis, and William J. Craigen. Presentadores : Alves, Matías. Areosa, Maite. Argañaraz, Marinana.
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Seminario Aciduria

Nov 09, 2015

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Ahumada Ahumada

presentación seminario argininosuccinato Aciduria.
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CARACTERIZACIN BIOQUMICA

de la Aciduria Argininosuccnica en un ratn modelo.V. Reid Sutton, Yanzhen Pan, Erica C. Davis, and William J. Craigen.

Presentadores: Alves, Matas.Areosa, Maite.Argaaraz, Marinana.

Objetivos:

Investigar el rol de la argininosuccinato liasa en la produccin endgena de arginina.

Explorar la patognesis de la enfermedad en el ratn deficiente en AL y encontrar posibles nuevos tratamientos para la misma.

Introduccin:

Enfermedad autosmica recesiva, caracterizada por:

Hiperamonemia.Convulsiones.Letargo.Vmitos.Desarrollo tardo.Coma.

El tratamiento para dicha enfermedad se basa en: una dieta baja en protenas y suplementos de arginina, para reducir el flujo de N a travs del ciclo de la urea.

La enfermedad se debe a una deficiencia de la argininosuccinato liasa, tambin conocida como argininosuccinasa.

Argininosuccinato Liasa (AL)

Enzima citoslica de 52-kDa.Se expresa en el hgado y el rin.Participa en dos procesos metablicos:

Ciclo de la Urea Ciclo de la arginina-citrulina.

La AL es responsable de la escisin del argininosuccinato en fumarato y arginina, siendo el fumarato un intermediario del ciclo de Krebs.

El enzima interviene en la eliminacin del N excedente.En este ciclo, la arginina es metabolizada por la xido ntrico sintasa (NOS), para generar NO y Citrulina.

Interconexin entre el Ciclo de la Urea y el Ciclo de Krebs:AL es fundamental en la produccin del xido ntrico (NO).

El NO regula el flujo sanguneo basal.

Acta sobre la guanilil ciclasa, que convierte el GTP a GMPc. Este ltimo es la medida mas estable de la produccin de NO, ya que la vida media del xido ntrico es demasiado corta imposibilitando su medicin.

Procedimiento:

Se generaron ratones heterocigotos para el alelo mutante y se reprodujeron para crear ratones homocigotos deficientes (portadores de la enfermedad).Estrategia para mutar el gen de la argininosuccinato liasa en los ratones.Ensayos bioqumicos:

Ensayo colorimtrico para medir la actividad enzimtica.

Por cromatografa lquida a alta presin se realiz un anlisis srico de aminocidos.

Se midieron los niveles de amonaco en plasma.

Medicin de los productos de la degradacin de NO y otros:

Se emple reaccin de Greiss en muestras de orina.

Espectrofotometra.

Resultados:

Generacin de ratones deficientes de AL:

Los ratones homocigotos recin nacidos no se distinguen en su peso (1,37g) de los ratones de tipo salvaje recin nacidos (1,45g).

Tampoco se distinguen de stos en cuanto a su apariencia.

A las 48 horas de nacidos, los ratones deficientes en AL (los homocigotos), dejaron de alimentarse y murieron rpidamente.

Niveles sricos de aminocidos en ambas camadas de ratonesEn gris se muestran los niveles para ratones de tipo salvaje, y en blanco para ratones deficientes en argininosuccinato liasa.Caracterizacin de los enzimas del ciclo de la Urea y los parmetros bioqumicos:

Ratones AL deficientes:

Poseen alta concentracin en suero de:

cido argininosuccnico.Citrulina.Glutamina.Amonaco (causando hiperamonemia)

Poseen baja concentracin de:

Arginina.EnzimaRatones deficientes de AL(mol/h/g hgado)Ratones de tipo salvaje(mol/h/g hgado)Carbamil fosfato sintetasa17,2 (2,5)12,2 (1,5)Ornitina transcarbamilasa597 (86)713 (164)Arginasa12,8 (1,6)21,3 (2,7)Argininosuccinato liasa40 (19)968 (286)La actividad de la arginasa es menor en los ratones AL deficientes que en los ratones control.Actividad de las enzimas del Ciclo de la Urea:

Niveles de amoniaco en el plasma en ratones deficientes de LA y ratones salvajes.Discusin:

El cido argininosuccinato es txico para los hepatocitos llevando a una cirrosis y otras alteraciones.

El NO es una importante molcula de sealizacin usada en un vasto nmero de ajustes biolgicos.

Estudios recientes indican que la arginina endgena, en oposicin con la arginina ingerida a travs de la dieta, es sustrato preferido de la NOS.

.

.

No se encontraron diferencias en los niveles de nitritos en plasma de animales mutantes, ni en los niveles de GMPc en la orina de estos.

Niveles bajos de arginina pueden reducir la creacin de creatina, y por tanto la capacidad energtica del cerebro y/o la sntesis de NO puede ser entorpecida a nivel enceflico.

No hay diferencias en las concentraciones de creatina en los tejidos ni su precursora guanidinoacetato entre los ratones mutantes y control.

Gracias!Alguna Duda?