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FFI0772
ADRIANO D ANDRICOPULOADRIANO D ANDRICOPULOADRIANO D. ANDRICOPULOADRIANO D. ANDRICOPULORAFAEL V. C. GUIDORAFAEL V. C. GUIDO
OBJETIVOSOBJETIVOS
� Inibição Enzimática� Inibição Enzimática
� Triagens Bioquímicas
� Determinação da Potência: IC50
INIBIÇÃOINIBIÇÃOINIBIÇÃOINIBIÇÃOÁÁENZIMÁTICAENZIMÁTICAENZIMÁTICAENZIMÁTICA
ATORVASTATINAATORVASTATINAAtorvastatina
(Lípitor®)(Lípitor®)US$ 10,733 bilhões - 2010HMG-CoA Redutase
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HMG-CoA redutaseTiolase
HMG-CoA
ACETIL-CoA 3-HIDRÓXI-3-METILGLUTARIL-CoA(HMG-CoA)
AESTATINASSintase
Mevalonato kinase
ÁCIDO MEVALÔNICOACETO-ACETIL-CoA
ATP
MIC
AFosfomevalonato kinase
MEVALONATO-5-FOSFATOU
ÍM Isopentenil-PPIsomerase
Mevalonato-5-pirofosfatodecarboxidase
MEVALONATO-5-PIROFOSFATO
DIMETILALIL-PPCO2
ISOPENTENIL-5-PIROFOSFATO (PP)
OQ
U
Farnesil-PP sintaseBisfosfonatos
GERANIL-PP
ISOPENTENIL 5 PIROFOSFATO (PP)
BIO
FARNESIL-PP
Farnesil-PP sintaseBisfosfonatos
GERANILGERANYL-PP
GERANIL PP
VIA
Esqualeno sintaseFARNESIL PP
ESQUALENO
Esqualeno monoxigenase
GERANILGERANYL PP
Geranilgeranil-PP sintase
V
LANOSTEROL
Esqualeno monoxigenase
Esqualeno epoxidasePROTEÍNAS
HEME ADOLICOL
2,3-OXIDOSQUALENONADPH
COLESTEROL19 reações
LANOSTEROLPROTEÍNASPRENILADAS
DOLICOLUBIQUINONA
MECANISMO DE AÇÃO
� Inibidores da HMGR (EC 1 1 1 34)� Inibidores da HMGR (EC 1.1.1.34)
2 H+
2 NADPHCoA
2 NADP+
HMGR
HMG-CoACoASH
M I ÃMODO DE INTERAÇÃO ATORVASTATINAATORVASTATINA
ATORVASTATINAATORVASTATINA
(3R,5R)-7-[2-(4-fluorofenil)-3-fenil-4-( , ) [ ( )(fenilcarbamoil)-5-(propan-2-il)-1H-
pirrol-1-il]-3,5-ácido-di-hidroxipentanóicop
IC50 = 8 nMK 6 MKi = 6 nM
Holdgate et al., Biochem. Soc. Trans., 2003, 528-531.Istvan & Deisenhofer, Science, 2001, 1160-1164.
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RECONHECIMENTORECONHECIMENTOMOLECULARMOLECULAR
ESTATINASESTATINAS
LovastatinaMevacor
PravastatinaPravachol
SinvastatinaZocor
MevastatinaCompactina
l i i i i At t tiFluvastatinaLescol
CerivastatinaBaycol
RosuvastatinaCrestor
AtorvastatinaLípitor
CINÉTICACINÉTICA
INIBIDORESINIBIDORESENZIMÁTICOSENZIMÁTICOS
PESQUISA BÁSICAPESQUISA BÁSICA
Substâncias BioativasMoléculas Bioativas
Ligantes
Composto-Líder
Novas Entidades QuímicasNovas Entidades Moleculares
FÁRMACO Medicamento
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TRIAGENS Parâmetros CinéticosParâmetros Cinéticos
TriagemPL% Inibição Triagem
BiológicaLAN
IC50 Potência
EJAMEN
Ki Afinidade NTO
ÃMECANISMO DE AÇÃO
TRIAGENS BIOLÓGICAS
CINÉTICACINÉTICACatálise Enzimática
Esquema de reação química catalisada por uma enzima
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INIBIÇÃO ENZIMÁTICAINIBIÇÃO ENZIMÁTICAEfeitos na Velocidade de Reação
ENSAIO BIOLÓGICOENSAIO BIOLÓGICO
EnsaioBiológico
SubstânciasCandidatas
ENSAIO BIOLÓGICO
EnsaioBiológico
SubstânciasCandidatas
Medidaé % InibiçãoCinética % Inibição
% Inhibition = 100 (1 - vi / v0)
PARAMÊTROS CINÉTICOSPARAMÊTROS CINÉTICOS
POTÊNCIAPOTÊNCIAPOTÊNCIAPOTÊNCIA
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Concentração x Resposta
PARAMÊTROS CINÉTICOSPARAMÊTROS CINÉTICOS
Concentração (μM) % InibiçãoConcentração (μM) % Inibição0 0
0,04 160,175 400 35 510,35 511,25 75
5 9610 99
100 100
nibi
ção 60
80
nibi
ção 60
80
% In
20
40 % In
20
40
[I] μM0 2 4 6 8 10 12
0
log [I] μM
0,01 0,1 1 10 1000